肌肉增量用组合物的制作方法

本发明涉及含有双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分的肌肉增量用组合物、以及肌肉增量用药物组合物和肌肉增量用饮食品组合物。

背景技术：

由于肌肉是站立、行走、保持姿势之类的日常生活的基础，所以为了维持生活的质量，无论男女老少均抱有尽可能维持肌肉量、尽可能使肌肉增量这样的愿望。另外，喜欢积极运动的人、运动员(例如，运动选手、体育爱好者、竞技选手等)为了提高成绩而抱有尽可能使肌肉增量这样的愿望。

进而，在健康意识增强或生活质量(qualityoflife：简称：qol)的提高、虚弱(frail)(健康的状态与需要看护状态(在日常生活中需要护理支持的状态)之间的状态)的改善、“运动器官综合征(locomotivesyndrome：简称：locomo)”对策中，课题在于如何使肌肉增量。

肌肉通常占体重40％左右的比例，其70～80％为水分，剩余几乎由蛋白质和游离氨基酸构成。因此，作为用于使肌肉增量或维持肌肉的营养素，即使从其组成方面来看蛋白质或氨基酸也是重要的。对于氨基酸，逐渐发现支链氨基酸(特别是亮氨酸)不仅作为蛋白质合成的材料，而且还成为促进蛋白质合成的刺激。因此，出于使肌肉量增加的目的而使用了含有各种蛋白质、氨基酸的营养强化剂(非专利文献1)。

然而，由于肌肉增量的作用机理还与营养素和蛋白质合成体系等复杂地关联，因此仍然存在很多不清楚的地方。因此，由于肌肉增量的方法有很多种，因此锐意进行了能进一步肌肉增量的物质的探索。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：下村吉治著、体育与健康的营养学(スポーツと健康の栄養学)(第3版)、2010年12月15日第3版第1刷

技术实现要素：

发明要解决的问题

鉴于上述情况，还考虑到为了获得肌肉增量效果而长期持续摄取的情况，因此需要副作用少且安全性高、能使肌肉有效增量的物质。

本发明的主要目的在于提供副作用少且安全性高、能使肌肉有效增量的肌肉增量用组合物。

用于解决问题的方案

本发明人等进行了深入研究，结果发现：双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物具有使肌管变粗的作用，进而在被检者试验中也具有肌肉增量作用，完成了本发明。

本发明具有以下的构成。

[1]一种肌肉增量用组合物，其含有双歧杆菌属细菌和/或所述细菌的培养物作为有效成分。

[2]一种肌肉增量方法，其给予双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分。

[3]一种肌肉疾病或其症状的改善或治疗方法，其给予双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分。

[4]一种肌肉增量用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物。

[5]一种肌肉疾病或其症状的改善或治疗用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物。

[6]一种肌肉增量用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物的应用。

[7]一种双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物在制造含有双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分的肌肉增量用组合物中的应用。

[8]前述组合物可以是药物组合物或饮食品组合物。

发明的效果

根据本发明，可以提供副作用少且安全性高、能使肌肉有效增量的肌肉增量用组合物。

需要说明的是，未必限定于此处记载的效果，还可以是本发明中记载的任意效果。

附图说明

图1是显微镜观察试验例3中的小鼠(双歧杆菌给予组)的腓肠肌的组织时的照片。图1中的附图标记1表示肌管。

图2是显微镜观察试验例3中的小鼠(对照组)的腓肠肌的组织时的照片。图2中的附图标记1表示肌管，附图标记2表示结缔组织。

具体实施方式

接下来对本发明优选的实施方式进行详细地说明。但是本发明不限定于以下优选的实施方式，可以在本发明的范围内进行自由变更。需要说明的是，本说明书中百分率只要没有特别声明则以质量表示。

本发明的肌肉增量用组合物具有肌肉肥厚作用或肌肉增量作用，且包含双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分。

需要说明的是，本说明书中“肌肉肥厚”是指通过将肌管或肌肉纤维变粗而使肌肉的容量(大小)增加。本说明书中“肌肉增量”是指肌肉的容量增加和/或肌肉的重量增加。

＜双歧杆菌属细菌＞

用于本发明的双歧杆菌属细菌只要不损害本发明的效果就没有特别限定，可以使用公知的双歧杆菌属细菌。本发明中使用的双歧杆菌属细菌适宜的是具有产生表现出肌肉肥厚作用的物质或表现出肌肉增量作用的物质(也包括菌体成分)的能力。

作为该双歧杆菌属细菌，例如可列举出：短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)、长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongumsubsp.longum)、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)、角双歧杆菌(bifidobacteriumangulatum)、齿双歧杆菌(bifidobacteriumdentium)、假链状双歧杆菌(bifidobacteriumpseudocatenulatum)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)、假长双歧杆菌球形亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.globosum)、假长双歧杆菌假长亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.pseudolongum)和嗜热双歧杆菌(bifidobacteriumthermophilum)等。需要说明的是，长双歧杆菌长亚种有时还简记为长双歧杆菌。

