专利名称：用非多肽环－磷酸腺苷水平调节剂诱导排卵的方法
技术领域：
本发明涉及通过给予非多肽环一磷酸腺苷(cAMP)水平调节剂诱导排卵来增加雌性宿主生育能力的方法。
背景技术：
排卵是从卵巢释放出一个卵子或多个卵子的过程。月经周期的排卵时间是受精的首要因素。普遍认为，卵泡受到垂体促性腺激素刺激生长和成熟后具有排卵能力。卵泡刺激素(FSH)主要负责卵泡生长，而黄体生成激素(LH)刺激排卵。卵泡受促性腺激素刺激成熟的协调过程确保了排卵时排出感受态卵子。该准备充分的卵子在排卵后数小时内再与精子受精。
排卵是一个精确时控的过程，由卵巢的垂体促性腺激素刺激驱动，并通过卵泡对促性腺激素刺激生长和生化(例如类固醇生成、抑制素分泌等)应答而被修饰。在妇女的正常月经周期期间，这些激素呈周期模式。月经周期按功能可分为三个时期卵泡期、排卵期和黄体期。上一个非妊娠周期的黄体期结束，则卵泡期开始，先于或与月经开始同时发生。一个周期开始，FSH在血液中的水平瞬时上升，刺激一批卵泡发育。采集的生长卵泡直径约为5毫米。在自然月经周期中，通常在卵泡期中建立一个大或优势卵泡，使它生长至成熟。被考虑可以排出的人卵泡的直径约15毫米或以上。
在卵泡期中卵巢内发生的第二件关键事件是卵泡内粒细胞获得LH受体，从而逐渐增大对LH的应答。首先，卵巢慢慢分泌雌二醇和雌酮，随着卵泡直径增大以及卵泡对LH的灵敏度增加而增多。雌激素和抑制素水平相对升高，造成下丘脑分泌促性腺激素释放激素(GnRH)和垂体分泌促性腺激素。在LH峰前一天雌激素的产生到达最高水平，对雌激素升高和孕酮浓度缓慢增加的神经内分泌应答是排卵前释放促性腺激素，下文将作进一步讨论。
在排卵期期间，对雌激素和孕酮的神经内分泌应答发生改变。在周期此时，雌激素上升引发排卵前血清中出现FSH和LH峰，这是由于对下丘脑的正反馈造成的，此时雌激素刺激GnRH水平迅速上升，随后FSH和LH从垂体释放出来。促性腺激素峰诱导卵泡成熟完成，并使优势卵泡或格雷夫氏卵泡破裂，在出现LH峰之后约16至24小时排出卵子。在排卵前出现峰之后的期间内，血清雌二醇水平暂时下降，血浆孕酮水平开始上升。
在排卵之后，后排卵的卵泡细胞受LH影响而黄体化，形成黄体，即是黄体期。月经周期中黄体期的诊断标记物是黄体分泌的孕酮明显增多，以及应答孕酮中出现的子宫的变化。与黄体孕酮生成相关的是，血清雌激素水平增幅较少。在黄体期的大部分时间内，LH和FSH随着孕酮和雌激素上升而下降。接近非妊娠月经周期的黄体期结束，黄体消退，而血清FSH水平开始上升，启动下一个周期的卵泡生长。
FSH和LH以各自刺激卵泡发育或排卵的能力来相互区别。众所周知，两者均能刺激胞内cAMP浓度增大。业已表明，与cAMP相似的两种药剂，例如弗司扣林(forskolin)或cAMP稳定类似物，在体外具有与FSH对未成熟卵泡的粒细胞的类似作用，以及具有与LH对成熟卵泡的细胞的类似作用。虽然有人提出FSH和LH的可替换胞内通道，但cAMP被刺激是应答该两种促性腺激素的观点已被普遍接受。如果和当cAMP水平的升高与卵泡发育和卵泡成熟有关时，排卵诱导取决于细胞类型和各自的受体是否存在。事实上已经证明，缺乏特定磷酸二酯酶的小鼠排卵受损，而且粒细胞对促性腺激素的灵敏度减弱。
目前临床采用的不孕症治疗结合上述一些调控事件。氯米芬(clomiphene)是刺激卵泡生长，并可用于治疗不排卵的其中一种药剂。氯米芬是一种非类固醇抗雌激素，在雌激素的结合位点上与雌激素竞争。一般认为，氯米芬与下丘脑和垂体内的雌激素受体结合，并且阻断卵巢雌激素施加的负反馈。此结果造成卵泡早期促性腺激素(FSH和LH)生成增加。氯米芬的作用是增加内源性FSH血清水平以及改善卵泡生长和成熟。内源性LH或者外源性LH/CG再诱导这些患者排卵。
除了氯米芬之外，用排卵诱导方案治疗妇女，包括市售的人促性腺激素制剂，包括卵泡刺激素(FSH)和黄体生成激素(LH)或者绒毛膜促性腺激素(CG)，所有这些激素最初是通过纯化妊娠妇女的尿而获得的，最近则利用重组技术获得。通常，这种治疗方法在刺激卵泡生成和类固醇生成方面极为有效。治疗引起的并发症是因为这些制剂和方案能够过度刺激卵泡发育和卵泡成熟所致。在一小组患者中，其卵巢被过度刺激，导致超数排卵，最后发生多胎出生。卵巢过度刺激不但威胁到母亲的生命安全，而且往往造成新生儿出生体重低，这样一些新生儿需要加强护理。一般认为，促性腺激素诱导的过度刺激和多胎妊娠引起的主要并发症可能是hCG的作用时间延长所致。另外，在排卵诱导方案中使用促性腺激素可导致在注射部位有反应，包括局部性或全身性。因此，与使用高效注射药剂的治疗相比，研究使用口服有较弱类促性腺激素活性的活性药剂的排卵诱导方案可能产生显著有益的效果。更重要的是，如果可以开发排卵诱导方案，使卵巢过度刺激减少，从而降低对母亲的危险以及生产健康新生儿，它具有明显的优点。
发明内容
本发明第一方面提供非多肽环一磷酸腺苷(cAMP)水平调节剂，优选是磷酸二酯酶(PDE□抑制剂，更好是PDE4抑制剂在制备诱导患者排卵的药物中的应用。
本发明第二方面提供非多肽环cAMP水平调节剂，优选是PDE抑制剂，更好是PDE4抑制剂在诱导患者排卵中的应用。
本发明第三方面提供非多肽cAMP水平调节剂，优选是PDE抑制剂，更好是PDE4抑制剂在制备一种治疗方案中诱导患者排卵的药物中的应用，在所述方案中，诱导排卵之前先用氯米芬或芳香酶抑制剂诱导卵泡成熟，优选的芳香酶抑制剂选自YM-511、来曲唑(letrozole)、法倔唑(fadrozole)和阿那曲唑(anastrazole)，更好是选自来曲唑和阿那曲唑。
本发明第四方面提供非多肽cAMP水平调节剂，优选是PDE抑制剂，更好是PDE4抑制剂在一种治疗方案中诱导患者排卵中的应用，在所述方案中，诱导排卵之前先用氯米芬或芳香酶抑制剂诱导卵泡成熟，优选的芳香酶抑制剂选自YM-511、来曲唑、法倔唑和阿那曲唑，更好是选自来曲唑和阿那曲唑。
本发明第五方面提供一种用于诱导排卵的试剂盒，该试剂盒包括排卵诱导剂量的非多肽cAMP水平调节剂，优选是PDE抑制剂，更好是PDE4抑制剂，和诱导排卵的使用说明书。
本发明第六方面提供一种用于排卵诱导和/或辅助生殖技术(ART)的试剂盒，该试剂盒包括足够的每日剂量的FSH和/或具有FSH作用的化合物，优选是氯米芬或芳香酶抑制剂，更好是选自YM-511、来曲唑、法倔唑和阿那曲唑的芳香酶抑制剂，以引发卵泡成熟，和排卵诱导剂量的非多肽cAMP水平调节剂，优选是PDE抑制剂，更好是PDE4抑制剂，以及该试剂盒在诱导排卵或ART中的使用说明书。
本发明第七方面提供非多肽cAMP水平调节剂，优选是PDE抑制剂，更好是PDE4抑制剂在一种治疗方案中诱导患者排卵中的应用，在所述方案中，还给予hCG或LH诱导排卵，而给予的hCG或LH剂量与正常情况下诱导同一个患者排卵所需的hCG或LH量相比是降低的。
本发明涉及提高雌性宿主生育能力的方法，所述方法包括把非多肽环一磷酸腺苷(cAMP)水平调节剂给予该雌性宿主。本发明另一方面提出在排卵周期的黄体期之前特异性给予非多肽cAMP水平调节剂，诱导优势成熟卵泡排卵。优选的非多肽cAMP水平调节剂包括磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，特别是磷酸二酯酶4同种型的抑制剂。
