专利名称：治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及中药制剂制备方法，具体涉及一种治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂及制备方法。
历史上将男性性功能障碍症称之为“阳痿”。近年来医学界改称其为“勃起功能障碍”，英文为Erectile Dysfunction，简称ED。治疗ED的方法很多，目前，临床上以理疗和药物治疗为主，而药物治疗中以口服药物较受欢迎。枸橼酸昔多酚(Sildenafil citrate，商品名为Viagra，俗称伟哥)原是1992年美国辉瑞公司开发的治疗心绞痛的新药，在临床试验中，其心绞痛疗效平平，而对ED却疗效显著，为一种阴茎动脉扩张剂。经重新申报新用途，美国FDA于1997年3月批准上市。目前，该药为世界上公认的、较成功的ED治疗药物。德国的Bayer、Schering-Plough和Zonagen lnc.及Eli Lily和ICOS Corp.也在合作开发ED治疗药物。可以预料，今后几年内类似于伟哥的产品将相继上市。
尽管伟哥的起效快、有效率较高，较受消费者欢迎，但它同样存在其它合成药所具有的弱点。在上市以来的两年中相继有500多例死亡的报道，故医学界认为伟哥有毒、副作用。英国等国家对伟哥的销售采取严格的管制，对消费者来说，这无疑是一种负面影响。显然，寻找功效类似于伟哥，而又无副作用或低副作用的药物，尤其是天然药物倍受瞩目。
毛冬青(Ilex pubescens Hook.et Arm.)是一种生长于我国南方的常绿灌木，以根等入药。为传统中药，药用历史久远。毛冬青主含黄酮、皂甙等成份，有扩张血管及抗菌消炎作用，主要用于冠状动物硬化性心脏病，血管闭塞性脉管炎，中心性视网膜炎，小儿肺炎等。到目前为止，毛冬青未见其有明显毒、副反应，更无治疗ED的文献报道。
本发明的目的是要提供一种治疗勃起功能障碍症的高活性成份含量的毛冬青提取物制剂。
本发明公开的高活性成份含量的毛冬青提取物制剂是由5～80％毛冬青提取物浸膏和95～20％药用辅料组成的颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液和注射剂，其中毛冬青提取物含总黄酮和总皂甙≥50％。
本发明所述的药用辅料为常用药用辅料如糊精、淀粉、乳糖、碳酸钙、乙二醇、苯甲酸、氯化钠、蔗糖、山梨酸、阿斯巴甜、甜蜜素、柠檬酸、低取代羟丙纤维素、膨速、硬脂酸镁、白碳黑、滑石粉、钛白粉、改良淀粉、羟丙基甲基纤维素、水、乙醇等。
本发明的另一目的是要公开上述毛冬青提取物制剂的制备方法。
本发明毛冬青提取物制剂的制备包括下列步骤(1)活性成份浸膏的制备将干燥的毛冬青根切制成饮片，加原生药量10-20倍量的水或亲水性溶剂，浸渍2小时后，加热回流，热提1-2次，每次1小时，冷却后，静置24小时，过滤，滤液通过以不带离子交换基团的分离介质为载体的层析柱1-2次，再用水及水-醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，于＜60℃温度下减压浓缩，干燥后制得含总黄酮和总皂甙≥50％的浸膏，浸膏提取得率为1.5～3％。
(2)含毛冬青提取物制剂的制备取5～80％上述活性成份浸膏和95～20％药用辅料按常规制剂方法制成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液和注射液。
本发明方法中所述的亲水性溶剂为脂肪族低级醇或低级酮；不带离子交换基团的分离介质为大孔吸附树脂、硅胶、氧化铝、聚酰鞍硅、硅藻土、活性炭或纤维素等，这些介质可以单一使用也可混合使用。
本发明方法中所述的水-醇混合剂中的醇为脂肪族低级醇，水与醇的混合比例为水∶醇＝99-1∶1-99的任意比例。
本发明的再一目的是公开毛冬青活性成份提取物制剂在治疗勃起功能性障碍症中的应用。
用本发明的含毛冬青活性成份提取物制剂进行动物试验和临床研究表明，和伟哥一样，毛冬青提取物低、中、高剂量组去势大鼠的阴茎勃起潜伏期显著缩短(P＜0.01)，给药后大鼠阴茎对外部刺激的兴奋性显著提高。40例ED患者经毛冬青制剂一个疗程的治疗后，临床症状明显好转，国际勃起功能障碍指数显著提高，总有效率为82.5％。
本发明产品的治疗剂量为每日口服相当于毛冬青活性成份浸膏1.5～3g的制剂，连续服用1个月为1个疗程。
