胰腺神经内分泌肿瘤易感基因位点及检测方法和试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及胰腺神经内分泌肿瘤易感基因位点及检测方法和试剂盒。具体地，本发明公开了基于全基因测序研究而发现的胰腺神经内分泌肿瘤易感基因位点，该位点是YY1(YinYangl)基因的高频T372R体细胞突变。本发明还提供了一种检测胰腺神经内分泌肿瘤易感性和胰腺神经内分泌肿瘤亚型分类的方法，它包括检测个体的YY1基因体细胞突变、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体胰腺神经内分泌肿瘤的亚型，为疾病的诊断、预后判断和治疗选择提供重要依据。本发明还公开了相应的检测试剂盒。
【专利说明】胰腺神经内分泌肿瘤易感基因位点及检测方法和试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及YYl基因及其突变位点与胰腺 神经内分泌肿瘤的相关性，它们可在胰腺神经内分泌肿瘤中用于分型诊断和作为药物靶标 的致病基因位点。本发明还涉及检测这些突变位点的方法和试剂盒。
【背景技术】
[0002] 功能性胰腺神经内分泌肿瘤的主要类型为胰岛细胞瘤。胰岛细胞瘤不依赖葡萄糖 刺激持续过量分泌胰岛素，可引起严重低血糖等临床症状。
[0003] 虽然已开展了一些胰腺神经内分泌肿瘤相关基因的遗传学研究，过去几年对胰腺 神经内分泌肿瘤的相关风险位点已经有了一些研究发现，但是对于导致散发功能性胰腺神 经内分泌肿瘤的遗传背景尚缺乏了解。
[0004] 近年来，全基因组测序和全外显子测序技术在多基因疾病研究中的广泛运用，为 在分子水平上研究胰腺神经内分泌肿瘤的发生和发展的机制开辟了全新的途径。同时，高 通量、低成本的突变测序检测技术的不断出现和成熟也为快速对重要疾病相关基因的序列 和位点分析提供了可能。
[0005] 重要疾病易感基因突变位点的存在与否以及在疾病人群中的发生及地域的差异 对多基因疾病的诊断、分型、预后半段和治疗方案选择具有重大意义。这些技术和方法是未 来实现疾病个体化治疗的基础。
[0006] 虽然已有一些基因突变和多态性位点与胰腺神经内分泌肿瘤相关性的研究，但没 有证实YYl基因与功能性胰腺神经内分泌肿瘤相关性的报道，更没有证实本发明所述的 YYl基因突变位点与胰腺神经内分泌肿瘤相关性的报道。
[0007] 综上所述，为了尽早诊断、分型和治疗胰腺神经内分泌肿瘤，本领域迫切需要寻找 胰腺神经内分泌肿瘤易感基因，并开发检测胰腺神经内分泌肿瘤易感基因的方法、试剂盒， 或相关的治疗药物和方案。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的就是提供一种辅助诊断（尤其是早期辅助诊断）胰腺神经内分泌肿 瘤的方法及检测试剂盒。
[0009] 本发明的另一目的是提供一种新的治疗胰腺神经内分泌肿瘤的方法。
[0010] 在本发明的第一方面，提供了一种体外非诊断性检测样品是否存在YYl基因的体 细胞位点突变的方法，包括步骤：
[0011] (a)用特异性引物扩增样品的YYl基因，得到扩增产物；和
[0012] (b)检测扩增产物中是否存在以下突变位点：
[0013] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. :1中第1115位C - G。
[0014] 在另一优选例中，所述的YYl基因的核苷酸序列对应于人第14号染色体的第 100, 743, 807 位（NCBI36/hgl8)。
[0015] 在另一优选例中，所述的基因特异性引物具有SEQ ID N0:3和4所示序列。
[0016] 在另一优选例中，所述的扩增产物的长度为80-2000bp且含有SEQ ID NO: 1中第 1115 位。
[0017] 在另一优选例中，所述的检测是对胰腺神经内分泌肿瘤细胞进行检测。
[0018] 在本发明的第二方面，提供了一种检测胰腺神经内分泌肿瘤的试剂盒，它包括特 异性扩增YYl基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为80-2000bp且含有SEQ ID NO: 1中第1115位的扩增产物。