虽然PDE抑制剂在体外对粒细胞中LH刺激的类固醇生成的影响已有报导，但本发明叙述两个新发现。首先，PDE抑制剂在体内不能增强FSH刺激的卵泡生长，尽管FSH和LH细胞通道中cAMP的作用已为人所接受。此外，有证据显示，PDE抑制剂在体外能够增加促性腺激素刺激的类固醇生成，这进一步说明了PDE抑制剂对LH依赖性排卵有新的活性。第二，在缺少添加LH或hCG的情况下，PDE抑制剂在体内增加排卵率。考虑到PDE抑制剂的口服活性，第二个发现为排卵诱导中首次可能采用非注射方案提供了基础，因为PDE抑制剂可与下文所述的现有方案结合使用。
本发明还提出在给予非多肽cAMP水平调节剂之前刺激卵泡发育，包括在宿主排卵周期的卵泡期期间给予能增大FSH浓度的药剂。本发明增加FSH的目的仅涉及卵泡发育和成熟，并不涉及排卵诱导。优选的药剂包括FSH本身、氯米芬、选择性雌激素受体调节剂、芳香酶抑制剂和神经内分泌调节FSH生成的选择性调节剂。
本发明另一方面提供在雌性宿主排卵周期的黄体期之前共给予非多肽cAMP水平调节剂与LH或绒毛膜促性腺激素(CG)。共给予可先后或同时发生，输送方式可相同或不同(例如肠胃外和/或口服)。另外，与现有排卵诱导方案中使用的LH或CG浓度相比，本发明使用的给予宿主的LH或CG的浓度更低，从而减少卵巢过度刺激的可能性。
本发明还提供非多肽cAMP水平调节剂作为治疗药剂在体外受精采集卵母细胞中取代或增强hCG或LH的作用中的应用。
所以，本发明提供非多肽cAMP水平调节剂作为一小分子治疗剂(例如磷酸二酯酶抑制剂)的应用，其以口服而非注射方式给予，对于蛋白质按要求的途径给予口在现有排卵诱导方案中按给药方式给予。口服给药避免了与注射相关的急性和全身性副作用。最重要的是，小分子治疗剂诱导排卵是有效的，可单独给予或者与LH或CG结合或不结合，可选择的LH或CG的浓度比现时使用的浓度低，因此，较少机会发生卵巢过度刺激及其相关危险。故可防止母亲和新生儿出现多胎出生和有生命威胁的并发症。另外，本发明还提供比现有涉及使用CG的排卵诱导方案更早的妊娠诊断测试机会。
本发明的治疗方法将用于治疗人和其他哺乳动物(例如马和牲畜，譬如牛、绵羊、奶牛等)及其他物种例如鱼类(譬如鱼)和鸟类((譬如鸟)的不孕症。
图1所示为人的通用排卵诱导方案的示意图。
图2所示为磷酸二酯酶抑制剂(即化合物1和化合物2)在体外对增加粒细胞胞内cAMP水平的影响的柱状图。
图3所示为磷酸二酯酶抑制剂(即化合物1)在体内对大鼠卵泡成熟的影响的柱状图。
图4所示为磷酸二酯酶抑制剂(即化合物1)在体内对大鼠用CG排卵的影响的柱状图。
图5所示为磷酸二酯酶抑制剂(即化合物1)在体内对大鼠用或不用CG排卵的影响的柱状图。
图6所示为磷酸二酯酶抑制剂(即化合物2)在体内对大鼠用或不用CG排卵的影响的柱状图。
图7所示为磷酸二酯酶抑制剂(即化合物2)对口服和皮下给药之后排卵的影响的柱状图。
图8所示为磷酸二酯酶抑制剂化合物3对口服和皮下给药之后排卵的影响的柱状图。
图9所示为磷酸二酯酶抑制剂化合物4在体内对次有效剂量hCG存在或不存在下排卵的影响的柱状图。
图10所示为磷酸二酯酶抑制剂化合物2对排卵和生育的影响的柱状图。
具体实施例方式
I.定义一般来说，下列字句或词语在本说明书、实施例或权利要求书中使用时有指定的定义。
“给予”指把治疗剂递送到雌性宿主。在本发明上下文中，该术语将包括递送非多肽cAMP水平调节剂和/或增大FSH浓度的药剂。该术语在下文题为“药物组合物”的部分中有完整描述。
本文所用的“排卵”指从卵巢释放出一个卵子或多个卵子的过程。随着周期中期的来临，雌激素大幅升高，然后出现LH峰和幅度较低的FSH峰。这时引发优势卵泡排卵。排卵包括卵泡快速增大，随后卵泡自卵巢皮层表面突出。最终卵泡破裂导致挤出卵丘复合体。该优势卵泡的其余部分再重组变成黄体。
“不排卵”指没有排卵。
“非多肽cAMP水平调节剂”指整体上不是由氨基酸组成，不论是否有糖基化，能直接或间接作用增加胞内cAMP水平的化合物。这些化合物可通过刺激cAMP合成或者抑制其降解，或者通过这二方面作用来增加cAMP水平。可增加cAMP合成的调节剂的例子包括腺苷酸环化酶激活剂，例如弗司扣林。可降低cAMP降解的调节剂的例子包括磷酸二酯酶抑制剂，例如茶碱。
“雌性宿主”指根据本发明被给予药剂的物种的雌性个体。本文定义包括人或其他哺乳动物和其他物种，例如鱼和鸟。
“磷酸二酯酶抑制剂”指阻断或抑制磷酸二酯酶(PDE)的化合物，其作用是通过水解切割3’-磷酸二酯键使PDE的环核苷酸靶(即cAMP和cGMP)失活，导致特异性环核苷酸被动积聚。抑制剂可以对全部磷酸二酯酶同种型是无选择性的，或者对特异性同种型有选择性。参见下文引述的化合物。
“磷酸二酯酶同种型”指负责胞内第二信使cAMP和cGMP的代谢或降解的一族同工酶或同种型。特异性同种型可能具有高度选择性的细胞或亚细胞定位。磷酸二酯酶同种型的例子包括PDE3和PDE4。
“卵泡期”指月经周期的第一个阶段，其特点是格雷夫氏卵泡发育导致雌二醇和抑制素B循环水平逐渐增大。
“在黄体期之前”指月经周期从雌激素主导的卵泡期转为孕酮主导的黄体期之前的阶段。在黄体期之前，对于直径为16毫米的卵泡，雌激素水平一般大于或等于150pg/ml/卵泡，卵泡直径通常不小于14毫米。这些标准不是绝对的，因不同患者而异。在本发明上下文中，就非多肽cAMP水平调节剂的给予时间而言，在现有排卵诱导方案中正常情况下将hCG或LH给予所述雌性宿主的时间点为给予该宿主非多肽cAMP水平调节剂的时间。
“排卵周期”或“月经周期”指在一种物种的一段特定时间内发生的一系列周期性事件，包括卵泡生长和发育、募集、选择、长成优势、排卵以及黄体形成和消失。该周期按功能可分为三个时期卵泡期、排卵期和黄体期。也可将这一周期称为月经周期。
“排卵诱导”指使用多肽和/或合成化学物质引致不排卵的雌性宿主排卵，从而诱导卵泡破裂和排出可受精卵母细胞的过程。排卵诱导不包括卵泡成熟和发育的排卵周期中发生的先行事件。
“卵巢过度刺激”指从药理上干预排卵或不排卵月经周期。它需要多个卵泡成熟，使许多卵泡呈现共显性，得到多个可受精的卵母细胞。
“卵泡”指卵子周围填充有体液的小囊，该小囊还含有粒细胞。
“卵泡发育”指卵泡的逐渐生长和发育，特别是在排卵周期的卵泡期期间，以致可采集预定排卵的卵泡，并使该卵泡长成优势。
“卵泡刺激素(FSH)及同种型”指由垂体释放的一种刺激卵泡生长的激素及FSH同种型，例如参照纳入本文作为参考的美国专利申请号US5,087,615中所描述。
“选择性雌激素受体调节剂”指在下丘脑和脑下垂体水平上作为雌激素受体拮抗剂和在子宫水平上作为激动剂的化合物或多肽。这些调节剂的例子可包括他莫西芬(tamoxifen)、雷诺昔芬(raloxifene)、托瑞米芬(toremifene)、氯米芬和屈洛昔芬(droloxifene)。纳入下列文献作为参考Endocrinology，1999December138(12)5476-5484。
