专利名称：猪囊尾蚴疫苗的制作方法
技术领域：
本发明是涉及家畜生猪预防患囊尾蚴病的一种生物制品。
用于预防猪囊尾蚴病，有全囊虫匀浆疫苗，它是从患有囊尾蚴病的猪身上采集囊虫作为抗原，将抗原匀浆后制成乳剂疫苗。其优点是，在高发区抗原的来源方便，易采集，制备工艺较简单，能有效地抵抗猪囊尾蚴的侵袭，免疫期长。缺点是囊虫不能在体外繁殖，来源完全依赖患囊虫病猪感染的虫体，受采集抗原量所限，无法进行规模生产，疫苗供应不能满足高发区大量生猪预防免疫的需要；且猪囊尾蚴对人有感染性，采集、制苗过程中稍有疏忽极易造成人的生命危害。因原料来源困难，常出现停滞生产局面。近年来已无产品供应。
基因重组疫苗正在研究中，已形成实验室产品，据有关文献报道，该疫苗所需的有效基因可以通过大肠杆菌无限量表达，可规模化生产，且生产成本较低。缺点是因寄生虫是一种多细胞生物，不同于原核单细胞生物，致病基因不是单一的，用某一种基因制备疫苗不能解决多细胞生物的感染问题，免疫效果不理想，只能达到92.2％的减虫率，即使用疫苗后只能使猪体内患囊虫的数量降低，而形成全部保护即猪体内不长虫的比率最高只有55％。达不到国家对预防寄生虫病制品的保护率应在70～75％以上的要求。
目前对猪囊尾蚴病的治疗，主要采用化学类药物-丙硫咪唑、砒喹酮等，临床证明，这类药物具有一定的疗效。现有技术的不足之处主要在于有很大的毒副作用，如丙硫咪唑的副作用发生率为93.6％，且易产生抗药性药量不易掌握，剂量太大可使猪中毒死亡，剂量小对囊虫又不起作用；使用不方便，投喂时间长，浪费人力；所需费用高，一年两次，需几十元钱；浪费严重，化学药物是掺入饲料中饲喂，流失多，各个猪食入的量不易掌握，使用效果不理想，影响推广应用。
本发明的目的在于避免现有技术的不足之处，而提供一种无毒副作用、可规模化生产、使用方便、效果好的猪囊尾蚴疫苗制品。
可采取以下的技术方案实现目的。
猪囊尾蚴疫苗，是含有猪囊尾蚴细胞-抗原5～1000万个细胞/ml，防腐剂低于或等于有关标准量，左旋咪唑1～5％，抗原代谢产物水溶液20～100％的制品。
因猪囊尾蚴细胞为猪囊尾蚴组织经消化后用细胞培养方法制备而成，将其作为免疫原注入猪体内后，刺激带有特定抗原受体的B细胞转化成浆细胞，在血液中合成产生免疫球蛋白抗体，其抗体水平逐渐增加，达到高峰时可持续3个月，然后逐渐下降，此过程为初次应答。在此期间，如遇体内受猪囊尾蚴感染、吃入虫卵进入消化道、再进入血液后，机体再次接触与初次免疫相同的抗原时，抗体水平再次升高，为再次应答。这时，抗体与相应的抗原特异性结合后可发挥多种免疫效应，如形成的抗原抗体复合物被吞噬细胞吞噬而达到清除目的的中和作用，导致抗原溶解破坏的免疫溶解作用等等。为激发体内的再次应答，疫苗在首次注射20天后，进行二次注射，可产生对囊尾蚴病更强，更持久的保护力。
本技术方案相对现有技术具有如下优点和效果(1)以猪囊尾蚴细胞为抗原，即将猪囊尾蚴组织消化制备成细胞，用细胞学技术在体外培养繁殖，反复传代，可获得大量的细胞-抗原，可规模化生产，细胞培养及整个生产工艺简单。
(2)利用免疫生物学技术将细胞免疫原与免疫佐剂按比例配制，免疫保护率高，可达94％以上，保护期长，20～30日龄仔猪首次注射，20天后第二次注射，可获终生免疫。这在大量的寄生虫免疫试验中是没有的。对四川省阿坝州茂县和内蒙兴安盟科右前旗进行区域试验的共20,353头猪的免疫实验证明，免疫保护率分别为99.22％和94.64％，受到保护猪体内均无囊虫生长，达到完全保护。
(3)无毒性，使用安全可靠，猪囊尾蚴细胞制备疫苗前需将其进行灭活处理(冻融和超声波破膜)，即细胞已无活性、不能对人及动物造成感染，既保持免疫原性，又不降低作用。
(4)使用方便，无浪费，剂量好掌握，(5)费用低廉，两次注射只需3～4元钱。
结合实施方式对本技术方案的内容作进一步详述。
