本发明属于饲料添加剂技术领域，具体涉及一种抗热应激饲料添加剂及其制备方法。
背景技术：
目前，蛋鸡多采用高密度集约化的饲养方式，蛋鸡的生产性能极易受到高温环境的影响，全球气候变暖、夏季高温期延长更加剧了这种影响的客观负效应。在高温季节里，鸡舍内的气温经常超过25℃，甚至高达35℃，高温环境（高于30℃）会使蛋鸡处于热应激状态，所谓热应激，就是指动物对于其生理不利的热环境产生的非特异性应答反应。热应激会引起蛋鸡产生一系列不适反应，主要表现为鸡群采食量减少、饮水量增加、呼吸加快、体温升高、抗病力降低、营养物质的消化吸收率下降、产蛋率降低、蛋质量下降等。
因热应激造成蛋鸡生产性能下降的现象已越来越多地被养殖业和营养工作者所关注，并提出了许多缓解蛋鸡热应激的相应措施，除了控制和改善养殖环境外，还包括在日粮中添加抗热应激的饲料添加剂，以此来增强蛋鸡的抗热应激能力。现有的抗热应激的饲料添加剂主要是抗生素和化学制剂，抗生素和化学制剂的缺点是长期使用副作用会很大，一方面会引起病原微生物产生抗药性；另一方面会在环境中产生药物残留，从而严重威胁人体健康。因此，在饲料添加剂中减少或替代原有的抗生素和化学制剂，将是饲料添加剂未来发展的必然趋势。植物提取物饲料添加剂具有无残留、不易产生抗药性的特点而成为现代集约化养殖业饲料添加剂的一种理想选择。然而，目前市场上抗热应激饲料添加剂功能单一，导致其使用效果受到一定限制。
因此，研制一种能综合调节蛋鸡热应激条件下的生理代谢、抗氧化代谢、免疫和生殖功能的饲料添加剂具有重要的应用价值。
技术实现要素：
本发明提供一种抗热应激饲料添加剂及其制备方法，以解决现有技术中抗热应激饲料添加剂功能单一而效果受限的技术问题。
本发明人经过长期的研究发现，热应激不仅会影响蛋鸡本身的生理生化、营养及内分泌代谢，而且会影响蛋鸡体内免疫、抗氧化功能。现有技术中仅基于一方面负效应为基础所采取的抗热应激的方法或研制的饲料添加剂，其使用效果往往受到一定的限制。
发明人经过长期的大量研究，筛选出核桃壳和艾草作为本发明饲料添加剂的植物提取物。核桃壳提取物含有丰富的酚类和黄酮类活性物质，具有抗氧化功能、抗病毒作用；艾叶具有浓烈香气，含有丰富的矿物质、脂肪、蛋白、碳水化合物、多种维生素及畜禽必需氨基酸、黄酮类、萜类等活性成分，具有抗氧化、抗菌的作用，能增强畜禽的免疫功能；本发明饲料添加剂采用核桃壳提取物和艾油膏与多种维生素、氨基酸等活性物质进行配伍搭配，本发明抗热应激饲料添加剂能够急速补充脱水造成的电解质流失，迅速恢复细胞渗透压与调解体内酸碱平衡，具有增强家禽体内抗氧化能力、提高免疫力和抗应激能力、促进生长的效果。
因此，本发明人拟出如下抗热应激饲料添加剂的配方：
设计一种抗热应激饲料添加剂，由下列重量份的原料药组成：
核桃壳提取物15～25份、维生素c1.5～2.5份、维生素e1.5～2份、谷氨酰胺0.5～0.8份、氧化锌0.2～0.3份、精氨酸0.6～1份、色氨酸1～2份、硫酸钠0.7～1.4份、碘酸钙1～1.5份、磷酸二氢钾0.8～1.5份、葡萄糖39.7～48.45份、糊精14.3～16.6份、艾油膏10份。
优选的，上述抗热应激饲料添加剂，由以下质量份的原料组成：
核桃壳提取物25份、维生素c2份、维生素e1.5份、谷氨酰胺0.5份、氧化锌0.2份、精氨酸1份、色氨酸2份、硫酸钠0.7份、碘酸钙1.2份、磷酸二氢钾0.8份、葡萄糖39.7份、糊精15.4份、艾油膏10份。
优选的，上述抗热应激饲料添加剂，由以下质量份的原料组成：
核桃壳提取物15份、维生素c1.5份、维生素e1.8份、谷氨酰胺0.6份、氧化锌0.25份、精氨酸0.8份、色氨酸1.5份、硫酸钠1份、碘酸钙1.5份、磷酸二氢钾1份、葡萄糖48.45份、糊精16.6份、艾油膏10份。
优选的，上述抗热应激饲料添加剂，由以下质量份的原料组成：
核桃壳提取物20份、维生素c2.5份、维生素e2份、谷氨酰胺0.8份、氧化锌0.3份、精氨酸0.6份、色氨酸1份、硫酸钠1.4份、碘酸钙1份、磷酸二氢钾1.5份、葡萄糖44.6份、糊精14.3份、艾油膏10份。
上述抗热应激饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）制备核桃壳提取物：先采用超声提取法或水煎提取法提取，再经喷雾干燥即得到核桃壳提取物；
