染色剂及其用途

染色剂及其用途
【专利摘要】本发明的课题在于，提供利用氧化酶的同时可得到优异的染色效果的染色方法、以及用于它的染色剂。提供一种染色剂，上述染色剂包含通过胺类化学修饰对选自以EC1.10.3.1编号的酶、以EC1.10.3.2编号的酶、以EC1.3.3.5编号的酶、以EC1.10.3.4编号的酶、以EC1.10.3.3编号的酶和以EC1.14.18.1编号的酶中的酶附加正电荷而得到的修饰酶。此外，提供使用该染色剂的染色法。
【专利说明】染色剂及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及染色剂以及它的用途。详细而言，涉及使用经修饰的氧化酶的染色剂以及染色方法。本申请基于2011年5月11日申请的日本专利申请第2011-106532号、2011年7月12日申请的日本专利申请第2011-154209号、以及2011年12月I日申请的日本专利申请第2011-263158号主张优先权，这些专利申请的全部内容通过参照而引用。
【背景技术】
[0002]利用苯二胺类、氨基苯酚类等氧化染料的染色法活用能够染色各种各样的色调、持续期间长、进而染色时间短等优点，尤其频用于人毛发等角蛋白纤维的染色。以往，氧化染料的发色使用过氧化氢。然而，过氧化氢的刺激性强，它的使用导致毛发和头皮等受到损伤。为了克服这种问题，尝试使用氧化酶代替过氧化氢(例如，参照专利文献I~3)。现有技术文献
[0003]专利文献
[0004]专利文献1:日本专利第3943133号公报
[0005]专利文献2:日本特表2000-502757号公报
[0006]专利文献3:日本特开2001-139441号公报

【发明内容】

[0007]对于以往报告的使用氧化酶的染色方法，未获得充分的染色效果，实用化还有很大差距。因此，本发明的课题在于，提供一种利用氧化酶、同时可得到优异的染色效果的染色方法、以及用于它的染色剂。
[0008]本发明的发明人等考虑在使用氧化酶的染色方法中酶对材料的亲和性尤其重要，使用作为氧化酶之一的胆红素氧化酶进行研究。以人毛发的染色为例子，以染色效果的提高为目标反复研究，其结果表示，若使用通过胺类化学修饰赋予正电荷的胆红素氧化酶(称为修饰BO或ΡΜ0)，则染色效果格外地提高。此外，即使在比较低的pH，也看到良好的染色性。进而，明确了利用修饰BO的染色的抗洗发剂性优异。通过这样的本发明的发明人等的研究，明确了通过胺类化学修饰赋予正电荷这类的修饰有效地发挥高染色效果。另外，在使用修饰酶的染色中，可以得到与使用未修饰酶时不同的特殊的色调。该事实也可以说是在寻求使用修饰酶的染色方法和染色剂的应用上重要且有意义的发现。
[0009]进一步研究的结果判明，即使在以安全性更高的吲哚化合物为发色基质的情况下，修饰酶也提高染色效果。而且，利用修饰酶的染色的抗洗发剂性优异。此外，也确认了并用2种以上的吲哚化合物能够调节染色的色彩(色调)。
[0010]以下所示的发明基于上述成果和发现。
[0011][1] 一种染色剂，包含通过胺类的化学修饰对以下的酶附加正电荷而得到的修饰酶，所述酶是选自以ECl.10.3.1编号的酶、以ECl.10.3.2编号的酶、以ECl.3.3.5编号的酶、以ECl.10.3.4编号的酶、以ECl.10.3.3编号的酶和以ECl.14.18.1编号的酶中的酶。[0012][ 2 ]如[I ]所述的染色剂，其特征在于，将氧化染料组合而成。
[0013][3]如[2]所述的染色剂，是含有上述氧化染料和上述修饰酶的一剂型。
[0014][4]如[2]所述的染色剂，是由含有上述氧化染料的第I成分和含有上述修饰酶的第2成分形成的二剂型。[0015][5]如[I]~[4]中的任一项所述的染色剂，用于角蛋白纤维的染色。
[0016][6]如[5]所述的染色剂，其中，上述角蛋白纤维为人毛发。
[0017][ 7 ]如[2 ]~[6 ]中的任一项所述的染色剂，其中，上述氧化染料是选自苯二胺、氨基苯酚、甲酚、甲苯二胺、萘酚、吲哚、吲哚啉和它们的衍生物中的一种以上化合物。
[0018][8]如[2]~[6]中的任一项所述的染色剂，其中，上述氧化染料是选自对苯二胺、对氨基苯酚、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚和5，6- 二羟基吲哚中的一种以上化合物。
[0019][9]如[I]~[8]中的任一项所述的染色剂，其中，上述酶为胆红素氧化酶。
[0020][10] 一种染色方法，包含用[I]~[9]中的任一项所述的染色剂将纤维或纤维加工品进行处理的步骤。
[0021][11]如[10]所述的染色方法，其中，上述纤维为角蛋白纤维。
[0022][12]如[11]所述的染色方法，其中，上述角蛋白纤维为人毛发。
[0023][13]如[12]所述的染色方法，其中，在pH为7.0~8.0的条件下进行上述处理。
【专利附图】

【附图说明】
[0024]图1是关于修饰BO的等电聚焦电泳的结果。M为分子量标记。
