蛹虫草多糖复方饮液及制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种蛹虫草多糖复方饮液，由以下组分组成：蛹虫草多糖15～25%，香菇多糖1.3～2%，猴头菇多糖1.3～2%，枸杞多糖1.3～2%，红枣多糖1.3～2%，水果酵素15～25%，蜂蜜1～5%，柠檬酸0.1～0.3%，羧甲基纤维素钠0.1～0.5%，山梨酸钾0.005～0.015%，余量为水，以重量百分比计。本发明针对蛹虫草中多糖含量低、功能单一和生物利用度低的问题，以蛹虫草多糖、其它多糖按比例复配，加入水果酵素配成饮液，获得生物利用度高、功能强和功效多的保健食品，适合大多数人服用。
【专利说明】
蛹虫草多糖复方饮液及制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种保健食品，特别是涉及蛹虫草原料的来源、蛹虫草多糖及多种物 质的多糖等原料组成的营养保健蛹虫草饮液及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk)Sacc.]是我国名贵的中药材，与人参、鹿鸾 一起列为中国三大补药，是唯一一种能够同时平衡调节阴阳的名贵中药。蛹虫草又名北冬 虫夏草、北虫草等，蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属的模式种，与冬虫夏 草是同一个属。主产于云南、吉林、辽宁、内蒙古，生于针、阔叶林或混交林地表土层中鳞翅 目昆虫的蛹体上。能采用家蚕和柞蚕蛹人工批量培育，药效、药理与野生种相似甚至更好。 蛹虫草含有虫草素、虫草多糖等多种生物活性物质。蛹虫草与冬虫夏草相仿，在药化、药理 和临床实验中被证明可作为冬虫夏草的重要替代品。
[0003] 蛹虫草保健品研究与开发现状：以蛹虫草为原料，研磨、煲汤等方式服用，这些方 法费时、费力及不利于吸收;或以蛹虫草粉为原料，制作成蛹虫草胶囊或蛹虫草含片，这种 方法不利于吸收;或以蛹虫草或发酵提取液为原料，制成口服液，使其营养更高。目前市场 上已有多种蛹虫草制品，形态上主要有虫草药酒、虫草药膳、虫草茶、虫草饮料和各类胶囊、 片剂等。
[0004] 蛹虫草中的多糖含量较少且不易分离，故对多糖进行深入的研究，规范多糖的提 取方法，研制好的剂型，提高生物利用度，增加其靶向性和功效，使其同时具有多种保健强 身功能的研究尤为重要。
【发明内容】
[0005] 为了克服蛹虫草中的多糖含量较少、功能单一和生物利用度低，本发明研制了蛹 虫草多糖水果酵素饮液及制备方法。
[0006] 本发明的目的是通过以下措施实现的：
[0007] -种蛹虫草多糖复方饮液，由以下组分组成：蛹虫草多糖15~25%，香菇多糖1.3 ~2%，猴头菇多糖1.3~2%，枸杞多糖1.3~2%，红枣多糖1.3~2%，水果酵素15~25%， 蜂蜜1~5%，柠檬酸0.1~0.3%，羧甲基纤维素钠0.1~0.5%，山梨酸钾0.005~0.015%， 余量为水，以重量百分比计。
[0008] 上述蛹虫草多糖是按照以下步骤提取的：将蛹虫草清洗，热水回流提取水煮 120min，得重量浓度为15 %蛹虫草提取液，3000r/min离心10min后得上清液，将上清液浓缩 至重量浓度为60%蛹虫草提取液，加入3倍于蛹虫草提取液体积的无水乙醇，放在4摄氏度 冰箱过夜，出现大量沉淀，将上清液倒掉，得沉淀，冷冻干燥，得蛹虫草多糖。
[0009] 上述水果酵素的制备方法，包括以下步骤:选取重量份数为黄瓜1~2份、胡萝卜1~ 2份、竹笋1~2份、火龙果1~2份、猕猴桃1~2份为原料，去杂，打浆，加入1~3份蜂蜜，于121 °C高温高压条件下灭菌15min，在无菌操作条件下，接种10wt%复合发酵菌液，进行发酵，发 酵时间200天，发酵结束后于121°C高温高压条件下灭菌15min杀灭发酵菌，过滤后液体为果 蔬酵素。
