一种猪、鸡粪便发酵复合菌、制备方法以及使用所述复合菌发酵制备有机肥的方法
【专利摘要】本发明公开了一种猪、鸡粪便发酵复合菌、制备方法以及使用所述复合菌发酵制备有机肥的方法,发酵复合菌包含以下原料菌种：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、绿色木霉。将猪、鸡粪便与粉碎了的秸秆混合，将所述发酵复合菌按照1～2Kg/t的用量添加进去混合均匀，混合后水分为50～65wt％；将混合原料码堆，维持温度为55～65℃开始发酵，发酵两天后进行第一次翻堆，次后每隔1～2天进行一次翻堆，发酵期间保持水分含量50～65wt％；发酵结束，得到含水率为20～30wt％的有机肥。本发明用于猪、鸡粪便发酵，相比现有技术，生产投资小，生产成本低，使用方便，无臭味，发酵腐熟效果好。
【专利说明】-种猪、鸡粪便发酵复合菌、制备方法以及使用所述复合菌 发酵制备有机肥的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物发酵【技术领域】，具体涉及一种用于对猪、鸡粪便发酵制备有机 肥的复合菌及其发酵技术。
【背景技术】
[0002] 猪（鸡）粪本应是一种很好的农家肥，是培肥改良土壤的优质有机肥资源。但如 果直接施用新鲜猪（鸡）粪便，必将产生作物伤根、烧苗、病害、草害等负面影响。如果按现 有的自然堆怄发酵处理，存在如下几方面弊端：一是堆怄时间长（4一6个月），效果差；二是 长期堆置既占场地，又对周围环境造成污染；三是自然堆怄发酵粪便呈烂湿状、巨恶臭，难 以运输，也很难直接施用。
[0003] 而用微生物发酵法处理猪（鸡）粪，不仅能加快发酵过程，缩短发酵时间，防止浪 费，提高猪（鸡）粪的营养价值；而且能通过发酵产生的温度烘干鸡粪，节省能耗，成本低 廉，操作简单，易于推广，因而越来越得到人们的重视。目前，尽管有相关的发酵菌剂问世， 但是均存在发酵效果差，发酵时间长，生产成本高，发酵后的肥料肥效差等问题。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的第一个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种生产 成本低、发酵效果好、发酵得到的有机肥肥效高、对农作物无伤害的猪、鸡粪便发酵复合菌。
[0005] 本发明所要解决的第二个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种生产 成本低、发酵效果好、发酵得到的有机肥肥效高、对农作物无伤害的猪、鸡粪便发酵复合菌 的制备方法。
[0006] 本发明所要解决的第三个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种使用 发酵复合菌发酵猪、鸡粪便制备有机肥的方法，该方法生产投资小、生产成本低、发酵效果 好、发酵得到的有机肥肥效高、对农作物无伤害。
[0007] 为解决上述第一个技术问题，本发明的技术方案是：
[0008] -种猪、鸡粪便发酵复合菌，包含以下重量份数的原料菌种：
[0009] 枯草芽抱杆菌 20 ~ 30份, 地衣芽孢杆菌 20 ~ 25份, 凝结芽孢杆菌 10 ~ 25份, 巨大芽孢杆菌 10 ~ 20份， 绿色木霉 8 ~ 15份。
[0010] 为解决上述第二个技术问题，本发明的技术方案是： toon] 制备猪、鸡粪便发酵复合菌的方法，包括以下步骤：分别将枯草芽孢杆菌、地衣芽 孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和绿色木霉的菌种进行高密度培养，首先接种至装有 体积比为15?30%的培养基的摇瓶中活化培养，将培养好的菌种接种到发酵罐内进行发 酵扩大培养，将扩大培养得到的各种单菌脱水干燥，制备成休眠体微生物干粉，然后按照枯 草芽孢杆菌20?30份，地衣芽孢杆菌20?25份，凝结芽孢杆菌10?25份，巨大芽孢杆 菌10?20份和绿色木霉8?15份的重量比，混合得到所述发酵复合菌。
[0012] 其中，所述枯草芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
[0013] 将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30% 的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18?22g/L、蛋白胨12?18g/ L、氯化钠3?7g/L和牛肉膏0. 2?0. 8g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180? 220rpm 培养 20 ?32h ;
[0014] 将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基 的发酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10?15g/L、葡萄糖 3?8g/L、豆饼粉18?22g/L、鱼粉3?8g/L、碳酸钙5?9g/L、硫酸铵0. 8?1. 2g/L、磷酸 氢二钾0. 1?0. 5g/L、硫酸镁0. 1?0. 3g/L和硫酸锰0. 1?0. 3g/L，在培养温度为36? 40°C，发酵罐搅拌转速200?220rpm培养20?32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量> 109个 /ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0015] 其中，所述地衣芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