[0025]图2是染发试验I的结果。左为色差(AE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。
[0026]图3是染发试验2 (200U/100g)的结果。左为色差(ΛE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。
[0027]图4是染发试验3 (ρΗ8.0)的结果。左为色差(ΛE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。
[0028]图5是染发试验4 (ρΗ9.0)的结果。左为色差(Λ E*ab)的比较，右为红度(a*))的比较。
[0029]图6是各种修饰BO的基质特异性(pH9.0，25U/100g)的比较。比较使用不同发色基质(染色基质)时的染色性。Pro:对苯二胺，PAP:对氨基苯酚，PTD:对甲苯二胺
[0030]图7是关于各种修饰BO的等电聚焦电泳的结果。泳道(Lane)1:未修饰B0，Lane2:二胺(1，4- 丁二胺)修饰B0，Lane3:三胺(3，3’ - 二氨基二丙胺)修饰B0，Lane4:四胺(硫酸狐基丁胺)修饰BO, Lane M:分子量标记。
[0031]图8是利用各种修饰BO的染色效果的比较(pH9.0)。左为色差(ΛE*ab)的比较，右为红度(a*)的比较。
[0032]图9是利用各种修饰BO的染色效果的比较(pH9.0)。比较各种修饰BO染色后的毛发而示出。酶量统一为25U/100g。数值为与白发的色差(AE*ab) (n=3)。值越大表示染色效果越高。
[0033]图10是抗洗发剂试验的结果。使用洗涤后的毛发的色差相对于洗涤前的毛发的色差的(％)比较抗洗发剂性。[0034]图11是抗洗发剂试验的结果。对各种修饰BO比较洗涤前和洗涤后的毛发而示出。应予说明，酶量统一为25U/100g。
[0035]图12是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果。BO,PMO是用pH7的条件下、H2O2是用pH9的条件下进行染色时的值进行比较。BO:未修饰酶，PMO:修饰酶，H2O2:过氧化氢，4A1:4_氨基吲哚，5A1: 5-氨基吲哚。
[0036]图13是抗洗发剂试验的结果。以吲哚化合物作为发色基质进行染色后进行洗涤。对BO (未修饰酶)、ΡΜ0 (修饰酶)和H2O2 (过氧化氢)比较?评价抗洗发剂性(牢固度)。B0、PMO是用pH7的条件下、H2O2是用pH9的条件下染色时的值进行比较。A:以4-氨基吲哚为发色基质时的结果，B:以5-氨基吲哚为发色基质时的结果，C:以4-氨基吲哚和5-氨基吲哚为发色基质时的结果。[0037]图14是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果。研究酶浓度与染色效果的关系。Β0、ΡΜ0是用pH7的条件下、H2O2是用pH9的条件下染色时的值进行比较。4A1:4_氨基吲哚，5A1:5-氨基吲哚。
[0038]图15是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果。研究吲哚化合物的组合与染色效果的关系。Β0、ΡΜ0是用pH7的条件下、H2O2是用pH9的条件下染色时的值进行比较。4A1:4-氨基吲哚，5A1:5-氨基吲哚，6A1:6_氨基吲哚，4H1:4_羟基吲哚。
[0039]图16是以吲哚化合物为发色基质的染色试验的结果(pH7.0)。将不同的吲哚化合物以各种各样的组合并用，研究色彩的变化。4A1:4_氨基吲哚，5A1:5-氨基吲哚，6A1:6_氨基吲哚，4H1:4_羟基吲哚。-:无酶，+:有酶(添加25U/100g的ΡΜ0)。
[0040]图17是抗洗发剂试验的结果。将不同的吲哚化合物以各种各样的组合并用，比较抗洗发剂性。A:以5-氨基吲哚为发色基质时的结果，B:并用4-氨基吲哚和5-氨基吲哚作为发色基质时的结果，C:各组合之间的比较(添加25U/100g的PMO)。4AI:4-氨基吲哚，5A1:5-氨基吲哚，6A1:6_氨基吲哚，4H1:4_羟基吲哚。
[0041]图18是以吲哚化合物5，6-二羟基吲哚为发色基质进行染色试验的结果。对于以PH7.0的条件染色时(左)和以pH9.0的条件染色时(右)，在过氧化氢(Η202)、Β0 (未修饰酶)和PMO (修饰酶)之间对染色结果(色差AE*ab)进行比较。
[0042]图19是以吲哚化合物5，6-二羟基吲哚为发色基质的染色试验的结果。对于以PH7.0的条件染色时(左)和以pH9.0的条件染色时(右)，对酶量和染色效果(色差AE*ab)的关系在BO (未修饰酶)和PMO (修饰酶)之间进行比较。
[0043]图20是以吲哚化合物5，6- 二羟基吲哚为发色基质的染色试验的结果。使用各种氧化剂(B0:未修饰酶，PMO:修饰酶，H2O2:过氧化氢)将毛发在pH7.0染色，进行比较。对照(Control)是处理前的毛发。BO和PMO添加了 25U/100g。此外，H2O2添加了 3% (终浓度)。数值是与白发的色差(AE*ab)。