[0010] 上述复合发酵菌液是将乳酸菌、酵母菌、干酪乳杆菌的菌种活化培养制备成发酵 菌液。具体包括以下步骤：（1)将乳酸菌、酵母菌、干酪乳杆菌分别在LB平板上划线接种，放 入30°C培养箱中培养至长满菌丝；（2)挑取平板上的菌落分别接入装有50ml培养液的三角 培养瓶中，置于摇床，转速200rpm，温度30°C，恒温培养48~72小时，得到三种菌液；（3)将三 种菌液按乳酸菌:酵母菌:干酪乳杆菌=1:1:1比例配成浓度为每毫升含2.5 X 107个孢子的 菌液，作为复合发酵液。
[0011] 上述蛹虫草多糖复方饮液的制备方法，包括以下步骤:取蛹虫草多糖15%，香菇多 糖1.6%，猴头菇多糖1.6%，枸杞多糖1.6%，红枣多糖1.6%，水果酵素20%，蜂蜜3%，柠檬 酸0.2%，乳化剂羧甲基纤维素钠0.3%，山梨酸钾0.01 %，去离子水加至100%混合，均质， 瞬时灭菌，灭菌温度在100-120°C，时间在30-60分钟，灌装。
[0012]有益效果
[0013] 1.本发明针对蛹虫草中多糖含量低、功能单一和生物利用度低的问题，以蛹虫草 多糖、其它多糖按比例复配，加入水果酵素配成饮液，获得生物利用度高、功能强和功效多 的保健食品，适合大多数人服用。
[0014] 2.在蛹虫草多糖饮液的加工制备中，有效成分的生物活性易削弱或丧失，且多糖 是大分子物质，其生物利用度极低。而本发明不仅能够改善肠胃消化系统功能，加速多糖的 吸收，而且能够提高多糖的生物利用度，使得产品在水解吸收过程中产生更多的寡糖、低聚 糖，利于与体内免疫系统发生作用，例如与粘膜上的细胞受体结合，从而激活一些信号通 路、引起免疫反应，不但可以增多功效，而且还可以提高药理作用和临床疗效。
【具体实施方式】
[0015] 下面对本发明做进一步详细说明。以下实施例仅限于说明本发明而不用于限制本 发明的范围。
[0016] 实施例1
[0017] -种蛹虫草多糖复方饮液，原料重量配比是:蛹虫草多糖15%，香菇多糖1.6%，猴 头菇多糖1.6%，枸杞多糖1.6%，红枣多糖1.6%，水果酵素20%，蜂蜜3%，酸味剂(柠檬酸） 0.2%，乳化剂(羧甲基纤维素钠)0.3%，防腐剂（山梨酸钾)0.01 %，去离子水加至100%。
[0018] 蛹虫草多糖的制备方法，包括以下步骤:筛选优质蛹虫草，清洗，热水回流提取水 煮120min，得重量浓度为15 %蛹虫草提取液，3000r/min离心10min后得上清液，将上清液至 旋浓缩至重量浓度为60%蛹虫草提取液，加入3倍于蛹虫草提取液体积的无水乙醇，放入4 °C冰箱过夜，出现大量沉淀，将上清液倒掉，得沉淀，冷冻干燥，得蛹虫草多糖。
[0019]选取重量份数为黄瓜1份、胡萝卜1份、竹笋1份、火龙果1份、猕猴桃1份为原料，去 杂，打浆，加入2份蜂蜜，于121°C高温高压条件下灭菌15min，在无菌操作条件下，接种 10wt%复合发酵菌液，进行发酵，发酵时间200天，发酵结束后于121°C高温高压条件下灭菌 15min杀灭发酵菌，过滤后液体为果蔬酵素。
[0020]上述复合发酵菌液是将乳酸菌、酵母菌、干酪乳杆菌的菌种活化培养制备成发酵 菌液。具体包括以下步骤:①将乳酸菌、酵母菌、干酪乳杆菌分别在LB平板上划线接种，放入 30°C培养箱中培养至长满菌丝;②挑取平板上的菌落分别接入装有50ml培养液的三角培养 瓶中，置于摇床，转速200rpm，温度30°C，恒温培养48~72小时，得到三种菌液;③将三种菌 液按乳酸菌:酵母菌:干酪乳杆菌=1:1:1比例配成浓度为每毫升含2.5 X 107个孢子的菌 液，作为复合发酵液。
