一种超氧化物歧化酶的生产方法
【专利摘要】本发明提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，包括如下步骤：S1、大蒜分瓣并切蒂，用30～45℃的水浸泡清洗、去皮，烘干备用；S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨；S3、将破碎的大蒜用2-5℃的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡8-15个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯；S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化。本发明采用收集率可达到80％以上，超氧化物歧化酶比活高，并且优化了工艺参数。
【专利说明】一种超氧化物歧化酶的生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及超氧化物歧化酶制作方法，具体涉及利用大蒜进行一种超氧化物歧化酶的生产方法。
【背景技术】
[0002]超氧物歧化酶(Superoxide Dismutase简称S0D)是一种新型酶制剂。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。目前的超氧物歧化酶的制法由于工艺的粗糙，SOD的收集比例较低，造成大量的浪费。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种超氧化物歧化酶的生产方法，解决上述现有技术中一个或者多个问题。
[0004]根据本发明的一个方面，提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0005]S1、大蒜分瓣并切蒂,用30~45°C的水浸泡清洗、去皮,烘干备用； [0006]S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨；
[0007]S3、将破碎的大蒜用2_5°C的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡8_15个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。
[0008]在一些实施方式中，还包括S3后的如下步骤:
[0009]S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯；
[0010]S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化。
[0011]本发明收集率可达到80%以上，超氧化物歧化酶比活达到100 μ /mg,而传统法只能达到50%，比活仅有60 μ /mg。
【具体实施方式】
[0012]实施例1:
[0013]本发明提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0014]S1、大蒜分瓣并切蒂,用30°C的水浸泡清洗、去皮,烘干备用；
[0015]S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以达到破损大蒜细胞壁的作用；
[0016]S3、将破碎的大蒜用2°C的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡8个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。
[0017]S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯，去除其中大部分杂蛋白质，可得到10倍以上的纯化效果，具体操作将超氧化物歧化酶原液先在60°C温度下20min，然后调等电点至pH3.0，左后加入1.0 %体积分量的丙酮沉淀，离心杂质，收集纯化液；
[0018]S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化，将上述纯化液再加入4.0%体积分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下来，利用离心机收集沉淀物，将其置于缓冲洗液中，进行柱层析分离纯化，得到超氧化物歧化酶成品。
[0019]本发明收集率达到78%，超氧化物歧化酶比活达到92 μ /mg。
[0020]实施例2:
[0021]本发明提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0022]S1、大蒜分瓣并切蒂,用37°C的水浸泡清洗、去皮,烘干备用；
[0023]S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以达到破损大蒜细胞壁的作用；
[0024]S3、将破碎的大蒜用3°C的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡12个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。
[0025]S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯，去除其中大部分杂蛋白质，可得到10倍以上的纯化效果，具体操作将超氧化物歧化酶原液先在60°c温度下20min，然后调等电点至pH3.5，左后加入1.0%体积分量的丙酮沉淀，离心杂质，收集纯化液； [0026]S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化，将上述纯化液再加入4.0%体积分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下来，利用离心机收集沉淀物，将其置于缓冲洗液中，进行柱层析分离纯化，得到超氧化物歧化酶成品。
[0027]本发明收集率达到79%，超氧化物歧化酶比活达到95 μ /mg。
[0028]实施例3:
[0029]本发明提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0030]S1、大蒜分瓣并切蒂,用45°C的水浸泡清洗、去皮,烘干备用；
[0031]S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以达到破损大蒜细胞壁的作用；
[0032]S3、将破碎的大蒜用5°C的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡15个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。
[0033]S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯，去除其中大部分杂蛋白质，可得到10倍以上的纯化效果，具体操作将超氧化物歧化酶原液先在60°c温度下20min，然后调等电点至pH4.0，左后加入1.0 %体积分量的丙酮沉淀，离心杂质，收集纯化液；
[0034]S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化，将上述纯化液再加入4.0%体积分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下来，利用离心机收集沉淀物，将其置于缓冲洗液中，进行柱层析分离纯化，得到超氧化物歧化酶成品。
[0035]本发明收集率达到80%，超氧化物歧化酶比活达到100 μ /mg。
[0036]以上表述仅为本发明的优选方式，应当指出，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些也应视为本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤: 。51、大蒜分瓣并切蒂，用30~45°C的水浸泡清洗、去皮，烘干备用； 。 52、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨；。 。53、将破碎的大蒜用2-5°C的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡8_15个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。
2.根据权利要求1所述的一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，还包括S3后的如下步骤: 。54、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯； 。55、将提纯超氧化物 歧化酶原液进行柱层析分离纯化。
【文档编号】C12N9/02GK104031891SQ201410307343
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月30日 优先权日:2014年6月30日
【发明者】施佩蓓 申请人:施佩蓓