【具体实施方式】
[0044]1.染色剂
[0045]本发明的第I方面涉及用于纤维或纤维加工品的染色的染色剂。本发明的染色剂利用于例如由角蛋白、棉、二乙酸酯、亚麻、亚麻布( ') > 木 >)、莱赛尔纤维(lyocell)、聚丙烯酸、聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、天丝(TENCEL，注册商标)或三乙酸酯形成的纤维、纱、布、织物或衣类等的染色。本发明的染色剂包含施行了规定的修饰的氧化酶(以下称为“修饰酶”)。本发明的染色剂对氧化染料起作用，发挥所需的染色效果。因此，有代表性的是将本发明的染色剂与氧化染料组合使用。在本说明书中“组合使用”或“组合而成”的表述是指将氧化染料和修饰酶并用。作为一个方式，本发明的染色剂以混合有氧化染料和修饰酶的组合物的形式被提供。该方式的染色剂称为一剂型染色剂。另一方面，也可以以由包含氧化染料的第I成分和包含修饰酶的第2成分形成的成套的形态提供本发明的染色剂。该方式的染色剂称为二剂型染色剂。二剂型染色剂的情况下，各成分是以收容于各自的容器或被分隔收容的状态被提供的，使用时将两个成分混合。另外，可以说从为简单的构成、可以实现更简便的使用方法方面，一剂型染色剂胜于二剂型染色剂。
[0046](I)染料
[0047]在本说明书中用语“氧化染料”是指发色或染色中需要氧化反应的染料。氧化染料包含与它自身进行氧化聚合而发色的“染料前体”和通过与染料前体聚合，呈现特有的色调的“染料助剂(coupler)”。根据本发明的染色剂的用途，采用适当的氧化染料。氧化染料的例子可以举出Π 丫唳、蒽、奥、拜恩拜恩(~benbene)、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻
唑啉、咔啉、咔唑、增啉、苯并二氢吡喃、苯并吡喃、;1、富烯、呋喃、咪唑、吲唑、茚、喷哚、喷
哚啉、中氮茚、异噻唑、异喹啉、异唑、萘、萘撑、萘基吡啶、唑、花、菲、吩嗪、2，3- 二
氮杂萘、蝶唳、嘌呤、吡喃、吡唑、芘、哒嗪、哒酮、吡唆、嘧唆、吡咯、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、磺酰、噻吩、三嗪或者它们的衍生物或取代物、3，4-二乙氧基苯胺、2-甲氧基对苯二胺、1-氨基-4-b-甲氧基乙基氨基-苯(N-b-甲氧基乙基-对苯二胺)、1-氨基-4-双-(b-羟乙基)_氛基苯(N, N-双-(b_轻乙基)_对苯二胺、2_甲基-1, 3_ 二氛基_苯(2，6_ 二氛基甲苯)、2，4- 二氨基甲苯、2，6- 二氨基甲苯、1-氨基-4-磺酸根-苯、1-N-甲磺酸根_4_氨基苯、1-甲基-2-羟基-4-氨基苯(3-氨基邻甲酚)、1-甲基-2-羟基-4-b-羟乙基氨基苯(2-羟基-4-b-羟乙基氨基-甲苯)、1_羟基-4-甲氨基-苯(对甲氨基苯酚)、1_甲氧基_2，4- 二氛基_苯(2，4_ 二氛`基苯甲酿)、1-乙氧基-2，3- 二氛基_苯(2，4_ 二氛基苯乙醚)、Ι-b-羟乙基氧基-2，4- 二氨基-苯(2，4- 二氨基苯氧基乙醇)、1，3- 二羟基-2-甲基苯(2-甲基间苯二酚)、1，2，4-三羟基苯、1，2，4-三羟基-5-甲基苯(2，4，5-三羟基甲苯)、2，3，5-三羟基甲苯、4，8- 二磺酸根-1-萘酚、3-磺酸根-6-氨基-1-萘酚(J酸)、6，8- 二磺酸根-2-萘酌.、1，4-苯二胺、2，5- 二氨基甲苯、2-氯-1，4-苯二胺、2-氨基苯酌.、3-氨基苯酚、4-氨基苯酚、I, 3-苯二胺、1-萘酚、2-萘酚、4-氯间苯二酚、I, 2，3-苯三酚(连苯三酚)、1，3-苯二酚(间苯二酚)、1，2-苯二酚(邻苯二酚)、2_羟基-肉桂酸、3-羟基-肉桂酸、4-羟基-肉桂酸、2，3-二氨基苯甲酸、2，4-二氨基苯甲酸、3，4-二氨基苯甲酸、3，5-二氨基苯甲酸、2，3-二氨基苯甲酸甲酯、2，3-二氨基苯甲酸乙酯、2，3-二氨基苯甲酸异丙酯、2，4-二氨基苯甲酸甲酯、2，4- 二氨基苯甲酸乙酯、2，4- 二氨基苯甲酸异丙酯、3，4- 二氨基苯甲酸甲酯、3，4-二氨基苯甲酸乙酯、3，4-二氨基苯甲酸异丙酯、3，5-二氨基苯甲酸甲酯、3，5-二氨基苯甲酸乙酯、3，5- 二氨基苯甲酸异丙酯、N, N- 二甲基-3，4- 二氨基苯甲酰胺、N，N- 二乙基_3，4- 二氨基苯甲酰胺、N, N- 二丙基_3，4- 二氨基苯甲酰胺、N, N- 二丁基-3，4- 二氨基苯甲酰胺、4-氯-1-萘酚、N-苯基对苯二胺、3，4- 二羟基苯甲醛、吡咯、吡咯-2-氨基咪唑、