进而，上述双歧杆菌属细菌中，更优选短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)、长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongumsubsp.longum)、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)、齿双歧杆菌(bifidobacteriumdentium)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)、假长双歧杆菌球形亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.globosum)、假长双歧杆菌假长亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.pseudolongum)或嗜热双歧杆菌(bifidobacteriumthermophilum)中的任意者。

进而，上述的各双歧杆菌属细菌中，进一步优选短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)fermbp-11175、短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)atcc15700、长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongumsubsp.longum)atcc15707、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)atcc29521、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)atcc15703、齿双歧杆菌(bifidobacteriumdentium)dsm20436、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)dsm10140、假长双歧杆菌球形亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.globosum)jcm5820、假长双歧杆菌假长亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.pseudolongum)atcc25526或嗜热双歧杆菌(bifidobacteriumthermophilum)atcc25525。

另外，用于本发明的双歧杆菌属细菌可以选自上述组中的1种或2种以上，可以仅使用1种，还可以使用任意的2种以上。

需要说明的是，赋予了atcc编号的细菌是可以由美国典型培养物保藏中心(地址：12301parklawndrive,rockville,maryland20852,unitedstatesofamerica)获得的公知细菌。例如可以获得atcc15700(atcc^(r)15700^tm)、atcc15707(atcc^(r)15707^tm)、atcc29521(atcc^(r)29521^tm)、atcc15703(atcc^(r)15703^tm)、atcc27535(atcc^(r)27535^tm)、atcc27919(atcc^(r)27919^tm)、atcc25526(atcc^(r)25526^tm)、atcc25525(atcc^(r)25525^tm)等(https://www.atcc.org/products/all/,[在线]:2017年10月17日检索)。

另外，赋予了dsm编号的细菌是可以由dsmz(德国微生物保藏中心，germancollectionofmicroorganismsandcellcultures)(inhoffenstr.7b,d38124braunschweig,germany)获得的公知细菌。例如可以获得dsm20436(dsmno:20436)、dsm10140(dsmno:10140)等(https://www.dsmz.de/catalogues/catalogue-microorganisms.html,[在线]:2017年10月17日检索)。

另外，赋予了jcm编号的细菌是可以由jcm(地址：3050074茨城县筑波市高野台3-1-1国立研究开发法人理化学研究所生物资源中心微生物材料开发室)获得的公知细菌。例如可以获得jcm5820(jcm5820^t,http://www.jcm.riken.jp/cgi-bin/jcm/jcm_number？jcm＝5820,[在线]:2017年10月17日检索)等。

赋予了fermbp-11175保藏号的细菌于2009年8月25日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(现在的国家高级工业科学技术学院(nite)，国际专利生物保藏中心(ipod)(nite-ipod)、邮政编码：292-0818、地址：千叶县木更津市上总镰足2-5-8120号室)进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

本发明中使用的双歧杆菌属细菌只要具有能够实现本发明目的的特性(例如，肌肉增量效果)，就可以是上述双歧杆菌属细菌的突变株。由于双歧杆菌属细菌为厌氧菌，因此能够在厌氧条件下生长而无法在空气中生长。另外，该突变株优选具有与上述双歧杆菌属细菌相同的菌学性质，并且具有与上述双歧杆菌属细菌同等以上的肌肉增量促进效果。某突变株是否具有与上述双歧杆菌属细菌“同等以上的肌肉增量效果”例如可以利用后述试验例的方法加以确认。

可以通过将突变非人为地导入上述双歧杆菌属细菌中来构建这样的突变株。另外，可以通过使用了uv等突变原的处理将突变导入上述细菌中来构建，还可以利用各种基因操作法将突变导入上述株中来构建。

本发明中使用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物可以通过利用常规方法对双歧杆菌属细菌进行培养而容易地获得。

需要说明的是，双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物还包括该细菌所产生的产物(例如，菌体成分、代谢产物等)，作为该产物，可列举出从前述细菌的培养物中得到的分离纯化物(例如，上清液、提取物等)和/或菌体处理物(例如，肽聚糖、细胞壁等菌体成分等)等。

前述细菌的培养方法只要能使双歧杆菌属细菌增殖就没有特别限定，可以根据细菌的性质在适当的条件下进行培养。例如，培养温度是25～50℃为宜，优选为35～42℃。另外培养优选在厌氧条件下进行，例如，可以边通入二氧化碳气体等厌氧气体边进行培养。另外，还可以液体静置培养等在微好氧条件下进行培养。

作为培养本发明中使用的双歧杆菌属细菌的培养基，没有特别限定，可以使用通常用于培养双歧杆菌属细菌的培养基。即，作为碳源，例如可以根据同化性而使用葡萄糖、半乳糖、果糖、阿拉伯糖、甘露糖、蔗糖、淀粉、淀粉水解物、黑糖蜜等糖类。作为氮源，例如可以使用氨、硫酸铵、氯化铵、硝酸铵等铵盐类、硝酸盐类。另外，作为无机盐类，例如可以使用氯化钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁、氯化钙、硝酸钙、氯化锰、硫酸亚铁等。另外，还可以使用蛋白胨、大豆粉、脱脂大豆粕、肉提取物、酵母提取物等有机成分。

