专利名称：Snx7基因调节胚胎肝脏细胞发育的方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及利用SNX7基因表达水平调节斑马鱼胚胎肝脏细胞发育，以及含有该基因的表达产物和应用。
背景技术：
肝脏是包括人在内的脊椎动物中最大的消化腺，它参与体内多种物质的消化，储存，合成，分泌等过程，同时，它还是主要的解毒器官。肝脏相关的疾病是对人类健康的主要威胁之一。阐明肝脏的发育，功能及再生的分子机制是生物医学领域面临的一个重要问题。斑马鱼是研究脊椎动物肝脏发育的良好模型斑马鱼的体外发育以及早期胚胎的透明性使得能够实时连续观察肝脏的发育过程；斑马鱼中成熟的正向和反向遗传学技术使能够快速有效地确定特定基因的体内功能；斑马鱼早期的器官发育不需要通过血液循环提供的营养，而且斑马鱼的肝脏不参与胚胎期的造血过程，这非常有利于排除一个基因间接的对肝脏发育的影响，而研究它是否对肝脏发育起直接的调节作用。Sorting Nexins (SNXs)是一类具有PX结构域的蛋白，这些蛋白中不同的PX结构域能与不同磷酸化水平的磷脂酰肌醇结合并将相应的SNX蛋白定位到细胞内不同的内膜系统上。在小鼠和人的基因组中，迄今已有超过30个SNX编码基因被鉴定和克隆了。一系列的体外研究表明他们的主要功能是调节包括表皮生长因子受体(EGFR)等在内的一系列细胞表面蛋白的内吞及细胞内蛋白的分选(sorting)过程。相对于分子与细胞水平已开展的工作，关于SNX基因在生物个体的胚胎发育及成体的生理功能方面的研究却非常有限。基因敲降(knockdown)是反向遗传学的一种常用技术，它通过人为抑制特定基因的表达产生的相关表型来研究该基因的生理功能。特别地，对于所采用的斑马鱼这种模式生物，基因敲降技术采用得非常普遍且拥有其他模式生物所不具备的优势。在斑马鱼中，是采用注射反义核苷酸Morpholino的方法来完成对特定基因表达的敲降的。斑马鱼作为一个较新的模式生物，其应用的一个主要方面就是被用来进行早期器官发育的研究，与研究最多、应用最广的小鼠相比，斑马鱼作为发育学研究的模式生物具有以下特点斑马鱼非常便于饲养、人工繁育和品系保持，正常培养的雌雄鱼每周都能够交配，每次可产生数以百计的后代(受精卵)，这为大规模的筛选和运用统计学方法进行研究在短时间内提供了大量的研究样本。斑马鱼发育周期非常短，在受精之后M小时内，几乎所有的器官和系统都已经开始发育，在受精之后的5天内，所有的器官和系统都已经具有了完整的功能，此时的幼体斑马鱼已经具有各种完整地生理行为。斑马鱼的胚胎是在体外完成整个生理发育过程的，这不仅可以通过一部简单的光学显微镜就能观察到其发育全过程，而且与哺乳动物相比，其受精卵的发育过程由于独立于母体，省去了一系列用来支持和提供养分的附属结构；斑马鱼早期发育的胚胎是完全透明的，从光学显微镜和解剖镜下，能够实时清晰地观察某一特定部位、系统、器官和组织的发育，能够得以方便地全程监控所感兴趣的发育过程。在较短的时间内，斑马鱼研究的前驱科学家们已经建立的一套系统的研究方法，并积累起了大量的研究数据。斑马鱼全基因组比对已经接近完成，人和小鼠的绝大部分基因都能在斑马鱼基因组数据库中找到其对应的同源基因。众多转基因斑马鱼品系已经建立，目前具有的数千种转基因斑马鱼品系中几乎涵盖了所有组织器官，用荧光等标签特异性标记了某一部位和器官的转基因斑马鱼品系为发育学研究提供了强有力的工具。在斑马鱼胚胎中对某一特定基因进行敲降(knockdown)具有着其他模式生物无法比拟的优势，在这其中，Gene-tools公司所设计的morpholino反义寡核苷酸是应用最广的一种，通过将带有与目标基因互不配对序列的morpholino反义寡核苷酸显微注射到单细胞阶段的斑马鱼受精卵，能够非常方便地完成单个或是多个特定基因的瞬时敲降，morpholino反义寡核苷酸具有极好的水溶性与稳定性，这样的敲降虽是瞬时，但由于前述的斑马鱼发育过程的短暂，敲降的效果可相当稳定地维持于斑马鱼早期胚胎发育的全过程。