[0016] 将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30% 的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8?12g/L、牛肉膏1?5g/L和氯 化钠3?7g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180?220rpm培养20?32h ;
[0017] 将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基 的发酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13?17g/L、玉米粉 13?17g/L、磷酸氢二钾(λ 05?(λ 15g/L、磷酸二氢钾(λ 05?0· 15g/L和氯化钙2?6g/ L，在培养温度为36?40°C，发酵罐搅拌转速200?220rpm培养20?32h，发酵罐中地衣 芽孢杆菌含量> 1〇9个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生 物干粉。
[0018] 其中，所述凝结芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
[0019] 将纯化培养的斜面培养基上的凝结芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30% 的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖10?12g/L、蛋白胨8?12g/L、 牛肉膏1?5g/L和氯化钠3?7g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180?220rpm 培养20?32h ;
[0020] 将活化培养好的凝结芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养 基的发酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为麸皮20?25g/L、葡萄糖 11?15g/L、豆饼粉12?18g/L、磷酸氢二钾0· 05?0· 15g/L、硫酸镁0· 05?0· 15g/L和氯 化钙2?6g/L，在培养温度为36?40°C，发酵罐搅拌转速200?220rpm培养30?40h， 发酵罐中凝结芽孢杆菌含量>1〇 9个/ml，然后将发酵得到的凝结芽孢杆菌单菌经干燥制备 成休眠体微生物干粉。
[0021] 其中，所述巨大芽孢杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
[0022] 将纯化培养的斜面培养基上的巨大芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30% 的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8?12g/L、牛肉膏1?5g/L和氯 化钠3?7g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180?220rpm培养20?32h ;
[0023] 将活化培养好的巨大芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基 的发酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉20?26g/L、玉米粉 12?20g/L、磷酸氢二钾0· 05?0· 15g/L、磷酸二氢钾0· 05?0· 15g/L和氯化钙2?6g/ L，在培养温度为36?40°C，发酵罐搅拌转速200?220rpm培养20?32h，发酵罐中巨大 芽孢杆菌含量> 1〇9个/ml，然后将发酵得到的巨大芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生 物干粉。
[0024] 其中，所述绿色木霉的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤：
[0025] 将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15?30%的 活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28? 30°C、摇瓶转速140?180rpm，活化培养32?48h ;
[0026] 将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基的发 酵罐内，接种量为体积比1?3%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8?12g/L、玉米芯5? 6g/L、氯化钙0. 2?0. 6g/L、硫酸镁0. 1?0. 5g/L、磷酸二氢钾18?22g/L、酵母膏8? 12g/L、硫酸亚铁3?7mg/L、硫酸锌L 0?L 8mg/L、氯化钴3. 5?4. Omg/L和硫酸锰L 2? 1. 8mg/L，在培养温度为28?30°C，发酵罐搅拌转速140?180rpm，扩大培养68?84h，至 发酵罐中绿色木霉含量>10 8个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休 眠体微生物干粉。
[0027] 本发明中的枯草芽孢杆菌是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌，枯草芽孢杆 菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对致病菌 或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；可以抑制粪便中的致病菌；枯草芽孢杆菌 菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶等酶类，可以分解猪（鸡）粪中的淀粉、蛋白质等大颗粒； 枯草芽孢杆菌对猪（鸡）粪便中的大肠杆菌和杆状病毒等有害细菌有很强的抑制作用。