（2）制备艾油膏：取干燥艾叶制艾绒后的艾粉，采用亚临界法提取有效成分即得到艾油膏；
（3）按权利要求1所述配方制成颗粒剂即可。
优选的，在所述步骤（1）中，当采用超声提取法时：加入核桃壳重量5～10倍量的30%乙醇，在25℃条件下，采用超声提取法提取40min，提取1～4次，合并提取液，回收乙醇，喷雾干燥即可；
优选的，在所述步骤（1）中，当采用超声提取法时：加入核桃壳重量5～15倍量的ph值为7～10的碱水，在35℃条件下，采用超声提取法提取25～40min，提取1～4次，合并提取液，浓缩，喷雾干燥即可。
优选的，在所述步骤（1）中，采用水煎提取法时：加入核桃壳重量5～10倍量的水煎煮，提取1～4次，每次分别为1.5h、1h、0.5h，合并提取液，浓缩，喷雾干燥即可。
优选的，在所述步骤（2）中，采用亚临界法提取，在65℃、0.65mpa条件下，以丁烷为溶媒，提取3次，每次分别为1.5h，1h，1h，回收溶剂，即可。
优选的，在所述步骤（2）中，采用亚临界法提取，在40℃、0.8mpa条件下，以二甲醚为溶媒，提取1次，3h，回收溶剂，即可。
上述抗热应激饲料添加剂的应用，具体方法为将抗热应激饲料添加剂与日粮混合后进行投喂即可，所述抗热应激饲料添加剂占日粮质量的1～4%。
与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：
1.本发明抗热应激饲料添加剂组方配比科学，搭配合理，含有多种维生素、氨基酸、酚类及黄酮类等活性物质，抗热应激效果显著。
2.本发明抗热应激饲料添加剂中核桃壳提取物和艾油膏，与抗生素类及化学制剂类饲料添加剂相比，具有无毒副作用、无抗药性、无药物残留，有益于动物和人类健康的优点。
3.本发明抗热应激饲料添加剂原料来源广泛、成本低廉，有利于在养殖业得到广泛应用。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，以便本领域技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
实施例1
一种抗热应激饲料添加剂，由以下质量份的原料制成：
核桃壳提取物25份、维生素c2份、维生素e1.5份、谷氨酰胺0.5份、氧化锌0.2份、精氨酸1份、色氨酸2份、硫酸钠0.7份、碘酸钙1.2份、磷酸二氢钾0.8份、葡萄糖39.7份、糊精15.4份、艾油膏10份。
上述抗热应激饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备核桃壳提取物：加入核桃壳重量8倍的乙醇，在25℃条件下，采用超声提取法提取40min，提取3次，合并提取液，回收乙醇，喷雾干燥得到核桃壳提取物；
测得核桃壳提取物中总酚（福林-酚法）和总黄酮（芦丁-比色法）总含量为20.2%；
（2）制备艾油膏：取干燥艾叶制艾绒后的艾粉，采用亚临界法提取，在65℃、0.65mpa条件下，以丁烷为溶媒，提取3次，每次分别为1.5h，1h，1h，回收溶剂，得到艾油膏；
（3）将核桃壳提取物和艾油膏按照上述配方制成颗粒剂即可。
实施例2
一种抗热应激饲料添加剂，由以下质量份的原料制成：
核桃壳提取物15份、维生素c1.5份、维生素e1.8份、谷氨酰胺0.6份、氧化锌0.25份、精氨酸0.8份、色氨酸1.5份、硫酸钠1份、碘酸钙1.5份、磷酸二氢钾1份、葡萄糖48.45份、糊精16.6份、艾油膏10份。
上述抗热应激饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备核桃壳提取物：加入核桃壳重量10倍的ph值为9的碱水，在35℃条件下，采用超声提取法提取30min，提取3次，合并提取液，浓缩，喷雾干燥得到核桃壳提取物；
测得核桃壳提取物中总酚（福林-酚法）和总黄酮（高效液相色谱法）总含量为35.92%；
（2）制备艾油膏：取干燥艾叶制艾绒后的艾粉，采用亚临界法提取，在65℃、0.65mpa条件下，以丁烷为溶媒，提取3次，每次分别为1.5h，1h，1h，回收溶剂，得到艾油膏；
（3）将核桃壳提取物和艾油膏按照上述配方制成颗粒剂即可。
实施例3
一种抗热应激饲料添加剂，由以下质量份的原料制成：