I,2，3-三唑、苯并三唑、苯并咪唑、咪唑、吲哚、1-氨基-8-羟基萘-4-磺酸(S酸)、4，5-二羟基萘-2，7- 二磺酸(变色酸)、邻氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸(PABA)、2-氨基-8-萘酚-6-磺酸(咖马酸)、5_氨基-1-萘酚-3-磺酸(M酸)、2_萘酚-3，6- 二磺酸(R酸)、1_氨基_8_萘酚-2，4- 二磺酸(芝加哥酸)、1-萘酚-4-磺酸(奈温酸)、迫位酸、N-苯甲酰基J酸、N-苯基J酸、1，7-克雷伯氏酸、I, 6-克雷伯氏酸、2-羟基-3-萘甲酸、萘酚AS、分散黑9、萘酚AS 0L、萘酚AS PH、萘酚AS KB、萘酚AS BS、萘酚AS D、萘酚AS B1、媒染黑3CI14640 (铬蓝黑B)、
4-氨基-5-羟基-2，6-萘二磺酸(H酸)、苏丹红7B(Cl 11285 )、氢醌、扁桃酸、三聚氰胺、邻硝基苯甲醛、1，5-二羟基萘、2，6-二羟基萘、2，3-二羟基萘、苄基咪唑、2，3-二氨基萘、1，5-二氨基萘、1，8-二氨基萘、水杨酸、3-氨基水杨酸、4-氨基水杨酸、5-氨基水杨酸、3-氨基水杨酸甲酯、4-氨基水杨酸甲酯、5-氨基水杨酸甲酯、3-氨基水杨酸乙酯、4-氨基水杨酸乙酯、
5-氨基水杨酸乙酯、3-氨基水杨酸丙酯、4-氨基水杨酸丙酯、5-氨基水杨酸丙酯、水杨酰胺、4-氨基苯硫酹、4-羟基苯硫酹、苯胺、4，4’- 二氨基二苯胺硫酸盐、4-氨基偶氮苯、4-硝基苯胺、N, N- 二甲基-1，4-苯二胺、N, N- 二乙基-1，4-苯二胺、分散橙3、分散黄9、分散蓝1、N-苯基-1，2-苯二胺、6-氨基-2-萘酌.、3-氨基-2-萘酌.、5-氨基_1_萘酌.、1，2-苯二胺、氨基喃唳、4_氨基喹哪唳、2_硝基苯胺、3-硝基苯胺、2-氯苯胺、3-氯苯胺、4-氯苯胺、4-(苯基偶氮)间苯二酚(苏丹橙G，CI11920)、苏丹红B、CI26110、苏丹红B、CI26050、4’-氨基乙酸苯胺、菌素、1-蒽胺(1-氨基蒽)、1-氨基蒽醌、蒽醌、2，6- 二羟基蒽醌(2，6- 二羟基蒽醌)、1，5_ 二羟基蒽醌(蒽绛酚)、3_氨基吡啶(烟酰胺)、吡啶-3-羧酸(烟酸)、媒染黄
1、茜素黄GG、GI14025、考马斯蓝灰、酸性黑48、CI65005、宫殿坚牢黑WAN(Palantine FastBlack WAN)、安德黑 52 (And Black52)、CI15711、宫殿铬黑 6BN、CI15705、羊毛铬蓝黑 R、媒染黑11、羊毛铬黑1\萘酚蓝黑、酸性黑1、(:120470、1，4-二羟基蒽醌(醌茜)、4-羟基香豆素、伞形酮，7-羟基香豆素、七叶亭6，7- 二羟基香豆素、香豆素、铬变素2B酸性红176、CI1657、铬变素2B酸性红29、CI16570 、铬变素FB酸性红14、CI14720、2，6- 二羟基异烟酸、柠嗪酸、
2,5- 二氯苯胺、2-氨基-4-氯甲苯、2-硝基-4-氯苯胺、2-甲氧基_4_硝基苯胺、对溴苯酚。优选为选自苯二胺、氨基苯酚、甲酚、苯酚、萘酚、吲哚或吲哚啉中的芳香族化合物、或它们的衍生物。这里，衍生物是被I或多个官能团或取代基取代的化合物。这里可导入的官能团或取代基选自卤素；横基；横酸根；横氣基；横酸基；氣基；酸胺；硝基；偶氣；亚氣基；竣基；氛基；甲酸基；羟基；卤代擬基；氣基甲酸基；脉基；勝酸根；勝酸基；C1_18烷基；C1_18烯基；C1-18炔基；C1-18烷氧基；C1-18氧羰基；C1_18氧代烷基；C1_18烷基硫基；C1_18烷基磺酰基；C1-18烷基亚氨基或氨基中，这里各C1-18烷基、C1-18烯基和C1-18炔基可以由任意的上述官能团或取代基进行一、二或多取代。
[0048]本发明的染色剂对角蛋白纤维(人的毛发、牛、马、羊、山羊、羊驼、安哥拉兔等的毛等)的染色尤其有用。作为用于角蛋白纤维的染色，构成本发明的染色剂时优选的氧化染料的例子可以举出对苯二胺类、间苯二胺类、邻苯二胺类、对氨基苯酹类、对氨基苯酹类、邻氨基苯酚类、吡啶衍生物、嘧啶衍生物、吡唑衍生物、间二苯酚类、萘酚类、喷哚啉衍生物、口引哚衍生物以及它们的酸加成盐(作为酸加成盐，例如，可以使用盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、或乙酸盐等。)、吲哚啉化合物、吲哚化合物。这些氧化染料的具体例为对苯二胺、5-氨基邻甲酚、邻氨基苯酚、对氨基苯酚、对氨基苯酚、2，6-二氨基吡啶、5- (2-羟乙基氨基)~2~甲苯二胺、N, N-双(β -羟基)-对苯二胺硫酸盐、对硝基_邻苯二胺、对硝基-2’，4’ - 二氨基偶氮苯.硫酸钠、甲苯_2，5- 二胺、5-氨基邻甲酚.硫酸盐、对氨基苯酚?硫酸盐、邻氯-对苯二胺?硫酸盐、4，4’ - 二氨基二苯基胺?硫酸盐、对甲氨基苯酚?硫酸盐、对苯二胺.硫酸盐、间苯二胺.硫酸盐、甲苯_2，5- 二胺.硫酸盐、2，4- 二氨基苯氧基乙醇.盐酸盐、甲苯_2，5-二胺.盐酸盐、间苯二胺.盐酸盐、2，4-二氨基苯酚.盐酸盐、3，3’ -亚氨基二苯酹、对苯二胺.盐酸盐、N-苯基-对苯二胺.盐酸盐、N-苯基-对苯二胺.乙酸盐、1，5- 二羟基萘、苯亚甲基_3，4- 二胺、对甲氨基苯酚、N，N’ -双(4-氨苯基)-2，5- 二氨基-1，4-醌二亚胺、邻氨基苯酚.硫酸盐、2，4- 二氨基苯酚.硫酸盐、对氨基苯酚.硫酸盐、对甲苯二胺、吲哚啉、5，6- 二羟基吲哚啉、N-甲基-5，6- 二羟基吲哚啉、N-乙基-5，6-二羟基吲哚啉、N-丁基-5，6-二羟基吲哚啉、4-羟基-5-甲氧基吲哚啉、
