一种用于防治草鱼烂腮病的饲料添加剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及饲料领域，具体涉及一种水产饲料添加剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 鱼产品具有较高的营养价值，对改善膳食结构，提高人体健康水平非常重要。随着 健康意识日益增强，消费者对鱼产品的消费需求量和品质要求越来越高。近几年，随着饲料 养鱼的迅猛发展，草鱼因其生长速度快，已成为国内主养鱼类，尤其是山塘型水库和小型水 库，主养、密养草鱼已经相当普遍。然而随着养殖密度不断提高，养殖环境污染等原因，各种 鱼类疾病发病率也急剧升高，由于草鱼烂腮病的频频发生以及难以治疗而大大降低了其成 活率，严重影响了养殖专业户的经济效益。
[0003] 草鱼烂腮病是一种在秋季传染迅速、病程较长的常见鱼病。烂腮病主要有两种，一 种是寄生虫性烂腮病，一种是细菌性烂腮病。寄生虫性烂腮病是寄生虫引起的各种烂腮病， 寄生虫在草鱼的腮部繁殖，刺激腮部分泌大量粘液，腮丝肿大、变色，严重影响鱼的呼吸;细 菌性烂腮病由粘球菌侵入引发，表现为腮丝腐烂，腮盖内侧表面充血，中央表皮常被腐蚀成 一个圆形透明的小洞，俗称"开天窗"。发病后病鱼游动缓慢，食欲不振，上下窜游;死亡后有 的腮丝腐烂，有的成花瓣腮，有的开天窗。长期的养殖实践表明，预防较好时，一般不易发生 鱼病，如果忽视预防，鱼病极易发生，迅速蔓延，且不易控制。
[0004] 目前生产上主要用抗生素和消毒剂来防治烂腮病等鱼类疾病，但长期使用会导致 十分严重的后果：（1)滥用抗生素造成病菌抗药性增强，使得鱼病治疗越发困难；（2)消毒剂 毒副作用大，局部刺激强，容易致癌，造成鱼类应激严重；（3)破坏养殖水体，污染水环境，降 低鱼体免疫力；（4)药物残留增加，水产品安全堪忧，质量下降，危害人类健康。
[0005] 为解决上述问题，科研人员不断探索水产饲料添加剂新品种以代替抗生素和消毒 剂。一些学者开始从免疫学角度对水产动物病害防治进行研究，认为在饲料中添加免疫增 强剂是增强鱼类免疫功能，抵抗疾病的一种有效实用的方法。但是，动物的免疫系统是相对 稳定的，在正常情况下免疫系统会将机体的免疫功能整合在一个适宜的水平。免疫增强剂 只可能较大幅度地提高免疫功能低下的水产动物的免疫水平，而对于免疫功能正常的水产 动物会因机体自身免疫系统的调节阻止其免疫水平过高而影响免疫增强剂的真实效果，况 且免疫水平也并非越高越好，免疫水平过高会导致免疫亢进，引起各种类型的超敏反应、炎 症和自身免疫性疾病。在众多的免疫增强剂中，溶菌酶和多糖类成分因其低药残、生物毒性 小的优点而引起了学者们重视。
[0006] 溶菌酶（lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰基胞壁质聚糖水解酶⑴-acetylmuramide glycanohydrIase)，是一种能破坏致病菌细胞壁中黏多糖的水溶性蛋白 酶。它是由Fleming在1922年在人唾液和眼泪中发现的存在溶解细菌细胞壁的酶，故命名为 溶菌酶。此后，在鸟类、家禽的蛋清和哺乳动物泪液、唾液、血浆、乳汁、胎盘以及体液、组织 细胞内等发现了溶菌酶，其中以蛋清中含量最丰富（约0.3% );在一些植物体如卷心菜、萝 卜、无花果和微生物体内也存在溶菌酶。研究发现枯草芽孢杆菌(Baci I Ius subti I is)中的 溶解子就是溶菌酶的前身。
[0007] 溶菌酶本身是一种碱性蛋白质，在酸性环境下，溶菌酶的热稳定性很强:pH值3.0 时96°C加热处理15min仍能保持87%的酶活性。在自然条件下，大多数溶菌酶化学性质稳 定，即使当PH值在1.2-11.3范围内剧烈变化，溶菌酶的空间结构仍可以保持不变，酶活性的 变化也不显著。但碱性环境很容易使溶菌酶的空间结构破坏，此时对热的稳定性较差，当处 于碱性PH值范围时，温度会使酶活力损失非常快。