近几年来，运用锌指蛋白技术，已经成功地完成了基因敲除(knockout)斑马鱼品系的构建。肝脏发育的过程在多个模式生物系统中都做过很多的研究，相当多的基因被证明在肝脏形成和发育过程当中发挥着功能。它们当中的绝大多数都可以归结到以下三种类型之一 1.信号通路分子，如FGF、BMP、Wnt、Hedgehog和RA信号通路相关的基因；2.转录因子，如feita和HNF家族的成员，Hhex, Proxl等等；3.表观遗传学相关的修饰基因如Dnmt 1/2，Hdac 1/3 和 Uhrfl 等等。在本发明研究中SNX7，一个原本被认为参与到细胞内膜泡运输和蛋白分选的基因家族成员，在斑马鱼胚胎肝脏发育的过程中起着关键性的作用。
发明内容
本发明通过观察SNX7对肝脏细胞生长的影响作用，探索其调节肝脏细胞生长的机理，并最终为以SNX7为靶点设计、开发治疗肝脏疾病的药物。本发明的技术方案为如SEQ ID NO 1所示的SNX7基因调节胚胎肝脏细胞发育的方法，所述方法包括调整胚胎肝脏细胞中的SNX7基因的表达水平。优选的，上述使用如SEQ ID NO :1所示的SNX7基因调节胚胎肝脏细胞发育的方法，所述胚胎肝脏细胞为斑马鱼胚胎肝脏细胞，所述方法包括调整斑马鱼胚胎肝脏细胞中的SNX7基因的表达水平。优选的，上述使用如SEQ ID NO :1所示的SNX7基因调节胚胎肝脏细胞发育的方法，所述调整SNX7基因的表达水平为通过将外源人SNX7基因的mRNA导入斑马鱼胚胎肝脏细胞中来表达SNX7基因，所述调整SNX7基因的表达水平为使用基因敲降抑制斑马鱼胚胎肝脏细胞中SNX7基因的表达。优选的，上述使用如SEQ ID NO :1所示的SNX7基因调节胚胎肝脏细胞发育的方法，所述将外源人SNX7基因的mRNA导入斑马鱼胚胎肝脏细胞中来表达SNX7基因方法包括使用体外转录的方式合成外源人SNX7基因的mRNA。本发明另一个技术方案为SEQ ID NO 1所示的SNX7基因在调节斑马鱼胚胎肝脏细胞生长的应用。本发明另一个技术方案为如SEQ ID NO 1所示的SNX7基因制备调节胚胎肝脏细胞生长发育的药物中的应用。本发明另一个技术方案为SEQ ID NO 1所示的SNX7基因在制备调节斑马鱼胚胎肝脏细胞生长发育的药物中的应用。SNX7基因治疗的制备方法，可按照基因药物领域的方法进行制备。SNX7将通过直接注射的方法给药。本发明证实了 SNX7调节斑马鱼肝脏细胞生长的作用，提供了 SNX7基因新作用或新药物的应用方式。
图1 为人和斑马鱼SNX基因家族进化谱系示意图；图2 多个SNX基因在斑马鱼胚胎的肝脏中有着特异的高表达；图3 斑马鱼组织特异性标记探针的原位杂交结果；图4 斑马鱼内胚层及肝脏发育标记基因的原位杂交结果；图5 :SNX7基因在小鼠不同组织和器官中表达谱。
具体实施例方式斑马鱼作为一个新兴的模式生物被研究的过程当中，其作为研究器官发育模型的一个特点越来越受到关注并被广泛应用到一些对于小鼠模型产生致死效应的基因的研究当中。在小鼠的研究当中，如果遇到所感兴趣的基因的突变或是敲除引起了胚胎早期的致死效应(lethality)，那么在小鼠模型中这个基因的研究就要不幸地画上句号了。但同样的基因在斑马鱼中的突变可能就不会产生致死效应，这是由于斑马鱼早期发育所需的养料都来源于母体的卵黄，而斑马鱼胚胎早期发育所需的氧气也可以通过简单的扩散而主要不是由循环系统来实现，这样就使本发明能够在斑马鱼中对某个在小鼠胚胎发育中引起致死效应的基因的功能来进行研究成为可能，在已经报道过的文献中，已经有不少成功的范例，这表明对斑马鱼作为模式动物能够完善和拓展在小鼠等其他模式生物中的进行的研究。具体到肝脏发育的研究中，在小鼠中，肝脏的发育过程包含了管脉系统的形成、造血功能的启动和肝实质的形成等几个相对独立而又紧密联系的过程，这个精密程序的任何一部分出现问题都极有可能导致整体胚胎的致死效应，而一旦产生了致死效应就无法再进行进一步的研究。