6-羟基-7-甲氧基吲哚啉、6，7- 二羟基吲哚啉、4，5- 二羟基吲哚啉、4-甲氧基-6-羟基吲哚啉、N-己基-5，6- 二羟基吲哚啉、2-甲基-5，6- 二羟基吲哚啉、3-甲基-5，6- 二羟基吲哚啉、4-羟基吲哚啉、2，3- 二甲基-5，6- 二羟基吲哚啉、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚啉、2-甲基-5-羟基-6- β -羟乙基吲哚啉、4-羟丙基吲哚啉、2-羟基-3-甲氧基吲哚啉、6-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基吲哚啉、5-羟基吲哚啉、7-羟基吲哚啉、7-氨基吲哚啉、5-氨基吲哚啉、4-氨基吲哚啉、5，6-二羟基吲哚啉羧酸、1-甲基-5，6-二羟基吲哚啉、4，5-二羟基吲哚、5，6- 二羟基吲哚、6，7- 二羟基吲哚、N-甲基-5，6- 二羟基吲哚、N-乙基-5，6- 二羟基吲哚、N-己基-5，6- 二羟基吲哚、2-甲基-5，6- 二羟基吲哚、3-甲基-5，6- 二羟基吲哚、4-羟基吲哚、2，3-二甲基-5，6-二羟基吲哚、2-甲基-5-乙基_6_羟基吲哚、2-甲基-5-羟基-6-β -羟乙基吲哚、4-羟丙基吲哚、2-羟基-3-甲氧基吲哚、4-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基-7-甲氧基吲哚、6-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基吲哚、5-羟基吲哚、7-羟基吲哚、7-氨基吲哚、6-氨基吲哚、5-氨基吲哚、4-氨基吲哚、5，6- 二羟基吲哚羧酸、1-甲基-5，6-二羟基吲哚。
[0049]本发明的染色剂使用I种或2种以上的氧化染料。2种以上的氧化染料的并用对例如染色效果的提高、色彩(色调)的调节等有效。尤其，构成用于角蛋白纤维的染色时，可以并用分类于染料前体的氧化染料(对苯二胺、邻氨基苯酹、对氨基苯酹、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚、5，6- 二羟基吲哚等)和分类于染料助剂的氧化染料(间苯二胺、间氨基苯酚、间二苯酚、萘酚、喷哚、喷哚啉、喷唑等)。
[0050]氧化染料的配合量没有特别的限定，可以考虑使用的氧化染料的特性、用途等而决定配合量。一剂型染色剂的情况下，可以以相对于染色剂总量例如为0.01~20重量％、优选为0.05~10重量％、更优选为0.01~I重量％的方式配合氧化染料。二剂型染色剂的情况下，可以以相对于含有氧化染料的第I成分总量例如为0.01~20重量％、优选为
0.05~10重量％、更优选为0.01~I重量％的方式配合氧化染料。
[0051]作为有助于染色的成分，除氧化染料以外，可以配合直接染料。通过配合直接染料，可以提高染色效果，或调节染色的色调。直接染料的例子，可以举出2-氨基-4-硝基苯酌.、2-氨基-5-硝基苯酌.、1-氨基-4-甲氨基蒽醌、硝基-对苯二胺.盐酸盐、I, 4- 二氨基蒽醌、硝基-对苯二胺、苦氨酸、苦氨酸钠、2-氨基-5-硝基苯酚.硫酸盐、间苯二酚、硝基-对苯二胺.硫酸盐、对硝基-邻苯二胺.硫酸盐、对硝基-间苯二胺.硫酸盐、天然橙6 (2-羟基-1，4-萘醌)、酸性橙8、酸性紫17、雷玛素艳蓝、伊文思蓝、酸性蓝80。
[0052]直接染料的配合量也没有特别的限定。一剂型染色剂的情况下，可以以相对于染色剂总量例如为0.01~20重量％的方式配合直接染料。二剂型染色剂的情况下，对含有氧化染料的第I成分和/或含有修饰酶的第2成分配合直接染料。这时的配合量相对于第I成分总量为例如0.01~20重量％,相对于第2成分总量为例如0.01~20重量％。另外，与氧化染料同样，直接染料也能够并用2种以上。
[0053](2)修饰酶
[0054]在本发明中，使用与天然状态(Native)相比，持有的正电荷增加的氧化酶。换句话说，使用以附加正电荷的方式进行修饰的氧化酶。对氧化酶可以使用儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、漆酶(EC1.10.3.2)、胆红素氧化酶(EC1.3.3.5)、邻氨基苯酚氧化酶(EC1.10.3.4)、抗坏血酸氧化酶(EC1.10.3.3)或一元酚氧化酶(EC1.14.18.1)。可以使用来源于植物(例如，来源于漆树科(Anacardiacea)、来源于檬果(Magnifera indica)、来源于加州胡椒树(Schinusmolle)、来源于帖木李(Pleiogynium timoriense)、来源于罗汉松(Podocarpacea))、来源于动物或来源于细菌或真菌(例如，来源于曲霉属(Aspergillus)、来源于葡萄孢属(Botrytis)、来源于金钱菌属(Collybia)、来源于层孔菌属(Fomes)、来源于香燕属(Lentinus)、来源于毁丝霉属(Myceliophthora)、来源于脉孢菌属(Neurospora)、来源于侧耳属(Pleurotus)、来源于柄孢壳菌属(Podospora)、来源于柱顶孢霉属(Scytalidium)、来源于栓菌属(Trametes)、来源于丝核菌属(Rhizoctonia)、来源于腐质霉高温变种(H.thermoidea)、来源于短孢腐质霉(H.brevispora))的酶。此外，也可以使用利用基因重组技术生产的酶(重组酶)。
