本发明属于功能食品技术领域，具体涉及一种用于提高免疫力的功能食品及其制备方法。
背景技术：
免疫力是指机体抵抗外来侵袭，维护体内环境稳定的能力。机体免疫系统的一些特殊细胞，能吞噬和消灭入侵体内的细菌、病毒、体内已衰老死亡或突变的细胞、引起变态反应的物质，维持体内环境稳定，保持机体健康。当人体免疫功能下降时，极易被细菌、病毒等感染，最直接的表现就是容易生病，机体消耗增加，从而出现体质虚弱、营养不良、疲乏无力、食欲下降、腹泻、睡眠障碍等问题，而对于肿瘤术后人群来说，免疫功能低下最直接的表现则是伤口难愈合、易感染、肿瘤易复发等。
机体免疫力低下易引起腹泻、胃肠功能紊乱及睡眠障碍等问题。而肠道菌群失衡，也会导致免疫力降低，引起多种疾病；良好的睡眠可使体内的两种淋巴细胞数量明显上升，也有研究证明，睡眠时人体会产生一种称为胞壁酸的睡眠因子，促使白血球增多，巨噬细胞活跃，肝脏解毒功能增强，从而将侵入的细菌和病毒消灭，反之，睡眠不足或睡眠质量下降都会引起免疫力的下降。因此，机体的胃肠功能及睡眠质量与免疫功能之间是互相影响的，只有综合解决免疫力低下的根源、表征及并发问题(如免疫细胞数量下降、nk细胞杀伤活性降低、胃肠道菌群失调、消化吸收障碍、睡眠障碍、肿瘤易复发等)，才能真正改善机体的免疫功能。
现有技术中对于提高免疫力的研究较多，主要有植物提取物、中药材、复合维生素、矿物质等、活性肽、蜂胶等提高免疫力的研究；此外关于提高免疫力的发明专利也较多，主要包括中药材、植物提取物、维生素、矿物质等复合制备的中药制剂、口服液、保健药品组件、保健品、保健酒、饮料等。目前常见的提高免疫力的保健品种类较多，主要包括有复合维生素类、蛋白粉、蜂蜜制品、灵芝孢子粉、西洋参类、益生菌粉、螺旋藻等以及多种成分混合制成的口服液、片剂、粉剂等产品。
综上，目前所提供的免疫力功能食品，主要功能多单独针对免疫力提高，或与抗衰老、抗皱、提高骨密度、抗肿瘤等结合，然而，与睡眠问题和胃肠道问题相结合的研究较少，而且具有增强免疫力、促进消化、润肠通便、改善睡眠等功能的现有技术多为中药制剂，原料种类繁多，成分复杂，制备繁琐，且食用不便。本发明将提供一种主要功能为提高免疫力的功能食品，同时通过改善睡眠质量、改善胃肠功能的途径综合解决免疫力低下相关综合症状，尤其适用老年人及肿瘤术后人群。本发明功能食品易吸收，效果明显，无副作用，且食用方便、生产工艺简单。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种具有提高免疫力作用的功能食品及其制备方法，该功能食品通过增强巨噬细胞吞噬能力、增强nk细胞活性、增加抗体生成数量等提高机体免疫力，同时与改善睡眠质量、改善胃肠功能相结合，综合解决免疫力低下的系列问题，适用于免疫力低下及亚健康人群，尤其适用于免疫力低下的老年人及肿瘤术后人群，食用方便、易吸收、效果明显。
为了实现这一目的，本发明提供一种提高免疫力的功能食品，其特征在于该功能食品包括以下重量配比的原料：鱼胶原蛋白肽20-60份、蛹虫草多肽0.2-10份、人参提取物5-15份、灵芝多糖5-50份、红枣粉10-60份、菊粉30-150份、水苏糖5-30份、γ-氨基丁酸1.5-25份、酸枣仁提取物5-30份。
本发明优选的原料重量配比为：鱼胶原蛋白肽30-50份、蛹虫草多肽0.5-8份、人参提取物5-10份、灵芝多糖10-30份、红枣粉10-50份、菊粉30-80份、水苏糖8-20份、γ-氨基丁酸2-10份、酸枣仁提取物10-20份。
本发明最佳的原料重量配比为：鱼胶原蛋白肽30份、蛹虫草多肽0.5份、人参提取物5份、灵芝多糖10份、红枣粉15份、菊粉30份、水苏糖10份、γ-氨基丁酸3份、酸枣仁提取物12份。
本发明中所述的鱼胶原蛋白肽和蛹虫草多肽分子量均为3000da以下；所述的人参提取物为人参皂苷含量0.1％，灵芝多糖的多糖含量为30％；γ-氨基丁酸净含量为20％；酸枣仁提取物为10:1提取物。
配方分析：