“芳香酶抑制剂”指阻断或抑制将雄激素转化为雌激素的芳香酶活性的化合物或多肽。芳香酶抑制剂的例子包括来曲唑、阿那曲唑和伏罗唑(vorozole)。纳入下列文献作为参考1)Journal of Endocrinology，2000 Feb164(2)224-238；2)Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology，1997April61(3-6)157-166。
“有关类固醇生成的酶”指参与合成雌激素和孕酮的生化反应中催化作用的任何一种酶，包括3-β-羟基类固醇脱氢酶，这种酶的抑制剂包括黄豆甙原(daidzein)、三羟基异黄酮(genistein)、鹰嘴豆素A(biochanin A)和芒柄花黄素(formononetin)。纳入下列文献作为参考Journal of Steroid Biochemistry andMolecular Biology，1996 April58(1)95-101。
“氯米芬”指2-[4-(2-氯-1，2-联苯基乙烯基)苯氧基]-N，N-二乙基乙胺及其盐。
“黄体生成激素(LH)”指由垂体释放出来的一种激素，起着使优势卵泡释放卵子和刺激黄体分泌孕酮的双重作用。
“降低浓度”指当与所给予药剂的标准水平相比，该药剂的给予浓度降低。在本发明上下文中，给予的LH和CG的浓度比现有排卵诱导方案低。
“现有排卵诱导方案”指目前诱导排卵的方法，包括使用氯米芬、促性性激素(例如FSH、LH和CG)或这些药剂的组合，以促进不排卵雌性卵泡生成和诱导排卵。这些方案在药剂的给药时间、频率和浓度是可变化的。该定义包括对现有方案的修改，但在排卵诱导方案期间的某些时间点仍需要给予hCG或LH。纳入关于雌性不孕症、刺激的卵泡生成和排卵诱导的下列论文作为参考Reproductive Endocrinology，Surgery，and Technology，Volumes 1and 2；EditorsE.Y.Adashi，J.A.Rock and Z.Rosenwaks；Lippincott-RavenPublishers，Philadelphia，199；Female Infertility Therapy Current Practice；EditorsZ.Shoham，C.M.Howles and H.S.Jacobs；Martin Dunitz Ltd，London，1999。
“绒毛膜促性腺激素(CG)”指一种生理和免疫上与垂体LH相似的糖蛋白激素。在正常妊娠中，CG由胎盘产生，因为其水平在血清浓度中升高，故可用作妊娠的诊断标记物。缩写hCG是指人绒毛膜促性腺激素。
“增大FSH浓度的药剂”指物质、蛋白或合成化学物质的任何组合物，当被给予雌性宿主时，通过给予FSH本身或一种能刺激其内源性产生或抑制其内源性降解的药剂，它能直接或间接地增大血清中FSH的浓度。该词组和药剂的定义包括可能不会增大FSH浓度，但具有刺激素生物功能和活性的化合物。
II.排卵诱导方案的原则自上世纪六十年代以来已经确认，不足够或不适当促性腺激素水平等问题是造成排卵障碍的原因。使用的各种促性腺激素制剂的临床效果与FSH的给予量成比例。最初证据显示，在排卵诱导期间获得足够的排卵生成不需要外源性LH。然而，越来越明显的是，仅给予外源性FSH的妇女无法产生足够的卵泡雌二醇进行排卵诱导。在人进行排卵诱导时至少给予一定量的外源性或内源性LH似乎是重要的。图1所示为通用排卵诱导方案的示意图。最初7天每日给予75IU FSH制剂。第7天结束，进行超声波扫描评估卵泡直径，并测定血清雌二醇水平。如果卵泡直径少于12毫米，将FSH剂量增加一倍，在下一个5至7天期间进行超声波扫描。卵泡直径≥15毫米的患者接受排卵推注剂量的hCG。
III.通用排卵诱导方案排卵诱导是一门结合科学的艺术。虽然有很多治疗方案，但没有一种方法或特定的方案是唯一正确的。某些原则确实是适用的，但也只提供了安全有效治疗的基础。然而，应当注意，以下陈述的诱导排卵标准仅作为举例说明目的，可随着临床情况、患者本人及治疗目的而有很大变化。
第一个周期通常涉及在月经结束第4天至第7天开始每日给予FSH。通过雌激素水平和超声波监测卵泡生长和反应。连续7至14天给予FSH一般可达到足够的卵泡刺激。用FSH治疗少于8天会增加妊娠患者的自然流产率。
一旦获得足够的卵泡发育(有2个16至18毫米的卵泡，而且血清雌激素逐渐上升至500-1,000pg/ml)，才给予hCG(5,000或10,000IU)。hCG的给予时间非常重要，这是因为hCG的作用时间延长可能导致促性腺激素诱导的过度刺激和多胎妊娠引起的主要并发症。虽然hCG的半衰期约为8小时，但注射后7至10天在患者的血液中还可被检测到，并有可能被误诊为妊娠治疗获得成功。给予hCG之后，指示夫妇在当晚性交，而接下来的48小时还需要作多1或2次性交。
关于给予促性腺激素的基本准则是每个治疗周期必须因人而异，并要监测和作适当调整。监测不仅对增加排卵和妊娠率是必要的，而且对于减少严重的卵巢过度刺激，其产生的可能后果及多胎妊娠也是不可缺少的。
这可通过经常测定血浆/血清雌二醇水平和超声波检查卵巢来达到。雌二醇水平一般与生长卵泡数有关，但与成熟卵泡数无必然联系。依靠雌二醇水平作为卵泡成熟的标记物，在有多个小卵泡存在下可能会错误提示卵泡已经成熟，以致在成熟前给予hCG。因为卵泡生长与卵子成熟直接相关，所以超声波评估平均卵泡直径可作为评估卵泡成熟及hCG给予时间的较好指标。因此，雌二醇水平应该用来评估早期卵泡发育，作为对促性腺激素反应的指标，超声波应用来评估成熟卵泡的数目和尺寸。
大部分治疗的目的是使单胎妊娠的可能性最大化，同时减少过度刺激综合征的风险。雌二醇水平在1000至1500pg/mL之间似乎是最佳的，但实际水平可取决于使用的实验室和医生的经验。患上过度刺激的风险随雌二醇水平上升而增加。通常，当血清雌二醇超过2000pg/mL，给予hCG时应该十分谨慎，或者应停止给予以便使卵泡退回。低促性腺激素性功能减退症在妊娠周期患上数值大于2400pg/mL的严重过度刺激的风险是5％，在非妊娠周期是1％。此外，因为过度刺激倾向与已有的卵泡数相互关联，所以停止给予hCG的决定还可基于用超声波发现有10个或以上的发育卵泡这一结果。
纳入下列关于雌性不孕症、刺激的卵泡生成和排卵诱导的论文作为参考Reproductive Endocrinology，Surgery，and Technology，Volumes 1 and 2；EditorsE.Y.Adashi，J.A.Rock and Z.Rosenwaks；Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，199；Female Infertility Therapy Current Practice；EditorsZ.Shoham，C.M.Howles and H.S.Jacobs；Martin Dunitz Ltd，London，1999。
IV.本发明的方法本发明涉及一种排卵诱导的方法，包括在一种排卵诱导方案中给予非多肽cAMP水平调节剂，给予该调节剂可以增强或取代通常在诱导或自然排卵周期的黄体期之前给予的hCG(或LH)。调节剂可单独给予或者与hCG(或LH)同时或先后共给予，输送方式可以不同(例如肠胃外和/或口服)。
