专利名称：褐疣柄牛肝菌发酵产色素的制备方法
技术领域：
本发明涉及微生物工程技术领域，特别是涉及ー种褐疣柄牛肝菌发酵产色素的制备方法。
背景技术：
色素即着色剂，在食品、日化、医药、印染エ业中有广泛应用。按来源不同，色素可分为天然色素和人工合成色素两类，由于合成色素有一定毒性，人们更青睐天然色素。天然色素有三种主要来源，植物、动物、微生物。通过微生物的大規模培养，发酵生产色素，不受资源、环境和空间的限制，是高效率、低成本获得色素的有效途径，目前商品化利用的微生物色素仅红曲红、红曲黄、法夫酵母色素等。我国大型真菌资源丰富，尤其某些大型真菌中色素含量较高，兼具营养和药理活性，但被应用的非常少，开发潜力巨大。褐抚柄牛肝菌{Leccinum scabrum)隶属于层菌纲、伞菌目、牛肝菌科、抚柄牛肝菌属，是ー种经济真菌，味道鲜美，菌肉细嫩，富含蛋白质、氨基酸、多糖及各种微量元素，食用和药用价值都较高，可与桦、山毛棒、杨、柳、椴、棒、松等形成外生菌根，分布于黑龙江、吉林、河北、安徽、江苏、浙江、陕西、青海、新疆、云南、四川等地。褐疣柄牛肝菌液体培养菌丝体呈黄色，该真菌发酵所产黄色素可广泛应用于食品添加剤、エ业印染、生物制药等领域，但目前未见褐疣柄牛肝菌发酵产色素的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种褐疣柄牛肝菌发酵产色素的制备方法，该方法首先将褐疣柄牛肝菌发酵产色素，然后通过超声波辅助提取色素。超声波辅助提取是ー种利用外场介入的強化提取过程，利用空化作用、机械作用和热效应在溶媒中进行天然产物活性成分提取，可以加速有效成分的浸出和扩散释放，提高提取效率。因此，利用超声波辅助提取褐疣柄牛肝菌发酵所产色素，既可以缩短生产周期，又能够减少溶剂用量，有利于实现对褐疣柄牛肝菌的综合利用和精深加工，促进微生物工程领域的快速发展。本发明所述的褐疣柄牛肝菌发酵产色素的制备方法，通过以下步骤实现
(I)按下述比例配制褐疣柄牛肝菌液体培养基
取马铃薯150 200g、淀粉15 20g、牛肉膏I 2 g、KH2P040 . 4 O. 5 g 'K2HPO4O. I 0.2 g、MgSO4 · 7Η200· 2 O. 6 g，首先将马铃薯洗净、去皮、称量、切片，加水煮沸30min，过滤取滤液，在滤液中加入淀粉、牛肉膏、KH2PO4、Κ2ΗΡ04和MgSO4 ·7Η20，混匀定容至IOOOmL,121°C灭菌25min，冷却得液体培养基；
(2)褐疣柄牛肝菌液体发酵将褐疣柄牛肝菌菌种接种至综合PDA平板培养基上，25 27°C培养5 7天，获得褐疣柄牛肝菌菌丝；将菌丝块接种至液体培养基，接种比例为每100 mL液体培养基加入5块直径为IOmm的菌丝块，25 27°C、130r/min、黑暗振荡培养3天，获得液体种子；将体积比8 10%的液体种子接种至液体培养基进行发酵，25 27°C、130r/min、黑暗振荡培养6 8天，获得褐疣柄牛肝菌发酵液；
(3)褐疣柄牛肝菌菌丝粉的获得发酵液离心5000r/min、20min，收集菌丝体，在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，粉碎至60目得菌丝粉；(4)超声波辅助提取色素称取菌丝粉，加入质量比浓度为80 90%的こ醇，在液料比65 75mL/g、超声波功率400 500W、温度40 50°C条件下提取20 30min ;取超声波提取液离心5000r/min、20min,得沉淀物和离心上清液,沉淀物在相同条件下重复超声提取2 3次；收集、合并离心所得上清液，在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为40 45°C下减压蒸馏浓缩至浸膏状，并回收こ醇；将浸膏在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，即获得褐疣柄牛肝菌色素。上述方法中，综合PDA培养基及褐疣柄牛肝菌菌种均可在市场上购得。本发明相比现有技术具有以下优点①液体培养菌丝体繁殖速度快、色素产量高、营养价值丰富，极具发展前景培养设备简单、原料来源广、价格低，可进行大規模生产；③超声波提取生产周期短，操作エ艺易控制，提取效率高，节能环保，经济效益高，便于エ业化推广。