本发明中使用的双歧杆菌属细菌如之前所说明的那样，可以以细菌本身、前述细菌的培养物或其干燥物、由前述细菌的培养物得到的分离纯化物(例如，培养上清液)或前述细菌的菌体处理物的形态使用。

即，可以使用双歧杆菌属细菌本身，可以直接使用培养双歧杆菌属细菌而得到的培养物，可以由培养物仅分离培养上清液来使用，可以将培养物、培养上清液稀释或浓缩后使用，还可以使用由培养物回收的菌体。另外，还可以通过分离纯化从培养物中回收前述细菌的产物。另外，还可以是将培养物或培养上清液干燥而得到的细菌。另外，本发明中使用的双歧杆菌属细菌可以是活菌、也可以是死菌，还可以是包含活菌和死菌这两者的细菌。

另外，由前述培养物的分离纯化可以将具有肌肉增量作用的产物利用离心分离、盐析、溶剂提取(极性溶剂、非极性溶剂或它们的混合溶剂(例如，水、乙醇、己烷等))、凝胶过滤分离、hplc分离、超滤膜分离等公知的分离纯化方法来进行。

另外，作为前述细菌的菌体处理物，例如可列举出利用超声波处理、均质器处理等常规方法将菌体的细胞壁和细胞膜的一部分或完全破碎而得到的细胞破碎物等。进而，前述细胞破碎物可以是前述破碎后的全部级分，可以是一部分级分，还可以是前述破碎后的离心分离上清液、通过硫酸铵处理等将该上清液部分纯化而得到的馏分或者将前述上清液浓缩而得到的物质。

如后述〔实施例〕所示，本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物具有肌管或肌肉纤维的粗细的增大作用、肌肉肥厚作用或肌肉增量作用。

通常，据说通过促进肌肉蛋白质的合成而使肌管或肌肉纤维变粗。另外，据说通过使肌管或肌肉纤维变粗，而使肌肉的容量(大小)或肌肉的重量增加。

因此，本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物还能够用于能通过肌肉增量进行预防、改善或治疗的症状或疾病(例如，由肌肉消耗或肌肉退化等导致的肌肉疾病或其症状)。作为本说明书中的肌肉疾病，例如可列举出张力缺乏(atony)、肌萎缩(muscularatrophy)、肌肉营养不良(musculardystrophy)、肌肉退化、肌无力(myasthenia)和肌少症(sarcopenia)等。本说明书中，肌肉疾病由于遗传因素、后天因素、老化等而发生，另外，肌肉消耗的特征在于肌肉量的渐进性损失、肌肉的弱化和变性。

另外，本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物具有肌管或肌肉纤维的粗细的增大作用、肌肉肥厚作用或肌肉增量作用，肌肉不限制其种类(快肌和/或慢肌)，但在运动中经常活动的肌肉容易显现出增量作用。

另外，本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物在普通的生活中也能使肌肉增量，通过运动也能使肌肉增量。

另外，对于本发明中使用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物，由于该细菌的副作用少且安全性高，因此也能够长期持续摄取。

本发明通过促进肌肉蛋白质的合成使肌管增厚从而还能用于副作用少地使肌肉肥厚的目的。本发明还能有效地用于如下情况：基于训练的肌肉增强效果的增大；肌少症(sarcopenia)、虚弱、运动器官综合征的预防或改善；肌萎缩相关疾病或症状的预防、改善或治疗。

因此，本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物能够作为有效成分含有在肌肉增量用组合物中，另外，由于安全性高，因此能够用于药物、饮食品、化妆品、饲料等广泛的用途的产品中。这些产品可以通过适宜使用适于各用途的任意成分并利用适于各用途的公知的制造方法来制造。

本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物还可以直接使用其本身，或者还可以与生理性、药物或饮食品所容许的通常的载体或稀释剂等一起混合来使用。

另外，本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物可以用于制造这些各种制剂或各种组合物等。另外，本发明还可以作为肌肉增量用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物使用。

本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物的给予或摄取优选至少持续4周，更优选至少持续8周，期望的是每天持续进行。

对于由于本发明的双歧杆菌属细菌的用量，由于安全性高因而没有特别限制，例如，优选1×10⁶～1×10¹²cfu/kg体重/天，更优选1×10⁷～1×10¹¹cfu/kg体重/天，进一步优选1×10⁸～1×10¹⁰cfu/kg体重/天。或者，作为每一个体(体重)的用量(给药量)，优选10⁷～10¹⁴cfu/天，更优选10⁸～10¹³cfu/天，进一步优选10⁹～10¹²cfu/天。