[0019] 在另一优选例中，所述试剂盒还含有选自下组的试剂：
[0020] (a)与SEQ ID NO: 1中第1115位的突变结合的探针；
[0021] (b)识别SEQ ID NO: 1中第1115位的突变限制性内切酶。
[0022] 在另一优选例中，所述的突变是以下单核苷酸突变（SNV):
[0023] YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0024] 在另一优选例中，所述的引物具有SEQ ID N0:3和4所示序列。
[0025] 在本发明的第三方面，提供了一种YYl基因的用途，用于制备对胰腺神经内分泌 肿瘤进行诊断分型的试剂或试剂盒。
[0026] 在另一优选例中，所述的试剂或试剂盒用于检测以下单核苷酸突变（SNV):
[0027] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0028] 在另一优选例中，所述的试剂包括特异性扩增YYl基因或转录本的引物、含有所 述突变位点的扩增产物、与所述突变位点特异性结合的探针、特异性检测所述突变位点的 核酸芯片。
[0029] 在另一优选例中，所述的试剂盒包括使用说明书以及一种或多种以下试剂：
[0030] 容器（a)以及位于所述容器内的特异性扩增YYl基因或转录本的引物；
[0031] 容器（b)以及位于所述容器内的与所述突变位点特异性结合的探针；
[0032] 容器（C)以及位于所述容器内的特异性检测所述突变位点的核酸芯片。
[0033] 在另一优选例中，所述的核酸芯片还包括用于检测额外的胰腺神经内分泌肿瘤易 感位点的检测点。
[0034] 在另一优选例中，所述的额外的胰岛细胞瘤体细胞突变位点选自下组：
[0035] MLL3基因的错义突变：第7号染色体，第151，874, 400位A - G ;
[0036] H3F3A基因的错义突变：第1号染色体，第226, 252, 135位A - G ;
[0037] LM02基因的移码突变：第11号染色体，第33, 886, 330位插入C (*/+〇
[0038] 在本发明的第四方面，提供了一种多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特异性 扩增含突变位点的扩增产物的引物和/或与所述SNV位点特异性结合的探针，其特征在于， 所述的核苷酸分子用于制备对胰腺神经内分泌肿瘤进行诊断分型的试剂盒，并且所述的突 变位点选自下组：
[0039] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0040] 在另一优选例中，所述的突变位点是YYl基因的核苷酸序列，并且所述的试剂盒 用于判断胰腺神经内分泌肿瘤病人是否适合采用依维莫司治疗。
[0041] 在另一优选例中，当胰腺神经内分泌肿瘤病人具有该突变位点，则提示该病人适 合依维莫司（Everolimus)治疗。
[0042] 在另一优选例中，所述试剂盒用于检测东亚人群（尤其是中国人群）的胰腺神经 内分泌肿瘤分型。
[0043] 在本发明的第五方面，提供了一种对个体的胰腺神经内分泌肿瘤进行诊断分型 的方法，其特征在于，它包括步骤：
[0044] 检测该个体的YYl基因、转录本和/或蛋白，并与正常的YYl基因、转录本和/或 蛋白相比较，
[0045] 其中，存在差异就表明该个体患胰腺神经内分泌肿瘤属于YYl突变亚型，具有特 定临床特征，预后判断和治疗手段。
[0046] 在另一优选例中，检测的是YYl基因或转录本，并与正常细胞DNA核苷酸序列比较 差异。
[0047] 在另一优选例中，所述的YYl突变基因会造成下游基因的表达量上调。
[0048] 在另一优选例中，所述的下游基因包括IDH3A、UCP2、C0L1A1、C0X5A、PGC-I a、或 PGC-I P，优选地，所述的下游基因包括IDH3A、UCP2、或C0L1A1。
[0049] 在另一优选例中，所述的差异是以下突变位点：
[0050] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0051] 在本发明的第六方面，提供了一种YYl基因的用途，它被用于制备判断胰腺神经 内分泌肿瘤病人是否适合采用依维莫司治疗的试剂或试剂盒。