鱼胶原蛋白肽：提升巨噬细胞的吞噬能力，提升淋巴球的力量，使其不断分解，形成血浆细胞，从而产生更多的免疫球蛋白；增强nk细胞的杀伤力，提升机体免疫机能，增强人体抵抗力。此外胶原蛋白肽还具有增加皮肤弹性、抗氧化、延缓衰老、抑制肿瘤细胞增殖转移等作用。
蛹虫草多肽：促进骨髓增殖，拮抗造血功能损伤，激活单核巨噬细胞系统，增强其吞噬功能；增强nk细胞活性，从而提高其免疫功能。在微量及低浓度条件下即能发挥其生理作用。此外，蛹虫草多肽还具有抗肿瘤的作用，其原理也主要是通过提高机体的免疫功能，促进脾淋巴细胞转化，激活腹腔巨噬细胞的吞噬活性，显著提高机体的非特异性免疫能力等。
人参提取物：富含人参皂苷、人参多糖等活性成分。能够增强细胞免疫功能、增强巨噬细胞吞噬中性红细胞的能力，促进腹腔巨噬细胞增殖，从而增强非特异性免疫功能，同时还具有修复免疫损伤的作用。
灵芝多糖：活化t淋巴细胞，增强巨噬细胞吞噬功能，促进一氧化氮、白细胞介素-1β(il-1β)、肿瘤坏死因子(tnf-α)等的产生和释放，在体内外均具有免疫调节作用。灵芝多糖还可以通过增强宿主免疫功能，激活体内免疫应答，进而抑制肿瘤的发展过程。
红枣粉：红枣粉中的红枣多糖具有明显的补体活性和促进淋巴细胞增殖作用，可以提高机体免疫力。此外红枣粉中的皂类物质还具有调节代谢、增强免疫、抗炎等作用。
菊粉、水苏糖：调节肠道微生物菌群，增强胃肠蠕动，提高肠胃功能，防治便秘，提高免疫力，且两种益生元有协同增效作用。
γ-氨基丁酸(gaba)：降低神经元活性，防止神经细胞过热，能够结合抗焦虑的脑受体并使之激活，然后与另外一些物质协同作用，阻止焦虑相关的信息抵达脑指示中枢；能够增加gaba受体亲和力，从而增加其与识别位点结合，抑制gaba的分解，提高其脑中的含量，增加慢波睡眠时间；此外gaba还可提高葡萄糖磷酸酯酶的活性，使脑细胞活动旺盛，促进脑组织的新陈代谢，改善神经机能。
酸枣仁提取物：含有多种皂苷类和黄酮类成分，酸枣仁总皂苷能够增加总睡眠时间，酸枣仁总黄酮具有镇静催眠作用，酸枣仁多糖具有降低自主活动性的作用。
本发明还提供了该功能食品的制备方法，步骤如下：
a.原料准备及调配：将检验合格的原料按照配比进行调配。原料配比为：
鱼胶原蛋白肽20-60份、蛹虫草多肽2-10份、人参提取物5-15份、灵芝多
糖5-50份、红枣粉5-60份、菊粉20-150份、水苏糖5-30份、γ-氨基丁
酸1.5-25份、酸枣仁提取物5-30份；
b.混合：将调配好的原料投入v型混合机进行均匀混合，搅拌转速为
12r/min，混合时间为20min；
c.超微粉碎：将原料混合物采用超微粉碎机进行超微粉碎，使混合原料颗
粒度达到300目以上；
d.干燥、灭菌：将超微粉碎后的原料采用微波干燥灭菌法进行低温干燥及
灭菌，其中温度为70℃，时间为4-8min。干燥后使水分含量控制在5％以下；
e.制备：将上述干燥灭菌后的超微细粉制成功能食品。
制备好的超微细粉可进一步制成各种剂型的功能食品，如颗粒、片剂、胶囊等，用于提高人体免疫力。
制备不同剂型功能食品时，可以加入其它辅料，如填充剂、粘合剂、增溶剂、崩解剂、甜味剂、香精、着色剂等。
有益效果
1、本发明功能食品通过改善胃肠功能(润肠通便、调节肠道菌群)，改善睡眠质量以及提高免疫力三方面综合改善免疫力低下及相关综合症状。
2、本发明功能食品经动物试验及人体试食试验，证实其具有调节肠道菌群、改善胃肠功能、防治便秘、提高睡眠质量、防治睡眠障碍以及综合提高免疫力的功能。
3、本发明功能食品适用于免疫力低下人群，尤其适用于具有顽固便秘、睡眠障碍及免疫力低下的老年人，此外对于肿瘤术后人群，不仅具有提高免疫力作用，还具有防止肿瘤复发的功能。
4、本发明功能食品易吸收，效果明显，食用方便，无副作用，且生产工艺简单，便于工业化生产。
具体实施方式
以下实施例为示例性，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例1
原料配比：鱼胶原蛋白肽30份、蛹虫草多肽0.5份、人参提取物5份、灵芝多糖10份、红枣粉15份、菊粉30份、水苏糖10份、γ-氨基丁酸3份、酸枣仁提取物12份、甜味剂(ak糖：柠檬酸＝20:1)0.5份。