除猪囊尾蚴细胞抗原外，其它试剂均可用市售制品、化学纯。
猪囊尾蚴细胞及其代谢产物，可按常规制备。即用猪体内采集的囊虫组织进行细胞培养，反复传代，收集细胞及细胞代谢产物。保存于-20℃以下。疫苗生产前，用蒸馏水将细胞及其代谢产物按疫苗所需剂量稀释成水溶液。用于稀释抗原和佐剂的蒸馏水，应高压灭菌后使用。
防腐剂，用量应符合有关标准。可采用固态硫柳汞、0.005～0.01％，或液态甲醛、1～8‰。
免疫促进剂，可选用分枝杆菌、革兰氏阴性菌内毒素冻干品中的一种或两种。
油乳佐剂白油，以无多环芳烃化合物，粘度低，无色无味，无毒性矿物油为宜；硬脂酸铝，乳化剂，白色粉末，亲油亲水平衡值5.5为宜；司班80(Span 80)，乳化剂，液体，亲油亲水平衡值4.3为宜；吐温80(Tween 80)，乳化剂，液体，亲油亲水平衡值15.0为宜。
保护剂蔗糖、明胶、硫脲及其它未注单位的固态试剂，在制品中的用量为g/100ml。
以固态葡聚糖为载体佐剂。
猪囊尾蚴疫苗，是含有猪囊尾蚴细胞-抗原5～1000万个细胞/ml，防腐剂低于或等于有关标准量，左旋咪唑1～5％，抗原代谢产物水溶液20～100％；还有油乳佐剂白油45～70％、硬脂酸铝1～1.5％、司班80(Span 80)4～6％、吐温80(Tween 80)2～4％，免疫促进剂0.3～5mg/ml的油乳剂疫苗制品。制备时，先将各试剂按含量混合、搅拌均匀，加热溶化、高压灭菌，制成油乳剂；将传代培养的细胞按含量制成抗原水溶液；再将油乳剂和抗原水溶液按百分比混合，加入免疫促进剂和防腐剂，用胶体磨充分乳化即得油乳剂疫苗制品；装瓶、封口压盖，包装存放。
实施例1、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞 150万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液 34％白油(液) 59％
司班80(Span80)(液) 4％吐温80(Tween80)(液)3％硬脂酸铝 1.3％硫柳汞 0.01％分枝杆菌0.3mg/ml左旋咪唑 5％制成油乳剂疫苗，特别适于断奶前仔猪预防猪囊尾蚴病。
实施例2、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞 5万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液34％白油(液) 59％司班80(Span80)(液)4％吐温80(Tween80)(液) 3％硬脂酸铝 1.3％甲醛 0.5％分枝杆菌5mg/ml左旋咪唑 1％制成油乳剂疫苗，特别适于非疫病区仔猪预防猪囊尾蚴病。
实施例3、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞 1000万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液34％白油(液) 60％司班80(Span80)(液) 4％吐温80(Tween80)(液)2％硬脂酸铝 1.3％硫柳汞 0.01％分枝杆菌5mg/ml左旋咪唑 5％制成油乳剂疫苗，特别适于患病猪治疗猪囊尾蚴病。
猪囊尾蚴疫苗，是含有猪囊尾蚴细胞-抗原5～1000万个细胞/ml，防腐剂低于或等于有关标准量，左旋咪唑1～5％，抗原代谢产物水溶液20～100％；还有保护剂蔗糖5～40％、明胶2～3％、硫脲1～2％，免疫促进剂0.3～5mg/ml的冻干疫苗制品。制备时，先将蔗糖、明胶按含量配制，然后混合，再加入硫脲制备成水溶液保护剂；将抗原水溶液与保护剂混合后加入免疫促进剂和防腐剂，制得疫苗溶液；溶液装瓶，冻干，封口压盖，包装存放。