核桃壳提取物20份、维生素c2.5份、维生素e2份、谷氨酰胺0.8份、氧化锌0.3份、精氨酸0.6份、色氨酸1份、硫酸钠1.4份、碘酸钙1份、磷酸二氢钾1.5份、葡萄糖44.6份、糊精14.3份、艾油膏10份。
上述抗热应激饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备核桃壳提取物：加入核桃壳重量10倍的水，水煎提取3次，每次分别为1.5h、1h、0.5h，合并提取液，合并提取液，浓缩，喷雾干燥得到核桃壳提取物；
测得核桃壳提取物中总酚（福林-酚法）和总黄酮（高效液相色谱法）总含量为32.96%；
（2）制备艾油膏：取干燥艾叶制艾绒后的艾粉，采用亚临界法提取，在40℃、0.8mpa条件下，以二甲醚为溶媒，提取1次，3h，回收溶剂，得到艾油膏；
（3）将核桃壳提取物和艾油膏按照上述配方制成颗粒剂即可。
本发明抗热应激饲料添加剂可急速补充脱水造成的电解质流失，迅速恢复细胞渗透压与调解体内酸碱平衡，具有增强家禽体内抗氧化能力、提高免疫力和抗应激能力、促进生长的效果。为表明本发明的应用效果，进行如下试验。
试验设计及管理
生理生化试验
选取健康的、相近体重的80羽4日龄蛋公鸡随机分为四组，即对照组、1%添加组、2%添加组、4%添加组，对照组饲喂正常日粮，添加组分别在日粮中添加1%、2%、4%的本发明实施例1中的抗热应激饲料添加剂，严格控制鸡舍光照和通风，温度30℃、湿度60%，养殖25天。将对照组和添加组每组各随机分为两半，一半进行热应激处理（36℃±1℃处理7h），另一半不进行热应激处理，7h后采血测定。试验中可见热应激处理后，鸡群出现不适状态，表现为张口呼吸，伸颈，大部分鸡呈卧姿。
具体试验过程采用如下试剂、仪器设备：re-5210旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、yc-015喷雾干燥器（上海雅程仪器设备有限公司）、h-1650高速台式离心机（湖南湘仪离心机仪器有限公司）、pe-6800vet全自动血细胞分析仪（河北普康医疗设备有限公司）、pf-300vet全自动生化分析仪（河北普康医疗设备有限公司）。naoh、抗凝剂（柠檬酸钠）、总蛋白检测等试剂盒均购自广州科方生物技术股份有限公司。
各组的生理生化指标具体测定项目包括白细胞总数、血小板总数、红细胞总数、ast（天门冬氨基转移酶）、tp(总蛋白)、uara(尿素)、alb(白蛋白），具体试验结果如表1所示。
用excel软件对数据进行平均数和标准差处理，并对数据进行单因素方差分析，若p>0.05，则数据间差异不显著；若p<0.05，则数据间差异显著；若p<0.01，则数据间差异极显著。
表1抗热应激饲料添加剂对蛋鸡生理生化指标的影响
注：肩标表示添加组与对照组的差异性，a、b、c分别表示无显著差异、差异显著、差异极显著。
表1（续）抗热应激饲料添加剂对蛋鸡生理生化指标的影响
注：肩标表示添加组与对照组的差异性，a、b、c分别表示无显著差异、差异显著、差异极显著。
由表1可知，当雏鸡发生热应激时，ast（天门冬氨基转移酶）、血小板总数降低，tp(总蛋白)、uara(尿素)、alb(白蛋白）、白细胞总数的数值升高；抗热应激饲料添加剂添加组的ast（天门冬氨基转移酶）、血小板总数的水平升高，tp(总蛋白)、uara(尿素)、alb(白蛋白）、白细胞总数的水平降低，上述试验结果表明：本发明热应激饲料添加剂有利于雏鸡体内相关生理生化指标维持稳态水平。
生理生化指标是反映机体内环境变化的重要指标，热应激造成雏鸡内环境发生变化，因而引起雏鸡发生一系列不适反应。而在日粮中添加一定比例的本发明实施例1抗热应激饲料添加剂可以在一定程度抵消热应激对雏鸡生理生化指标的影响，减少热应激状态下雏鸡内环境的变化，减少热应激对雏鸡造成的不良反应，因此，本发明抗热应激饲料添加剂有望应用于畜禽热应激的缓解，减少因热应激造成的损失。
抗氧化酶活力试验
选取健康的、相近体重的80羽4日龄蛋公鸡随机分为四组，即对照组、1%添加组、2%添加组、4%添加组，对照组饲喂正常日粮，添加组分别在日粮中添加1%、2%、4%的本发明实施例2中的抗热应激饲料添加剂，严格控制鸡舍光照和通风，温度30℃、湿度60%，养殖25天。将对照组和添加组每组各随机分为两半，一半进行热应激处理（36℃±1℃处理7h），另一半不进行热应激处理，