制备方法如下：
原料准备及调配：将检验合格的原料按照配比进行调配。
混合：将调配好的原料投入v型混合机进行均匀混合，搅拌转速为12r/min，混合时间为20min。
超微粉碎：将原料混合物采用超微粉碎机进行超微粉碎，使混合原料颗粒度达到300目以上。
干燥、灭菌：将超微粉碎后的原料采用微波干燥灭菌法进行低温干燥及灭菌，其中温度为70℃，时间为4-8min，干燥后使水分含量控制在5％以下。
制备：将上述干燥灭菌后的超微细粉进行分装，每袋12g，以复合膜分装。
用法与用量：每日2次，每次12g，以200-300ml温水冲服。
实施例2
原料配比：鱼胶原蛋白肽30份、蛹虫草多肽0.2份、人参提取物5份、灵芝多糖12份、红枣粉13份、菊粉30份、水苏糖10份、γ-氨基丁酸3份、酸枣仁提取物15份、甜味剂(ak糖：柠檬酸＝20:1)0.5份。
制备方法同实施例1。
用法与用量：每日2次，每次12g，以200-300ml温水冲服。
实施例3
原料配比：鱼胶原蛋白肽50份、蛹虫草多肽1份、灵芝多糖14份、水苏糖25份、γ-氨基丁酸10份。
制备方法如下：
原料准备及调配：将检验合格的原料按照配比进行调配。
混合：将调配好的原料投入v型混合机进行均匀混合，搅拌转速为12r/min，混合时间为20min。
超微粉碎：将原料混合物采用超微粉碎机进行超微粉碎，使混合原料颗粒度达到300目以上。
干燥、灭菌：将超微粉碎后的原料采用微波干燥灭菌法进行低温干燥及灭菌，其中温度为70℃，时间为4-8min，干燥后使水分含量控制在5％以下。
制备胶囊：将上述干燥灭菌后的超微细粉用胶囊自动分装机装胶囊(胶囊为市售0号空心胶囊)，每粒胶囊含内容物0.5g，对装填好的胶囊在抛光机上抛光，并筛选取出不合格产品。
用法与用量：每日两次，每次2粒，吞服。
实施例4
主要原料配比：鱼胶原蛋白肽17份、蛹虫草多肽5份、灵芝多糖8份、水苏糖15份、γ-氨基丁酸5份。
辅料：乳糖30份、柠檬酸9份、碳酸氢钠8.5份、peg60002份、蛋白糖0.5份。
制备方法如下：
原料准备及调配：将主要原料及柠檬酸、碳酸氢钠进行粉碎后，过40目筛，按照配比进行调配。
混合：将调配好的主要原料投入v型混合机进行均匀混合，搅拌转速为12r/min，混合时间为20min。混合均匀后等分为两份。
制粒：将上述等分的两份混合原料，一份加入柠檬酸，另外一份加入碳酸氢钠及蛋白糖，两份均加入2％聚乙烯吡络烷酮(pvp)乙醇溶液进行湿法制粒，分别制得酸性颗粒和碱性颗粒。将两种颗粒重新进行混合，混合时间20min，待混合均匀以后，于60℃条件下干燥2h，使水分含量控制在2％-5％，制得泡腾颗粒。
压片：将上述制得的泡腾颗粒送入压片机进行压片，制得泡腾片，每片净含量4g。
用法与用量：每日2次，每次1片，100-150ml温水浸泡服用。
实验例1对免疫力抑制小鼠的免疫调节试验
以实施例1所得样品为受试样品，取50只6-8周龄清洁级雌性balb/c小鼠，试验前按标准饮食饲养一周。预饲一周后将50只小鼠随机分为5组，每组10只，分组情况见表1。空白对照组小鼠腹腔注射0.2ml生理盐水，其它各组小鼠腹腔注射0.2ml环磷酰胺(80mg/kg)，每天1次，连续3天，制造小鼠免疫抑制模型。
从第4天开始，进入正式受试期。根据本发明样品人体推荐用量为每次12g/60kg体重，每日两次，折算小鼠剂量，受试样品低、中、高剂量组的剂量分别为1.0、2.0、6.0g/kg体重，受试样品每日灌胃两次，给予28天。空白对照及模型对照组小鼠每次灌服0.2ml灭菌生理盐水。
表1.实验分组
1、小鼠身体指数分析
每周定期称量小鼠体重，记录小鼠体重变化。灌胃四周后，颈椎脱臼处死小鼠之后，摘取胸腺和脾脏，将周围结缔组织剥除干净后称重，数据见表2。按以下公式计算免疫器官指数:
脾脏指数＝脾脏重量(mg)/体重(g)
胸腺指数＝胸腺重量(mg)/体重(g)
表2小鼠体重变化及胸腺指数、脾指数测定结果
