专利名称：一株产二甲苯单加氧酶的恶臭假单胞菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株产二甲苯单加氧酶菌株一恶臭假单胞菌(I^eudomonas putida) ZJB-LLJ,及其在微生物发酵制备5-甲基吡嗪_2_羧酸中的应用。背景技术：
5-甲基吡嗪-2-羧酸(5-Methylpyrazine-2-carboxylic acid)是一种米白色固体结晶，分子式为C6H6N2O2、分子量138. 12、熔点166 169°C、外观淡黄色晶体、具有刺激性气味，暴露在空气中会缓慢氧化，由棕色油状物变为棕黑色粘稠状固体，需真空密封保存。 5-甲基吡嗪-2-羧酸在医药工业领域有着广泛的用途，主要用于合成第二代磺崛类降血糖药物格列吡嗪、新型抗高血压药物阿西莫司以及抗结核药物5-甲基吡嗪-2-羧酸甲醋等， 因此对5-甲基吡嗪-2-羧酸的研究具有重要的实际应用价值。
权利要求
1.一株产二甲苯单加氧酶菌株——恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)ZJB-LLJ，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学430072，保藏编号CCTCC No =M 2011395，保藏日期2011年11月13日。
2.如权利要求1所述的恶臭假单胞菌ZJB-LLJ在微生物发酵制备5-甲基吡嗪-2-羧酸中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为以恶臭假单胞菌ZJB-LLJ经产酶培养获得的含酶菌体细胞为催化剂，以2，5- 二甲基吡嗪为底物，在观 32°C、pH7. 0 8. 0下进行转化反应M 48小时，于反应液中获得所述5-甲基吡嗪-2-羧酸。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述产酶培养在以对二甲苯为唯一的碳源和能源的产酶培养基中进行，于观 32°C、pH7. 0 8. 0下培养12 M小时。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述产酶培养基质量组成如下 (NH4)2SO4 1. 0 3. Og/L ；Na2HPO4 · 2H20 1. 0 5. Og/L ；KH2P04 0. 5 2. Og/L ；NaCl1. 0 5. 0g/L ；MgCl2 ·6Η20 0. 1 0. 5g/L ；CaCl2 ·2Η20 1. 0 5. 0g/L ；FeCl3 ·6Η20 0. 1 0. 5g/L ；ZnSO4 · 7H20 0. 05 0. 2g/L ；MnCl2 · 4H20 0. 05 0. lg/L ；H3BO3 0. 1 0. 5g/L ； CaCl2 · 6Η20 0. 1 0. 3g/L ；CuCl2 · 2H20 0. 05 0. 02g/L ；NiCl2 · 6H20 0. 01 0. 03g/L ； Na2MoO4 · 2Η20 0. 01 0. 05g/L ；EDTA · Na2 · 2Η20 3. 0 8. 0g/L ；FeSO4 · 7H20 1. 0 3. Og/ L，对二甲苯0. 5 2mL/L，溶剂为水，ρΗ6· 8 7. 2。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物的初始浓度为2 6g/L。
全文摘要
本发明提供了一株产二甲苯单加氧酶菌株——恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)ZJB-LLJ，及其在微生物发酵制备5-甲基吡嗪-2-羧酸中的应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学430072，保藏编号CCTCC NoM 2011395，保藏日期2011年11月13日。本发明的有益效果主要体现在提供了一种产二甲苯单加氧酶的新菌株，通过该菌株可以制备药物中间体5-甲基吡嗪-2-羧酸。使用本发明生产5-甲基吡嗪-2-羧酸，反应条件温和，节能，环保，更重要的是过程简单，产物提取容易，具有良好的工业应用前景。
文档编号C12R1/40GK102533599SQ20111045142
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者刘丽娟, 沈寅初, 薛亚平, 郑裕国 申请人:浙江工业大学