试验中可见热应激处理后，鸡群出现不适状态，表现为张口呼吸，伸颈，大部分鸡呈卧姿。
测定各组肝脏中的谷胱甘肽过氧化物酶（gsh）、总超氧化物歧化酶（sod）、过氧化氢酶（cat）、丙二醛（mda）含量，具体试验过程中采用如下试剂、仪器设备：谷胱甘肽过氧化酶（gsh-px）测试盒（20180309）；过氧化氢酶（cat）测试盒（20180312）；总超氧化物歧化酶（t-sod）测试盒（20180425）；丙二醛（mda）测试盒（20180426）；蛋白质定量测试盒（20180421）；试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品且其规格均为100t/96样，冰乙酸和无水乙醇均为分析纯等，h.h.s电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；x1r型台式离心机（thermo）；xk96-b快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公司）；varioskan多功能酶标仪（thermo）等，具体测定结果如表2所示。
表2抗热应激饲料添加剂对蛋鸡血清抗氧化指标的影响
表2可知，本发明抗热应激饲料添加剂提高了热应激状态下鸡体内的谷胱甘肽过氧化酶（gsh）活性、过氧化氢酶（cat）活性、总超氧化物歧化酶(sod)活性，降低了丙二醛(mda)的含量。上述试验表明：本发明抗热应激饲料添加剂对由热应激引起的肝脏gsh-px活力、cat活力、t-sod活力的降低和mda含量的升高具有预防作用，即本发明抗热应激饲料添加剂对肝脏具有保护作用，总体来看，1%添加组和2%添加组对鸡肝脏的保护作用优于4%添加组。
血清免疫试验
选取健康的、相近体重的80羽4日龄蛋公鸡随机分为四组，即对照组、1%添加组、2%添加组、4%添加组，对照组饲喂正常日粮，添加组分别在日粮中添加1%、2%、4%的本发明实施例3中抗热应激饲料添加剂，严格控制鸡舍光照和通风，温度30℃、湿度60%，养殖25天。将对照组和添加组每组各随机分为两半，一半进行热应激处理（36℃±1℃处理7h），另一半不进行热应激处理，实验中可见热应激处理后，鸡群出现不适状态，表现为张口呼吸，伸颈，大部分鸡呈卧姿。
本血清免疫试验检测指标包括免疫球蛋白：iga、igm、igg；血清细胞因子：il-2、il-4、il-6、ifn-α、il-1β、ifn-γ，iga、igm、igg检测采用德国prodiadiagnostics公司用日立7600全自动生化仪；il-2、il-4、il-6、il-1β、ifn-γ、ifn-α试剂盒购自上海源叶生物科技有限公司，酶标仪（北京普朗新技术有限公司、型号：9602a）、微量移液器（北京卓信伟业科技有限公司eppendorfresearch）100-1000µl、微量移液器（北京卓信伟业科技有限公司eppendorfresearch）5-50µl、一次性吸头、303-0a台式恒温箱（北京永光明医疗仪器有限公司），具体检测结果如表3所示。
表3抗热应激饲料添加剂对蛋鸡血清免疫指标的影响
表3（续）抗热应激饲料添加剂对蛋鸡血清免疫指标的影响
由表3可知，在未应激状态下，1%添加组提高了除igm以外的所有指标；2%添加组提高了除iga、ifn-γ、ifn-α以外的所有指标；4%添加组提高了除igm和iga以外的所有指标。在热应激状态下，1%添加组提高了所有指标；2%添加组提高了除iga、il-1β、ifn-γ以外的所有指标；4%添加组提高了除iga、igm以外的所有指标。饲料中添加1%的本发明抗热应激饲料添加剂对热应激和未热应激状态下鸡血清中il-1β、il-2、il-6、il-4、ifn-r和ifn-α有增强作用，能增强鸡的免疫系统。因此，本发明抗热应激饲料添加剂有助于提高鸡的免疫指标。
综合以上试验可知，本发明抗热应激饲料添加剂可急速补充脱水造成的电解质流失，迅速恢复细胞渗透压与调解体内酸碱平衡，具有增强家禽体内抗氧化能力、提高免疫力和抗应激能力、促进生长的效果。
上面结合实施例对本发明作了详细的说明，但是，所属技术领域的技术人员能够理解，在不脱离本发明宗旨的前提下，还可以对上述实施例中的各个具体参数进行变更，形成多个具体的实施例，均为本发明的常见变化范围，在此不再一一详述。