[0055]在本发明优选的一个方式中，采用胆红素氧化酶作为氧化酶。胆红素氧化酶可以使用例如来源于属于漆斑菌属、鬼伞属、青霉菌属、芽孢杆菌属的微生物的胆红素氧化酶。作为漆斑菌属菌，可以举出疣孢漆斑菌MT-1、FERM-BP653 (参照Agricultural andBiological Chemistry，第 45 卷，2383-2384 页(1981 年))、疣孢漆斑菌 IF06113、疣孢漆斑菌IF06133、抚孢漆斑菌IF06351、抚孢漆斑菌IF09056、漆斑菌(Myrothecium cinctum)IF09950、露湿漆斑菌IF09531等保存菌株。此外，作为鬼伞属菌，可以举出灰盖鬼伞IF08371、Coprinus lagopides IF030120等保存菌株。作为青霉菌属菌，可以举出微紫青霉菌(参照日本特开昭63-309187)。作为芽孢杆菌属菌，可以举出地衣芽孢杆菌(参照日本特开昭61-209587)。将这些菌株通`过常用方法进行液体培养或固体培养，通过从该培养液进行萃取、盐析、透析、离子交换、凝胶过滤等可以得到酶胆红素氧化酶的精制标品。另一方面，已知来源于裂褶菌(参照日本特开昭59-135886)、来源于菊科植物(参照日本特开昭62-285782)、来源于苜蓿(参照日本特开平6-319536)的胆红素氧化酶；重组体(参照日本特开平5-199882)，也可以使用这些胆红素氧化酶。此外，胆红素氧化酶也在市场上销售(AMANO Enzyme株式会社、TAKARA BIO株式会社、旭化成株式会社、Sigma-Aldrich公司等)，也可以使用该市售品。
[0056]本发明中使用的酶通过使用胺类(二胺或多胺(三胺、四胺等))进行化学修饰，从而附加正电荷(以下，将施行了该修饰的酶称为“修饰酶”)。换句话说，通过氨基的附加而增大正电荷。这种修饰方法自身是周知的，例如，可以参考蛋白质的化学修饰法〈上〉，〈下>(学会出版中心，大野等著)、蛋白质杂交(共立出版，稻田编)等。可利用于化学修饰的胺类的例子，可以举出正丁胺、乙二胺、腐胺、3，3’ - 二氨基二丙胺、胍丁胺、N，N’ -双(3-氨基丙基)-1,4-丁二胺、双(六亚甲基)二胺、1，5-二氨基戍烧、二乙烯二胺、精胺、亚精胺或它们的盐等。[0057]通过将构成酶的氨基酸残基的一部分取代为其它氨基酸残基，也能够附加正电荷。具体而言，使用基因工程的方法，在构成氨基酸残基之中，可以将酸性氨基酸残基(例如天冬氨酸、谷氨酸)取代为中性氨基酸(例如谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸)或碱性氨基酸(精氨酸、组氨酸、赖氨酸)。对这种氨基酸残基的取代，可以利用定点突变导入法(MolecularCloning, Third Edition, Chapterl3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York)、随机突变导入法(Molecular Cloning, Third Edition, Chapterl3, Cold Spring HarborLaboratory Press, New York)。
[0058]为了增多正电荷的附加量，优选的是，对2以上的氨基酸残基进行如上述氨基酸残基的取代。但是，若取代的氨基酸残基的数过多，则有可能酶活性受到影响，因此，虽然也取决于修饰对象的酶，但对例如2~10个左右的氨基酸残基施行取代即可。
[0059]在取代的氨基酸残基的选定?确定中，可以以是否影响酶活性为指标。即，可以利用立体结构分析的结果等，在确定不影响(或不太可能影响)酶活性的氨基酸残基的基础上施行取代。另一方面，优选在立体结构上以位于表面的氨基酸残基为取代的目标。这里，若示出利用氨基酸残基取代的修饰的具体例，在由序列号I的氨基酸序列形成的胆红素氧化酶的情况下，优选的取代候补为第91号的Asp、第96号的Asp、第126号的Glu、第151号的Glu、第181号的Glu、第233号的Glu、第280号的Asp、第323号的Asp、第366号的Asp、第376号的Asp、第408号的Asp、第516号的Asp、第529号的Glu、第538号的Glu。因此，可以将它们之中的一种或二种以上取代为碱性氨基酸。