具体实施例方式实施例I
(I)配制褐疣柄牛肝菌液体培养基
取马铃薯 180g、淀粉 20g、牛肉膏 2 g、KH2PO4O. 4 g、K2HPO4O. I g、MgSO4 · 7Η200· 6 g,首先将马铃薯洗净、去皮、称量、切片，加水煮沸30min，过滤取滤液，在滤液中加入淀粉、牛肉膏、KH2PO4、K2HPO4和MgSO4 · 7H20，混匀定容至lOOOmL，121°C灭菌25min，冷却得液体培
养基;
(2)褐疣柄牛肝菌液体发酵将褐疣柄牛肝菌菌种接种至综合PDA平板培养基上，26°C培养5天，获得褐疣柄牛肝菌菌丝；将菌丝块接种至液体培养基，接种比例为每100 mL液体培养基加入5块直径为IOmm的菌丝块，26°C、130r/min、黑暗振荡培养3天，获得液体种子；将体积比8%的液体种子接种至液体培养基进行发酵，26°C、130r/min、黑暗振荡培养7天，获得褐疣柄牛肝菌发酵液；
(3)褐疣柄牛肝菌菌丝粉的获得发酵液离心5000r/min、20min，收集菌丝体，在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，粉碎至60目得菌丝粉；
(4)超声波辅助提取色素称取菌丝粉，加入质量比浓度为80%的こ醇，在液料比75mL/g、超声波功率400W、温度45°C条件下提取20min ;取超声波提取液离心5000r/min、20min，得沉淀物和离心上清液，沉淀物在相同条件下重复超声提取3次；收集、合并离心所得上清液，在相对真空度为-0. 08 -I. OMPa、温度为45°C下减压蒸馏浓缩至浸膏状，并回收こ醇；将浸膏在相对真空度为-0. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，即获得褐疣柄牛肝菌色素。实施例2
(I)配制褐疣柄牛肝菌液体培养基
取马铃薯 2000g、淀粉 150g、牛肉膏 10 g、KH2P045 g、K2HP042 g、MgSO4 · 7H204 g，首先将马铃薯洗净、去皮、称量、切片，加水煮沸30min，过滤取滤液，在滤液中加入淀粉、牛肉膏、KH2PO4、K2HPO4和MgSO4 · 7H20，混匀定容至10L，121°C灭菌25min，冷却得液体培养基；
(2)褐疣柄牛肝菌液体发酵将褐疣柄牛肝菌菌种接种至综合PDA平板培养基上，27°C培养5天，获得褐疣柄牛肝菌菌丝；将菌丝块接种至液体培养基，接种比例为每100 mL液体培养基加入5块直径为IOmm的菌丝块，27°C、130r/min、黑暗振荡培养3天，获得液体种子；将体积比10%的液体种子接种至液体培养基进行发酵，27°C、130r/min、黑暗振荡培养6天，获得褐疣柄牛肝菌发酵液；
(3)褐疣柄牛 肝菌菌丝粉的获得发酵液离心5000r/min、20min，收集菌丝体，在相对真空度为-O. 08 -1. OMPa、温度为50°C下真空干燥，粉碎至60目得菌丝粉；
(4)超声波辅助提取色素称取菌丝粉，加入质量比浓度为90%的こ醇，在液料比65mL/g、超声波功率500W、温度50°C条件下提取30min ;取超声波提取液离心5000r/min、20min，得沉淀物和离心上清液，沉淀物在相同条件下重复超声提取2次；收集、合并离心所得上清液，在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为40°C下减压蒸馏浓缩至浸膏状，并回收こ醇；将浸膏在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，即获得褐疣柄牛肝菌色素。实施例3
(I)配制褐疣柄牛肝菌液体培养基
取马铃薯 1500g、淀粉 180g、牛肉膏 15 g、KH2P045 g、K2HP042 g、MgSO4 · 7H202 g，首先将马铃薯洗净、去皮、称量、切片，加水煮沸30min，过滤取滤液，在滤液中加入淀粉、牛肉膏、KH2PO4、K2HPO4和MgSO4 · 7H20，混匀定容至10L，121°C灭菌25min，冷却得液体培养基；