但在斑马鱼中，造血功能的发生不发生在早期胚胎的肝脏中，同时肝脏本身的发育也不依赖血管系统的生成，斑马鱼胚胎的肝脏能在没有循环系统出现的前提下独立发育数天之久，这就使本发明研究某一个独立作用于肝脏本身发育的基因成为现实。实施例一、通过生物信息学的方法，本发明从斑马鱼基因组数据库中筛选出了和目前已知的人类Sorting Nexin基因家族相对应的所有同源基因，并通过蛋白序列分析绘出了反映SNX基因家族各成员之间亲缘和进化关系的谱系图，请参阅图1为人和斑马鱼SNX基因家族进化谱系示意图。人的Sorting Nexin(SNX)基因目前发现了 33个，根据结构特点，Sorting Nexin家族蛋白可以分为三类。第一类SNXPX，即只具有PX结构域。SNXPX这个大类包括6个SNX，即 SNX3、SNX10、SNX12、SNX22、SNX23 及 SNX24。第二类SNXPX_BAR。SNXPX-BAR 这个大类包括 SNX 家族中已知的 SNX1、SNX2、SNX4、SNX5、SNX6、SNX7、SNX8、SNX9、SNX18，与新的家族基因SNX30、SNX32、SNX33。BAR(Bin/amphiphysin/Rvs)结构域具有形成而二聚体的能力，还可以诱导膜的弯曲化。因此，SNXPX-BAR这一类SNX蛋白可能因为其参与调节膜转运而成为一类特殊的SNX。第三类SNXPX-other。这类包括17个SNX基因，既已知的SNX11、SNX13、SNX14、SNX15、SNX16、SNX17、SNX19、SNX20、SNX21、SNX25、SNX 26、SNX27、SNX28、SNX29 及新家族基因SNX31。在SNX家族蛋白中，包含有各式各样的结构域，例如SNX9/SNX18/SNX 33还有一个SH3结构域，SNX27含有PDZ结构域和RA结构域。通过生物信息学的方法，本发明找出了在斑马鱼已知的基因组中和人的SNX对应的基因。本发明发现，绝大部分的SNXs在斑马鱼中都可以找到，不仅如此，有8个SNXs (1，8，9，10，18，19，27，28)在斑马鱼中都有两个亚型，同时，有3个SNXs (22，31，32)在斑马鱼的基因文库中暂未发现同源基因，这有可能是由于目前斑马鱼的基因组数据尚不完整，相对应的基因序列数据尚未公布。对人和斑马鱼的所有SNX的蛋白序列比对发现，人和斑马鱼的SNXs在序列上有着相当高的同源性，人SNX7基因序列如SEQ IDNO :1所示，斑马鱼SNX7基因序列如SEQ ID NO :2ο二、用原位杂交的方法对所有SNX基因的表达进行筛查，原位杂交(In-situhybridization)结果显示SNX家族的多个基因在肝脏和消化道中有特异性的表达，请参阅图2，其显示多个SNX基因在斑马鱼胚胎的肝脏中有着特异的高表达。本发明合成了斑马鱼中已知的所有SNX基因(共38个)，对3天的野生型斑马鱼胚胎进行原位杂交染色。结果发现有10个以上的SNX基因特异性表达在3天斑马鱼胚胎的内胚层消化系统中，至少有6个SNX基因特异性地表达在3天斑马鱼胚胎的肝脏中SNXla，SNX3, SNX7, SNX17, SNX25, SNX29 (请参阅图 2 中的 A-F)。其中，SNXla,SNX 3 和 SNX7 在肝脏和肠道中特异地高表达；SNX17在肝脏，眼和脑中表达但似乎并不表达在肠道中，而SNX25则在眼和脑中表达量尤甚于在肝脏和肠道中。如此多的SNX特异性地高表达在斑马鱼胚胎肝脏发育的早期，提示本发明这些SNX基因很有可能参与到斑马鱼的胚胎早期肝脏发育过程。本发明进一步观察了在更早时期的胚胎中SNX7的表达在48小时(请参阅图2中的I)，就已经可以看到SNX7在肝脏部位的清晰表达，此外，耳囊，眼中也有表达；而在更早的18体节(约18小时)的胚胎中，SNX7表现出在整个胚胎中广泛的表达(此时肝脏还未开始形成)，由于此时胚胎还基本未合成自身的mRNA，提示本发明在母体卵细胞中，SNX7就有着相当的含量。