毛冬青为冬青科冬青植物毛冬青(Ilex pubescens Hook.Et Arn.)的根，具有活血通脉，清热解毒，消肿止痛的功效。为心血管疾病用药，有扩张血管及抗菌消炎作用。该植物含黄酮类、皂甙类、甾醇、氨基酸、酚性化合物、鞣质、三萜类化合物等，它常用于冠状动脉硬化性心脏病、血栓闭塞性脉管炎、中心性视网膜炎和小儿肺炎的治疗。
据报道，昔多酚的药理作用机理是，通过抑制磷酸二酯酶-5(PDE-5)，减少环鸟苷酸(cGMP)降解，引起阴茎海绵体血管平滑肌舒张，血流增加，从而使阴茎勃起。我们的实验结果提示，毛冬青提取物的药理机理既有对阴茎血管的作用，还可能通过其它途径起效。
现有的毛冬青制剂有片剂、胶囊剂、注射剂等，所用的毛冬青提取物均为水提醇沉工艺，一些有效成份随大分子化合物沉淀而大量流失，其主要活性成份总黄酮＜30％。本发明工艺为水提液经柱层吸附，富集小分子有效成分，然后，用一定比例的醇性溶媒洗脱、解吸有效成分，经干燥后，配以适量辅料，混合后制成片剂、胶囊、颗粒剂或注射剂。柱层吸附法能有效地克服有效成分的流失，从而提高了提取物中有效成分的含量。使主要活性成份黄酮和皂甙的含量大大提高，可达到≥50％水平。
用本发明的毛冬青提取物浸膏进行药理和临床试验，具体结果如下一、药理试验(一)实验材料I动物SD大鼠，雄性，体重180-200g，由上海西普尔-必凯公司提供，合格证号沪动合证字152号。ICR小鼠，雌雄各10只，体重18-22g，由上海西普尔-必凯公司提供，合格证号沪动合证字153号。饲养条件按纯系动物要求饲养。II仪器JL-B型电刺激器上海嘉龙教仪厂制造。III药物(I)毛冬青浸膏粉为淡棕黄色粉末状固体，批号20000428，使用时用水配成适当浓度的溶液备用。(II)丙酸睾丸素注射液上海第九制药厂；批号990401；花生油稀释后备用。(III)枸橼酸昔多酚(Sildenafil citrate)纯度99.12％，使用前用1％CMC配置成混悬液。(二)实验方法与结果1、对去势大鼠阴茎勃起潜伏期的影响动物在戊巴比妥钠(4％，40mg/kg，ip)麻醉下消毒阴囊皮肤，摘除双侧睾丸，术后肌注青霉素G钾2万/kg。
去势手术3日后，将大鼠随机分为6组。丙睾组皮下注射丙酸睾丸素1.25mg/1ml/kg，作阳性对照；3组给药组分别灌胃给与毛冬青浸膏0.15、0.45和1.35/10ml/kg；模型组灌胃蒸馏水10ml/kg。以上5组动物均连续给药20天，每日1次。伟哥组于测试前约40分钟给与枸橼酸昔多酚，作为阳性对照。另取10只未去势大鼠同期饲养，作为正常对照组。
7组动物均于第21日，用电刺激器的电极置于大鼠阴茎部位，给与局部电刺激，电流强度为4mA。记录从刺激开始至阴茎勃起的时间(勃起潜伏期)。
结果显示(见表1)，在局部电刺激作用下，与阳性对照丙酸睾丸素和昔多酚一样，毛冬青浸膏低、中、高剂量组去势大鼠的阴茎勃起潜伏期显著缩短(P＜0.01)，给药后大鼠阴茎对外部刺激的兴奋性显著提高。
表1毛冬青浸膏对电刺激去势大鼠阴茎勃起潜伏期的影响组别 动物数剂量潜伏期(n)(mg/kg)(mean±SDs)正常对照组 105.50±1.71*去势模型组 826.13±5.38丙睾组 91.254.80±0.73*昔多酚组 890 7.64±1.32*给药组 9150 12.77±4.13*8450 7.60±1.76*813506.42±1.60**与去势模型组比较，P＜0.01。2、对大鼠交配的影响①雌性大鼠准备取体重为200-300g的性成熟大鼠120只，雌雄各半。60只雌性大鼠在乙醚麻醉下，行双侧卵巢切除术，术后肌注青霉素2万U/kg，共3天以抗感染。卵巢切除二周后可进行实验。实验48小时前皮下注射苯甲酸雌二醇20μg/只，4小时前再次注射黄体酮注射液500μg/只。
②雄性大鼠准备60只雄性大鼠随机均分成6组，每日灌胃给药1次，连续7天。
③交配实验观察方法将雄性大鼠单独放入54.5×39.5×20cm笼中，使其适应环境后，每笼加入1只雌鼠，开始记时并记录扑捉潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次扑捉雌鼠之间的时间)、射精潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠发生第一次射精之间的时间)、20分钟内雄鼠扑捉雌鼠的次数、20分钟内雄鼠射精的次数。上述观察结果进行统计学(组间t-test)处理。
结果表明，与空白组比较，给与毛冬青提取物后，大鼠的扑捉潜伏期和射精潜伏期明显缩短，扑捉次数和射精次数明显增加。尤其是射精次数的增加具有显著性意义(P＜0.01)。提示毛冬青提取物能提高大鼠的性欲和交配能力。
表2毛冬青提取物对大鼠交配的影响药物剂量动物数扑捉潜伏期扑捉次数射精潜伏期射精次数