实施例4、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞 150万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液 100％蔗糖 5％明胶 2％硫脲 1％硫柳汞 0.005％分枝杆菌 1mg/ml革兰氏阴性菌内毒素 5mg/ml左旋咪唑 1％制成冻干疫苗，特别适于两月龄以上仔猪治疗猪囊尾蚴病。
实施例5、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞 50万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液 100％蔗糖 5％明胶 2％硫脲 1％硫柳汞 0.005％分枝杆菌 1mg/ml左旋咪唑 1％制成冻干疫苗，特别适于两月龄以上仔猪预防猪囊尾蚴病。
实施例6、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞 5万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液 100％蔗糖 5％明胶 2％
硫脲 1％硫柳汞0.005％分枝杆菌1mg/ml左旋咪唑 1％制成冻干疫苗，特别适于断奶前仔猪预防猪囊尾蚴病。
猪囊尾蚴疫苗，是含有猪囊尾蚴细胞-抗原5～1000万个细胞/ml，防腐剂低于或等于有关标准量，左旋咪唑1～5％，抗原代谢产物水溶液20～100％；还有葡聚糖1～2％载体佐剂疫苗制品。制备时，左旋咪唑和葡聚糖按含量制成水溶液，与抗原代谢产物水溶液混合，加入防腐剂，得到疫苗制品；装瓶，封口压盖，包装存放。
实施例7、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞 150万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液100％左旋咪唑5％葡聚糖 2％硫柳汞 0.005％制成载体佐剂疫苗，特别适于疫病高发区二月龄以上仔猪预防猪囊尾蚴病。
实施例8、猪囊尾蚴疫苗，由猪囊尾蚴细胞50万个细胞/ml抗原代谢产物水溶液100％左旋咪唑5％葡聚糖 2％硫柳汞 0.005％制成载体佐剂疫苗，特别适于疫病高发区断奶前仔猪预防猪囊尾蚴病。
权利要求
1.一种猪囊尾蚴疫苗，其特征在于它是含有猪囊尾蚴细胞-抗原5～1000万个细胞/ml，防腐剂低于或等于有关标准量，左旋咪唑1～5％，抗原代谢产物水溶液20～100％的制品。
2.如权利要求1所述的猪囊尾蚴疫苗，其特征在于它是还有油乳佐剂白油45～70％、硬脂酸铝1～1.5％、司班80 4～6％、吐温80 2～4％，免疫促进剂0.3～5mg/ml的油乳剂疫苗制品。
3.如权利要求1所述的猪囊尾蚴疫苗，其特征在于它是还有保护剂蔗糖5～40％、明胶2～3％、硫脲1～2％，免疫促进剂0.3～5mg/ml的冻干疫苗制品。
4.如权利要求1所述的猪囊尾蚴疫苗，其特征在于它是还有葡聚糖1～2％的载体佐剂疫苗制品。
全文摘要
本发明是涉及家畜生猪预防患囊尾蚴病的一种生物制品。它是含有:猪囊尾蚴细胞—抗原5～1000万个细胞/ml,防腐剂低于或等于有关标准量,左旋咪唑1～5%,抗原代谢产物水溶液20～100%的制品。在体外培养繁殖细胞,反复传代,可规模化生产,工艺简单;使用方便,无浪费,剂量好掌握;免疫保护率高,达94%以上,可获终生免疫,受到保护的猪体内均无囊虫生长,达到完全保护;无毒性,使用安全可靠,不会对人及动物造成感染;费用低廉。
文档编号A61K39/002GK1314184SQ0110415
公开日2001年9月26日 申请日期2001年2月22日 优先权日2001年2月22日
发明者张中庸, 李靓茹, 张京 申请人:天津实验动物中心