复合多肽类添加剂饲料及其制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明具体涉及一种复合多肽类添加剂饲料及其制作方法。
【背景技术】
[0002] 由于抗生素强大的抗菌杀菌作用，被大量使用于世界各地，并在动物疾病治疗、提 高饲料利用率、促进畜禽生长等方面发挥了重要作用。但是，其副作用也特别明显，尤其体 现在细菌耐药性和药物残留等方面。2006年，欧盟全面禁止了应用抗生素作为饲料的添加 剂。
[0003] 抗菌肽，原指昆虫体内经诱导而产生的一类具有抗菌活性的碱性多肽物质。其分 子量在2000~7000左右，由20~60个氨基酸残基组成，这类活性多肽多数具有强碱性、 热稳定性以及广谱抗菌等特点，尤其是对某些耐药性病原菌具有很好的杀灭作用，这些特 点引起了人们的重视。
[0004] 除此之外，人们还发现，某些抗菌肽对部分病毒、真菌、原虫和癌细胞等有杀灭作 用，甚至能提高免疫力、加速伤口愈合过程。抗菌肽的广泛生物学活性显示了其在医学上良 好的应用前景。
[0005] 因此，在日常饲料中添加抗菌肽类物质，一方面可以减少对抗生素的依赖和使用 量，减少抗生素滥用的污染；另一方面，寻找到新型的抗生素替代物，促进畜禽业的健康发 展。
【发明内容】
[0006] 为克服现有技术所存在的缺陷，现提供一种复合多肽类添加剂饲料及其制作方 法，以形成新的抗生素替代物，减少对抗生素的依赖和滥用，促进畜禽业的健康发展。
[0007] 为实现上述目的，提供一种复合多肽类添加剂饲料，
[0008] 包括有抗菌肽片段，所述抗菌肽片段通过酵母基因提纯浓缩形成，所述酵母基因 的配方材料包括：54%的玉米、16. 3%的豆柏、0. 084%的青糠、0. 04%的DDGS、0. 05%的棉 柏、0. 03%的蛋鸡预混料、0. 06%的石粉、0. 02%的贝壳粉以及0. 01 %的鱼粉。
[0009] 本发明复合多肽类添加剂饲料的有益效果在于，通过抗菌肽片段替代抗生素以形 成新种饲料。
[0010] 为更好地实现上述目的，本发明还提供一种复合多肽类添加剂饲料的制作方法， 包括以下步骤：
[0011] 利用化学合成法合成以酵母偏爱密码子为编码的抗菌肽蛙皮素基因片段；
[0012] 将所述抗菌肽蛙皮素基因片段与与酵母表达载体重组，以形成胞内表达栽体；
[0013] 电机转化所述胞内表达栽体内的宿主菌；
[0014] 对所述抗菌肽蛙皮素基因片段进行提纯和浓缩；
[0015] 将提纯浓缩后的所述抗菌肽蛙皮素基因片段与常规配料原料混合，以形成所述复 合多肽类添加剂饲料。
[0016] 优选地，在对所述抗菌肽蛙皮素基因片段进行提纯和浓缩之前，还包括：通过电泳 和药敏试验验证所述胞内表达栽体中的所述抗菌肽蛙皮素基因片段是否稳定。
【具体实施方式】
[0017] 为利于对本发明的结构的了解，以下结合实施例进行说明。
[0018] 本发明提供了一种复合多肽类添加剂饲料，包括有抗菌肽片段，所述抗菌肽片 段通过酵母基因提纯浓缩形成，所述酵母基因的配方材料包括：54%的玉米、16. 3%的豆 柏、0. 084%的青糠、0. 04%的DDGS、0. 05%的棉柏、0. 03 %的蛋鸡预混料、0. 06%的石粉、 0. 02 %的贝壳粉以及0. 01 %的鱼粉。
[0019] 1.基因表达法获取有效果的抗菌肤物质：
[0020] 以酵母为基因工程受体菌来表达，酵母具有比大肠杆菌更完备的基因表达调控机 制和对表达产物的加工修饰及分泌能力，不产生内毒素，采用电泳技术获得抗菌肽片段；
[0021] 2.抗菌肽片段的提纯和浓缩技术：由于抗菌肽产量不高，需要进行纯化和浓缩， 获得高质量和浓度的抗菌肽；
[0022] 3.抗菌肽片段的饲喂效果：
[0023] 通过对实验动物小鼠的饲喂试验，检验小鼠免疫机能的变化和效果。
[0024] 以下为上述配方材料的具体质量比：
[0027] 在上述饲料组成结构的基础上，本发明还提供了一种复合多肽类添加剂饲料的制 作方法，包括以下步骤：
[0028] 步骤S1，利用化学合成法合成以酵母偏爱密码子为编码的抗菌肽蛙皮素基因片 段；
[0029] 步骤S2,将所述抗菌肽蛙皮素基因片段与与酵母表达载体重组，以形成胞内表达 栽体；
[0030] 步骤S3,电机转化所述胞内表达栽体内的宿主菌；
[0031] 步骤S4,对所述抗菌肽蛙皮素基因片段进行提纯和浓缩；