(mg/kg) (n) (min) (次) (Min) (次)空白92.73±1.60 17.6±9.6 7.92±7.56 2.56±2.19昔多酚 3082.24±1.60 22.0±10.43.56±3.35 5.50±4.81丙酸睾酮6 80.56±0.39**23.5±8.2 0.97±0.50*6.50±3.63*120 91.65±0.88 20.3±5.6 2.70±1.38 8.00±3.50**毛冬青提取物 240 92.00±2.06 23.0±6.5 3.25±2.24 8.33±4.90**480 82.49±2.24 22.3±12.92.96±2.60 8.63±5.15***P＜0.05，**P＜0.01.二、毛冬青浸膏的急性毒性试验挑选并称重健康小鼠，雌雄各10只，灌胃给与54％浓度的毛冬青浸膏水溶液0.4ml/10g，给药剂量为21.6g/kg，相当于临床剂量的360倍。观察小鼠灌胃后的反应情况，连续7天。
结果给药后小鼠的饮食和活动均正常，未见异常的反应，在7天的观察期内亦未见动物死亡。提示毛冬青浸膏的毒性较低。三、毛冬青治疗阴茎勃起功能障碍的临床疗效观察(1)对象与方法I观察对象男性病，年龄20-59岁(平均39.65±10.25岁)，病程1月-17年(平均3.35±4.32月)。II用药方法每日口服浸膏1次，每次3.6g，连续1个月为1疗程。III疗效判断标准根据中医辨证(表3)国际勃起功能障碍指数标准(表4)等，判断疗效标准如下表3中医辩证症状轻中 重性欲淡漠 性欲降低偶有性要求 阳痿射精无力偶有 经常发作 持续出现腰膝酸软偶有发作 反复发作持续发作，不易缓解精神萎靡精神不振 精神萎靡精神萎靡，反应迟钝表4国际勃起功能障碍指数标准评分标准0分1分2分3分4分5分对获得和维持 很低低中等 高 很高勃起的自信度受性刺激勃起后 无性活动 几乎没有或 远少于 约一半 多于一半 几乎总是多少次能插入 完全没有一半或总是性交时，多少次 没有尝试 几乎没有或 远少于 约一半 多于一半 几乎总是能维持勃起状态 性交 完全没有一半或总是维持勃起直至性 没有尝试 困难极大困难很大 困难 有点困难 不困难交完成困难程度 性交性交有多少次没有尝试 几乎没有或 远少于约一半 多于一半 几乎总是感到满足性交 完全没有一半或总是近期治愈经一疗程后，临床症状消失，阴茎勃起大于90°，性交成功率＞70％，国际勃起功能障碍指数＞20。
显效经一疗程治疗后，临床症状明显改善(二级以上)，阴茎勃起＞90°，性交成功率＞50％，国际勃起功能障碍指数＞20。
有效经一疗程治疗后，临床症状好转，阴茎勃起有改善，性交成功率＞25％。
无效症状无改善。(2)结果I临床疗效经一个疗程的治疗，治愈8例，占20.0％；显效11例，占27.5％；有效14例，占35.0％；无效7例，占17.5％。总有效率为82.5％(见表5)。
表5临床总疗效(例％)组别例数临床痊愈 显效有效 无效总有效率治疗组 40 8/20.0 11/27.5 14/35.07/17.5 33/82.5II临床症状变化经一个疗程的治疗后，患者的临床症状明显好转(见表6)。表6 40例患者治疗前后临床症状变化(例)治疗前治疗后P值性欲淡漠247 ＜0.01射精无力1815＜0.05腰膝酸软153 ＜0.01精神萎靡2712＜0.05III国际勃起功能障碍指数40例病人经治疗国际起功能障碍指数显著提高(见表7)。
表7国际勃起功能障碍指数变化情况(mean±SD)治疗前治疗后指数分值13.38±6.36 22.48±2.85**与治疗前比较，P＜0.01。
ED的发生与年龄增长有关，美国一项调查研究表明，40-50岁的男性中，40％的人曾发生过ED；而70-80岁的男性则为70％。但ED并非老龄的必然结果，而是其它年龄相关疾病，包括心身疾病导致的结果。最近估计美国约有4千万ED患者，全球约有一亿以上患者。可以预测，随着生活节奏的加快和社会老龄化，ED患者将逐年增长。
本发明含毛冬青活性浸膏的制剂治疗勃起功能障碍症的疗效与昔多酚相当，但长期使用未发现任何毒副作用，是一种安全、价廉、疗效可靠的全天然药物，具有巨大的社会和经济效益。
实施例1、取毛冬青饮片20kg，加水200kg，加热，回流，回流提取2小时，放出药液，残渣内再加水150kg，回流提取1小时，然后合并提取液，经部分浓缩后，过一装有大孔树脂(D-101)的不锈钢柱(Φ200×1000mm)，用10kg纯水洗涤后，分别用20％、50％和95％乙醇各20kg洗涤，收集50％和95％乙醇洗脱，经浓缩、干燥，得到提取物0.4kg。