本发明另一方面提供在雌性宿主排卵周期的黄体期之前，同时或先后共给予非多肽cAMP水平调节剂与LH(或CG)。另外，因为一般相信hCG的作用时间延长可能导致促性腺激素诱导的过度刺激和多胎妊娠引起的主要并发症，所以本发明提供给予宿主所用的LH或CG浓度与现有排卵诱导方案中所用的浓度相比是降低的，因此减少卵巢过度刺激的可能性，最后避免了与此条件相关的副作用多胎出生、新生儿体重低及影响母亲健康的并发症。
应当注意，在排卵周期期间给予非多肽cAMP水平调节剂对卵泡成熟和发育没有治疗作用。
所以，本发明涉及诱导雌性宿主排卵的方法，包括把非多肽环一磷酸腺苷(cAMP)水平调节剂给予该雌性宿主。非多肽cAMP水平调节剂的作用直接或间接地增加胞内cAMP水平。这些化合物通过刺激cAMP合成或抑制其降解，或者通过这二方面作用增加cAMP水平。可增加cAMP合成的调节剂的例子包括腺苷酸环化酶激活剂，例如弗司扣林。可降低cAMP降解的调节剂的例子包括磷酸二酯酶抑制剂，例如茶碱。优选的非多肽cAMP水平调节剂包括磷酸二酯酶抑制剂，特别是磷酸二酯酶4同种型的抑制剂。
本发明另一方面提出在宿主排卵周期的黄体期之前特异性给予非多肽cAMP水平调节剂。作为排卵诱导方案中hCG的增强剂或替代物，在该排卵诱导方案中，hCG通常在排卵周期接近卵泡期结束但在黄体期之前的时间内给予。给予非多肽cAMP水平调节剂的优选时间是宿主排卵周期的黄体期之前。
本发明还提出在给予非多肽cAMP水平调节剂诱导排卵之前刺激卵泡发育，包括在宿主排卵周期的卵泡期期间给予能增大FSH浓度的药剂。优选的药剂包括FSH本身、氯米芬、选择性雌激素受体调节剂、芳香酶抑制剂以及不是FSH但有FSH生物功能和活性的试剂。所以，本发明要求保护在指定时间给予本文所述与卵泡生长和成熟有关的药剂，改善排卵过程和随后要怀孕必须进行的受精过程。
应当注意，当单独给予非多肽cAMP水平调节剂，以及不与hCG共给予时，本发明提供比现有涉及使用CG的排卵诱导方案更早的妊娠诊断测试机会。
V.磷酸二酯酶抑制剂至于磷酸二酯酶抑制剂用作非多肽cAMP水平调节剂，基本上任何一种无毒性的PDE抑制剂都可用在本发明的方法中，包括选择性和非选择性PDE4抑制剂。合适的非选择性PDE4抑制剂和PDE3/PDE4组合抑制剂包括茶碱、异丁基甲基黄嘌呤、AH-21-132、Org-30029(Organon)、Org-20241(Organon)、Org-9731(Organon)、扎达维林(Zardaverine)、长春西汀(vinpocetine)、EHNA(MEP-1)、咪利酮(Milrinone)、氰胍佐旦(Siguazodan)、扎普司特(Zaprinast)、SK+F 96231、托拉芬群(Tola6entrine)(Byk Gulden)、非明司特(Filaminast)(Wyeth-Ayerst药厂)。
特别优选的是对PDE4有特异性的选择性抑制剂。许多公知的选择性PDE4抑制剂属于六种化学结构之一类咯利普兰(rolipram-like)、黄嘌呤、硝喹宗(nitraquazones)、苯并呋喃、萘和喹啉。类咯利普兰类似物的例子包括咯利普兰的咪唑烷酮和吡咯烷酮类似物，例如Ro 20-1724以及咯利普兰的苯甲酰胺衍生物，例如RP 73401(Rhone-Poulenc Rorer药厂)。黄嘌呤类似物包括登布茶碱(Denbufylline)(SmithKline Beecham药厂)和阿罗茶碱(Arofylline)(Almirall药厂)；硝喹宗类似物包括CP-77,059(Pfizer)及一系列吡啶[2，3d]哒嗪-5-酮(Syntex)；苯并呋喃类似物包括EP-685479(Bayer)；萘类似物包括T-440(Tanabe Seiyaku)；喹啉类似物包括SDZ-ISQ-844(Novartis)。
更优选的是下列化合物WO 97/42174(Pfizer，Inc.)公开的化合物 式中，R1是环戊基或环己基，R2是乙基，R3是羧酸、酯或伯酰胺、羟甲基或羰基，R4是氰基；美国专利号US5,710,160和5,710,170(Merck Frost Canada，Inc.)公开的化合物 式中，R选自H、CO-(4-甲哌嗪基)、CO-(吡咯烷基)、CHNOH、5-四唑基、(CH)OHCH3、COCH3、CONHSO2CH3、CONHSO2Ph、CONHSO2CF3、CONHSO2C6H4CH3(邻)、CH2CONHSO2Ph、CH2CONHSO2CF3、COH(CF3)2和SO2NHCOC6H4CH3(邻)。
WO 98/2007(Darwin Discovery)公开的化合物，以下式表示 WO 98/14432(Janssen Pharm NV)公开的化合物， 式中，R1是H或CH3，R2是CH3或CHF2，R3是环戊基、茚满基、环丙基甲基、Ph(CH2)5、THF。
WO 98/18796(Novartis)公开的化合物
式中，X是NH2、OH、NHPh、NPh2、Ph、C6H4CO2H，Y是Cl、CN、NO2。
WO 97/49702(Pfizer，Inc.)公开的化合物，以下式表示 WO 97/48697(Rhne-Poulenc Rorer)公开的化合物 式中，R1是环戊基、环丙基、Ph(CH2)3、苯甲基或H，R2是CH3、苯甲基、甲苯磺酰基或H，R3是CH3或Cl，A是CH、C-烷基、O或N，B是C或N。
WO 98/02440(Bayer AG)公开的化合物 式中，R1是CH3、OH、Oallyl、OCH3、C2H5、丙基或乙酰基，R2是3-Cl、2，4-Cl2、3-NO2、3-Br、4-F、4-Cl、2，4-(CH3)2或2，4(CH3O)2。
WO 97/44337、WO 97/44036、WO 97/44322(Chiroscience Ltd.)公开的化合物
式中，R1是CH3、乙基或丙基，R2和R3独立地选自H、任意取代的芳基或杂芳基，R4和R5独立地选自酰基、烷基(可被OH或卤素任意取代的)、芳基、杂芳基以及被芳基或杂芳基取代的酰基。
美国专利号US6,303,789(Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik GmbH)公开的化合物，以及这些化合物的盐和其吡啶N-氧化物或其盐 式中，R1是被氟完全或主要取代的1-6C-烷氧基、3-7C-环烷氧基、3-7C-环烷基甲氧基、苄氧基或1-4C-烷氧基；R2是氢；R3是氢；或者R2和R3都是亚甲基；R4是被氟完全或主要取代的氢、1-8C-烷基、1-6C-烷氧基-1-4C-烷基、1-6C-烷基硫-1-4-烷基、1-6C-烷基亚磺酰基-1-4C-烷基、1-6C-烷基磺酰基-1-4C-烷基、1-8C-烷基羰基、3-7C-环烷基、3-7C-环烷基甲基、苯基-1-4C-烷基或1-4C-烷基；R5是苯基、吡啶基、被R51、R52和R53取代的苯基或者被R54、R55、R56和R57取代吡啶基，其中R51是羟基、卤素、氰基、羧基、三氟甲基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基、1-4C-烷基羰基、1-4C-烷基羰氧基、氨基、一或二-1-4C-烷基氨基或1-4C-烷基羰基氨基；R52是氢、羟基、卤素、氨基、三氟甲基、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基；R53是氢、卤素、1-4C-烷基或1-4C-烷氧基；R54是羟基、卤素、氰基、羧基、1-4C-烷基、1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基羰基或氨基；R55是氢、卤素、氨基、或1-4C-烷基；R56是氢或卤素；R57是氢或卤素；n是1或2；m是1或2；而m和n的总和只可以是2或3。
