生物强化细胞营养素在制备抗hiv功能食品中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种生物强化细胞营养素在制备抗HIV功能食品中的应用，实验证明生物强化细胞营养素对HIV-1病毒有较高的抑制活性，对细胞无毒性，生物强化细胞营养素的血液代谢产物对HIV-1病毒感染细胞有明显的抑制作用，生物强化细胞营养素能够抗1型人类免疫缺陷病毒。
【专利说明】生物强化细胞营养素在制备抗HIV功能食品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物强化细胞营养素的用途。
【背景技术】
[0002] 我们人类的身体由上万亿个细胞组成，这些细胞是人体结构的基本功能单位，细 胞的健康是在核酸的调控下，依靠蛋白质、多种氨基酸、多肽、多糖、多种微量元素、矿物质 等带有生物活性的物质以维持细胞的正常代谢。细胞有特定的职责，协同工作，保持着我们 的身体健康。身体内的每个组织由细胞构成，而相关细胞组织集群便构成了人体的器官。虽 然这些器官由功能不同的细胞构成，但是，它们需要同样的基本营养成分，这便是支撑细胞 代谢的基础物质。细胞是有寿命的，理论上说，如果为细胞提供合适的、足够的基本营养成 分，淘汰凋亡的细胞，精确复制已经存在的健康的细胞，提高人体对于疾病的自愈能力，我 们人类可延缓衰老，保持健康。
[0003] 人体对于疾病的自愈能力，即是人类依靠自身的内在生命力，依靠免疫系统、神经 系统和内分泌系统为主的修复机制，修复受损的细胞、摆脱疾病与亚健康状态的一种保持 身体健康的能力。当人体的自愈力下降时，是因为某些人体器官组织系统缺少足够的营养 因子，细胞不能正常地代谢，不能完全正确地复制健康细胞和液化凋亡的细胞。由于细胞的 不正确的复制，使得细胞的正常功能打了折扣，身体的自我修复能力减低，这直接影响了人 体对于疾病的抵抗能力，一旦遭遇外界不良因素，人体就会生病。
[0004] 艾滋病是一种危害性极大的传染病，由感染人类免疫缺陷病毒（HIV)引起。它是 一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，属于反转录病毒的一种。该病毒破坏人体的免疫能 力，导致免疫系统失去抵抗力，从而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后， 导致艾滋病。至今尚未研制出根治艾滋病的特效药物，也还没有可用于预防的有效疫苗。艾 滋病已被我国列入乙类法定传染病，并被列为国境卫生监测传染病之一。目前临床上治疗 本病强调综合疗法，包括：一般治疗、抗病毒治疗、恢复或改善免疫功能的治疗及机会性感 染和恶性肿瘤的治疗。其中抗病毒治疗是艾滋病治疗的关键，通过降低病毒载量，维持和重 建免疫功能，从而提高生活质量，降低HIV相关的发病率和死亡率。因此，开发有效抗HIV 病毒感染的功能性食品是科研工作者的重要任务。目前尚未发现报道能有效抗HIV病毒感 染的功能性食品，与治疗药物相比，功能性食品能够提高患者的顺应性，降低使用痛苦，使 治疗过程无负担、治疗效果无副作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种生物强化细胞营养素在制备抗 HIV功能食品中的应用。
[0006] 本发明的技术方案概述如下：
[0007] 生物强化细胞营养素在制备抗HIV功能食品中的应用。
[0008] 生物强化细胞营养素是用下述方法制成：
[0009]( -）母液的制备：
[0010] (1)选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量 30 %?50 %的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30?60分钟；
[0011] ⑵停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持_4°C以下60?90分 钟，停止旋转；
[0012] (3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
[0013] (4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持KKTC，30?60分钟，关闭蒸汽；
[0014] (5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30°C?50°C ;
[0015] (6)停止旋转，加入原料总重量1 %?3%的营养配料粉，旋转30?60分钟；所述 营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0016] (7)停止旋转，加入原料总重量0. 2%?0. 4%的复合酶，旋转1?2小时；
[0017] (8)加入原料总重量0.2%?1%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵 桶，在28?35°C发酵8?15天，即得母液备用；
[0018] (二）胶料的制备：
[0019] (1)另取谷类为第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小时；浙水，置于容器内；
[0020] (2)向容器内加入第二原料重量1?2倍的水，煮1?3小时；
[0021] (3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0022] (三）成品的制备：
[0023] (1)将母液与胶料按重量比为1 :1?2的比例，混合，分离除渔，得混合液；
[0024] (2)加入混合液重量1 %?2%的低聚异麦芽糖，混合液重量0. 2%?0. 7%的黄原 胶，混合液重量〇?1%的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0025] 原料优选为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米 中的至少五种。