三、针对SNX7基因，分别设计morpholino反义寡核苷酸对其进行敲降(knockdown)实验，人为加入的人SNX7mRNA能够特异性地逆转由注射SNX7-morpholino而产生的肝脏的缺陷和发育异常。本发明发现SNX7能够强烈地抑制斑马鱼胚胎肝脏的发育，而SNX7的mRNA能够特异性地挽救和逆转这种肝脏发育缺失的表型，有力地佐证了本发明所观察到的肝脏发育异常的表型是特异性地由SNX7单个基因表达的下调所引起。请参阅图3组织特异性标记探针的原位杂交结果。Morpho 1 ino是Gene-too 1 s公司设计的一种改造了糖环结构的寡核苷酸，它通过与目的基因序列互补结合而能够很容易地插入RNA的二级结构中，根据作用的原理，morpholino可以分为两种设计成与基因5'端翻译起始位点结合的morpholino能够通过阻止翻译起始复合体的形成而阻断翻译过程；而设计成与跨某个外显子和相邻内含子区域结合的morpholino则能够干扰mRNA前体的剪接成熟过程产生剪接错误的mRNA从而阻断目标基因的表达。对于那些通过成熟过程中多样化剪接而产生含有不同外显子和内含子组合的不同亚型的基因，本发明可以通过设计特异性阻断某个外显子-内含子区域剪接的morpholino来阻断某个特定亚型的表达。根据morpholino反义寡核苷酸的作用机制，其导致目标基因mRNA序列紊乱的结果可以预测，因此本发明可以通过RT-PCR扩增的方法检测morpholino的作用效果。分别提取正常胚胎和注射SNX7-m0rph0lin0胚胎的总RNA并反转录成cDNA，用SNX7的引物PCR对SNX7的表达进行检测。(请参阅图3中的A、B)与正常的SNX7(WT)相比，分别注射了两个SNX7-m0rph0lin0的胚胎MOl和M02中，SNX7片段长度有了明显的改变，测序的结果显示，MOl注射的斑马鱼胚胎中SNX7多出来原本属于内含子1的序列，而M02注射的斑马鱼胚胎中SNX7多出来原本属于内含子2的序列，这与设计该两条morpholino时预计的作用位点一致。对注射了 SNX7-m0rph0lin0的斑马鱼胚胎进行镜下显示，从注射之后第1天至第5天，胚胎的整体大小、形态、发育阶段和行动力与未注射morpholino的胚胎相比，都没有明显的差异，各浅表的器官和系统发育也未见显著异常和缺失，提示胚胎的发育基本正常。本发明用一系列的组织特异性的标记探针(marker)对野生型及SNX7-morpholino注射的斑马鱼3天胚胎进行原位杂交实验。铜蓝蛋白(Ceruloplasmin，CP)是一种由肝细胞产生的携带有6个铜原子的氧化还原酶，一般被用作标记肝脏细胞，铜蓝蛋白探针原位杂交的结果清楚地显示，注射了 SNX7-m0rph0lin0的斑马鱼胚胎(请参阅图3中的C)，3天时其肝脏发育发生了明显的缺陷，与未注射SNX7-m0rph0lin0的野生型胚胎(请参阅图3中的B)相比，肝脏的大小仅为野生型的1/3不足。而标记胰脏内分泌腺β细胞的组织特异性探针胰岛素αnsUlin，inS，请参阅图3中的E、F)，标记胰脏内分泌腺a细胞的组织特异性探针胰高血糖素(Clucagon，glu，请参阅图3中的G、H)，标记胰脏外分泌腺的组织特异性探针胰蛋白酶(Trypsin，try，请参阅图3中的I、J)以及在耳囊、视网膜和内胚层器官鳔中表达的探针Wnt2(请参阅图3中的K、L)，这些在来源于内胚层的消化道不同器官组织特异性标记的探针在SNX7-m0rph0lin0注射和野生型的斑马鱼胚胎中的表达均没有明显的差异。