[0028] 本发明中的地衣芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，能分解猪 (鸡）粪中的淀粉、蛋白质和脂类。该菌还能产生抗活性物质，能抑制致病菌的生长繁殖； 还能防治多种植物病害。
[0029] 本发明中的凝结芽孢杆菌在生长繁殖过程中可以产生一些酸性物质，抑制猪 (鸡）粪中致病菌的生长，还可以活化土壤，为植物提供营养。
[0030] 本发明中的巨大芽孢杆菌可以将猪（鸡）粪中的蛋白质等大颗粒分解成氨基酸 等小分子物质，还可用来生产解磷固钾肥。巨大芽孢杆菌具有很好的降解土壤中有机磷的 功效，是生产生物有机肥的常用菌种，巨大芽孢杆菌会分泌有机酸类等物质溶解土壤中作 物不易吸收的钙磷化合物、铁磷化合物及铝磷化合物，促使土壤无效磷的溶解及利用，进而 协助土壤中微生物的增长，预防土壤病害发生，减少连作障碍等问题，以达到土壤改良的功 效。
[0031] 本发明中的绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、 木聚糖酶等。绿色木霉是产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶可以降解猪 (鸡）粪中或者填料中的纤维，效果非常好，又是一种资源丰富的拮抗微生物，在生物防治 中具有重要的作用，具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。
[0032] 为解决上述第三个技术问题，本发明的技术方案是：
[0033] 使用发酵复合菌发酵猪、鸡粪便制备有机肥的方法，包括以下步骤：
[0034] (1)将猪粪便或者鸡粪便与粉碎了的秸杆混合，将所述发酵复合菌按照1?2Kg/t 的用量添加进去混合均匀得到混合原料，混合原料的水分为50?65wt% ;
[0035] (2)将步骤（1)的混合原料码堆成条形肥堆，维持温度为55?65°C开始发酵，发 酵两天后进行第一次翻堆，次后每隔1?2天进行一次翻堆，发酵期间保持水分含量50? 65wt% ；
[0036] (3)至步骤（2)的发酵堆温度降为常温后，发酵结束，得到含水率为20?30wt% 的有机肥。
[0037] 作为一种改进，发酵期间，在条形肥堆上设置多个直径为1. 5?2cm的通风孔。
[0038] 作为一种优选，所述混合原料中粪便与秸杆的混合重量比为3?5:1?2。
[0039] 由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
[0040] 本发明的猪、鸡粪便发酵复合菌，包含以下重量份数的原料菌种：枯草芽孢杆菌 20?30份、地衣芽孢杆菌20?25份、凝结芽孢杆菌10?25份、巨大芽孢杆菌10?20 份、绿色木霉8?15份，将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和绿 色木霉的菌种采用合理配比混合，得到猪、鸡粪便发酵复合菌，各菌种复配后经拮抗性试验 证明相互之间没有拮抗性，而且，各菌种之间相互协同，枯草芽孢杆菌分泌的淀粉酶活性最 高，其次为蛋白酶、脂肪酶，而地衣芽孢杆菌分泌的蛋白酶活性最高，绿色木霉分泌的纤维 素酶活性最高，其次为木聚糖酶、几丁质酶，这三种菌产生的酶系可以将猪（鸡）粪便中未 被动物利用的蛋白质、淀粉、脂肪、纤维素进行彻底分解，转化成植物易吸收利用的小分子 物质。而凝结芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌则可以产生各种酸性物质，抑制猪（鸡）粪中致病 菌的生长，而且巨大芽孢杆菌还有解磷解钾的作用，还可以活化土壤，为植物提供营养可将 粪便中的蛋白质、淀粉、纤维等大分子物质，快速降解成植物易吸收利用的小分子物质，猪 (鸡）粪便通过这些菌种之间的相互协同作用，最终变成了富含有机质和有益微生物的生 物有机肥。并且在发酵腐熟过程中，发酵物料升温较快，温度可快速达到60?70度，能有 效杀死粪便中的虫卵、草籽等有害物质，发酵周期短，夏季一般7天左右可发酵完成，冬季 20天左右完成，发酵后的粪便无臭味，含水率为30wt %以下，氮磷钾总养分含量达55g/ kg 以上，有机质含量为40%以上，大肠杆菌值无法检出，寄生虫卵死亡率为98%以上。
[0041] 本发明用于猪、鸡粪便发酵，相比现有技术，生产投资小，生产成本低，使用方便， 无臭味，发酵腐熟效果好。
【具体实施方式】
[0042] 下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。
[0043] 实施例1
[0044] 一种猪、鸡粪便发酵复合菌，包含以下重量份数的原料菌种：
[0045] 枯草芽孢杆菌 20份, 地衣芽孢杆菌 20份, 凝结芽孢杆菌 10份，
[0046] 巨大芽孢杆菌 10份, 绿色木霉 8份。
[0047] 实施例2
[0048] 一种猪、鸡粪便发酵复合菌，包含以下重量份数的原料菌种：
[0049] 枯草芽孢杆菌 25份， 地衣芽孢杆菌 22份， 凝结芽孢杆菌 13份， 巨大芽孢杆菌 16份， 绿色木霉 12份。
[0050] 实施例3
[0051] -种猪、鸡粪便发酵复合菌，包含以下重量份数的原料菌种：
[0052] 枯草芽孢杆菌 28份， 地衣芽孢杆菌 23份, 凝结芽孢杆菌 20份, 巨大芽孢杆菌 18份, 绿色木霉 10份。
[0053] 实施例4
[0054] 将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为20%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨13g/L、氯化钠4g/L和 牛肉膏0. 7g/L，在培养温度为38°C，摇瓶转速200rpm培养24h ;
