生物强化细胞营养素在制备抗胃癌细胞功能食品中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种生物强化细胞营养素在制备抗胃癌细胞功能食品中的应用。实验证明生物强化细胞营养素能使胃癌细胞存活率下降，促进胃癌细胞的凋亡。生物强化细胞营养素对人胃癌细胞有一定的抑制作用。并且随着浓度的增大，抑制作用增强。
【专利说明】生物强化细胞营养素在制备抗胃癌细胞功能食品中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物强化细胞营养素的用途。
【背景技术】
[0002]我们人类的身体由上万亿个细胞组成，这些细胞是人体结构的基本功能单位，细胞的健康是在核酸的调控下，依靠蛋白质、多种氨基酸、多肽、多糖、多种微量元素、矿物质等带有生物活性的物质以维持细胞的正常代谢。细胞有特定的职责，协同工作，保持着我们的身体健康。身体内的每个组织由细胞构成，而相关细胞组织集群便构成了人体的器官。虽然这些器官由功能不同的细胞构成，但是，它们需要同样的基本营养成分，这便是支撑细胞代谢的基础物质。细胞是有寿命的，理论上说，如果为细胞提供合适的、足够的基本营养成分，淘汰凋亡的细胞，精确复制已经存在的健康的细胞，提高人体对于疾病的自愈能力，我们人类可延缓衰老，保持健康。
[0003]人体对于疾病的自愈能力，即是人类依靠自身的内在生命力，依靠免疫系统、神经系统和内分泌系统为主的修复机制，修复受损的细胞、摆脱疾病与亚健康状态的一种保持身体健康的能力。当人体的自愈力下降时，是因为某些人体器官组织系统缺少足够的营养因子，细胞不能正常地代谢，不能完全正确地复制健康细胞和液化凋亡的细胞。由于细胞的不正确的复制，使得细胞的正常功能打了折扣，身体的自我修复能力减低，这直接影响了人体对于疾病的抵抗能力，一旦遭遇外界不良因素，人体就会生病。
[0004]癌症现在已经是人类的第一大顽疾，癌细胞的特点是无限制、无止境地增生，使患者体内的营养物质被大量消耗；癌细胞释放出多种毒素，使人体产生一系列症状；癌细胞还可转移到全身各处生长繁殖，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等等。找到能治疗或辅助治疗的药物已是科学家的当务之急。目前使用的抗癌药多是化学合成药物，在治疗肿瘤的过程中，往往会出现患者难以忍受的不良反应。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种生物强化细胞营养素在制备抗胃癌细胞功能食品中的应用。
[0006]本发明的技术方案概述如下:
[0007]生物强化细胞营养素在制备抗胃癌细胞功能食品中的应用。
[0008]生物强化细胞营养素是用下述方法制成:
[0009](一 )母液的制备:
[0010](I)选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30%?50%的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30?60分钟；
[0011](2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4°C以下60?90分钟，停止旋转；
[0012](3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
[0013](4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100°C，30?60分钟，关闭蒸汽；
[0014](5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30°C?50°C ；
[0015](6)停止旋转，加入原料总重量I %?3%的营养配料粉，旋转30?60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0016](7)停止旋转，加入原料总重量0.2 0Z0?0.4%的复合酶，旋转I?2小时；
[0017](8)加入原料总重量0.2%?1%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28?35°C发酵8?15天，即得母液备用；
[0018](二)胶料的制备:
[0019](I)另取谷类为第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小时；浙水，置于容器内；
[0020](2)向容器内加入第二原料重量I?2倍的水，煮I?3小时；
[0021](3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0022](三)成品的制备:
[0023](I)将母液与胶料按重量比为1:1?2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
[0024](2)加入混合液重量I %?2%的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2%?0.7%的黄原胶，混合液重量O?I %的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0025]原料优选为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
[0026]述第二原料优选为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
[0027]复合酶优选为质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶。
[0028]食用菌种优选为面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
[0029]本发明的优点:
[0030]实验证明，生物强化细胞营养素使胃癌细胞存活率下降，促进胃癌细胞的凋亡。证明生物强化细胞营养素对人胃癌细胞有一定的抑制作用。并且随着浓度的增大，抑制作用增强。
【专利附图】
【附图说明】
[0031]图1为生物强化细胞营养素对人胃癌细胞系(BGC-823)存活率的影响。
[0032]图2为生物强化细胞营养素对人胃癌细胞系(SGC-7901)存活率的影响。
[0033]图3为生物强化细胞营养素诱导人胃癌细胞系(BGC-823)细胞凋亡。
[0034]图4为生物强化细胞营养素诱导人胃癌细胞系(SGC-7901)细胞凋亡。
【具体实施方式】
[0035]本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好的理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
[0036]本发明所采用的各个食用酵母菌均购自安琪酵母股份有限公司(但并不对本发明作任何限制，其它公司生产的功能相同的食用酵母菌也可以用于本发明)；各个乳杆菌购自丹麦汉森公司(但并不对本发明作任何限制，其它公司生产的功能相同的乳杆菌也可以用于本发明)。
[0037]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0038]实施例1
[0039]生物强化细胞营养素用下述方法制成:
[0040](一 )母液的制备:
[0041](I)选取重量比例为1:1:1:2:2的黑糯米、黄糯米、紫米、黍米和大米五种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30%的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30分钟；浸泡的目的是使原料充分吸收水份；
[0042](2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持_4°C以下60分钟，停止旋转；放冷的目的是使吸水后的原料膨胀；
[0043](3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；提前预热的目的是为了下一步通蒸汽之前的温度升高而节省能源；
[0044](4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100°C，60分钟，关闭蒸汽；其目的是熟化并消毒；
[0045](5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30°C ;其目的为后续加入营养配料、复合酶及菌种提供合适的温度；
[0046](6)停止旋转，加入原料总重量2%的营养配料粉，旋转30分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0047](7)停止旋转,加入原料总重量0.2%的复合酶,旋转I小时；复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
[0048](8)加入原料总重量0.2%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28°C发酵15天，即得母液备用；食用菌种为重量比为3:1的面包酵母菌和保加利亚乳杆菌；
[0049]( 二)胶料的制备:
[0050](I)另取重量比为1:1的黄糯米和白糯米为第二原料，用18°C水浸泡16小时；浙水，将浙水后的米置于容器内；
[0051](2)向容器内加入第二原料重量I倍的水，煮I小时；
[0052](3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0053](三)成品的制备:
[0054](I)将母液与胶料按重量比为1:1的比例，混合，分离除渣，得混合液；
[0055](2)加入混合液重量I %的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2%的黄原胶,均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0056]本实施例中的旋转转速均为15转/分钟。
[0057]实施例2
[0058]生物强化细胞营养素用下述方法制成:
[0059](一 )母液的制备:
[0060](I)选取重量比为1:1:2:1:1:2:1的黑糯米、紫米、黍米、白糯米、粟米、高粱米和大米七种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量40%的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡40分钟；
[0061](2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持_4°C以下80分钟，停止旋转；
[0062](3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
[0063](4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100°C，50分钟，关闭蒸汽；
[0064](5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至40°C ；
[0065](6)停止旋转，加入原料总重量I %的营养配料粉，旋转60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0066](7)停止旋转,加入原料总重量0.3%的复合酶,旋转1.5小时,复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
[0067](8)加入原料总重量0.5%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在32°C发酵12天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和植物乳杆菌；
[0068]( 二 )胶料的制备:
[0069](I)另取重量比为1:1的黄糯米和白糯米为第二原料，用30°C水浸泡8小时；浙水，置于容器内；
[0070](2)向容器内加入第二原料重量1.5倍的水，煮2小时；
[0071](3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0072](三)成品的制备:
[0073](I)将母液与胶料按重量比为1:1.5的比例，混合，分离除渣，得混合液；
[0074](2)加入混合液重量2%的低聚异麦芽糖,混合液重量0.4%的黄原胶,混合液重量0.1 %的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0075]本实施例中的旋转转速均为20转/分钟。
[0076]实施例3
[0077]生物强化细胞营养素用下述方法制成:
[0078](一 )母液的制备:
[0079](I)选取重量比为1:1:1:2:1:0.5:1:1:0.5的黑糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、
香米、高粱米、大米和薏米九种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量50%的水,启动纸楽:蒸煮机,旋转浸泡60分钟；
[0080](2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持_4°C以下90分钟，停止旋转；
[0081](3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
[0082](4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100°C，30分钟，关闭蒸汽；
[0083](5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至50°C ；
[0084](6)停止旋转，加入原料总重量3%的营养配料粉，旋转30分钟；营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0085](7)停止旋转,加入原料总重量0.4%的复合酶,旋转2小时，复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
[0086](8)加入原料总重量I %食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在35°C发酵8天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和嗜酸乳杆囷；
[0087]( 二)胶料的制备:
[0088](I)另取黑糯米为第二原料，用25°C水浸泡10小时；浙水，置于容器内；
[0089](2)向容器内加入第二原料重量2倍的水，煮3小时；
[0090](3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0091](三)成品的制备:
[0092](I)将母液与胶料按重量比为1:2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
[0093](2)加入混合液重量2%的低聚异麦芽糖,混合液重量0.7%的黄原胶,混合液重量I %的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0094]各实施例中的转速为15-20转/分钟，其目的是例物料混匀，但对转速并不限制，达到混匀目的的其它转速也可以使用。
[0095]在实施例1 一 3的基础上再加以微波、气流干燥、喷雾等烘干技术，可将本发明制成粉体状食品，减轻了液体灌装的重量，方便外出携带，食用时即冲即食；
[0096]在实施例1 一 3的基础上再在上述成品工序中将黄原胶的加入比例提高，加入天然果胶，也可制成类似果冻状食品，或添加到巧克力、麦乳精、饼干、面包等食品中食用；也可精制成口服液服用。又可制成固体羹状食品，此外，本发明还可制成饼干、糖果、点心等食品，方便各类群体食用。
[0097]实施例4
[0098]用MTT实验检测实施例3制备的生物强化细胞营养素对人胃癌细胞系(BGC-823/SGC-7901)的存活率的影响(细胞毒性实验):
[0099](I)用含有10%的胰蛋白酶消化单层细胞，将细胞收集到含10%血清的DMEM培养液中。
[0100](2)离心(1500RPM，10分钟)，用培养液重悬细胞，计数。将细胞均匀铺至96孔板，每孔加入200 μ I (7000细胞)细胞悬液。
[0101](3)将培养板放至37°C二氧化碳培养箱中，培养24小时，分别加入用DMEM培养液配制的不同浓度的生物强化细胞营养素，孵育不同时间后检测细胞存活数。结果见图1和图2。
[0102]图1中，30%的生物强化细胞营养素作用人胃癌细胞系(BGC_823) 12和24小时后，细胞的存活率为72.33±4.04%和58.36±0.85%。
[0103]图2中，30%的生物强化细胞营养素作用人胃癌细胞系(SGC_7901) 12和24小时后，细胞的存活率为60.49±0.32和57.44±0.29%.
[0104]实施例5
[0105]用流式细胞术检测实施例3制备的生物强化细胞营养素对人胃癌细胞系(BGC-823/SGC-7901)凋亡情况的影响。
[0106](I)将细胞以2 X 14分别加入到六孔板中，放于二氧化碳培养箱中37°C培养24小时，然后分别加入用DMEM培养液配制的不同浓度的生物强化细胞营养素，孵育12、24和36小时；
[0107](2)取出六孔板，用含有10%的胰蛋白酶消化单层细胞，离心得到细胞沉淀，每管分别用50ul缓冲液(含0.5ul的FITC-ant1-AnnexinV抗体和0.5ul的PI)样品处理，并避光4°C放置30分钟后，用PBS洗涤，加0.5mlPBS悬浮细胞。
[0108](3)准备好样品后，进行流式细胞检测。结果见图3和图4。
[0109]图3中，在30%生物强化细胞营养素作用24h和36h后，人胃癌细胞(BGC-823)的早期凋亡和晚期凋亡的百分比别为11.27%和24.05%。
[0110]图4中，在30%生物强化细胞营养素作用24h和36h后，人胃癌细胞(SGC-7901)的早期凋亡和晚期凋亡的百分比分别为17.33%和27.96%。
[0111]实验证明，本发明的生物强化细胞营养素使胃癌细胞存活率下降，促进胃癌细胞的凋亡。证明生物强化细胞营养素对人胃癌细胞有一定的抑制作用。并且随作用时间的增强、浓度的增大，抑制作用增强。
[0112]实验证明，实施例1、实施例2制备的生物强化细胞营养素对使胃癌细胞存活率下降，促进胃癌细胞的凋亡的作用与实施例3的作用相似。
[0113]BGC-823和SGC-7901细胞系为人胃癌细胞系，来源为ATCC细胞库，为现在实验室常用的胃癌实验细胞，本细胞经过检测，不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV, HCV)、支原体。
【权利要求】
1.生物强化细胞营养素在制备抗胃癌细胞功能食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述生物强化细胞营养素是用下述方法制成: (一)母液的制备: (1)选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30%?50%的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30?60分钟； (2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4°C以下60?90分钟，停止旋转； (3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温； (4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100°C，30?60分钟，关闭蒸汽； (5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30°C?50°C； (6)停止旋转，加入原料总重量1%?3%的营养配料粉，旋转30?60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂； (7)停止旋转，加入原料总重量0.2%?0.4%的复合酶，旋转I?2小时； (8)加入原料总重量0.2%?1%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28?35°C发酵8?15天，即得母液备用； (二)胶料的制备: (1)另取谷类为第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小时；浙水，置于容器内； (2)向容器内加入第二原料重量I?2倍的水，煮I?3小时； (3)过滤，去除水，获得胶料备用； (三)成品的制备: (1)将母液与胶料按重量比为1:1?2的比例，混合，分离除渣，得混合液； (2)加入混合液重量1%?2%的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2%?0.7%的黄原胶，混合液重量O?I %的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述原料为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述第二原料为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述食用菌种为面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
【文档编号】A23L1/30GK104172185SQ201410409456
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年8月19日 优先权日:2014年8月19日
【发明者】董福生, 施维, 李全顺, 谭盈盈, 蒋梦影 申请人:天津市泉又今生物科技有限公司