另外，双歧杆菌属细菌的培养物或源自其的分离纯化物(例如培养上清液)的用量优选为0.01～100ml/体重kg/天，更优选为0.1～10ml/体重kg/天。

需要说明的是，本发明中，cfu是指集落形成单位(colonyformingunit)，表示菌落形成单位。前述细菌为死菌时，cfu可以替换为个细胞(cells)。

本发明的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物可以用于作为适用对象的人或非人动物(适宜的是哺乳类)，优选人和宠物，更优选为人。

适用对象只要是希望肌肉增量的人就没有特别限定，例如可列举出婴幼儿、少儿、大人、健康的人、运动员、中年人、老年人和具有肌肉疾病的症状的人等。

另外，本发明可以是治疗目的的使用，还可以是非治疗目的的使用。

“非治疗目的”是指不包括医疗行为、即通过治疗对人体进行的处置行为的概念。例如可列举出健康增进、美容行为等。

“改善”是指疾病、症状或状态的好转；疾病、症状或状态的恶化防止、延迟；疾病或症状进行的逆转、防止或延迟。

“预防”是指防止、延迟适用对象发生疾病或症状或降低适用对象的疾病或症状的危险性。

＜药物组合物＞

本发明的肌肉增量用组合物可以作为药物组合物使用。本发明的药物组合物能够用于针对肌肉疾病或其症状、肌萎缩相关疾病或其症状的预防、改善和/或治疗。本发明尤其适宜用于使肌肉增量的目的。作为肌萎缩相关疾病或其症状，可以示例出肌少症(sarcopenia)、长期卧床、无运动、零重力飞行、受伤的治疗等中进行的伴随四肢的固定的废用性的肌萎缩；肌萎缩性侧索硬化症(amyotrophiclateralsclerosis,als)、脊髓性肌萎缩(spinalmuscularatrophy)、急性脊髓前角灰质炎(acuteanteriorpoliomyelitis)(脊髓灰质炎(poliomyelitis))、格林-巴利综合征(guillain-barrésyndrome)等神经源性肌萎缩；肌肉营养不良症等肌肉原性肌萎缩。

另外，本发明的药物组合物由于以作为经口组合物成分长年使用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物(例如，前述细菌的培养物的培养上清液和/或前述细菌的菌体处理物等)作为有效成分，因此对于患有各种疾病的患者也能够安心地给予。另外，由于双歧杆菌属细菌还存在于动物的肠内，因此本发明可期待即使长期持续给予也不易产生副作用。另外，双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物还能够安全地对婴幼儿、少儿给予。因此，本发明还适于针对婴幼儿、少儿的疾病或其症状的预防、改善和/或治疗。

利用本发明的肌肉增量用组合物作为药物组合物的情况，该药物组合物可以是经口给予和非经口给予中的任一种，可以根据给予方法而制成适宜期望的剂型。例如，经口给予的情况下，可以制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂等固体制剂；溶液剂、糖浆剂、悬浮剂、乳剂等液体制剂等。另外，非经口给予的情况下，可以制成栓剂、软膏剂等。

另外，在进行制剂化时，本发明的药物组合物可以使用通常制剂化中所使用的赋形剂、ph调节剂、着色剂、矫味剂等成分。另外，只要不损害本发明的效果，本发明的药物组合物中还可以使用公知的或未来会发现的、对肌肉疾病、肌萎缩相关疾病或这些症状具有预防、改善和/或治疗的效果的成分。

此外，制剂化可以根据剂型适宜利用公知的方法来实施。在制剂化时，还可以适宜配混制剂载体进行制剂化。

本发明的药物组合物的摄取量或给药量可以根据剂型进行适宜选择，例如，每1kg体重、1天的双歧杆菌属细菌的摄取量或给药量优选为1×10⁶～1×10¹²cfu/kg体重/天，更优选为1×10⁷～1×10¹¹cfu/kg体重/天，进一步优选为1×10⁸～1×10¹⁰cfu/kg体重/天。或者，作为每一个体(体重)的摄取量或给药量，优选为10⁷～10¹⁴cfu/天，更优选为10⁸～10¹³cfu/天，进一步优选为10⁹～10¹²cfu/天。

另外，使用双歧杆菌属细菌的培养物、源自前述细菌的培养物的分离纯化物(例如培养上清液)、前述细菌的菌体处理物的情况，其摄取量或给药量在换算为双歧杆菌属细菌的摄取量或给药量时优选为上述摄取量或给药量。

另外，使用双歧杆菌属细菌的培养物、源自前述细菌的培养物的分离纯化物(例如培养上清液)的情况，其给药量以每1kg体重、1天的量计优选为0.01～100ml，更优选为0.1～10ml。此时，前述细菌的分离纯化物(例如培养上清液)优选：使用公知的培养基，由以双歧杆菌属细菌的菌数成为1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml的方式培养的培养物得到的分离纯化物(例如上清液)；更优选为由以成为1×10⁸～1×10¹⁰cfu/ml的方式培养的培养物得到的分离纯化物(例如培养上清液)。