[0026] 述第二原料优选为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
[0027] 复合酶优选为质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶。
[0028] 食用菌种优选为面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆 菌至少两种。
[0029] 本发明的优点：
[0030] 实验证明，生物强化细胞营养素对细胞有较低的毒性，且对HIV-1病毒有较高的 抑制活性。生物强化细胞营养素的血液代谢产物对HIV-1病毒感染细胞有明显的抑制作 用，生物强化细胞营养素能够抗1型人类免疫缺陷病毒。
【具体实施方式】
[0031] 本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好的理解本发明，但并不对本 发明作任何限制。
[0032] 本发明所采用的各个食用酵母菌均购自安琪酵母股份有限公司（但并不对本发 明作任何限制，其它公司生产的功能相同的食用酵母菌也可以用于本发明）；各个乳杆菌 购自丹麦汉森公司（但并不对本发明作任何限制，其它公司生产的功能相同的乳杆菌也可 以用于本发明）。
[0033] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0034] 实施例1
[0035] 生物强化细胞营养素用下述方法制成：
[0036](一）母液的制备：
[0037] (1)选取重量比例为1:1:1:2:2的黑糯米、黄糯米、紫米、黍米和大米五种谷物为 原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30 %的水，启动纸浆蒸煮机，旋 转浸泡30分钟；浸泡的目的是使原料充分吸收水份；
[0038] (2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通人冷气，旋转保持_4°C以下60分钟，停止 旋转；放冷的目的是使吸水后的原料膨胀；
[0039] (3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；提前预热的目的 是为了下一步通蒸汽之前的温度升高而节省能源；
[0040] (4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持l〇〇°C，60分钟，关闭蒸汽；其目 的是熟化并消毒；
[0041] (5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30°C ;其目的为后续加入营 养配料、复合酶及菌种提供合适的温度；
[0042] (6)停止旋转，加入原料总重量2%的营养配料粉，旋转30分钟；所述营养配料为 重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0043] (7)停止旋转，加入原料总重量0. 2%的复合酶，旋转1小时；复合酶是质量比为 3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
[0044] (8)加入原料总重量0.2%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在 28°C发酵15天，即得母液备用；食用菌种为重量比为3:1的面包酵母菌和保加利亚乳杆 菌；
[0045] (二）胶料的制备：
[0046] (1)另取重量比为1:1的黄糯米和白糯米为第二原料，用18°C水浸泡16小时；浙 水，将浙水后的米置于容器内；
[0047] (2)向容器内加入第二原料重量1倍的水，煮1小时；
[0048] (3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0049] (三）成品的制备：
[0050] (1)将母液与胶料按重量比为1 :1的比例，混合，分离除渔，得混合液；
[0051] ⑵加入混合液重量1 %的低聚异麦芽糖，混合液重量0. 2 %的黄原胶，均质；灌装 灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0052] 本实施例中的旋转转速均为15转/分钟。
[0053] 实施例2
[0054] 生物强化细胞营养素用下述方法制成：
[0055] (一）母液的制备：
[0056] (1)选取重量比为1:1:2:1:1:2:1的黑糯米、紫米、黍米、白糯米、粟米、高粱米和 大米七种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量40%的水，启动 纸浆蒸煮机，旋转浸泡40分钟；
[0057] (2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通人冷气，旋转保持-4°C以下80分钟，停止 旋转；
[0058] (3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
[0059] (4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持KKTC，50分钟，关闭蒸汽；
[0060] (5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至40°C ;
[0061] (6)停止旋转，加入原料总重量1 %的营养配料粉，旋转60分钟；所述营养配料为 重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0062] (7)停止旋转，加入原料总重量0. 3%的复合酶，旋转1. 5小时，复合酶是质量比为 3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