美国专利号US6,316,472(Merck Frosst Canada)公开的化合物或其药学上可接受的盐或水合物
式中，Y表示N或N-氧化物；y表示0、1或2；R1和R2独立地选自H、C1-6烷基和卤代C1-6烷基，R3和R4独立地选自H和C1-6烷基，或者连接于同一个碳原子上的R3和R4一起表示羰基氧原子，或者连接于不同碳原子上的R3和R4与它们连接的碳原子以及任何介入的原子综合考虑，表示5-、6-或7-元饱和碳环，R5和R6独立地表示选自H、C1-6烷基、卤代C1-6烷基和CN的其中一个成员；n表示0至6的整数；Ar1是芳基。
特别优选的是下列化合物咯利普兰、阿罗茶碱(Almirall药厂)、Ariflo(SmithKline Beecham)、Roflumilast(Byk Gulden)、登布茶碱(SmithKline Beecham)、RS-17597(Syntex)、SDZ-ISQ-844(Novartis)、4-[2，3-二(羟甲基)-6，7-二乙氧基萘基]-1-(2-羟乙基)氢化吡啶-2-酮(T-440；Tanabe Seiyaku)、3-[6-(2H-3，4，5，6-四氢吡喃-2-基氧基)-2-(3-噻吩基羰基)苯并[b]呋喃-3-基]丙酸甲酯(Bayer)、2-甲基-1-[2-(甲乙基)(8-氢化吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)]丙-1-酮(Ibudilast；Kyorin)、N-(3，5-二氯(4-吡啶基))(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)羧酰胺(RP 73401；Rhne-PoulencRorer)、(1E)-l-氮杂-2-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)丙-1-烯基氨基酸盐(PDA-641；American Home Products)、4-氰基-4-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)环己烷羧酸(SB207499；SmithKline Beecham)、西潘茶碱(Cipamfylline)(SmithKlineBeecham)、5-[3-((2S)二环[2.2.1]庚-2-氧基)-4-甲氧基苯基]-1，3-diazaperhydroin-2-one(CP-80633；Pfizer)、1-(3-硝基苯基)-3-(3-吡啶基甲基)-1，3-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二酮(RS-25344；Syntex)、4-((1R)-1-苯基-2-(4-吡啶基)乙基)-2-环戊氧基-1-甲氧基苯(CDP-840；Celltech)、(3-{[(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)甲基]氨基}吡唑-4-基)甲-1-醇、Ro-20-1724(Roche Holding AG)、吡拉米司特(Piclamilast)、多索茶碱(Doxoftlline)(Instituto BiologicoChemioterapico ABC SpA)、RPR-132294(Rhne-Poulenc Rorer)、RPR-117658A(Rhone-Poulenc Rorer)、L-787258(Merck Frosst Canada)、E-4021(Eisai Co.Ltd.)、GF-248(Glaxo Wellcome)、SKF-107806(SmithKline Beecham)、IPL-4088(Inflazyme Pharmaceuticals Ltd.)、{3-[(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)甲基]-8-(甲乙基)嘌呤-6-基}乙胺(V-11294A；Napp Research Centre Ltd.)、Atizoram(Pfizer)、5-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)吡啶-2-羧酰胺(CP-353164；Pfizer)、3-[2，4-二氧-3-苄基-1，3-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶基]苯甲酸甲酯(CP-77059；Pfizer)、CP-146523(Pfizer)、CP-293321(Pfizer)、CI-1044(Pfizer)、PD-189659(Pfizer)、CI-1018(Pfizer)、CP-220629(Pfizer)、1-(3-硝基苯基)-3-(4-吡啶基甲基)-1，3-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二酮(RS-25344-000；Roche Bioscience)、Mesopram(Schering AG)、N-(2，5-二氯(3-吡啶基))(8-甲氧基(5-喹啉基))羧酰胺(D-4418；Chiroscience)、T-2585(Tanabe Seiyaku)、4-[4-甲氧基-3-(5-苯基戊氧基)苯基]-2-甲基苯甲酸、XT-044(Hokuriku University)、XT-611(KanzawaUniversity)、WAY-126120(Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.)、1-氮杂-10-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)-7，8-二甲基-3-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-2-酮(WAY-122331；Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.)、[(3S)-3-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基-5-氧吡唑烷基]-N-(3-吡啶基甲基)羧酰胺(WAY-127093B；Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.)