进而，对于本发明的药物组合物，以前述摄取量或给药量计优选至少4周每天持续摄取，更优选至少8周每天持续摄取，优选至少12周每天持续摄取。

另外，本发明的药物组合物中的双歧杆菌属细菌的含量可以基于前述摄取量或给药量进行适宜选择。例如，可以为1×10⁶～1×10¹²cfu/g或1×10⁶～1×10¹²cfu/ml、优选为1×10⁷～1×10¹¹cfu/g或1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml、更优选为1×10⁸～1×10¹⁰cfu/g或1×10⁸～1×10¹⁰cfu/ml。该细菌为死菌时，cfu可以替换成个细胞(cells)。

另外，使用双歧杆菌属细菌的培养物、源自前述细菌的培养物的分离纯化物(例如培养上清液)、前述细菌的菌体处理物的情况下，其含量在换算成双歧杆菌属细菌的含量时优选为上述含量。进而，使用双歧杆菌属细菌的培养物、源自前述细菌的培养物的分离纯化物(例如培养上清液)的情况下，优选含有0.01～100ml，优选含有0.1～10ml。

另外，作为前述制剂载体，可以根据剂型使用各种有机或无机的载体。作为固体制剂的情况的载体，可列举出例如：赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味矫臭剂等。

作为赋形剂，例如可列举出：乳糖、白糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇等糖衍生物；玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、糊精、羧甲基淀粉等淀粉衍生物；结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙等纤维素衍生物；阿拉伯胶；葡聚糖；普鲁兰多糖；轻质无水硅酸、合成硅酸铝、偏硅酸铝酸镁等硅酸盐衍生物；磷酸钙等磷酸盐衍生物；碳酸钙等碳酸盐衍生物；硫酸钙等硫酸盐衍生物等。

作为结合剂，除了上述赋形剂之外可列举出例如：明胶；聚乙烯基吡咯烷酮；聚乙二醇等。

作为崩解剂，除了上述赋形剂之外可列举出例如：交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯基吡咯烷酮等经化学修饰的淀粉或纤维素衍生物等。

作为润滑剂，可列举出例如：滑石；硬脂酸；硬脂酸钙、硬脂酸镁等硬脂酸金属盐；胶体二氧化硅；硅酸铝镁盐(veegum)、鲸蜡等蜡类；硼酸；二元醇；富马酸、己二酸等羧酸类；苯甲酸钠等羧酸钠盐；硫酸钠等硫酸盐类；亮氨酸；月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁等月桂基硫酸盐；硅酸酐、硅酸水合物等硅酸类；淀粉衍生物等。

作为稳定剂，可列举出例如：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸酯类；氯丁醇、苄醇、苯基乙醇等醇类；苯扎氯铵；乙酸酐；山梨酸等。

作为矫味矫臭剂，例如可列举出：甜味剂、酸味剂、香料等。

需要说明的是，作为用于经口给予用的液体制剂的情况下的载体，可列举出：水等溶剂、矫味矫臭剂等。

＜饮食品组合物＞

进而，本发明的肌肉增量用组合物可以作为饮食品组合物使用。本发明的饮食品组合物可以通过将双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物(例如，前述细菌的培养物的培养上清液和/或前述细菌的菌体处理物等)添加至公知的饮食品中来制造，还可以通过将双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物(例如，前述细菌的培养物的培养上清液和/或前述细菌的菌体处理物等)混合至饮食品的原料中而以新的饮食品组合物的形式加以制造。

本发明中的饮食品组合物无论液体、糊剂状、固体、粉末等的形态，除了压片糖、流质食品、饲料(包括宠物用)等之外，可列举出例如：小麦粉产品、速食品、农产加工品、水产加工品、畜产加工品、发酵乳或干酪等乳/乳产品、油脂类、基础调味剂、复合调味剂/食品类、冷冻食品、点心类、饮料、或除此以外的市售品等。

另外，只要不损害本发明的效果，本发明中的饮食品组合物就可以使用公知的或未来会发现的具有肌肉增量作用的成分或辅助肌肉增量作用的成分。例如，本发明中的饮食品组合物可以通过组合如下成分以及双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物来制备，所述成分为：乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白或豌豆蛋白(peaprotein)等各种蛋白质或其混合物、分解物；亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或谷氨酰胺等氨基酸；维生素b6或维生素c等维生素类；肌酸；柠檬酸；或者鱼油等。

另外，本发明中定义的饮食品组合物可以以标示了肌肉疾病或肌萎缩相关疾病或这些症状的预防、疾病或症状的风险降低、疾病症状缓和和/或疾病或其症状的治疗等用途(包括保健用途)的饮食品的形式来提供/销售。另外，作为饮食品的摄取对象，可以标示为“运动员”，“希望增加肌肉的人”，“因缺乏运动而担心肌力衰退的人”，“担心肌肉因老龄化而衰退的人”，“担心肌肉随年龄增长而衰退的人”，“希望改善虚弱的人”等来提供/销售。

“标示”行为中包括用于向需求者通知上述用途的全部行为，只要是能唤起/类推前述用途的表现，无论标示的目的、标示的内容、标示的对象物/介质等如何全部均属于本发明的“标示”行为。

