采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法。本发明通过在羊肚菌深层发酵培养液中添加黄芪提取液，以促进羊肚菌菌丝体的生长，提高羊肚菌多糖含量。黄芪中的活性成分（生物碱、皂苷、黄酮等）可促进或抑制药用真菌菌丝体的生长及代谢产物的生产。
【专利说明】采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法。
【背景技术】
[0002]羊肚菌(Morchella sp.)是一种珍贵稀有的野生食药用菌,营养价值高。现代药理学研究表明，羊肚菌生物活性有效组分食(药)用真菌多糖的含量很高，其子实体多糖入药有消积杀虫的作用，能增强人体免疫功能，具有抗病毒、抗肿瘤作用，能降低胆固醇含量，防止动脉硬化等。
[0003]虽有报道称已实现羊肚菌的人工栽培，但迄今未见商品化人工栽培羊肚菌的报道，究其原因主要是羊肚菌子实体形成阶段对空气十分敏感。利用野生子实体来提取羊肚菌多糖成本高，原料来源有限。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法。
[0005]本发明采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法包括下列步骤:
A、将黄芪提取液添加入羊肚菌深层发酵培养基中；
B、接入羊肚菌液体菌种至含黄芪提取液的羊肚菌深层发酵培养基中进行羊肚菌深层发酵，其中羊肚菌液体菌种由羊肚菌一级种接入羊肚菌深层发酵培养基中制得。
[0006]优选方案，所述步骤A和步骤B所述的羊肚菌深层发酵培养基按重量百分比计的组成为，玉米粉1%~5%、黄豆粉0.1%~0.5%、硫酸镁0.05%~0.1%、磷酸二氢钾0.1%~
0.2%、磷酸氢二钾0.1%~0.2%，其余为水。
[0007]优选方案,所述步骤A黄苗提取液的浓度为5mg/ml~15mg/ml。
[0008]优选方案，所述步骤A中的黄芪提取液的制备过程为，将黄芪浸泡30min，然后用文火熬煮30min，用四层纱布过滤，再将药渣加水熬煮一遍过滤，然后将两遍滤液混合在一起，制得黄芪提取液。
[0009]优选方案，所述步骤B羊肚菌深层发酵过程为，在无菌条件下将羊肚菌液体菌种按10%的体积比接种到添加了黄芪提取液培养基中，在温度25°C，pH值为6，转速160r/min的恒温振荡器内振荡培养，5—8d后测定发酵液中羊肚菌菌丝体干重和菌丝体多糖含量。羊肚菌多糖的含量达到峰值。
[0010]优选方案，羊肚菌液体菌种的制备过程为，
将羊肚菌一级种无菌操作接入羊肚菌深层发酵培养基中，接种块的大小、薄厚以菌种块浮在液面不沉下去为准，先置于恒温培养箱，25°C静置48-72小时，待菌丝萌发后，置于摇床上，以160r/min的转速、在25°C的温度下摇瓶培养7d，制得羊肚菌液体菌种。[0011]羊肚菌(Morchella sp.) 一级种购买于四川省绵阳食用菌研究所。
[0012]中药黄苗dtragaJiAs membranaceus -(Fisch.}伽/7职)，别名绵苗，为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根。黄芪含皂昔、黄酮、氨基酸、亚油酸、生物碱、多种矿物质及维生素等化学成分。黄芪中的活性成分(生物碱、皂苷、黄酮等)可促进或抑制药用真菌菌丝体的生长及代谢产物的生产，在羊肚菌深层发酵培养液中添加黄芪提取液，可以促进羊肚菌菌丝体的生长，提高羊肚菌多糖含量。
[0013]本发明在甘肃名贵食(药)用真菌羊肚菌的深层发酵培养基中，添加适量浓度的甘肃特色中药黄芪提取液，利用发酵过程中的相互增效作用来提高羊肚菌多糖得率，为羊肚菌多糖的开发利用及生产提供理论依据和技术支撑，减少由于人们对羊肚菌野生资源的过渡采摘而造成的生态破坏。【具体实施方式】
[0014]下面的实施例可以使本领域的技术人员更好地理解本项技术，但不以任何方式限制本发明。
[0015]实施例1:
1.羊肚菌深层发酵培养基组成:玉米粉(煮汁)1%，黄豆粉(煮汁)0.5%，硫酸镁0.05%，磷酸二氢钾0.1%，磷酸氢二钾0.1%，以上组分均按重量百分含量计算，其余为水。
[0016]2.黄芪提取液的准备，称取黄芪250g，在500ml水中浸泡30min，然后用文火熬煮30min,用四层纱布过滤，再将药渣加水熬煮一遍过滤，然后将两遍滤液混合在一起，制得黄芪提取液。
[0017]3.黄芪提取液的添加:将10mg/ml的黄芪提取液加入羊肚菌深层发酵培养基中共计300ml，装入500ml的三角瓶中，棉花塞封口，0.12MPa灭菌30min，冷却后待用。
[0018]4.羊肚菌液体菌种准备:将羊肚菌一级种无菌操作接入羊肚菌深层发酵培养基中，接种块的大小、薄厚以菌种块浮在液面不沉下去为准，先置于恒温培养箱，25°C静置60小时，待菌丝萌发后，置于摇床上，以160r/min、25°C摇瓶培养7d，制得羊肚菌液体菌种。