[0052] 在本发明第七方面，提供了一种多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特异性突 变位点的扩增产物的引物和/或与所述突变位点特异性结合的探针，所述的核苷酸分子用 于制备判断胰腺神经内分泌肿瘤病人是否适合采用依维莫司治疗的试剂盒，并且所述的突 变位点选自下组：
[0053] YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
[0054] 在另一优选例中，当胰腺神经内分泌肿瘤病人具有该突变位点，则提示该病人适 合依维莫司（Everolimus)治疗。
[0055] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再 累述。
【专利附图】
【附图说明】
[0056] 图1显示了散发功能性胰腺神经内分泌肿瘤中的YYl基因 T372R热点突变。
[0057] (a)人类YYl蛋白功能域和外显子示意图。T372R突变位于YYl基因编码蛋白的 第三个锌指结构功能域中。
[0058] (b) Sanger测序和焦磷酸测序验证T372R体细胞突变。
[0059] (c) T372位点及其所在的锌指结构功能域在各物种之间非常保守。
[0060] (d)基于YYl蛋白锌指结构功能域的蛋白晶体结构所进行的T372R突变位置分析。 T372R突变位于第三个锌指结构功能域中，并处于和DNA结合的表面，提示其与转录调控和 DNA修饰有关。
[0061] 图2显示了散发胰岛细胞瘤中的YYl基因T372R热点突变的检测结果。通过 Sanger测序（a)和焦磷酸测序（b)技术检测和确定了胰岛细胞瘤细胞中YYl基因的T372R 热点突变。
[0062] 图3显示了散发胰岛细胞瘤中的YYl基因表达的定量检测结果。突变型和野生型 YYl基因在胰岛细胞瘤细胞中均有较高水平的表达。
[0063] 图4显示了散发胰岛细胞瘤中的YYl基因发生T372R突变后，对下游基因表达的 影响。
[0064] 图5显示了转基因小鼠模型构建策略。
[0065] 图6的细胞增殖检测显示野生型和突变型YYl基因过表达均能诱导胰岛细胞瘤细 胞显著增殖，T372R突变型YYl基因促进胰岛细胞瘤细胞增殖的作用更强。
[0066] 图7显示了 YYl转基因小鼠胰岛细胞增殖标志物Ki67表达显著增高，而给予mTOR 抑制剂后Ki67的升高受到可被显著抑制。
【具体实施方式】
[0067] 本发明人经过广泛而深入的研究，对大量候选基因进行了测定和分析。首次发现 和证明了 YYl基因组序列与胰腺神经内分泌肿瘤（即胰岛细胞瘤）的发生密切相关。关联 研究结果显示，在SEQ ID NO: 1中第1115位（第14号染色体第100, 743, 807位C - G)的 突变位点（命名为T372R突变）在对照组和病例组中的分布存在显著性差异（P〈0. 05)，因 此可作为辅助性诊断检测的特异性基因位点（SNV)。在此基础上完成了本发明。
[0068] 具体地，通过对10对散发的功能性胰腺神经内分泌肿瘤进行全外显子测序，本发 明人发现了在YYl (Yin Yangl)基因中高频率的T372R突变，并在113例的功能性胰腺神经 内分泌肿瘤中通过测序发现此位点在所有的肿瘤中突变频率非常高，为30% (34/113)。该 基因的热点突变首次揭示了 YYl基因的T372R位点对于胰腺神经内分泌肿瘤发生的重要作 用，并可用于胰腺神经内分泌肿瘤的分型诊断标志物和药物靶点，即具有该位点的YYl基 因突变更适合采用mTOR(例如依维莫司）进行治疗。
[0069] YYl 基因
[0070] YYl基因的序列是已知，其详细序列和一些相关信息可参见网址http: //Ww. ncbi.nlm.nih.gov/Genebank/。为了方便起见，在SEQ ID NO: 1给出YYl基因与本发明相 关的核苷酸序列。
[0071] YYl基因位于14号染色体，编码YYl蛋白，YYl蛋白为广泛表达且保守的转录因 子，在代谢调控，多种肿瘤发生以及表观遗传调控等过程中起重要作用。
[0072] 胰腺神经内分泌肿瘤相关突变