[0021]蛹虫草多糖复方饮液的制备方法为:取蛹虫草多糖15%，香菇多糖1.6%，猴头菇 多糖1.6%，枸杞多糖1.6 %，红枣多糖1.6 %，水果酵素20 %，蜂蜜3%，柠檬酸0.2%，乳化剂 羧甲基纤维素钠〇. 3 %，山梨酸钾0.01 %，去离子水加至100 %混合，均质，瞬时灭菌，灭菌温 度在100-120°C，时间在30-60分钟，最后灌装为本发明饮液。制得的产品效果验证如下： [0022] 1.保健功能试验：
[0023] (1)抗肿瘤作用
[0024]选取20只健康且体重相近（18±2g)的清洁型ICR小鼠，在小鼠背部皮下接种5 X 106个S180细胞。随机分为A(0.9%生理盐水作为对照组）、B(实施例1作为实验组)两组，每 组10只。A组灌入0.4ml生理盐水，B组灌入0.4ml蛹虫草多糖液，每天同一时间灌胃1次，连续 灌胃10天后放血处死，取瘤称重。实验组瘤重0.396 ± 0.112g，对照组瘤重0.908 ± 0.110g。
[0025] 结论:本产品具有良好的抗肿瘤作用。
[0026] (2)抗氧化作用
[0027] 首先配制好91111]1〇1/1^6304、91]11]1〇1凡水杨酸乙醇溶液、8.81]11]1〇171^过氧化氢溶液和 不同浓度梯度的本产品（分别为5mg/mL、1 Omg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL)。取15支试管 分成5组依次做好编号，每组3个平行试验，每支试管中加入lmL 9mmol/L FeS04、2mL 9mmo 1 /L水杨酸乙醇溶液，按照编号依次加入不同浓度的多糖溶液2mL，再分别加入2mL 8.8mmol/L过氧化氢溶液，室温下反应lh后。蒸馏水空白调零，在510nm处测定各试管的吸光 度，计算不同浓度本产品对羟自由基的清除率。
[0028] 计算公式:羟自由基清除率（％) = (Aq-As)/AqX100%
[0029] 其中:Aq--空白对照管的吸光度；
[0030] As 加入样品后的吸光度
[0031] 结果表明本产品多糖浓度为20mg/mL时，羟自由基的抑制率达到最高75%以上，试 验表明本广品具有良好的还原能力。
[0032] 结论:本产品具有良好的体外抗氧化作用。
[0033] (3)降血糖
[0034]选取12只健康且体重相近（18 ± 2g)的清洁型ICR小鼠，以多次低剂量链脲霉素 (multiple low-dose streptozotocin，MLD_STZ)方法腹腔注射BALB/c小鼠，成功诱导出糖 尿病小鼠。随后随机分成A、B两组，每组6只。每天同一时间，分别给A组小鼠注射本产品 300mL/kg、B组小鼠注射饮用蒸馏水，每天注射一次，连续注射6周，每周断尾取血，用血糖仪 测定血糖浓度。实验组血糖浓度由19.08 ± 2.66 (mmol/L，η = 6)变成11.10 ± 3.42 (mmol/L，η =6)，对照组由 19· 11 ±2·94(mmol/L，n = 6)变成17·41 ±3· 52(mmol/L，n = 6) 〇
[0035] 结论:本产品对糖尿病小鼠有较好的降糖作用。
[0036] (4)护肝作用。
[0037] 选取30只健康且体重相近（18±2g)的清洁型ICR小鼠，随机分成正常对照组(饲喂 正常饲料）、急性CC14肝损伤模型组(简称模型对照组，正常饲料+CC14)、产品组(正常饲料+ CC14+本产品为500mg/kg多糖），每组10只。每天晚上7:00，产品组灌胃0.2mL，正常对照组与 模型对照组灌胃等体积0.2mL生理盐水，连续灌胃7天，末次灌胃2小时后，正常对照组注射 0.2mL花生油，其他各组每只鼠腹腔注射0.2 % CC14花生油溶液0.2m L。禁食16h，断头取血 约3mL，室温放置2h，3000r/min离心10min后取血清，-20°C密封保存备用；取肝左叶用生理 盐水制成10%的组织匀浆。