为了进一步确认这样的缺失和异常的表型是由于SNX7的表达异常所致，本发明进行了斑马鱼SNX7挽救实验，即通过体外转录的方式合成了人SNX7的mRNA，在注射了 SNX7-m0rph0lin0之后，立即再次注射SNX的mRNA至同一胚胎，对这样的胚胎进行观察发现，胚胎在注射之后1-3天形态和发育均正常，取3天的胚胎固定进行原位杂交显示，在先后注射了 SNX7的morpholino和mRNA之后，肝脏特异性marker铜蓝蛋白(CP)的表达与正常的胚胎几乎看不出有明显差异，肝脏的大小大大超过只注射了 SNX7-m0rph0lin0敲降SNX7表达的胚胎和未经处理的野生型胚胎相仿(请参阅图3中的D)。这个实验有力地证明了，人为加入的人SNX7mRNA能够特异性地逆转由注射SNX7-m0rph0lin0而产生的肝脏的缺陷和发育异常，即本发明所观察到的斑马鱼胚胎肝脏发育异常确系由于SNX7的异常表达(敲降)引起。四、SNX7基因特异地作用于肝母细胞特化形成肝细胞的阶段用斑马鱼肝脏发育不同阶段所特异性表达的标记基因对不同时期的SNX7敲降和野生型的斑马鱼胚胎进行原位杂交染色，发现SNX7只作用于斑马鱼肝脏发育的某一特定阶段，时间约为受精之后的30小时至48小时之间，结合文献报道的斑马鱼肝脏发育模型，SNX7应作用于肝母细胞生长和特化为肝细胞的发育阶段。通过检测细胞分裂增殖的磷酸化组蛋白H3染色，比较不同时期的SNX7敲降和未经处理的正常胚胎，本发明发现SNX7敲降所介导的斑马鱼肝脏发育过程的抑制不是通过抑制肝细胞的增殖来实现的。通过检测细胞凋亡的TUNEL染色，比较不同时期的SNX 7敲降和未经处理的正常胚胎，本发明发现SNX7的敲降能够显著地促进某一特定发育过程(约受精后30小时至48小时)中的肝脏细胞的凋亡。为了探究SNX7究竟是在这其中的哪个或是哪几个过程中起作用，本发明用原位杂交的方法对一系列内胚层和肝脏发育的标记基因(marker)的表达情况进行分析。请参阅图4，foxA3和gata6是内胚层广泛表达(pan-endodermal)的标记基因，它们影响着早期内胚层的发育和分化，并在肝脏发育的第一个过程，即内胚层细胞特化为肝母细胞的过程中起着不可替代的关键作用。用上述两个基因的探针对30小时的斑马鱼胚胎进行原位杂交本发明发现，尽管SNX7特异性敲降的胚胎表现出脑部和整体躯干的发育略微延迟，但胚胎整体形态基本正常，标记基因foxA3和gata6的表达水平和空间分布与野生型的胚胎相比，并无明显的区别(请参阅图4中的A-D)。proxl和hhex是最早表达在肝脏发育过程中的两个基因，它们的表达贯穿斑马鱼胚胎肝脏发育的全过程，在肝脏发育的第一个阶段，对于肝母细胞的形成过程是必须的，它们的正常表达也是肝母细胞形成的标志。本发明的实验结果显示，这两个基因的表达在在受精后30小时的SNX7敲降胚胎和野生型的胚胎相比，也没有发生显著变化(请参阅图3中的E-H)，这提示本发明在SNX7敲降的胚胎中，肝母细胞的产生过程和形成的数量没有发生太大的改变。但是，随着肝脏发育过程的进行，从受精后30小时到72小时，野生型胚胎的proxl表达有了显著地增长，在72小时的胚胎中，proxl的表达更是描绘出了一个位于身体中轴线稍偏左的完整肝脏的轮廓(请参阅图4中的I、K)，但与此同时，在SNX7敲降的斑马鱼胚胎中proxl的表达却没有观察到相应的增加，在受精后48小时和72小时的表达量与30小时相比，几乎没有增加(请参阅图4中的J、L)。与此同时，本发明观察到，proxl在其他部位的表达，包括同样位于内胚层消化道的胰脏和眼部，在48小时和72小时SNX7敲降的胚胎中却几乎完全正常，因此本发明可以得出初步结论SNX7对于proxl表达的调控特异性地发生在肝脏当中。同样的结果也发生在在对受精后48小时和72小时的foxA3和gata6的观察中。以上的结果有力地证明SNX7对于肝母细胞的形成过程并不必须，但对于随后肝母细胞的生长和特化为肝细胞的过程却是必不可少的。五、SNX7功能在进化上的保守性请参阅图5，本发明运用荧光实时定量PCR方法对SNX7在信使RNA水平上在成体小鼠组织中进行了分析，在内胚层来源的多个内脏器官中，SNX7在肝脏中的含量是最丰富的。