、PDB-093(Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.)、3-(1，3-二氧苯并[c]唑啉-2-基)-3-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)丙酰胺(CDC-801；Celgene Corp.)、CC-7085(Celgene Corp.)、CDC-998(Celgene Corp.)、NCS-613(CNRS)、CH-3697(Chiroscience)、CH-3442(Chiroseience)、CH-2874(Chiroscience)、CH-4139(Chiroscience)、RPR-114597(Rhone-Poulenc Rorer)、RPR-122818(Rhne-Poulenc Rorer)、(7aS，7R)-7-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)-7a-甲基-2，5，6，7，7a-五氢-2-氮杂吡咯嗪-3-酮、GW-3600(Glaxo-Wellcome)、KF-19514(Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd.)、CH-422(Celltech Group)、CH-673(Celltech Group)、CH-928(Celltech Group)、D-22888(Asta Medica)、AWD-12-232(Asta Medica)、YM-58997(Yamanouchi)、IC-485(ICOS Corp.)、KW-4490(Kyowa Hakko Kogyo Co.Ltd.)、YM-976(Yamanouchi)、Sch-351591(Celltech Group)、AWD-12-343(Asta Medica)、N-(3，5-二氯(4-吡啶基))-2-{1-[(4-氟苯基)甲基]-5-羟基吲哚-3-基}-2-氧乙酰胺(AWD-12-281；Asta Medica)、异丁司特(Ibudilast)(Kyorin Pharmaceutical Co.Ltd.)、Cilomilast(SmithKlineBeecham)、BAY-19-8004(Bayer)、3-{2-[(4-氯苯基)羰基]-6-羟基苷并[b]呋喃-3-基}丙酸甲酯、5-甲基-4-[(4-甲基硫苯基)羰基]-4-咪唑啉-2-酮、5，6-二乙氧基苯并[b]噻吩-2-羧酸(Tibenelast)以及4-(3-溴苯基)-1-乙基-7-甲基氢化吡啶并[2，3-b]吡啶-2-酮(YM-58897；Yamanouchi)。
在一实施例中，本发明提供PDE抑制剂，优选是PDE4抑制剂在用FSH诱导卵泡生长和成熟之后引发排卵中的应用。PDE抑制剂，特别是PDE4抑剂在用具有FSH活性的化合物或制剂诱导卵泡生长和成熟之后引发排卵中的应用也属于本发明范围之内。FSH治疗的特别优选的替代物或辅助物是芳香酶抑制剂，例如YM-551(Yamanouchi)、来曲唑(Novartis)、阿那曲唑(AstraZeneca)或法倔唑(Novartis)。在需要获得多个卵母细胞以作体外受精的优选辅助生殖技术方案中，从月经周期的第3天或约第3天至第7天或约第7天、或者第3天或约第3天至第8天或约第8天将芳香酶抑制剂(例如每日2.5-5或约2.5-5毫克来曲唑或阿那曲唑)与每日50-225或约50-225IUFSH，优选每日50-150IU FSH，一起给予患者，从月经周期的第3天或约第3天至第7天或约第7天开始，持续给予FSH直到至少有两个直径大于或等于16或约16毫米的优势卵泡。此时，给予能引发排卵的足够剂量的PDE抑制剂，特别是PDE4抑制剂。
另一个选择是，芳香酶抑制剂可作为单一的卵泡生长刺激剂(即不给予FSH)来使用，采用较高剂量的芳香酶抑制剂(例如每日2-10毫克来曲唑或阿那曲唑)和/或延长给予的时间(例如第3天至第8天，第3天至第9天，第3天至第10天)。当以超声波判断卵泡成熟是足够的，就给予排卵引发剂量的PDE抑制剂，特别是PDE4抑制剂。此方案允许采集多个卵母细胞，同时避免应用注射途径，因为所有药剂都是口服的。
在排卵诱导中，希望能仅释放一个卵子。根据本发明，这可按如下方法实现用FSH刺激卵泡生长和成熟，然后给予PDE抑制剂，特别是PDE4抑制剂引发排卵。用FSH的替代物例如芳香酶抑制剂诱导卵泡生长和成熟的排卵诱导方案也属于本发明的范围之内。
在优选的排卵诱导方案中，从月经周期的第3天或约第3天至第7天或约第7天、或者第5天或约第5天至第9天或约第9天将一定剂量的芳香酶抑制剂(例如每日2.5-5毫克来曲唑或阿那曲唑)给予患者。另一个选择是，从月经周期的第3天或约第3天或者第4天或约第4天给予单剂量的芳香酶抑制剂(例如5-30毫克来曲唑或阿那曲唑，最好10或20毫克)。用排卵引发剂量的PDE抑制剂，特别是PDE4抑制剂引发排卵。此方案提供一种无需注射的排卵诱导方案。
VI.药物组合物可以将本发明的非多肽cAMP水平调节剂和能增大雌性宿主体内的FSH浓度的药剂(本文也称“活性化合物”)、其衍生物、片段、类似物和同系物配成适合给予的药物组合物。这些组合物通常含有活性化合物和药学上可接受的载体。本文所用的“药学上可接受的载体”包括与药学上给药相容的任何或全部溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌药剂、等渗和吸收延迟剂等。合适的载体在本领域的标准参考文章最新版的Remington′s PharmaceuticalScience中有描述，纳入作为本文的参考文献。例如，优选的载体或稀释剂包括但不限于水、盐水、格林氏溶液、葡糖溶液及5％人血清白蛋白。也可使用脂质体和非水溶性赋形剂，例如硬化油。这些介质和药剂应用于具有药学活性的物质已为本领域所公知。除了在任何常规介质或药剂与活性化合物不相容的情况之外，可考虑将它们应用于组合物中。在组合物中还可加入补充的活性化合物。
本发明的药物组合物可按其预定的给药途径配制。例如，给药途经包括肠胃外(例如静脉内、皮内、皮下)、口服、吸入、透皮(局部)、跨粘膜、和直肠给药。用于肠胃外、皮内、皮下途径的溶液或悬浮液包括下列组分无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、硬化油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌药，例如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲液，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，毒性调节剂，例如氯化钠或葡萄糖。pH值可用酸或碱调节，例如盐酸或氢氧化钠。肠胃外制剂可封装于安瓿、一次性注射器或者多剂量玻璃或塑料小瓶中。