另外，“标示”优选的是通过需求者能直接识别上述用途的表现来进行。具体而言，可列举出：为了转让、交付、用于转让或交付而展示在饮食品的商品或商品的包装上记载了前述用途的物品，在进口行为、涉及商品的广告、价格表或说明书类上将上述用途记载并展示、或进行发布，或在将这些作为内容的信息中记载上述用途并利用电磁(网络等)方法来提供的行为等。

另一方面，作为标示内容，优选为根据行政等许可的标示(例如基于行政规定的各种制度而获得许可，在基于这样的许可的状态下进行的标示等)。另外，优选将这样的标示内容附于包装、容器、目录、小册子、pop(购买点广告，pointofpurchaseadvertising)等销售现场的宣传材料、其它资料等上。

另外，“标示”还可列举出作为健康食品、功能性食品、经肠营养食品、特殊用途食品、保健功能食品、特定保健用食品、营养功能食品、功能性标示食品、准药物等的标示。其中特别是被消费者事务机构许可的标示、例如可列举出特定保健用食品、营养功能食品或通过功能性标示食品的制度或与其相似的制度许可的标示等。具体而言，可以列举出作为特定保健用食品的标示、作为带有条件的特定保健用食品的标示、对身体的构造、功能产生影响内容的标示、疾病风险降低标示、基于科学根据的功能性的标示等。更具体而言，典型的例子为：作为关于健康增进法中规定的特殊用途标示的许可等的内阁府令(平成二十一年八月三十一日内阁府令第五十七号)所确定的特定保健用食品的标示(特别是保健用途的标示)及与其类似的标示。

本发明的饮食品组合物的摄取量可以进行适宜选择，例如，每1kg体重的1天的双歧杆菌属细菌的摄取量优选为1×10⁶～1×10¹²cfu/kg体重/天，更优选为1×10⁷～1×10¹¹cfu/kg体重/天，进一步优选为1×10⁸～1×10¹⁰cfu/kg体重/天。或者，作为每一个体(体重)的摄取量或给药量，优选为10⁷～10¹⁴cfu/天，更优选为10⁸～10¹³cfu/天，进一步优选为10⁹～10¹²cfu/天。该细菌为死菌时，cfu可以替换为个细胞(cells)。

另外，使用双歧杆菌属细菌的培养物、前述细菌的菌体处理物时，其摄取量在换算为双歧杆菌属细菌的摄取量时优选为上述摄取量。

另外，使用双歧杆菌属细菌的培养物或源自其培养物的分离纯化物(例如培养上清液)的情况，其摄取量或给药量以每1kg体重的1天的量计优选为0.01～100ml，更优选为0.1～10ml。此时，源自前述细菌的培养物的分离纯化物(例如培养上清液)优选：使用公知的培养基，由以双歧杆菌属细菌的菌数成为1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml的方式培养的培养物得到的分离纯化物(例如培养上清液)，更优选为由以成为1×10⁸～1×10¹⁰cfu/ml的方式培养的培养物得到的分离纯化物(例如培养上清液)。

进而，对于本发明的饮食品组合物，以前述摄取量或给药量计优选至少4周每天持续摄取，更优选至少8周每天持续摄取，进一步优选至少12周每天持续摄取。

另外，本发明的饮食品组合物中的双歧杆菌属细菌的含量可以基于前述摄取量进行适宜选择，例如，可以为1×10⁶～1×10¹²cfu/g或1×10⁶～1×10¹²cfu/ml、优选为1×10⁷～1×10¹¹cfu/g或1×10⁷～1×10¹¹cfu/ml、更优选为1×10⁸～1×10¹⁰cfu/g或1×10⁸～1×10¹⁰cfu/ml。该细菌为死菌时，cfu可以替换为个细胞(cells)。

另外，使用双歧杆菌属细菌的培养物、前述细菌的菌体处理物的情况，其含量在换算成双歧杆菌属细菌的含量时优选为上述含量。进而，使用源自双歧杆菌属细菌的培养物的分离产物(例如培养上清液)的情况，优选含有0.01～100ml，更优选含有0.1～10ml。

本发明还可以采用以下的构成。

[1]

一种肌肉增量用组合物，其含有双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分。该组合物适合用于经口摄取用途。该组合物适宜的是药物组合物或饮食品组合物。

[2]

一种肌肉增量方法，其给予双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分。该给予适宜的是经口摄取。

[3]

一种肌肉疾病或其症状的改善或治疗方法，其给予双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分。该给予适宜的是经口摄取。前述肌肉疾病或其症状适宜的是肌萎缩相关疾病或其症状。

[4]

一种肌肉增量用的双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物或其应用。

[5]

一种肌肉疾病或其症状的改善或治疗用的、双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物或其应用。

[6]

一种双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物在制造含有双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分的肌肉增量用组合物中的应用。该组合物适宜的是经口摄取用途。该组合物适宜的是药物组合物或饮食品组合物。

[7]