[0073] 本发明人通过全基因组关联和验证研究，研究结果表明，SEQ ID NO: 1中第1115位 的突变是与胰腺神经内分泌肿瘤发生关联性非常高的位点。该高频率的T372R突变在所有 的散发胰岛细胞瘤中突变频率非常高，为约30% (34/113)。
[0074] 具体而言，本发明揭示了 YYl基因的T372R位点突变与胰腺神经内分泌肿瘤发生 的相关性。
[0075] 如本文所用，术语"本发明的基因突变位点"或"本发明SNV"指YYl基因的核苷酸 序列（如SEQ ID NO. : 1所示）中第1115位C/G突变，等位基因型G在胰腺神经内分泌肿 瘤中的发生频率，要显著高于在正常对照人群中的频率。在正常对照DNA序列中无该突变 位点存在。
[0076] 基于本发明的新发现，YYl基因或相应的核酸分子或多肽分子有多方面的新用途。 这些用途包括（但不限于）：
[0077] 用于辅助性诊断胰腺神经内分泌肿瘤；
[0078] 用于辅助性判断胰腺神经内分泌肿瘤治疗方案（如是否适合依维莫司治疗方 案）；
[0079] 用于制备用于辅助性诊断胰腺神经内分泌肿瘤的试剂或试剂盒；
[0080] 用于制备判断胰腺神经内分泌肿瘤病人是否适合采用依维莫司治疗的试剂盒。
[0081] 检测方法、检测试剂及试剂盒
[0082] 与YYl基因相关的突变位点可用于胰腺神经内分泌肿瘤的辅助诊断分型，尤其是 早期辅助性诊断。另一方面，本发明的检测方法可用于评估胰腺神经内分泌肿瘤患者个体 的疾病预后和治疗方案。
[0083] 本领域的技术人员知道，有大量的分析技术可用于检测基因中所述位点是否存在 突变。这些技术包括（但并不限于）=DNA测序、杂交测序；酶促错配切割、异源双链分析、点 杂交、寡核苷酸阵列（芯片）、焦磷酸测序、Taqman探针检测技术、分子信标等。
[0084] 用于本发明的测试样品没有特别限制，对于检测突变位点而言，可以是从细胞或 组织等样品中抽提出的DNA或mRNA。由于本发明的T372R突变是体细胞突变，因此该在突 变存在于胰岛细胞或胰岛肿瘤细胞中，通常而不存在于外周血细胞中。因此，优选的测试样 品是胰岛组织或胰岛肿瘤细胞。
[0085] 本发明的基因序列检测的一部分或全部可作为探针固定在微阵列（microarray) 或DNA芯片（又称为"基因芯片"或"核酸芯片"）上，用于分析组织中基因的序列和差异表 达分析，以及基因诊断。用YYl基因特异的引物进行RNA-聚合酶链反应（RT-PCR)体外扩 增也可检测相应的转录产物。
[0086] 检测可以针对cDNA，也可针对基因组DNA。YYl基因的突变的形式包括与正常 野生型DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如 Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响相关蛋 白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
[0087] 最方便的检测本发明突变位点的方法，是通过用YYl基因特异性引物扩增样品的 YYl基因，得到扩增产物；然后检测扩增产物中是否存本发明的单核苷酸突变（SNV)。
[0088] 应理解，在本发明首次揭示了 YYl基因的突变位点与胰腺神经内分泌肿瘤的相关 性之后，本领域技术人员可以方便地设计出可特异性扩增出含该突变位点位置的扩增产 物，然后通过测序等方法确定是否存在本发明的突变。通常，引物的长度为15-50bp，较佳地 为20-30bp。虽然引物与模板序列完全互补是优选的，但是本领域技术人员知道，在引物与 模板存在一定的不互补（尤其是引物的5'端）的情况下，也能够特异性地扩增（即仅扩增 出所需的片段）。含有这些引物的试剂盒和使用这些引物的方法都在本发明范围之内，只 要该引物扩增出的扩增产物含有本发明基因突变位点的对应位置。一种优选的引物对具有 SEQ ID NO: 1中第1115位的序列。
[0089] 虽然扩增产物的长度没有特别限制，但是通常扩增产物的长度为100_2000bp，较 佳地为150-1500bp，更佳地为200-1000bp。这些扩增产物都应含有SEQ ID N0:1中第1115 位。
[0090] 本发明的主要优点包括：