适合注射用的药物组合物包括无菌水溶液(能溶于水)或分散剂以及即时制作无菌注射液或分散剂的无菌粉末。静脉内给药的合适载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的，而且流动性为易于注射。它在制造和储存条件下必须是稳定的，并且保存时防止抗细菌和真菌等微生物的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质及其适当混合物。例如，通过使用卵磷脂，若是分散介质保持所需的颗粒度以及使用表面活性剂，都可维持适当的流动性。应用各种抗菌药或抗真菌药，例如对羟苯甲酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等，可防止微生物作用。在许多情况下，组合物最好包括等渗试剂，例如糖、甘露醇、山梨醇等多元醇、氯化钠。组合物中可包括延迟吸收的试剂，例如一硬脂酸铝和明胶，将注射组合物的吸收时间延长。
在适当溶剂中将所需量的活性化合物，如果有需要，与上面列举的成分其中之一或组合混合，然后过滤灭菌，可制成无菌注射液。通常，将活性化合物与含有基本分散介质和按需要与上面列举的其他成分的无菌赋形剂混合，可制成分散剂。在制备无菌注射液的无菌粉末时，制造方法是真空干燥和冻干法，得到活性成分和任何附加的所希望的成分的粉末口所希望的成分来自己被无菌过滤的溶液。
口服组合物一般包括惰性稀释剂或食用载体。它们可封装在凝胶胶囊中或压缩成片剂。当用于口服治疗给药时，可将活性化合物与赋形剂混合，制成片剂、锭剂、或胶囊。口服组合物还可用供作为嗽口水用的流体载体制备，其中流体载体中的化合物经口腔施加、嗽口和吐出或吞下。组合物的一部分可包括药学上相容的结合剂和/或辅助剂材料。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可含有下列相似性质的任何成分或化合物结合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或凝胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如褐藻酸、原胶或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶体二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或香味剂，例如薄荷、甲基水杨酸盐或甜橙味剂。
当用作吸入给药途径时，化合物以含有适当助推剂，如二氧化碳等气体的加压容器或分散器的气溶胶喷射形式，或者以喷雾器形式输送。
全身给药也可以通过跨粘膜或透皮方式进行。当用作跨粘膜或透皮给药途径时，可配制成适合待渗透障碍物的渗透剂。这样一些渗透剂通常已为本领域所公知，例如包括，用于跨粘膜给药的是去污剂、胆盐、和梭链孢酸衍生物。跨粘膜给药可通过使用鼻喷雾剂或栓剂实现。用于透皮给药时，可将活性化合物配制成本技术领域公知的药膏、软膏、凝胶、或乳脂。
非多肽cAMP水平调节剂(包括磷酸二酯酶)和氯米芬、选择性雌激素受体调节剂、芳香酶抑制剂和类固醇生成酶抑制剂的优选给药途径是口服途径。这些活性化合物还可经皮下注射、静脉内或经阴道(局部给药)给予。FSH、LH或hCG的优选给药途径是皮下注射，但也可经静脉内给予。
化合物也可以制成栓剂(例如，与常规栓剂基质，譬如可可脂和其他甘油酯)或灌肠剂形式，供直肠或阴道输送。
在一实施例中，使活性化合物与将保护化合物免于在体内快速清除的载体一起配制，例如控释制剂，包括植入物和微囊包裹型输送系统。可使用生物可降解和生物可相容的聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯共聚物、聚酸酐、聚乙二醇酸、胶原、聚原磷酯、和聚乳酸。这些制剂的制备方法对本领域技术人员来说是显而易见的。所述材料也可从Alza Corporation and NovaPharmaceutical，Inc.买到。
本发明的化合物可单独使用或者与一或多种上面讨论的其他治疗剂联用，与常规赋形剂混合制成药物组合物，例如，赋形剂可以是药学上可接受的适合口服、肠胃外、肠内或局部给药，而又不与活性化合物起有害反应，并对受者无害的有机或无机载体物质。合适的药学上可接受的载体包括但不限于水、盐溶液、醇、蔬菜油、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉糖、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、香油、脂肪酸一酸甘油酯和二酸甘油酯、petroethralfatty acid esters、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。可将药物组合物灭菌，如果有需要，可与不会和活性化合物起有害反应的辅助剂混合，例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲液、着色剂、香味剂和/或芳香物质等。
特别有利的是把口服或肠胃外组合物配制成单位剂量形式以方便给药和剂量一致。本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的剂量的单个物理单位，每个单位含有经过计算的预定量活性化合物，与所需要的药学载体一起产生所希望的治疗效果。关于本发明剂量单位形式的说明遵照且直接取决于活性化合物的独有特性、所要达到的特定治疗效果、以及本领域中用这样一种活性化合物治疗个体的固有限制。
应当知道，在一给定治疗中活性化合物的实际优选用量随着所使用的特定化合物、明确配制的组合物、给药模式、给药的具体部位等而变化。本领域技术人员参照上文提供的指南进行常规的剂量测定试验，可轻易确定一给定给药方案的最佳给药速度。也可参见Remington′s Pharmaceutical Science。一般而言，本发明一或多种化合物，特别是当使用本发多种有效化合物时，适当的有效剂量为每日每千克受者体重0.01至100毫克范围内，优选为每日每千克受者体重0.01至20毫克范围内，更好为每日每千克受者体重每日0.05至4毫克范围内。所希望的剂量是适合每日给予1次，或者在一天内相隔适当时间，或者按照其他适当的时间表分多次小剂量给予，例如分2至4剂。这些小剂量可以单位剂量形式给予，例如每剂含有0.05至10毫克本发明的化合物。
药物组合物可封装于容器、包装或分散器内，并提供给药说明书。
以下，给合下列非限制性实施例对本发明进行说明。
VII.实施例本发明研制了一个体内排卵模型，把FSH给予未成熟大鼠，1日2次，持续2天或3天，以诱导卵泡成熟，然后给予1次排卵剂量的hCG。注射单剂非多肽cAMP水平调节剂(例如化合物1、化合物2等)，与次排卵剂量的hCG共给予，或者单独给予非多肽cAMP水平调节剂，诱导排卵。实验结果与口模型一致，在该模型中，升高的cAMP水平增强或取代hCG，但不是FSH。任何排卵诱导方案中FSH的作用是促进卵泡发育和成熟，而不是诱导排卵。