[0032] 步骤S5,将提纯浓缩后的所述抗菌肽蛙皮素基因片段与常规的配料原料混合，以 形成所述复合多肽类添加剂饲料。
[0033] 具体地，在本实施例中，上述步骤具体过程为：
[0034] -、抗菌肽的表达和生产
[0035] 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽蛙皮素（magainin)基因片 段，合成片段拼接后，与PUC19重组，获得magainin基因。magainin基因与酵母表达载体 PPIC3重组，构建胞内表达栽体pPIC3-Mag，电击法转化GS115宿主菌，经表型筛选和PCR鉴 定证实了目的基因已稳定整合人Pi chia pastoris酵母基因组中。
[0036] 二、抗菌肽的提纯和浓缩
[0037] 表达产物抗菌肽是通过电泳和药敏试验来进行鉴定的，通过以下条件的摸索来进 行优化：
[0038] 首先，挑YPDSZ平板上单个菌落接入YPDSZ液体培养基，30度230rpm振摇 22-24h ；
[0039] 然后，1 :100 接入 BMGY 中，30 度 230rpm22-24h ;
[0040] 随后，菌体沉淀接入BMMY中，30度230rpm甲醇诱导表达96h ;
[0041] 最后离心，取上清液进行电泳分析，获得的片段采用凝胶柱进行纯化。
[0042] 三、饲喂效果表达
[0043] 按照饲喂推荐量0. 9%。比例进行添加，做成预混料，饲料工艺如下：
[0044] 首先，将所有外购的粒状原料经粉碎后进入配料仓，粉状原料经清理筛后进入配 料仓。而后，饲料配方输入电脑自动配料系统，并自动配料。然后，将含有有益菌的预混料 直接投入混合机。之后，混合机进行混合，每批次2吨，混合时间不少于120秒，混合均匀度 < 10%。最后，打包，经检验合格才出厂。
[0045] 完成上述实施过程后，应能体现出本发明以下特点：
[0046] 1)酵母基因表达技术来生产抗菌肽；
[0047] 2)抗菌肽的纯化和浓缩技术，获得高质量、高浓度的抗菌肽。
[0048] 以上结合实施例对本发明进行了详细说明，本领域中普通技术人员可根据上述说 明对本发明做出种种变化例。因而，实施例中的某些细节不应构成对本发明的限定，本发明 将以所附权利要求书界定的范围作为保护范围。
【主权项】
1. 一种复合多肽类添加剂饲料，其特征在于， 包括有抗菌肽片段，所述抗菌肽片段通过酵母基因提纯浓缩形成，所述酵母基因的配 方材料包括：54%的玉米、16. 3 %的豆柏、0. 084%的青糠、0. 04%的DDGS、0. 05 %的棉柏、 0. 03%的蛋鸡预混料、0. 06%的石粉、0. 02%的贝壳粉以及0. 01 %的鱼粉。2. -种复合多肽类添加剂饲料的制作方法，其特征在于， 包括以下步骤： 利用化学合成法合成以酵母偏爱密码子为编码的抗菌肽蛙皮素基因片段； 将所述抗菌肽蛙皮素基因片段与与酵母表达载体重组，以形成胞内表达栽体； 电机转化所述胞内表达栽体内的宿主菌； 对所述抗菌肽蛙皮素基因片段进行提纯和浓缩； 将提纯浓缩后的所述抗菌肽蛙皮素基因片段与常规配料原料混合，以形成所述复合多 肽类添加剂饲料。3. 根据权利要求2所述复合多肽类添加剂饲料的制作方法，其特征在于，在对所述抗 菌肽蛙皮素基因片段进行提纯和浓缩之前，还包括： 通过电泳和药敏试验验证所述胞内表达栽体中的所述抗菌肽蛙皮素基因片段是否稳 定。
【专利摘要】本发明提供了一种复合多肽类添加剂饲料及其制作方法，饲料包括有抗菌肽片段，所述抗菌肽片段通过酵母基因提纯浓缩形成；制作方法包括：利用化学合成法合成以酵母偏爱密码子为编码的抗菌肽蛙皮素基因片段；将抗菌肽蛙皮素基因片段与酵母表达载体重组，以形成胞内表达栽体；电机转化胞内表达栽体内的宿主菌；对抗菌肽蛙皮素基因片段进行提纯和浓缩；将提纯浓缩后的抗菌肽蛙皮素基因片段与常规配料原料混合，以形成所述复合多肽类添加剂饲料。本发明形成了新的抗生素替代物，减少对抗生素的依赖和滥用，促进畜禽业的健康发展。
【IPC分类】A23K1/16
【公开号】CN105325673
【申请号】CN201410387071
【发明人】张泽宏
【申请人】上海延华饲料有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2014年8月7日