[0063] (8)加入原料总重量0.5%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在 32°C发酵12天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和植物 乳杆菌；
[0064] (二）胶料的制备：
[0065] (1)另取重量比为1 :1的黄糯米和白糯米为第二原料，用30°C水浸泡8小时；浙 水，置于容器内；
[0066] (2)向容器内加入第二原料重量1. 5倍的水，煮2小时；
[0067] (3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0068](三）成品的制备：
[0069] (1)将母液与胶料按重量比为1 :1. 5的比例，混合，分离除渔，得混合液；
[0070] (2)加入混合液重量2%的低聚异麦芽糖，混合液重量0. 4%的黄原胶，混合液重 量〇. 1 %的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0071] 本实施例中的旋转转速均为20转/分钟。
[0072] 实施例3
[0073] 生物强化细胞营养素用下述方法制成：
[0074](一）母液的制备：
[0075] (1)选取重量比为1:1:1:2:1:0. 5:1:1:0. 5的黑糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、 香米、高粱米、大米和薏米九种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料 总重量50%的水，启动纸楽蒸煮机，旋转浸泡60分钟；
[0076] (2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持_4°C以下90分钟，停止 旋转；
[0077] (3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
[0078] (4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持KKTC，30分钟，关闭蒸汽；
[0079] (5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至50°C ;
[0080] (6)停止旋转，加入原料总重量3%的营养配料粉，旋转30分钟；营养配料为重量 比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
[0081] ⑵停止旋转，加入原料总重量0. 4%的复合酶，旋转2小时，复合酶是质量比为 3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
[0082] (8)加入原料总重量1 %食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在35°C 发酵8天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和嗜酸乳杆 囷；
[0083] (二）胶料的制备：
[0084] (1)另取黑糯米为第二原料，用25°C水浸泡10小时；浙水，置于容器内；
[0085] (2)向容器内加入第二原料重量2倍的水，煮3小时；
[0086] (3)过滤，去除水，获得胶料备用；
[0087] (三）成品的制备：
[0088] (1)将母液与胶料按重量比为1 :2的比例，混合，分离除渔，得混合液；
[0089] (2)加入混合液重量2%的低聚异麦芽糖，混合液重量0. 7%的黄原胶，混合液重 量1 %的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
[0090] 各实施例中的转速为15-20转/分钟，其目的是例物料混匀，但对转速并不限制， 达到混匀目的的其它转速也可以使用。
[0091] 在实施例1 一 3的基础上再加以微波、气流干燥、喷雾等烘干技术，可将本发明制 成粉体状食品，减轻了液体灌装的重量，方便外出携带，食用时即冲即食；
[0092] 在实施例1 一 3的基础上再在上述成品工序中将黄原胶的加入比例提高，加入天 然果胶，也可制成类似果冻状食品，或添加到巧克力、麦乳精、饼干、面包等食品中食用；也 可精制成口服液服用。又可制成固体羹状食品，此外，本发明还可制成饼干、糖果、点心等食 品，方便各类群体食用。
[0093] 实施例4
[0094] 实施例3制备的生物强化细胞营养素对1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1)感染 MAGI-CCR5、TZM-bl细胞的抑制作用以及对细胞的毒性作用（实验由吉林大学艾滋病疫苗 国豕工程实验室完成）：
[0095] 采用MAGI-CCR5细胞和TZM-bl细胞按照文献标准方法检测HIV-1病毒感染力u。 取对数生长期的MAGI-CCR5细胞（带有β -半乳糖苷酶报告基因）和TZM-bl细胞（带有 荧光素酶报告基因），分别以1X 1〇5个/孔和1X 1〇4个/孔的浓度接入24孔和96孔培养 板，培养24h ;
[0096] 24孔培养板各孔加入200 μ L含HIV-1病毒和不同体积生物强化细胞营养素的 细胞培养液对MAGI-CCR5细胞进行感染抑制实验，HIV-1病毒用量为每孔40ngRT(逆转录 酶），生物强化细胞营养素在200 μ L体系中所占体积分别为50 μ L，25 μ L，12. 5 μ L，6. 25 μ L，3· 12 μ L, 1· 56 μ L，即浓度为 0· 2500, 0· 1250, 0· 0625, 0· 0313, 0· 0156, 0· 0078 ( μ L/ μ L)， 每个浓度设3个复孔，并设置只加 HIV-1病毒的阳性对照孔及空细胞培养液处理的阴性对 照孔；感染2h后每孔用lmL含10%胎牛血清的细胞培养液终止感染，继续培养细胞；