注：“a”:与a空白对照组相比具有显著差异，p＜0.05。
经统计学分析：空白对照组与其它组别相比，体重变化无显著差异；模型对照组的胸腺指数、脾指数与空白对照组相比显著降低(p＜0.05)，说明造模成功。不同剂量组与模型对照组相比无显著差异。
2、血清溶血素含量分析
在给予受试物的第23天时，每只小鼠腹腔注射0.20ml灭菌生理盐水配制的2％的绵羊红细胞悬液进行免疫反应。
在停止给予受试物之后(即第29天)，小鼠眼球取血置于1.5ml离心管中，析出血清并稀释至合适倍数。取稀释血清1ml与0.5ml10％的绵羊红细胞以及1ml10％的豚鼠血清混合，37℃恒温水浴中保温30min，冰浴终止反应，2000r/min离心10min。取上清液1ml，加入3ml都氏试剂，摇匀后放置10min，于540nm波长处测吸光度，结果见表3。以生理盐水代替小鼠血清作为空白对照，取其上清液在比色时调零。
表3血清溶血素实验结果
注：“a”:与a空白对照组相比具有显著差异，“b”与b模型对照组相比有显著差异，p＜0.05。
经统计学分析：b组模型对照组与a空白对照组相比抗体积数显著下降；c组低剂量组与模型对照组无显著差异；中剂量(2.00g/kg.d)及高剂量(6.0g/kg.d)组与模型对照组相比有显著增加。
3、小鼠碳廓清试验
在给予受试样品第28天时，按体重向小鼠尾部静脉注射稀释的印度墨汁(100ml/kg)，待墨汁注入后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即加入到2ml0.1％na2co3溶液中。用分光光度计测定其在600nm处od值，以na2co3溶液作为空白对照。根据小鼠体重、肝脏及脾脏重计算吞噬指数，结果见表4。吞噬指数a计算公式如下：
表4碳廓清试验结果
注：“a”:与a空白对照组相比具有显著差异，“b”与b模型对照组相比有显著差异，p＜0.05。
由表4可以看出，碳廓清试验中，空白对照组与其它组别相比，均有显著差异，中剂量和高剂量组与空白对照组及模型对照组相比均有显著增加。
4、nk细胞活性测定
在给予受试样品第28天，颈椎脱臼处死小鼠，常规制备单细胞悬液(效应细胞)，并用rpmi1640完全培养液调整细胞浓度为2*107个/ml。
取传代后24hyac-1细胞，用rpmi1640完全培养液调整至浓度为4*105个/ml。取靶细胞和效应细胞各100μl，加入u型96孔培养板中：靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％/np40各100μl，于37℃、5％co2培养箱中培养4小时后以1500r/min离心5min，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培养板中，同时加入ldh基质液100μl，根据室温反应3-10min，每孔加入1mol/l的hcl30μl，在酶标仪490nm处测od值，结果见表5。
按下式计算nk细胞活性：
表5nk细胞活性测定结果
注：“a”:与a空白对照组相比具有显著差异，“b”与b模型对照组相比有显著差异，p＜0.05。
由表5可以看出，模型对照组b与空白对照组a相比，nk细胞活性均有显著差异，三种剂量组与模型对照组相比较，均有显著提高。
结论：由动物实验得出，中剂量组及高剂量组血清溶血素实验、碳廓清试验、nk细胞杀伤活性实验三项均呈阳性，根据保健食品检测与评价技术规范，本发明样品具有增强免疫力的功能。
实验例2改善睡眠质量动物试验
以实施例1所得样品为受试样品，取40只6-8周龄清洁级雌性balb/c小鼠，试验前按标准饮食饲养一周。预饲一周后将40只小鼠随机分为4组，每组10只。根据本发明样品人体推荐用量为每次12g/60kg体重，每日两次，本实验剂量设计分为高、中、低三种水平剂量组，分别为1.0、2.0、6.0g/kg体重，受试样品每日灌胃两次，给予28天。另设空白对照组。