[0091] 首次用实验证实了 1种新体细胞突变与胰腺神经内分泌肿瘤的密切相关性，进而 提供了辅助性诊断分型胰腺神经内分泌肿瘤的方法和试剂盒。本发明可以为临床诊断（尤 其是早期诊断）胰腺神经内分泌肿瘤提供极为有价值的辅助性参考指标，从而有利于实现 胰腺神经内分泌肿瘤的早诊断、分型诊断和早期预防。
[0092] 由于本发明的突变位点与胰腺神经内分泌肿瘤具有非常高的关联性，因此不仅可 用于早期辅助性诊断胰腺神经内分泌肿瘤，而且可以未雨绸缪地使一些携带者在未发病前 就采取合理的预防措施，从而提高携带者的生存期和生存质量，因此具有极其重大的应用 价值和社会效益。当然，最终诊断还应当用常规检测方法进行确诊。
[0093] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件如 Sambrook 等人，分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0094] 在本发明中，关于各基因的序列，蛋白质结构及其他一些有用信息，可在如下电子 数据库信息中找到：
[0095] Cancer Gene Census (http://www. sanger. ac. uk/genetics/CGP/Census/)
[0096] Picard(http://picard. sourceforge. net/)
[0097] PyMOL (http: //www. pymol. org)
[0098] 实施例I
[0099] I. I临床标本
[0100] 功能性胰腺神经内分泌肿瘤诊断的标准：出现低血糖等相关临床症状，评估血胰 岛素和血糖水平（延长口服葡萄糖耐量试验），CT/PET-CT影响诊断，手术切除肿瘤的病理 诊断。基因组DNA抽提自液氮保存的胰岛细胞肿瘤和匹配的外周血液样本，以及福尔马林 固定的石蜡包埋（FFPE)的胰岛素瘤组织样本。DNA的制备使用QIAGEN公司的DNeasy试剂 盒以及QIAamp DNA FFPE组织试剂盒。
[0101] 对FFPE组织使用标准技术进行脱蜡。对样本进行免疫荧光染色，根据标准的实验 步骤。使用了以下的主要抗体：多克隆兔抗YYl抗体（1:100 ;0riGene，克隆EPR4651)和多 克隆豚鼠抗胰岛素（l:400，Dako公司）。用于免疫突光染色的二抗购自Invitrogen和Dako 公司。使用奥林巴斯显微镜系统拍摄图像。
[0102] 1. 2外显子组捕获，文库制备和测序
[0103] 使用Covaris技术，构建片段200至300bp的基因组文库。基因组DNA来源于胰岛 细胞瘤肿瘤组织及其匹配的外周血。然后使用适配器连接的片段的两端。然后，对提取的 0嫩通过？0?〇11-?0〇扩增并纯化，在附1111316661^24411人外显子组测序芯片上进行杂交，然 后洗涤去掉非杂交的片段。非捕获和捕获的LM-PCR产物通过进行定量PCR来评估富集程 度。捕获的每个文库在Hi Seq2000平台进行高通量测序，并确保每个样品满足所需要的平 均测序覆盖深度。测序的图像文件通过Illumina的软件（默认参数）进行读取。
[0104] 1. 3测序序列比对和变异检测
[0105] 使用默认参数的BWA软件（vO. 5. 9)，参照NCBI人类参考基因组（hgl9)对高质量 的测序结果序列进行比对。使用Picard软件（vl. 54)和基因组分析工具（vl. 0. 6076, GATK IndelRealigner)，提高分析准确度。体细胞的点突变检测使用VarScan2. 2. 5软件，程序参 数如下：samtools (vO. L 18) 3mpileup - Q0&&VarScan2. 2. 5somatic -min-coveragelO-mi n-coverage-normal 10-min-coverage-tumorlO-min-var-freqO. I -min_avg-qualO〇 使用 默认参数GATK SomaticIndelDetector软件对InDel进行了分析。高可置信突变位点，全 部进行人工检查，然后使用ANNOVAR进行注释。
[0106] I. 4PCR 和 Sanger 测序