[0055] 将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为55 %的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1. 5%，所述发酵培养基的配方为玉米粉12g/L、葡萄糖4g/L、豆饼粉 22g/L、鱼粉4g/L、碳酸钙6g/L、硫酸铵1. 2g/L、磷酸氢二钾0. 3g/L、硫酸镁0. 15g/L和硫酸 锰0. lg/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅拌转速200rpm培养24h，发酵罐中枯草芽孢杆菌 含量> 109个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0056] 将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为18%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨9g/L、牛肉膏4g/L和氯化钠7g/L，在 培养温度为38°C，摇瓶转速200rpm培养24h ;
[0057] 将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60 %的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13g/L、玉米粉17g/L、磷酸氢 二钾0. 10g/L、磷酸二氢钾0. 10g/L和氯化钙3g/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅拌转速 220rpm培养24h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量> 109个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆 菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0058] 将纯化培养的斜面培养基上的凝结芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖12g/L、蛋白胨8g/L、牛肉膏2g/L和氯 化钠4g/L，在培养温度为38°C，摇瓶转速190rpm培养24h ;
[0059] 将活化培养好的凝结芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为55 %的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1%，所述发酵培养基的配方为麸皮23g/L、葡萄糖13g/L、豆饼粉 14g/L、磷酸氢二钾0. 15g/L、硫酸镁0. 15g/L和氯化钙2g/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅 拌转速220rpm培养38h，发酵罐中凝结芽孢杆菌含量> 109个/ml，然后将发酵得到的凝结 芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0060] 将纯化培养的斜面培养基上的巨大芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为30%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨12g/L、牛肉膏lg/L和氯化钠3g/L，在 培养温度为38°C，摇瓶转速220rpm培养26h ;
[0061] 将活化培养好的巨大芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1.5%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉25g/L、玉米粉15g/L、磷酸 氢二钾0.05g/L、磷酸二氢钾0. 15g/L和氯化钙4g/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅拌转速 200rpm培养28h，发酵罐中巨大芽孢杆菌含量> 109个/ml，然后将发酵得到的巨大芽孢杆 菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0062] 将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为30%的活化培 养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为30°C、摇瓶转速 160rpm，活化培养36h ;
[0063] 将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为70%的发酵培养基的发酵罐 内，接种量为体积比1. 5%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖10g/L、玉米芯5. 5g/L、氯化钙 0· 4g/L、硫酸镁0· 3g/L、磷酸二氢钾18g/L、酵母膏10g/L、硫酸亚铁4mg/L、硫酸锌L 3mg/L、 氯化钴3. 5mg/L和硫酸锰1. 5mg/L，在培养温度为28°C，发酵罐搅拌转速180rpm，扩大培养 68h，至发酵罐中绿色木霉含量>108个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制 备成休眠体微生物干粉。
[0064] 分别将制备得到的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和 绿色木霉的休眠体微生物干粉，按照枯草芽孢杆菌24份，地衣芽孢杆菌24份，凝结芽孢杆 菌15份，巨大芽孢杆菌18份和绿色木霉10份的重量比，混合得到所述发酵复合菌。
[0065] 实施例5