取肝右叶，用10%甲醛溶液固定，冰冻保存。用考马斯亮蓝法测 定组织中蛋白含量，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。取甲醛固定的肝右叶组织，常规石 蜡切片，HE染色、20X 10倍光镜镜检。正常对照组SOD活性29.75±0.13(U/mg pro)，MDA含量 2.43±0.14(111]1〇1/11^卩1'〇)，丁？含量64.96±0.26(11^/1111^卩1'〇);模型对照组300活性15.08 ±0.85(U/mg pro)，MDA含量9.21±0.08(nmol/mg pro)，TP含量56.86±0.12(mg/m L pro);产品组SOD活性24 · 91 ±0 · 13(U/mg pro)，MDA含量3 · 67 ±0 · 58(nmo 1 /mg pro)，TP含量 60.61 ±0.88(mg/m L pro)。
[0038] 结论:模型对照组SOD水平显著低于正常对照组(P<0.01)，说明肝细胞已受到破 坏。产品组S0D水平显著高于模型对照组(P<0.01)，表明产品组起到了抑制S0D降低的作 用。模型对照组MDA含量显著高于正常对照组(P<0.01)，说明CC1 4诱导的急性肝损伤模型 成功。产品组MDA水平显著低于模型对照组(P<0.01)，表明本产品起到了抑制MDA升高的作 用。因此，本产品具有护肝作用。
[0039] (5)保护肾功能
[0040] 健康witsra大鼠12只，雌、雄各半，50天龄，雌性体重160-180g，雄性体重170-200g，随机分成三组，正常对照组、模型组对照组、产品组，每组4只。模型对照组、产品组分 别在水合氯醛麻醉下行左侧肾脏2/3切除术。术后大鼠单独饲养3天后分组置饲养笼群养。 第三天开始进行千预治疗：（A)产品组，4只，每天给予本产品500mg/kg灌胃；（B)模型对照 组，4只，（C)正常对照组，4只。模型组和正常对照组每大给予等量的饮用水灌胃，大鼠自山 饮水、进食。次术后4周各组分别处死大鼠2只。术后9周处死剩余的2只。开放肾脏静脉，用4 °C预冷的生理盐水冲洗肾脏直至变白，摘下肾脏，将其剖开，取部分肾组织(兼顾皮、髓质） 置10%福尔马林固定液固定24小时，流水冲洗2小时，常规剃度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡 包埋，3pm厚连续切片，用HE染色、PSA染色，检查肾小球硬化指数。采用半定量方法评估肾小 球硬化程度，每张切片均观察20个完整肾小球。4周时肾小球硬化指数，正常对照组2.36土 1.24、模型对照组28.17 ± 4.05、蛹虫草多糖组25.89 ± 4.11，9周时肾小球硬化指数，正常对 照组2.55 ± 1.21、模型对照组45.07 ± 9.97、产品组30.02 ± 7.45。
[0041 ] 结论:模型对照组肾小球硬化指数显著低于正常对照组(P<0.01 )，说明肾小球已 受到破坏。产品组肾小球硬化指数显著低于模型对照组(P<〇.01)，表明产品组对肾小球起 到了保护作用。模型对照组肾小球硬化指数显著高于正常对照组(P<〇.01)，说明肾小球损 伤模型成功。因此，本产品具有能保护肾功能。
[0042] (6)改善肠胃消化系统
[0043] 选取20只健康且体重相近（18±2g)的清洁型ICR小鼠，禁食20-24小时，随机分为2 组，即产品组（20.0ml/kg灌胃），对照组（等量生理盐水灌胃），每组10只动物，用苦味酸标 记。90分钟后各组给予0.3ml墨汁液灌胃。20分钟后，颈椎脱臼处死，打开腹腔分离肠膜，上 端至幽门、下端至回盲部剪取肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为 小肠总长度。从幽门至墨汁前沿的距离作为"墨汁在肠内推进距离"。用公式计算墨汁推进 百分率。墨汁推进率（％ )=墨汁在肠内推进距离（cm)/小肠全长(cm) X 100%。各组小鼠小 肠推动功能。正常对照组推进率65.011±6.121%，产品组推进率85.203±8.654%。