一种肌肉增量用饮食品组合物的制造方法，前述饮食品组合物含有双歧杆菌属细菌和/或前述细菌的培养物作为有效成分。前述饮食品组合物适宜的是营养增强食品、发酵饮食品(例如发酵乳)。

[8]

根据前述[1]～[7]中任一项所述的组合物、细菌或前述细菌的培养物、应用或方法，其中，前述双歧杆菌属细菌为选自由短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)、长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongumsubsp.longum)、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)、齿双歧杆菌(bifidobacteriumdentium)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)、假长双歧杆菌球形亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.globosum)、假长双歧杆菌假长亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.pseudolongum)和嗜热双歧杆菌(bifidobacteriumthermophilum)组成的组中的一种或多种。

[9]

根据前述[1]～[7]中任一项所述的组合物、细菌或前述细菌的培养物、应用或方法，其中，前述双歧杆菌属细菌为选自由短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)fermbp-11175、短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)atcc15700、长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongumsubsp.longum)atcc15707、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)atcc29521、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)atcc15703、齿双歧杆菌(bifidobacteriumdentium)dsm20436、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)dsm10140、假长双歧杆菌球形亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.globosum)jcm5820、假长双歧杆菌假长亚种(bifidobacteriumpseudolongumsubsp.pseudolongum)atcc25526和嗜热双歧杆菌(bifidobacteriumthermophilum)atcc25525组成的组中的一种或多种。

[10]

根据前述[1]～[9]中任一项所述的组合物、细菌或前述细菌的培养物、应用或方法，其中，给予或摄取期间为至少4周以上。

[11]

根据前述[1]～[10]中任一项所述的组合物、细菌或前述细菌的培养物、应用或方法，其中，前述双歧杆菌属细菌的用量为1×10⁶～1×10¹²cfu/kg体重/天或前述培养物的用量为0.01～100ml/kg体重/天。

[12]

根据前述[1]～[11]中任一项所述的组合物、细菌或前述细菌的培养物、应用或方法，其中，前述培养物为分离纯化物(适宜的是培养上清液)。

实施例

以下使用实施例对本发明进一步详细地进行说明，但本发明不限定于这些实施例。

[试验例1]

(1)双歧杆菌属细菌培养物的制备

将在包含脱脂奶粉10％的水溶液中进行冷冻保存的、短双歧杆菌fermbp-11175(保藏号fermbp-11175：可由nite-ipod获得)的菌液90μl添加至mrs液体培养基3ml中，在37℃下进行16小时厌氧培养。mrs液体培养基通过如下方式制备：将difcolactobacillimrsbroth(bd株式会社制)5.5g和l-半胱氨酸盐酸盐单水合物(和光纯药工业株式会社制)50mg以成为100ml的方式溶解于纯水中，用hcl水溶液调节为ph6.5，在121℃下进行15分钟灭菌而制备。接着，将各培养液在4℃、8000×g的条件下进行10分钟离心处理后，回收培养上清液。对于得到的培养上清液，以ph成为在7.0±0.05的范围内的方式通过氢氧化钠进行ph调节。

(2)细胞培养试验

将c2c12细胞以成为1.5×10⁴个细胞/cm²的方式接种于6孔板中，在含有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的dmem培养基中培养24小时。然后，将前述(1)中制备的、短双歧杆菌fermbp-11175的培养上清液添加至含有2％马血清和1％青霉素-链霉素的dmem培养基中。将未添加前述培养上清液而进行培养的试样作为对照，每2天更换新鲜的培养基，培养7天。然后，进行苏木精-伊红染色(he染色)，在显微镜观察下随机测定100根肌管的粗细，通过dunnett检验对统计学的显著性差异进行了解析。

(3)结果

其结果，各试样的肌管细胞的直径(平均值)如表1所示，添加了短双歧杆菌fermbp-11175的培养上清液的体系与对照相比，肌管细胞的直径变粗至3μm以上，确认了显著的肌肉量增加。

[表1]

[试验例2]

按照与试验例1同样的步骤，对于以下的表2所示的9种双歧杆菌属细菌，在制备培养上清液后实施了细胞培养试验。将未添加培养上清液而培养的试样作为对照，在显微镜观察下随机测定250根肌管的粗细，通过dunnett检验对统计学的显著性差异进行了解析。

下述的双歧杆菌属细菌是可以从atcc、dsm、jcm机构获得的公知细菌。

·长双歧杆菌长亚种atcc15707

·短双歧杆菌atcc15700

·两歧双歧杆菌atcc29521

·青春双歧杆菌atcc15703

·齿双歧杆菌dsm20436

·动物双歧杆菌乳亚种dsm10140

·假长双歧杆菌球形亚种jcm5820

·假长双歧杆菌假长亚种atcc25526

·嗜热双歧杆菌atcc25525

其结果，各试样的肌管细胞的直径(平均值)如表2所示，添加了双歧杆菌属的培养上清液的体系与对照相比，确认了显著的肌管细胞的直径变粗，因此启示出在全部菌种中肌肉量增加。

[表2]

[试验例3]