[0060]所需的修饰是否达成可以通过例如在修饰后的酶和修饰前的酶(代表性的为天然的酶)之间比较等电点(Pl)进行判断。即，若通过等电聚焦电泳等将等电点进行比较的结果是修饰后的酶比修饰前的酶等电点高，则可以判断进行了所需的修饰(正电荷的附加)。另一方面，附加氨基时，也可以通过氨基的定量判断修饰的有无、程度等。
[0061]也可以使用除上述修饰以外还施行了其它修饰的酶。作为这里的“其它修饰”，可以举出利用水溶性高分子物质(聚亚烷基二醇、聚乙烯醇、多糖类、部分水解或部分半酯化的苯乙烯和马来酸酐的共聚物、部分水解或部分半酯化的二乙烯基醚和马来酸酐的共聚物、部分水解或部分半酯化的丙烯酸和马来酸酐的共聚物、聚蔗糖、聚氨基酸、白蛋白等)的化学修饰(日本特开昭64-60375)、利用丙烯酰基的修饰(日本特开2009-044997)等。“其它修饰”的目的没有特别的限定。例如，以酶的稳定性、活性和/或保存性的提高，或基质特异性的改变等为目的进行“其它修饰”。
[0062](3)其它成分
[0063]本发明的染色剂除上述各成分以外，能够含有追加的成分(任意成分)。作为任意成分，可以例示碱性化合物、硫代乳酸、亚硫酸钠、N-乙酰基-L-半胱氨酸等还原剂，表面活性剂、油性成分、有机硅类、增稠剂、溶剂、水、螯合剂、氨基酸、各种盐类，保湿剂、防腐剂、抗紫外线剂、醇、多元醇、香料等。
[0064]构成本发明的染色剂用于角蛋白纤维的染色时，可以使其含有碱性化合物。根据含有碱性化合物的染色剂，应用它时，促进角蛋白纤维的溶胀，提高染色效果。碱性化合物的配合量以可以实现使用时所需的PH (例如pH7.0~10.0)的方式进行设定。一剂型染色剂的情况下的配合量的例子是相对于染色剂总量为0.01~20重量％。另一方面，二剂型染色剂的情况下，原则上，使含有氧化染料的第I成分中含有碱性化合物，作为配合量是例如相对于第I成分总量为0.01~20重量％ (但是，可以不使第I成分含有碱性化合物而是使第2成分含有碱性化合物，或也可以使第I成分和第2成分两者含有碱性化合物)。另外，作为碱性化合物的具体例，可以举出单乙醇胺、单异丙醇胺、三乙醇胺、二乙醇胺等胺化合物；氨、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸铵、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾等无机化合物
坐寸ο
[0065]本发明的染色剂制备为糊(膏)状、气溶胶状、凝胶(Gel)状、液状、泡状等形态。在由第I成分(含有氧化染料)和第2成分(含有修饰酶)形成的二剂型的情况下，第I成分和第2成分的形态也可以不同。
[0066]2.染色方法
[0067]本发明的第2方面涉及使用本发明的染色剂的染色方法。在本发明的染色方法中，在存在氧的条件下(即，氧气氛下)，用本发明的染色剂处理纤维或纤维加工品(以下统称为“被染色材料”)。一剂型的染色剂的情况下，例如，将染色剂根据需要进行稀释后，涂布于被染色材料。或将被染色材料浸溃于溶解有染色剂的溶液中。
[0068]二剂型的染色剂的情况下，例如，将第I成分和第2成分混合后(可以根据需要进行稀释，或溶解于溶剂)，涂布于被染色材料。也可以将一者(第I成分或第2成分)涂布于被染色材料后，将另一者涂布于被染色材料，在被染色材料的表面等使得两成分混合。此外，也可以将被染色材料浸溃于溶解有第I成分和第2成分的溶液中。
[0069]通过以上的操作形成染色剂与被染色材料接触的状态。然后，维持该接触状态所需染色所需的时间。此时，为了提高染色效果或为了快速或有效地染色，也可以保温或加温。被染色材料为人毛发的情况下，即，以用本发明的染色方法将人毛发染色的情况举例，维持接触状态例如约10分钟~2小时，优选为约20分钟~I小时。
[0070]处理时的pH条件依赖于使`用的染色剂。但是，也能够另外使用pH调节剂调节pH。处理时的pH例如为pH7.0~9.0。如下述实施例所示，使用附加正电荷的修饰胆红素氧化酶时，即使在比较低的PH条件下也示出高染色效果。基于该发现，在本发明的一个方式中，在pH7.0~ph8.0的条件下进行处理。通过采用该条件，可以减低伴随着染色的被染色材料的损伤。该条件尤其在染色人毛发时有效，也能够减低人毛发的损伤和对皮肤(头皮)的刺激。
[0071]上述处理后，通常洗涤被染色材料，最后使其干燥。洗涤可以使用例如水、洗剂等。此外，作为干燥的方法，可以例示风干(自然干燥)、热风干燥、旋转干燥、抽吸干燥、桶干燥
坐寸ο
[0072]在本发明的染色方法中，通过修饰酶的作用产生氧化染料的氧化、聚合，染色被染色材料。在本发明中，由于氧化反应中利用酶，伴随染色处理的被染色材料的损伤(Damage)少。此外，应用于毛发时，对头皮的不良影响(过敏反应)等可能性也减少。另一方面，使用于本发明的酶通过如上述修饰显示出对被染色材料的高亲和性。通过该特性，酶反应(即氧化染料的氧化)有效地进行，染色效果提高。由此，本发明的染色剂能够减低对被染色材料等的影响，同时有效地染色。
[0073]3.其它用途
[0074]在本发明中的修饰酶作为烫发剂的成分也有用。在一般的烫发的操作中，利用以