实施例2、取毛冬青10kg，加50％乙醇100kg，加热回流2小时，放出药液，残渣内再加50％乙醇80kg，加热回流2小时，然后合并提取液，经部分浓缩后，过一装有聚酰胺的不锈钢柱(Φ150×800mm)，依次用20％、40％和95％乙醇洗涤，收集95％乙醇洗脱液，经浓缩、干燥，得到提取物0.2kg。
实施例3、取实施例1方法得到的提取物1kg，内加乳糖0.75kg和淀粉0.75kg，经充分混合后，过60目筛，然后干压制粒，整粒，得到颗粒均匀的颗粒剂2.5kg，包装成袋，每袋为1.5g。
实施例4、
取实施例2方法得到的提取物1kg，内加糊精0.5kg，淀粉0.5kg，经充分混合后过60目筛，然后湿法制粒，干燥后装填胶囊，制成每粒重0.4g的胶囊剂。
实施例5、取实施例1方法得到的提取物2kg内加微晶纤维素0.667kg、淀粉0.333kg和膨速0.167，经充分混合后，过细筛，制粒。然后在颗粒内加入硬脂酸镁和白碳黑各33g，混合后制成0.49异型片，经薄膜包衣后得到重为0.5g的片剂。
实施例6、取实施例1方法得到的提取物1kg，加注射用水使每ml含提取物50mg，调节pH值，滤过、灌封、灭菌，即得每支2ml装注射剂。
权利要求
1.一种治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂，其特征在于该制剂是由5～80％，毛冬青提取物浸膏和95～20％药用辅料组成的颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液和注射剂，其中毛冬青提取物含总黄酮和总皂甙≥50％。
2.一种如权利要求1所述的治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)活性成份浸膏的制备将干燥的毛冬青根切制成饮片，加原生药量10-20倍量的水或亲水性溶剂，浸渍2小时后，加热回流，热提1-2次，每次1小时，冷却后，静置24小时，过滤，滤液通过以不带离子交换基团的分离介质为载体的层析柱1-2次，再用水及水-醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，于＜60℃温度下减压浓缩，干燥后制得含总黄酮和总皂甙≥50％的浸膏；(2)含毛冬青提取物制剂的制备取5～80％上述活性成份浸膏和95～20％药用辅料按常规制剂方法制成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液和注射液。
3.一种如权利要求2所述的治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂的制备方法，其特征在于其中所述的亲水性溶剂为脂肪族低级醇或低级酮。
4.一种如权利要求2所述的治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂的制备方法，其特征在于其中所述的不带离子交换基团的分离介质为大孔吸附树脂、硅胶、氧化铝、聚酰鞍硅、硅藻土、活性炭或纤维素等，这些介质可以单一使用也可混合使用。
5.一种如权利要求2所述的治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂的制备方法，其特征在于其中所述的水-醇混合剂中的醇为脂肪族低级醇，水与醇的混合比例为水∶醇＝99-1∶1-99的任意比例。
6.一种如权利要求1所述的毛冬青提取物制剂在治疗勃起功能障碍症中的应用，其特征在于该制剂可用于治疗勃起功能障碍症，治疗剂量为每日口服相当于毛冬青活性成份浸膏1.5～3g的制剂，连续服用1个月为1个疗程。
全文摘要
本发明涉及一种治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂及制备方法。本发明治疗勃起功能障碍症的毛冬青提取物制剂是由5～80%毛冬青提取物浸膏和95～20%药用辅料组成的颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液和注射剂,其中毛冬青提取物含总黄酮和总皂甙≥50%。本发明毛冬青制剂疗效与伟哥相当,但长期使用未发现任何毒副作用,是一种安全、价廉、疗效可靠的全天然药物,具有巨大的社会和经济效益。
文档编号A61P15/00GK1355028SQ0012759
公开日2002年6月26日 申请日期2000年11月28日 优先权日2000年11月28日
发明者周国伟, 王宁, 张国明 申请人:上海市中药研究所