[0066] 将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为25%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨14g/L、氯化钠5g/L和 牛肉膏0. 3g/L，在培养温度为38°C，摇瓶转速220rpm培养30h ;
[0067] 将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60 %的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为2. 5%，所述发酵培养基的配方为玉米粉15g/L、葡萄糖6g/L、豆饼粉 21g/L、鱼粉5g/L、碳酸钙6g/L、硫酸铵0. 8g/L、磷酸氢二钾0. 5g/L、硫酸镁0. 3g/L和硫酸 锰0. 2g/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅拌转速200rpm培养30h，发酵罐中枯草芽孢杆菌 含量> 109个/ml，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0068] 将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为25%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨l〇g/L、牛肉膏3g/L和氯化钠5g/L，在 培养温度为38°C，摇瓶转速200rpm培养28h ;
[0069] 将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60 %的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1. 5%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉15g/L、玉米粉15g/L、磷酸 氢二钾0. lg/L、磷酸二氢钾0. lg/L和氯化钙4g/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅拌转速 200rpm培养28h，发酵罐中地衣芽孢杆菌含量> 109个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆 菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0070] 将纯化培养的斜面培养基上的凝结芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为20%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖llg/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L和 氯化钠5g/L，在培养温度为38°C，摇瓶转速200rpm培养28h ;
[0071] 将活化培养好的凝结芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60%的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1.5%，所述发酵培养基的配方为麸皮22g/L、葡萄糖13g/L、豆饼粉 15g/L、磷酸氢二钾0. lg/L、硫酸镁0. lg/L和氯化钙4g/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅拌 转速220rpm培养35h，发酵罐中凝结芽孢杆菌含量> 109个/ml，然后将发酵得到的凝结芽 孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0072] 将纯化培养的斜面培养基上的巨大芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为25%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨l〇g/L、牛肉膏3g/L和氯化钠4g/L，在 培养温度为38°C，摇瓶转速200rpm培养28h ;
[0073] 将活化培养好的巨大芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60 %的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为2%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉25g/L、玉米粉15g/L、磷酸氢 二钾0. 15g/L、磷酸二氢钾0. 15g/L和氯化钙3g/L，在培养温度为38°C，发酵罐搅拌转速 210rpm培养28h，发酵罐中巨大芽孢杆菌含量> 109个/ml，然后将发酵得到的巨大芽孢杆 菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
[0074] 将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为20%的活化培 养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28°C、摇瓶转速 180rpm，活化培养48h ;
[0075] 将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为60 %的发酵培养基的发酵 罐内，接种量为体积比2%，所述发酵培养基的配方为葡萄糖10g/L、玉米芯6g/L、氯化钙 〇· 2g/L、硫酸镁0· 3g/L、磷酸二氢钾20g/L、酵母膏10g/L、硫酸亚铁6mg/L、硫酸锌1. Omg/L、 氯化钴4. 0mg/L和硫酸锰1. 2mg/L，在培养温度为30°C，发酵罐搅拌转速160rpm，扩大培养 80h，至发酵罐中绿色木霉含量>108个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制 备成休眠体微生物干粉。