[0044]结论:本产品能改善肠胃消化系统。
[0045] 2.吸收率试验验证：
[0046]选取20只健康且体重相近（18±2g)的清洁型ICR小鼠，随机分2组，即本专利产品 组(简称实验组，本产品20.0ml/kg灌胃），对照组(等量生理盐水灌胃），每组10只动物，10分 钟后每只小鼠灌入〇.4mL2%葡聚糖蓝2000溶液，30分钟后颈椎脱臼处死动物，开腹取出全 部胃肠，自幽门括约肌处取胃，将其内残留的葡聚糖蓝2000充分溶2mL去离子水中，3500rpm 离心15分钟，取上清液，滤液用723型分光光度计，在620nm处测定吸光度，为胃内葡聚糖蓝 2000残留量，并求出实验组均值。以对照组均值为100%，得实验组相对胃内色素残留率 52.3%〇
[0047]结论:本产品有助于机体对对营养的吸收。
[0048] 3.感官评定试验选择20名专业评判人员，对本产品进行感官评价。表1为本产品感 官评价指标，表2为评价结果。
[0049] 表1实施例1的蛹虫草多糖复方饮液感官评分标准
[0050]
[0051 ]表2实施例1的蛹虫草多糖复方饮液感官评价结果
[0052]
[0053]由表2可以看出，本发明蛹虫草多糖复方饮液酸甜味适中，基本无苦味，不含不溶 性颗粒，澄清度较好，黏稠度适中，整体口感好，满足消费者需求。
【主权项】
1. 一种蛹虫草多糖复方饮液，由以下组分组成：蛹虫草多糖15~25%，香菇多糖1.3~ 2%，猴头菇多糖1.3~2%，枸杞多糖1.3~2%，红枣多糖1.3~2%，水果酵素15~25%，蜂蜜1~ 5%，柠檬酸0.1~0.3%，羧甲基纤维素钠0.1~0.5%，山梨酸钾0.005~0.015%，余量为水，以 重量百分比计。2. 如权利要求1所述蛹虫草多糖复方饮液，所述的复合酵素原料为黄瓜1~2份、胡萝卜1 ~2份、竹笋1~2份、火龙果1~2份、猕猴桃1~2份、1~3份蜂蜜，以重量份数计。3. 如权利要求1或2所述蛹虫草多糖复方饮液，所述的复合酵素制备方法包括以下步 骤:选取重量份数为黄瓜1份、胡萝卜1份、竹笋1份、火龙果1份、猕猴桃1份为原料，去杂，打 浆，加入2份蜂蜜，于121°C高温高压条件下灭菌15min，在无菌操作条件下，接种10wt%复合 发酵菌液，进行发酵，发酵时间200天，发酵结束后于121°C高温高压条件下灭菌15min杀灭 发酵菌，过滤后液体为果蔬酵素。4. 如权利要求1-3任一所述蛹虫草多糖复方饮液的制备方法，包括以下步骤： (1) 蛹虫草粉以物料重量比为1:15加蒸馏水，超声30min，在100°C下油浴提取2h，离心 得提取液，将提取液浓缩，加入3-5倍无水乙醇进行醇沉过夜； (2) 离心并用无水乙醇洗沉淀，得到粗多糖，将蛹虫草粗多糖进行冷冻干燥，得到蛹虫 草多糖粉； (3) 取蛹虫草多糖15%，香菇多糖1.6%，猴头菇多糖1.6%，枸杞多糖1.6%，红枣多糖1.6%， 水果酵素20%，蜂蜜3%，柠檬酸0.2%，乳化剂羧甲基纤维素钠0.3%，山梨酸钾0.01%，去离子水 加至100%混合，均质、瞬时灭菌，灭菌温度在100-120°C，时间在30-60分钟，灌装封口。
【文档编号】A23L33/10GK106036307SQ201610304385
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】肖艳文
【申请人】香格里拉东旺生物科技有限公司