[0008] 溶菌酶能有效水解细菌细胞壁肽聚糖，其水解位点是N-乙酰氨基葡萄糖胺(NAM) 的1位碳原子和N-乙酰胞壁酸(NAG)的4位碳原子间的β-l，4糖苷键，可使细菌细胞壁变得松 弛，失去对细胞的保护作用，细菌内容物溢出而使细胞壁溶解，最后细胞溶解死亡。溶菌酶 之所以会对革兰阳性细菌有很强杀伤力，就是因为革兰阳性菌的细胞壁主要是由胞质壁和 磷酸质组成的，其主要成分胞质壁又是杂多糖与多肽组成的糖蛋白，而杂多糖正是由NAM和 NAG以β-1，4糖苷键联结的，溶菌酶催化水解该糖苷键使细菌细胞壁破裂而死亡。而革兰阴 性菌内壁层为肽聚糖，因此溶菌酶只能破坏革兰阳性菌细胞壁，而对革兰阴性菌作用不大。
[0009] 溶菌酶在中性体液环境下带有大量正电荷，可与带有负电荷的病毒蛋白直接作 用，与DNA、RNA、脱附基蛋白相结合形成复盐，使病毒失活。在被疱疹病毒感染的Hela细胞培 养液中加溶菌酶后有抑制细胞变性作用。溶菌酶也可抑制腺病毒生长，可用于带状疱疹、腮 腺炎、鸡水痘、肝炎及流感等病毒性疾患治疗。
[0010] 溶菌酶可保持机体生理平衡，参与体内多种免疫反应，是机体内重要的非特异性 免疫因子之一。溶菌酶本身具有T细胞表位，能诱导2型(Th2) T辅助细胞反应。口服溶菌酶能 诱导小鼠产生全身性Thl和Th2免疫反应，增强免疫功能，因此，口服溶菌酶具有控制上呼吸 道感染和治疗痢疾的功能。此外，溶菌酶还具有激活血小板的功能，可改善组织局部血液循 环障碍，分解脓液，增强局部防卫功能，从而体现其止血、消肿及加快机体损伤组织的修复 作用。它还可作为一种宿主抵抗因子，对组织局部起保护作用。
[0011] 溶菌酶还可与各种诱发炎症的酸性物质结合，减少细菌内毒素释放，从而减轻内 毒素血症发生，减缓炎症发生过程，并对抗生素有一定增效作用，改善组织基质的黏多糖代 谢，起到抗菌消炎、修复组织的作用。经试验证明，用1种纤维素共聚物将人溶菌酶和蛋白水 解酶偶联，可显著提高溶菌酶抗菌能力，加速伤口愈合。
[0012] 近年来，随着研究的深入，人们不仅对溶菌酶的作用机制有更进一步了解，且根据 其溶菌特性，已将其广泛应用于医疗、食品防腐、生物工程及动物生产中。世界卫生组织及 许多国家都公认溶菌酶的无毒性，并核准其可作为治疗性物质在一些食品中使用。作为一 种无毒、无害的高盐基天然蛋白质酶，溶菌酶对动物细胞无任何影响，是安全的营养性饲料 添加剂，有非专用性生长激素作用，可改善消化道微生物群落，促进营养消化吸收。
[0013] 作为鱼类防护病原体入侵的一种重要非特异性免疫因子，溶菌酶能水解致病菌中 黏多糖的碱性酶，在抵抗外界细菌入侵时起到重要作用，它广泛存在于动物的血清、皮肤粘 液和组织器官中，在其他生物中也有存在。鱼类溶菌酶的研究虽然起步较晚，但因其特殊的 机理及其在免疫防御中的重要作用，近年来引起了广泛的关注。科研人员已经在鱼类溶菌 酶基因特征、表达活性、分子结构及其作用机理、转基因鱼类的培育、重组溶菌酶的开发等 方面进行了深入研究，并应用于食品保鲜剂、饲料添加剂、消炎镇痛药物等领域的生产。
[0014] 多糖及其缀合物是普遍存在于植物细胞壁及细胞中的一种成分，由于组成结构不 同，其理化特点及生物活性也各不相同。有些多糖(如淀粉、果胶、纤维素等)早已成为人类 日常生活中的重要组成部分，是一种重要的经济原料，对动物不具有特异性生物活性。从20 世纪50年代末对真菌多糖的抗癌效果的发现使人们开始了多糖系列的化学研究。日本从20 世纪60年代开始研究担子菌多糖的药物活性，并开发了一些有名的药物。中国对多糖的研 究始于20世纪70年代，近