将2.0g、4.0g、12.0g受试样品(实施例1)分别加灭菌生理盐水至20ml，即为不同剂量的供试液。空白对照小鼠每次灌服0.2ml灭菌生理盐水。试验在24-25℃安静环境下进行。
1、每周定期称量小鼠体重，记录小鼠体重变化。
2、直接睡眠实验
小鼠连续给样28天，观察受试组及对照组小鼠是否出现睡眠现象。睡眠以翻正反射消失为指标。当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位。如超过30-60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间，记录空白对照组与受试样品组入睡动物数及睡眠时间，结果见表6。
表6小鼠体重变化及直接睡眠观察结果
不同剂量组的小鼠体重变化与对照组相比，无显著差异，入睡动物数及入睡时间均为0，与对照组无显著差异，表明受试物对于小鼠无直接睡眠作用。
3、延长戊巴比妥钠催眠时间实验
小鼠连续给样28天，末次灌胃15min后，腹腔注射戊巴比妥钠溶液(42mg/kg)，注射量为0.2ml/20g，以翻正反射消失为指标，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间，结果见表7。
表7受试样对延长戊巴比妥钠催眠时间的影响
注：“a”：与空白对照组相比较有显著差异，p＜0.05。
由表7看出，中剂量和高剂量组与对照组相比，睡眠时间均显著延长，表明受试样有延长巴比妥钠诱导睡眠时间的作用。
4、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验
小鼠连续给样28天，末次灌胃15min后，腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量(24mg/kg)，注射量为0.2ml/20g，记录30min入睡动物数(翻正反射消失达1min以上者)，结果见表8。
表8戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验结果
注：“a”：与空白对照组相比较有显著差异，p＜0.05。
由表8可以看出，中剂量及高剂量组均能增加小鼠的睡眠发生率。
5、巴比妥钠睡眠潜伏期实验
小鼠连续给样28天，末次灌胃15min后，腹腔注射戊巴比妥钠(260mg/kg)，注射量为0.2ml/20g，以翻正反射消失为指标，观察受试样品对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响，结果见表9。
表9戊巴比妥钠睡眠潜伏期实验结果
注：“a”：与空白对照组相比较有显著差异，p＜0.05。
由表9可看出，高剂量组小鼠的睡眠潜伏期与空白对照组相比，显著缩短，其它剂量组与对照组无显著差异。
结论：受试样品所有剂量组对于小鼠无直接催眠作用，中剂量组和高剂量组对于延长戊巴比妥钠睡眠时间、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验两项均呈阳性，高剂量组对于巴比妥钠睡眠潜伏期实验也呈现阳性，根据保健食品检测与评价技术规范，本发明样品具有改善睡眠质量的功能。
实验例3改善胃肠功能(润肠通便)人体试食试验
选取100例患有不同程度便秘的志愿者，其中男性42人，女性58人，年龄分布25-70岁，其中25-40岁占15％，40-50岁占20％，50-70岁占65％。试食品为实施例1中制备方式所得粉剂功能食品，每日食用2次，每次1袋/12g，以200-300ml温水冲服。食用周期为30天。服用后效果统计见表10：
表10人群试食效果人数统计
效果评定标准：
无效：症状未见任何改善。
好转：症状减轻，排便逐渐规律，粪便性状得到改善，气色好转。
显著：症状显著改善，每日排便，且粪便性状明显改善，气色明显改变。
结果表明，100例便秘志愿者服用本发明1个月后，83％的患者得到显著改善，17％的患者情况有所好转，无效率为0。有充足证据可表明，本发明所提供的功能食品，可显著改善人体胃肠功能(润肠通便)。