(2)褐疣柄牛肝菌液体发酵将褐疣柄牛肝菌菌种接种至综合PDA平板培养基上，25°C培养7天，获得褐疣柄牛肝菌菌丝；将菌丝块接种至液体培养基，接种比例为每100 mL液体培养基加入5块直径为IOmm的菌丝块，25°C、130r/min、黑暗振荡培养3天，获得液体种子；将体积比9%的液体种子接种至液体培养基进行发酵，25°C、130r/min、黑暗振荡培养8天，获得褐疣柄牛肝菌发酵液；
(3)褐疣柄牛肝菌菌丝粉的获得发酵液离心5000r/min、20min，收集菌丝体，在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，粉碎至60目得菌丝粉；
(4)超声波辅助提取色素称取菌丝粉，加入质量比浓度为85%的こ醇，在液料比70mL/g、超声波功率450W、温度45°C条件下提取25min ;取超声波提取液离心5000r/min、20min，得沉淀物和离心上清液，沉淀物在相同条件下重复超声提取2次；收集、合并离心所得上清液，在相对真空度为-O. 08 -I. OMPa、温度为40°C下减压蒸馏浓缩至浸膏状，并回收こ醇；将浸膏在相对真空度为-0. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，即获得褐疣柄牛肝菌色素。
权利要求
1.褐疣柄牛肝菌发酵产色素的制备方法，其特征在于首先配制褐疣柄牛肝菌液体培养基，然后将褐疣柄牛肝菌液体发酵并获得褐疣柄牛肝菌菌丝粉，最后用超声波辅助提取得到褐疣柄牛肝菌色素。
2.根据权利要求I所述的褐疣柄牛肝菌发酵产色素的制备方法，其特征在于通过以下步骤实现 (I)按下述比例配制褐疣柄牛肝菌液体培养基 取马铃薯150 200g、淀粉15 20g、牛肉膏I 2 g、KH2P040 . 4 0. 5 g 'K2HPO4O. I 0.2 g、MgSO4 7H200. 2 0. 6 g，首先将马铃薯洗净、去皮、称量、切片，加水煮沸30min，过滤取滤液，在滤液中加入淀粉、牛肉膏、KH2PO4、K2HP04和MgSO4 *7H20，混匀定容至IOOOmL,121°C灭菌25min，冷却得液体培养基； (2)褐疣柄牛肝菌液体发酵将褐疣柄牛肝菌菌种接种至综合PDA平板培养基上，25 27°C培养5 7天，获得褐疣柄牛肝菌菌丝；将菌丝块接种至液体培养基，接种比例为每100 mL液体培养基加入5块直径为IOmm的菌丝块，25 27°C、130r/min、黑暗振荡培养3天，获得液体种子；将体积比8 10%的液体种子接种至液体培养基进行发酵，25 27°C、130r/min、黑暗振荡培养6 8天，获得褐疣柄牛肝菌发酵液； (3)褐疣柄牛肝菌菌丝粉的获得发酵液离心5000r/min、20min，收集菌丝体，在相对真空度为-0. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，粉碎至60目得菌丝粉； (4)超声波辅助提取色素称取菌丝粉，加入质量比浓度为80 90%的乙醇，在液料比65 75mL/g、超声波功率400 500W、温度40 50°C条件下提取20 30min ;取超声波提取液离心5000r/min、20min,得沉淀物和离心上清液,沉淀物在相同条件下重复超声提取2 3次；收集、合并离心所得上清液，在相对真空度为-0. 08 -I. OMPa、温度为40 45°C下减压蒸馏浓缩至浸膏状，并回收乙醇；将浸膏在相对真空度为-0. 08 -I. OMPa、温度为50°C下真空干燥，即获得褐疣柄牛肝菌色素。
全文摘要
褐疣柄牛肝菌发酵产色素的制备方法，通过配制液体培养基、褐疣柄牛肝菌发酵并获得菌丝粉、超声波辅助提取褐疣柄牛肝菌菌丝粉色素等一系列步骤实现。该方法液体培养菌丝体繁殖速度快、色素产量高、营养价值丰富；培养设备简单、原料来源广、价格低，可进行大规模生产；超声波提取生产周期短，操作工艺易控制，提取效率高，节能环保，经济效益高，便于工业化推广。
文档编号C12R1/645GK102660583SQ20121017299
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者刘朝贵, 方琼, 陈仁玉 申请人:西南大学