[0076] 分别将制备得到的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和 绿色木霉的休眠体微生物干粉，按照枯草芽孢杆菌28份，地衣芽孢杆菌22份，凝结芽孢杆 菌18份，巨大芽孢杆菌16份和绿色木霉12份的重量比，混合得到所述发酵复合菌。
[0077] 实施例6
[0078] 分别将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和绿色木霉的 菌种进行高密度培养，首先接种至装有体积比为25%的培养基的摇瓶中活化培养，将培养 好的菌种接种到发酵罐内进行发酵扩大培养，将扩大培养得到的各种单菌脱水干燥，制备 成休眠体微生物干粉，然后按照枯草芽孢杆菌24份，地衣芽孢杆菌23份，凝结芽孢杆菌19 份，巨大芽孢杆菌16份和绿色木霉12份的重量比，混合得到所述发酵复合菌。
[0079] 实施例7
[0080] (1)将猪粪与粉碎了的秸杆按照重量比为5:2的比例混合，将实施例2的发酵复合 菌按照lKg/t的用量添加进去混合均匀得到混合原料，混合原料的水分为55wt %，混合后 的发酵原料用手攥可以成团，摊开掌心晃动可以散团，表明水份合适；
[0081] (2)将步骤（1)的混合原料码堆成条形肥堆，维持温度为60?65°C开始发酵，发 酵两天后进行第一次翻堆，首次翻堆之后，温度在接下来一天继续上升，再维持高温发酵1 天之后，进行发酵阶段的第二次翻堆，次后每隔1?2天进行一次翻堆，发酵期间，用木棍在 条形肥堆上设置多个直径为1. 5?2cm的通风孔，发酵期间保持水分含量50?55wt%，如 果水分含量高，添加适量粉碎了的秸杆来降低水分；
[0082] (3)至步骤（2)的发酵堆温度降为常温后，发酵结束，得到含水率为26wt%的有机 月巴。腐熟的猪粪，其颜色是棕褐色，基本没有臭味，物料温度接近气温，松散度好；氮磷钾总 养分含量达55g/ kg，pH 7. 6,有机质含量为40%，大肠杆菌值无法检出，寄生虫卵死亡率为 98%。
[0083] 实施例8
[0084] (1)将鸡粪与粉碎了的秸杆按照重量比为3:1的比例混合，将实施例5制备得到 的发酵复合菌按照1. 5Kg/t的用量添加进去混合均匀得到混合原料，混合原料的水分为 53wt%，混合后的发酵原料用手攥可以成团，摊开掌心晃动可以散团，表明水份合适；
[0085] (2)将步骤（1)的混合原料码堆成条形肥堆，维持温度为62?65°C开始发酵，发 酵两天后进行第一次翻堆，首次翻堆之后，温度在接下来一天继续上升，再维持高温发酵1 天之后，进行发酵阶段的第二次翻堆，次后每隔1?2天进行一次翻堆，发酵期间，用木棍在 条形肥堆上设置多个直径为1. 5?2cm的通风孔，发酵期间保持水分含量50?52wt%，如 果水分含量高，添加适量粉碎了的秸杆来降低水分；
[0086] (3)至步骤（2)的发酵堆温度降为常温后，发酵结束，得到含水率为25wt%的有机 月巴。腐熟的鸡粪，其颜色是黑褐色，略带香味或泥土味，物料温度接近气温，松散度好；氮磷 钾总养分含量达60g/ kg，PH 7. 5,有机质含量为43%，大肠杆菌值无法检出，寄生虫卵死亡 率为98. 5%。
【权利要求】
1. 一种猪、鸡粪便发酵复合菌，其特征在于包含以下重量份数的原料菌种：
2. 制备如权利要求1所述的猪、鸡粪便发酵复合菌的方法，其特征在于包括以下步骤： 分别将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和绿色木霉的菌种进行 高密度培养，首先接种至装有体积比为15?30%的培养基的摇瓶中活化培养，将培养好的 菌种接种到发酵罐内进行发酵扩大培养，将扩大培养得到的各种单菌脱水干燥，制备成休 眠体微生物干粉，然后按照枯草芽孢杆菌20?30份，地衣芽孢杆菌20?25份，凝结芽孢 杆菌10?25份，巨大芽孢杆菌10?20份和绿色木霉8?15份的重量比，混合得到所述 发酵复合菌。
3. 如权利要求1所述的猪、鸡粪便发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述枯草芽孢 杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤： 将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖18?22g/L、蛋白胨12?18g/L、氯化 钠3?7g/L和牛肉膏0. 2?0. 8g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180?220rpm 培养20?32h ; 将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为玉米粉10?15g/L、葡萄糖3? 8g/L、豆饼粉18?22g/L、鱼粉3?8g/L、碳酸钙5?9g/L、硫酸铵0. 8?I. 2g/L、磷酸氢二 钾0· 1?(λ 5g/L、硫酸镁(λ 1?(λ 3g/L和硫酸锰(λ 1?(λ 3g/L，在培养温度为36?40°C， 发酵罐搅拌转速200?220rpm培养20?32h，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量> IO9个/ml， 然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干粉。