还原剂(巯基乙酸、巯基乙酸盐类、半胱氨酸、羟基半胱氨酸、二羟基半胱氨酸、乙酰基化半胱氨酸、亚硫酸钠等)为主要成分的第I剂切断毛发中的二硫键(S-S)，接着，利用以氧化剂为主要成分的第2剂处理毛发，使切断的S-S键再形成。氧化剂使用溴酸钠、过硼酸盐、过氧化氢等。能够使用本发明的修饰酶代替这种氧化剂。使用本发明的修饰酶时，也能够构成一剂型的烫发剂。
[0075]实施例
[0076]以在使用氧化酶的染色方法中的染色效果的提高为目的，进行了以下研究。具体而言，对氧化酶之一的胆红素氧化酶(BO)施行规定的修饰，研究对染色效果的影响。应予说明，以对人毛发的染色为指标。
[0077]A.BO 的修饰
[0078]1.方法
[0079](I)氨基的修饰
[0080]用以下方法对BO施行附加氨基的修饰。对200mg的BO(来源于抚孢漆斑菌,AMANOEnzyme公司制)加入以摩尔比1000当量的腐胺、100当量的N-羟基琥珀酰亚胺和200当量的水溶性碳二亚胺(EDC)，用20mM HEPES (pH6.5)制成20ml，在4°C使其反应I天。应予说明，腐胺是用稀硫酸进行PH调节。
[0081](2)样品的精制
[0082]为了从反应后的样品除去未反应的腐胺，用以20mM硼酸缓冲液(pH9.0)平衡了的IODG柱(BIO-RAD)精制样品。
[0083](3)活性测定
[0084]将试剂胆红素30mg溶解于0.05mol/L磷酸盐缓冲液(ρΗ7.0)(含有0.05mmol/LEDTA) 1.0ml中制成基质溶液。在0.05mol/L磷酸盐缓冲液(ρΗ7.0)(含有0.05mmol/L EDTA)中溶解胆酸钠使得其达到1%，在该3ml中混合0.2ml的基质溶液和0.1ml的酶液后，使其在37°C反应，由460nm的吸光度的减少进行测定。将使I μ mo I的胆红素氧化I分钟所需的酶量定义为I单位。
[0085](4)等电聚焦电泳
[0086]为了与未修饰BO的电荷进行比较，进行了等电聚焦电泳。
[0087](5)氨基的定量
[0088]用以下方法定量氨基。将测定样品(蛋白质含量:0.6~1.0mg/ml的范围内冲的蛋白质含量进行统一后，将制备样品(0.25ml),4% NaHCO3 (0.25ml)、0.1%TNBS (0.25ml)水溶液进行混合。在40°C使其反应2小时。加入5%SDS (0.25ml)、lM HCl (0.125ml)使反应停止，测定345nm的吸光度。将用水代替测定样品而得的溶液作为空白，将减去空白的测定值的值作为A0D。将未修饰BO中的氨基的结合量设为8 (赖氨酸的部分为7以及N末端为I)而定量氨基的量。
[0089]2.结果
[0090]活性测定的结果示于以下表1。收率为5成左右。
[0091][表 1]
【权利要求】
1.一种染色剂，其特征在于，包含通过胺类的化学修饰对如下的酶附加正电荷而得到的修饰酶，所述酶是选自以ECl.10.3.1编号的酶、以ECl.10.3.2编号的酶、以ECl.3.3.5编号的酶、以ECl.10.3.4编号的酶、以ECl.10.3.3编号的酶和以ECl.14.18.1编号的酶中的酶。
2.如权利要求1所述的染色剂，其特征在于，将氧化染料组合而成。
3.如权利要求2所述的染色剂，是含有所述氧化染料和所述修饰酶的一剂型。
4.如权利要求2所述的染色剂，是由含有所述氧化染料的第I成分和含有所述修饰酶的第2成分形成的二剂型。
5.如权利要求1~4中的任一项所述的染色剂，其用于角蛋白纤维的染色。
6.如权利要求5所述的染色剂，其中，所述角蛋白纤维为人毛发。
7.如权利要求2~6中的任一项所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自苯二胺、氨基苯酚、甲酚、甲苯二胺、萘酚、吲哚、吲哚啉和它们的衍生物中的一种以上的化合物。
8.如权利要求2~6中的任一项所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自对苯二胺、对氨基苯酚、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚和5，6-二羟基吲哚中的一种以上的化合物。
9.如权利要求1~8中的任一项所述的染色剂，其中，所述酶为胆红素氧化酶。
10.一种染色方法，其特征在于，包含用权利要求1~9中的任一项所述的染色剂将纤维或纤维加工品进行处理的步骤。`
11.如权利要求10所述的染色方法，其中，所述纤维为角蛋白纤维。
12.如权利要求11所述的染色方法，其中，所述角蛋白纤维为人毛发。
13.如权利要求12所述的染色方法，其中，在pH为7.0~8.0的条件下进行所述处理。
【文档编号】C12N9/04GK103517703SQ201280022797
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年5月10日 优先权日:2011年5月11日
【发明者】广濑芳彦, 佐藤幸秀 申请人:天野酶株式会社