[0019]5.羊肚菌深层发酵:在无菌条件下抽取30ml制备好的羊肚菌液体菌种，接种到添加了黄芪提取液培养基中，在温度25V, pH值为6，转速160r/min的恒温振荡器内振荡培养5d，测定发酵液中羊肚菌菌丝体干重和菌丝体多糖含量。
[0020]对照例:空白对照组为不加黄芪提取液的深层发酵培养基300ml，装入500ml的三角瓶中，棉花塞封口，0.12MPa灭菌30min，冷却后待用。接入羊肚菌液体菌种进行羊肚菌深层发酵，在无菌条件下抽取30ml制备好的羊肚菌液体菌种，接种到空白对照组中，在温度25V, pH值为6，转速160r/min的恒温振荡器内振荡培养5d，测定发酵液中羊肚菌菌丝体
干重和菌丝体多糖含量。
[0021]实施例1与对照组相比，添加黄芪提取液的发酵液中羊肚菌菌丝体的干重提高了25.6%，菌丝体多糖的含量提高了 22.7 %。
[0022]实施例2:与实施例1不同在于羊肚菌深层发酵培养基组分的含量不同:玉米粉(煮汁)3%，黄豆粉(煮汁)0.3%,硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.15%，磷酸氢二钾0.20%,以上组分均按重量百分含量计算，其余成分为水。
[0023]与对照组相比，添加黄芪提取液的发酵液中羊肚菌菌丝体的干重提高了 18.2%，菌丝体多糖的含量提高了 8.5%。
[0024]实施例3:与实施例1不同在于羊肚菌深层发酵培养基组分的含量不同:玉米粉(煮汁)5%,黄豆粉(煮汁)0.1%,硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.2%，磷酸氢二钾0.15%，以上组分均按重量百分含量计算，其余成分为水。
[0025] 与对照组相比，添加黄芪提取液的发酵液中羊肚菌菌丝体的干重提高了 16.4%，菌丝体多糖的含量提高了 6.1%。
[0026]实施例4:与实施例1不同在于将15mg/ml的黄芪提取液加入羊肚菌深层发酵培养基中。羊肚菌液体菌种制备时间为48小时，羊肚菌液体菌种进行羊肚菌深层发酵在恒温振荡器内振荡培养8d。与对照组相比，添加黄芪提取液的发酵液中羊肚菌菌丝体的干重提高了 9.1%，菌丝体多糖的含量提高了 4.9%。
[0027]实施例5:与实施例1不同在于将5mg/ml的黄芪提取液加入羊肚菌深层发酵培养基中。羊肚菌液体菌种制备时间为72小时，羊肚菌液体菌种进行羊肚菌深层发酵在恒温振荡器内振荡培养7d。与对照组相比，添加黄芪提取液的发酵液中羊肚菌菌丝体的干重提高了 10.6%，菌丝体多糖的含量提高了 7.3%。
【权利要求】
1.采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法，它包括下列步骤: A、将黄芪提取液添加入羊肚菌深层发酵培养基中； B、接入羊肚菌液体菌种至含黄芪提取液的羊肚菌深层发酵培养基中进行羊肚菌深层发酵，其中羊肚菌液体菌种由羊肚菌一级种接入羊肚菌深层发酵培养基中制得。
2.由权利要求1所述的方法，其特征在于:所述步骤A和步骤B所述的羊肚菌深层发酵培养基按重量百分比计 的组成为，玉米粉1%~5%、黄豆粉0.1%~0.5%、硫酸镁0.05%~0.1%、磷酸二氢钾0.1%~0.2%、磷酸氢二钾0.1%~0.2%，其余为水。
3.由权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述步骤A黄芪提取液的浓度为5mg/ml ~15mg/ml。
4.由权利要求3所述的方法，其特征在于:所述步骤A中的黄芪提取液的制备过程为，将黄芪浸泡30min，然后用文火熬煮30min，用四层纱布过滤，再将药渣加水熬煮一遍过滤，然后将两遍滤液混合在一起，制得黄芪提取液。
5.由权利要求4所述的方法，其特征在于:所述步骤B羊肚菌深层发酵过程为，在无菌条件下将羊肚菌液体菌种按10%的体积比接种到添加了黄芪提取液培养基中，在温度25°C，pH值为6，转速160r/min的恒温振荡器内振荡培养，5 — 8d后测定发酵液中羊肚菌菌丝体干重和菌丝体多糖含量。
6.由权利要求5所述的方法，其特征在于:羊肚菌液体菌种的制备过程为，将羊肚菌一级种无菌操作接入羊肚菌深层发酵培养基中，先置于恒温培养箱，25°C静置48-72小时，待菌丝萌发后，置于摇床上，以160r/min的转速、在25°C的温度下摇瓶培养7d，制得羊肚菌液体菌种。
【文档编号】C12R1/645GK103952451SQ201410176638
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年4月29日 优先权日:2014年4月29日
【发明者】韩融冰, 路等学, 赵玉卉, 王龙, 秦鹏 申请人:甘肃省科学院生物研究所