此外，如前文所示，本发明用人SNX7信使RNA能够成功地挽救斑马鱼中的SNX7缺失表型，这提示SNX7的功能在进化上是高度保守的。这也就意味着SNX7抗凋亡的功能很有可能发生在高等哺乳类体内并可能参与其他的生理和病理过程。本发明也从已有的数据库发现SNX7在多种人体组织中有着相比对应正常组织十几倍甚至几十倍的高表达。自从1996年第一个SNX基因被发现以来，对于SNX家族基因的主要研究成果是在细胞水平证实了它们调节细胞膜表面多种分子的内吞以及细胞内蛋白的分选过程，而关于SNX基因在发育及生理过程中的功能目前还知之甚少。本研究是第一次利用斑马鱼这种模式生物，从器官发育和完整生物体的宏观角度，系统地对整个SNX基因家族的功能进行研究。斑马鱼以其在胚胎早期发育研究中的独特优势，成为了研究SNX基因家族在器官发育水平功能的理想模型。通过大量早期的筛查工作，我们发现了 SNX基因家族对于斑马鱼早期胚胎发育的多个器官和系统具有重要而特异性地调控作用，在这其中，SNX7对肝脏发育的表型就是特别值得关注的一个，通过一系列胚胎水平操作和实验，我们总结出了 SNX 7对于斑马鱼肝脏早期发育的作用规律，而进一步的生理生化方法的研究，则勾勒出SNX7可能的作用机理。更为深入的研究有助于我们将SNX 7置于其在调控肝脏发育的复杂信号网络系统的正确位置，发现其与目前已知的调节器官发育的各个信号通路的联系，这对于我们进一步阐明肝脏发育和分化的分子机制，将来对于肝脏疾病的机理探究和所采取治疗方案的分子基础，以及对于其他参与不同器官和系统发育过程的SNX家族成员的生理功能的揭示，都有着开拓和启示性意义。 以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
权利要求
1.如SEQID NO :1所示的SNX7基因调节胚胎肝脏细胞发育的方法，其特征在于，所述方法包括调整胚胎肝脏细胞中的SNX7基因的表达水平。
2.如SEQID NO :1所示的SNX7基因调节胚胎肝脏细胞发育的方法，其特征在于，所述胚胎肝脏细胞为斑马鱼胚胎肝脏细胞，所述方法包括调整斑马鱼胚胎肝脏细胞中的SNX7基因的表达水平。
3.如权利要求2所述SNX7基因调节胚胎肝脏的发育的方法，其特征在于，所述调整SNX7基因的表达水平为通过将外源人SNX7基因的mRNA导入斑马鱼胚胎肝脏细胞中来表达SNX7基因，所述调整SNX7基因的表达水平为使用基因敲降抑制斑马鱼胚胎肝脏细胞中SNX7基因的表达。
4.如权利要求2所述SNX7基因调节斑马鱼胚胎肝脏细胞发育的方法，其特征在于，所述将外源人SNX7基因的mRNA导入斑马鱼胚胎肝脏细胞中来表达SNX7基因方法包括使用体外转录的方式合成外源人SNX7基因的mRNA。
5.如SEQID NO :1所示的SNX7基因在调节斑马鱼胚胎肝脏细胞发育的应用。
6.如SEQID NO :1所示的SNX7基因制备调节胚胎肝脏细胞发育的药物中的应用。
7.如权利要求6所示的SNX7基因制备调节斑马鱼胚胎肝脏细胞发育的药物中的应用。
全文摘要
本发明通过观察SNX7对肝脏细胞生长的影响作用，探索其调节肝脏细胞生长的机理，并最终为以SNX7为靶点设计、开发治疗肝脏疾病的药物。本发明的技术方案为使用如SEQ ID NO1所示的SNX7基因调节斑马鱼胚胎肝脏细胞发育的方法，所述方法包括调整斑马鱼胚胎肝脏细胞中的SNX7基因的表达水平。以及使用SEQ IDNO1在制备调节斑马鱼胚胎肝脏细胞生长发育的药物中的应用。本发明证实了SNX7调节斑马鱼肝脏细胞生长的作用，提供了SNX7基因新作用或新药物的应用方式。
文档编号C12Q1/68GK102559761SQ20111044502
公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月26日 优先权日2011年12月26日
发明者夏健红, 彭梅秀, 徐良亮, 殷文广, 舒晓东, 裴端卿 申请人:中国科学院广州生物医药与健康研究院