[0107] 使用双 96 孔的 GeneAmp PCR 系统 9700 (Applied Biosystems 公司）进行 PCR， 每个样品中每个反应使用20ng模板DNA。使用3730x1 DNA分析仪（Applied Biosystems 公司）进行测序。所有序列由序列分析软件（Applied Biosystems公司，版本5. 2) 进行分析。使用以下引物：5'-CACCCAGGGCAGGAATG-3' 人 YYl-Fl (SEQ ID NO. :3); 5'-CCTGTCTCCGGTATGGA-3' 人 YY1-R1(SEQ ID NO. :4)。
[0108] 1. 5突变的焦磷酸测序验证
[0109] 使用 QIAGEN PyroMark Q96ID 系统，与 PyroMark Q96 真空工作站和 PyroMark 黄 金Q96试剂，按照用户手册中的说明进行焦磷酸测序。
[0110] 使用以下引物：
【权利要求】
1. 一种体外非诊断性检测样品是否存在YYl基因的体细胞位点突变的方法，其特征在 于，包括步骤： (a) 用特异性引物扩增样品的YYl基因，得到扩增产物；和 (b) 检测扩增产物中是否存在以下突变位点： YYl基因的核苷酸序列即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基因特异性引物具有SEQ ID N0:3和 4所示序列。
3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的扩增产物的长度为100_2000bp且含 有 SEQ ID NO: 1 中第 1115 位。
4. 一种检测胰腺神经内分泌肿瘤的试剂盒，其特征在于，它包括特异性扩增YYl基因 或转录本的引物，所述的引物用于扩增出长度为80-2000bp且含有SEQ ID NO: 1中第1115 位的扩增产物。
5. 如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，它还含有选自下组的试剂： (a) 与SEQ ID NO: 1中第1115位的突变结合的探针； (b) 识别SEQ ID NO: 1中第1115位的突变限制性内切酶。
6. 如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的突变是以下单核苷酸突变（SNV): YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
7. -种YYl基因的用途，其特征在于，用于制备对胰腺神经内分泌肿瘤亚型进行诊断 (或判断）的试剂或试剂盒。
8. 如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的试剂或试剂盒用于检测以下单核苷 酸突变（SNV): YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
9. 一种多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特异性扩增含单核苷酸突变位点（SNV 位点）的扩增产物的引物和/或与所述SNV位点特异性结合的探针，其特征在于，所述的核 苷酸分子用于制备对胰腺神经内分泌肿瘤亚型进行诊断的试剂盒，并且所述的突变位点选 自下组： YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
10. -种YYl基因的用途，其特征在于，用于制备判断胰腺神经内分泌肿瘤病人是否适 合采用依维莫司治疗的试剂或试剂盒。
11. 一种多核苷酸分子的用途，所述的分子包括特异性扩增含突变位点的扩增产物的 引物和/或与所述突变位点特异性结合的探针，其特征在于，所述的多核苷酸分子用于制 备判断胰腺神经内分泌肿瘤病人是否适合采用依维莫司治疗的试剂盒，并且所述的突变位 点选自下组： YYl基因的核苷酸序列：即SEQ ID NO. : 1中第1115位C - G。
【文档编号】C12Q1/68GK104212884SQ201410235719
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年5月29日 优先权日:2013年5月29日
【发明者】宁光, 曹亚南, 王卫庆, 王俊, 高志博, 李林 申请人:中国科学院上海生命科学研究院, 上海交通大学医学院附属瑞金医院, 深圳华大基因研究院