4. 如权利要求1所述的猪、鸡粪便发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述地衣芽孢 杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤： 将纯化培养的斜面培养基上的地衣芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8?12g/L、牛肉膏1?5g/L和氯化钠 3?7g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180?220rpm培养20?32h ; 将活化培养好的地衣芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉13?17g/L、玉米粉13? 17g/L、磷酸氢二钾0· 05?0· 15g/L、磷酸二氢钾0· 05?0· 15g/L和氯化钙2?6g/L，在培 养温度为36?40°C，发酵罐搅拌转速200?220rpm培养20?32h，发酵罐中地衣芽孢杆 菌含量> IO9个/ml，然后将发酵得到的地衣芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干 粉。
5. 如权利要求1所述的猪、鸡粪便发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述凝结芽孢 杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤： 将纯化培养的斜面培养基上的凝结芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为葡萄糖10?12g/L、蛋白胨8?12g/L、牛肉 膏1?5g/L和氯化钠3?7g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180?220rpm培养 20 ?32h ; 将活化培养好的凝结芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为麸皮20?25g/L、葡萄糖11? 15g/L、豆饼粉12?18g/L、磷酸氢二钾(λ 05?(λ 15g/L、硫酸镁(λ 05?(λ 15g/L和氯化钙 2?6g/L，在培养温度为36?40°C，发酵罐搅拌转速200?220rpm培养30?40h，发酵 罐中凝结芽孢杆菌含量>1〇 9个/ml，然后将发酵得到的凝结芽孢杆菌单菌经干燥制备成休 眠体微生物干粉。
6. 如权利要求1所述的猪、鸡粪便发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述巨大芽孢 杆菌的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤： 将纯化培养的斜面培养基上的巨大芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15?30%的活 化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为蛋白胨8?12g/L、牛肉膏1?5g/L和氯化钠 3?7g/L，在培养温度为36?40°C，摇瓶转速180?220rpm培养20?32h ; 将活化培养好的巨大芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基的发 酵罐内，体积接种量为1?3%，所述发酵培养基的配方为豆饼粉20?26g/L、玉米粉12? 20g/L、磷酸氢二钾(λ 05?(λ 15g/L、磷酸二氢钾(λ 05?(λ 15g/L和氯化钙2?6g/L，在培 养温度为36?40°C，发酵罐搅拌转速200?220rpm培养20?32h，发酵罐中巨大芽孢杆 菌含量> IO9个/ml，然后将发酵得到的巨大芽孢杆菌单菌经干燥制备成休眠体微生物干 粉。
7. 如权利要求1所述的猪、鸡粪便发酵复合菌的制备方法，其特征在于所述绿色木霉 的休眠体微生物干粉的制备包括以下步骤： 将纯化培养的斜面培养基上的绿色木霉菌种接种至装有体积比为15?30%的活化培 养基的摇瓶中，所述活化培养基为麦芽汁马铃薯蔗糖培养基，在培养温度为28?30°C、摇 瓶转速140?180rpm，活化培养32?48h ; 将活化培养好的绿色木霉菌种接种到装有体积比为50?70%的发酵培养基的发酵罐 内，接种量为体积比1?3 %，所述发酵培养基的配方为葡萄糖8?12g/L、玉米芯5?6g/L、 氯化钙0. 2?0. 6g/L、硫酸镁0. 1?0. 5g/L、磷酸二氢钾18?22g/L、酵母膏8?12g/L、硫 酸亚铁3?7mg/L、硫酸锌L 0?I. 8mg/L、氯化钴3. 5?4. Omg/L和硫酸猛L 2?I. 8mg/ L，在培养温度为28?30°C，发酵罐搅拌转速140?180rpm，扩大培养68?84h，至发酵罐 中绿色木霉含量SlO 8个/ml，然后将发酵得到的绿色木霉单菌经冷冻干燥制备成休眠体微 生物干粉。
8. 使用权利要求1所述的发酵复合菌发酵猪、鸡粪便制备有机肥的方法，其特征在于 包括以下步骤： (1) 将猪粪便或者鸡粪便与粉碎了的秸杆混合，将所述发酵复合菌按照1?2Kg/t的用 量添加进去混合均匀得到混合原料，混合原料的水分为50?65wt% ; (2) 将步骤（1)的混合原料码堆成条形肥堆，维持温度为55?65°C开始发酵，发酵 两天后进行第一次翻堆，次后每隔1?2天进行一次翻堆，发酵期间保持水分含量50? 65wt% ； (3)至步骤（2)的发酵堆温度降为常温后，发酵结束，得到含水率为20?30wt%的有 机肥。
9. 如权利要求8所述的发酵猪、鸡粪便制备有机肥的方法，其特征在于：发酵期间，在 条形肥堆上设置多个直径为1. 5?2cm的通风孔。
10. 如权利要求8所述的发酵猪、鸡粪便制备有机肥的方法，其特征在于：所述混合原 料中粪便与秸杆的混合重量比为3?5:1?2。
【文档编号】C12R1/885GK104232551SQ201410515349
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月29日 优先权日:2014年9月29日
【发明者】韩威华, 郭芳先, 陈向梅 申请人:山东苏柯汉生物工程股份有限公司