[0097] 96孔培养板各孔加入50 μ L含HIV-1病毒和不同体积生物强化细胞营养素的细胞 培养液对TZM-bl细胞进行感染抑制实验，HIV-1病毒用量为每孔lOngRT，生物强化细胞营 养素在 50 μ L 体系中所占体积分别为 12. 5 μ L，6. 25 μ L，3. 12 μ L，1. 56 μ L，0· 78 μ L，0· 39 μ L，即浓度为 0· 2500, 0· 1250, 0· 0625, 0· 0313, 0· 0156, 0· 0078 ( μ L/ μ L)，每个浓度设 3 个 复孔，并设置只加 HIV-1病毒的阳性对照孔及空细胞培养液处理的阴性对照孔；感染2h后 每孔用200μ L含10%胎牛血清的细胞培养液终止感染，继续培养细胞；
[0098] 培养48h后，按照底物显色试剂盒说明书，MAGI-CCR5细胞采用X-gal底物显色法 检测被感染细胞，计数显蓝色的细胞即为被感染细胞；TZM-bl细胞采用荧光素酶底物检测 被感染细胞，在多标记微孔板检测系统上测定荧光值，荧光值的大小反映被感染细胞数量。
[0099] 计算细胞感染率（％)时，以只加 HIV-1病毒孔中的蓝色细胞数（MAGI-CCR5细胞） 和只加 HIV-1病毒孔中的荧光值（TZM-bl细胞）为阳性值（100%)，MAGI-CCR5细胞感染率 (%) =(生物强化细胞营养素孔蓝色细胞数-阴性对照孔蓝色细胞数V(阳性对照孔蓝色 细胞数-阴性对照孔蓝色细胞数）X l〇〇%，TZM-bl细胞感染率（％ )=(生物强化细胞营 养素孔荧光值-阴性对照孔荧光值）八阳性对照孔荧光值-阴性对照孔荧光值）\1〇〇%， 3个复孔的计算结果取平均值。
[0100] 生物强化细胞营养素抗1型人类免疫缺陷病毒（HIV-ι)感染的效果以细胞感染率 评价，感染率越低说明效果越好，独立实验重复三次，结果取三次平均值。
[0101] 结果表明：生物强化细胞营养素对HIV-ι病毒感染MAGI-CCR5、TZM-bl细胞有明 显的抑制作用，且呈浓度依赖性；生物强化细胞营养素在MAGI-CCR5和TZM-bl细胞中对 111￥-1的半数抑制浓度1(： 5(|(病毒抑制率为50(%时的药物浓度）分别为0.04221117^1^和 0· 0310μ L/μ L(表 1):
[0102] 表1生物强化细胞营养素对HIV-1病毒感染MAGI-CCR5、TZM-bl细胞的抑制作用
[0103]
【权利要求】
1. 生物强化细胞营养素在制备抗HIV功能食品中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征是所述生物强化细胞营养素是用下述方法制 成： (一） 母液的制备： (1) 选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30%? 50%的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30?60分钟； (2) 停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持_4°C以下60?90分钟，停 止旋转； (3) 关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温； (4) 关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100°C，30?60分钟，关闭蒸汽； (5) 停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30°C?50°C ; (6) 停止旋转，加入原料总重量1 %?3 %的营养配料粉，旋转30?60分钟；所述营养 配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂； (7) 停止旋转，加入原料总重量0. 2%?0. 4%的复合酶，旋转1?2小时； (8) 加入原料总重量0.2%?1%食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在 28?35°C发酵8?15天，即得母液备用； (二） 胶料的制备： ⑴另取谷类为第二原料，用18?30°C水浸泡8?16小时；浙水，置于容器内； (2) 向容器内加入第二原料重量1?2倍的水，煮1?3小时； (3) 过滤，去除水，获得胶料备用； (三） 成品的制备： (1) 将母液与胶料按重量比为1 :1?2的比例，混合，分离除渣，得混合液； (2) 加入混合液重量1 %?2%的低聚异麦芽糖，混合液重量0. 2%?0. 7%的黄原胶， 混合液重量〇?1%的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征是所述原料为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍 米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
4. 根据权利要求2所述的应用，其特征是所述第二原料为黑糯米、黄糯米和白糯米至 少一种。
5. 根据权利要求2所述的应用，其特征是所述复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀 粉酶、纤维素酶和果胶酶。
6. 根据权利要求2所述的应用，其特征是所述食用菌种为面包酵母，甜酒曲酵母、植物 乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
【文档编号】A23L1/10GK104146257SQ201410408472
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年8月19日 优先权日:2014年8月19日
【发明者】董福生, 姜春来, 于湘晖, 王储 申请人:天津市泉又今生物科技有限公司