使用c57bl/6小鼠(charlesriverlaboratoriesjapan,inc.：健康的小鼠)作为实验动物，评价了短双歧杆菌fermbp-11175的培养上清液持续摄取4周对肌肉增量的影响。

对于实验动物，在以9周龄购入后，使其自由摄取f-2饲料(funabashifarmco.,ltd.制)和自来水。进行1周的驯化后，将实验动物分为对照组(以10ml/kg体重给予自来水)、双歧杆菌给予组(试验例1的(1)中制备的短双歧杆菌fermbp-11175的培养上清液10ml/kg体重给予)、亮氨酸给予组(以1.5g/kg体重给予亮氨酸)这3组(n＝7/组)，对各小鼠进行1天1次使用了经口探针的经口给予并持续4周。在最终给予结束后让实验动物绝食3小时，然后在七氟醚麻醉下进行处置，摘取跖肌、腓肠肌，测定各组织的湿重(体重比)。对于腓肠肌，将切成薄片的组织进行he染色后在显微镜下观察了组织。

其结果，各肌肉的组织重量(体重比)如表3所示。跖肌和腓肠肌的情况，确认了通过短双歧杆菌fermbp-11175的给予，与对照相比组织重量(体重比)增加。具体而言，确认了：通过短双歧杆菌fermbp-11175的给予，跖肌的情况，与对照相比组织重量增加0.05mg/g体重以上，腓肠肌的情况，与对照相比组织重量增加接近0.2mg/g体重，由此确认了肌肉增量。

进而，在显微镜观察腓肠肌的组织的结果中，如图1(双歧杆菌给予组)和图2(对照组)所示，短双歧杆菌fermbp-11175给予组与对照组相比，确认了肌管直径增大，可知肌肉得以增量。

[表3]

[试验例4]

以肥胖1度(bmi25以上且低于30)的80名健康成人作为对象进行随机双盲多中心安慰剂对照平行组间比较试验，评价了短双歧杆菌fermbp-11175的持续摄取对肌肉增量的影响。

将80名被检者随机分为两组，分别每天摄取含有双歧杆菌属细菌(短双歧杆菌fermbp-11175)的胶囊(含有相当于每1天摄取量200亿cfu的双歧杆菌属细菌)或安慰剂胶囊(含有每1天摄取量的0.373g的玉米淀粉(松谷化学株式会社制))，在摄取4周和8周时测定了肌肉量和骨骼肌量。测定使用体组成计inbody770(inbodyjapaninc.制)进行测定，通过t检验对统计学的显著性差异进行了解析。需要说明的是，对于组间比较，在摄取后的各评价时间点通过以摄取前的值为协变量的协方差分析进行评价。

其结果，肌肉量的变化如表4所示，骨骼肌量的变化如表5所示。通过给予含有双歧杆菌属细菌(短双歧杆菌fermbp-11175)的胶囊，摄取8周后与安慰剂组相比肌肉量显示出显著的高值。对于第8周的肌肉量的变化量，安慰剂组为-0.33kg与摄取开始前相比有所降低，而含有双歧杆菌属细菌的胶囊给予组(双歧杆菌给予组)观察到0.22kg的增加。与肌肉量同样地，对于骨骼肌而言在摄取8周时与安慰剂摄取组相比显示出显著的高值。对于第8周的变化量，安慰剂组为-0.19kg有所降低，而双歧杆菌给予组增加了0.19kg。

[表4]

[表5]

[制造例1]

将短双歧杆菌fermbp-11175添加至mrs液体培养基3ml中，在37℃下进行16小时厌氧培养，将培养液浓缩并进行冷冻干燥，得到该细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将该菌末与乳清蛋白浓缩物(wheyproteinconcentrate；wpc)均匀地混合而得到组合物。将该组合物20g溶解于200g的水中，得到肌肉增量用组合物。其还可以作为肌肉增量用饮食品而摄取，也能够期待肌肉增量效果。

[制造例2]

将短双歧杆菌fermbp-11175添加至mrs液体培养基3ml中，在37℃下进行16小时厌氧培养，将培养液浓缩并进行冷冻干燥，得到该细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将该菌末与乳蛋白浓缩物的干燥粉末(mpc480、fonterra株式会社制、蛋白质含量80质量％、酪蛋白：乳清蛋白＝约8：2)均匀地混合而得到组合物。将该组合物20g溶解于200g的水中，得到肌肉增量用组合物。其还可以作为肌肉增量用饮食品而摄取，也能够期待肌肉增量效果。

由以上结果确认了：通过双歧杆菌属细菌和/或其培养物的给予或摄取，由于使肌管变粗而促进肌肉肥厚、及肌肉的重量得到增加。因此，本发明的肌肉增量用组合物可以有效地用于如下情况：基于训练的肌肉增强效果的增大目的；虚弱或运动器官综合征的改善；肌少症(sarcopenia)、肌肉疾病或肌萎缩相关疾病或其症状的预防、改善或治疗等。

附图标记说明

1肌管；2结缔组织。

pct/ro/134表