实施例1至9的化合物如下化合物1是顺-4-氰基-4-(3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯基)环己烷-1-羧酸；化合物2是3-(环戊氧基)-N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-4-甲氧基苯甲酰胺；化合物3是2-(4-(6，7-二乙氧基-2，3-二(羟甲基)萘-1-基)吡啶-2-基)-4-(3-吡啶基)pthalazin-1(2H)-酮盐酸盐；化合物4是7-苄氨基-6-氯-2-哌嗪并-4-吡咯烷蝶啶。
实施例1化合物1和化合物2单独或与促性腺激素联合在体外对大鼠卵巢粒细胞cAMP水平的影响在垂体被切除并用己烯雌酚治疗的25天龄Sprague-Dawley大鼠中切除卵巢。用27号针在卵巢重复刺孔，使卵泡释放出粒细胞。细胞清洗后重悬于McCoys 5A介质+1％BSA+2μM雄烯二酮中。存活的细胞数是100,000，全部装入容积为1.0毫升的6孔组织培养皿中(化合物1和化合物2的浓度是25微摩尔，单独或者与低剂量0.1pM的促性腺激素结合)。孔板在37℃、湿度100％和5.0％二氧化碳的培养器中培养48小时。在对cAMP特异的放射性免疫测定法(RIA)中分析条件培养液。实验结果以平均值±标准方差表示。参见图2，在次有效浓度的促性腺激素存在下，化合物1和2导致cAMP水平显著上升。
实施例2 PDE抑制剂化合物1在体内对卵泡成熟的影响用次佳剂量的FSH(1.08IU/大鼠/注射；1日2次，3天)结合或不结合给予化合物1(0.1、1、10和50毫克/千克/注射；1日2次，3天)，治疗未成熟雌性大鼠，使其产生成熟卵泡。注射单剂排卵剂量的hCG(20IU)，最后注射FSH。结合次佳剂量的FSH给予PDE抑制剂。所有注射均是皮下途径。给予hCG后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。实验结果以平均值±标准方差表示。参见图3，数据表示每一组所有大鼠输卵管内的平均卵母细胞数及排卵大鼠的排卵发生率。从图3还可以看到，PDE抑制剂(化合物1)为50毫克/千克时抑制(而不是刺激)排卵。这些结果证实，增加PDE剂量不能增大次佳剂量的FSH准备卵泡排卵的能力。
实施例3 PDE抑制剂化合物1在次有效剂量的hCG存在下在体内对排卵的影响用有效剂量的FSH(2.16IU/大鼠/注射；1日2次，2天)治疗未成熟雌性大鼠，使其产生成熟卵泡，注射单剂hCG诱导排卵。hCG的给予量是次有效剂量(3IU)，在最后注射FSH时结合或不结合单剂注射化合物1(50、10和1毫克/千克)。给予hCG后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。参见图4，注射单剂化合物1，与次排卵量的hCG共给予，诱导排卵。所有注射均是皮下途径。实验结果以平均值±标准方差表示。数据显示，非多肽cAMP水平调节剂，在此实施例是PDE抑制剂，在给予次佳剂量的hCG时能增强hCG诱导的排卵。图中示出化合物1(一种公知的PDE抑制剂)的影响。
实施例4 PDE抑制剂化合物1在次有效剂量的hCG存在或不存在下在体内对排卵的影响用FSH诱导卵泡成熟之后(2.16IU/大鼠/注射；1日2次，2天)，注射化合物1，结合或不结合次有效剂量的hCG。给予hCG/化合物1后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。数据表示每一组所有大鼠输卵管内的平均卵母细胞数及排卵大鼠的排卵发生率。参见图5，注射单剂化合物1，不给予次排卵剂量的hCG，诱导预先用FSH处理的大鼠排卵。实验结果以平均值±标准方差表示。本实施例数据显示，非多肽cAMP水平调节剂，在此实施例是PDE抑制剂即化合物1，在不注射任何hCG的情况下能诱导排卵。前面的实施例及本实施例均显示，用这些剂量的FSH制造的卵泡不能自然排卵，需要在后来的时间给予hCG。
实施例5 PDE抑制剂化合物2在次有效剂量的hCG存在或不存在下在体内对排卵的影响用FSH诱导卵泡成熟之后(2.16IU/大鼠/注射；1日2次，2天)，注射化合物2，结合或不结合次有效剂量的hCG。给予hCG/化合物2后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。数据表示每一组所有大鼠输卵管内的平均卵母细胞数及排卵大鼠的排卵发生率。实验结果以平均值±标准方差表示。参见图6，仅注射单剂化合物2，不给予次排卵剂量的hCG，诱导预先用FSH处理的大鼠排卵。本实施例数据显示，非多肽cAMP水平调节剂，在此实施例是PDE抑制剂即化合物2，在不注射任何hCG的情况下能诱导排卵。
实施例6 PDE抑制剂化合物2口服和皮下给予之后在体内对排卵的影响用FSH诱导卵泡成熟之后(2.16IU/大鼠/注射；1日2次，2天)，皮下注射(皮下组织)或者口服化合物2。给予化合物2后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。数据表示每一组所有大鼠输卵管内的平均卵母细胞数及排卵大鼠的排卵发生率。实验结果以平均值±标准方差表示。参见图7，经皮下或口服途径给予化合物2，诱导预先用FSH处理的大鼠排卵。本实施例数据显示，非多肽cAMP水平调节剂，在此实施例是PDE抑制剂即化合物2，当口服给予时能诱导排卵。
实施例7 PDE抑制剂化合物3口服和皮下给予之后在体内对排卵的影响用FSH诱导卵泡成熟之后(2.16IU/大鼠/注射；1日2次，2天)，皮下注射(皮下组织)或者口服化合物3。给予化合物3后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。数据表示每一组所有大鼠输卵管内的平均卵母细胞数及排卵大鼠的排卵发生率。实验结果以平均值±标准方差表示。参见图8，经皮下或口服途径给予化合物3，诱导预先用FSH处理的大鼠排卵。本实施例数据显示，非多肽cAMP水平调节剂，在此实施例是PDE抑制剂即化合物3，当口服给予时能诱导排卵。
实施例8 PDE抑制剂化合物4在次有效剂量的hCG存在或不存在下在体内对排卵的影响用FSH诱导卵泡成熟之后(2.16IU/大鼠/注射；1日2次，2天)，皮下注射化合物4，结合或不结合次有效剂量的hCG。给予hCG/化合物4后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。数据表示每一组所有大鼠输卵管内的平均卵母细胞数及排卵大鼠的排卵发生率。参见图9，注射单剂化合物4，并给予次排卵剂量的hCG，诱导预先用FSH处理的大鼠排卵。仅给予注射化合物4诱导少量或不诱导排卵。实验结果以平均值±标准方差表示。本实施例数据显示，非多肽cAMP水平调节剂，在此实施例是PDE抑制剂即化合物4，单独给予不足以诱导排卵，但在次有效剂量的hCG存在下能诱导排卵。
实施例9 PDE抑制剂化合物2对排卵和生育的影响用FSH(4.33IU/大鼠/注射；1日2次，2天)和怀孕母马的血清促性腺激素(PMSG)(1.5IU/大鼠/注射；1日2次，2天)诱导未成熟大鼠的卵泡成熟。以前已经发现，该组合能诱导卵泡成熟和促进交配行为，同时在不另外注射hCG的情况下可保持较低自然排卵率。接着，皮下给予化合物2(12只大鼠)或对照介质(12只大鼠)治疗FSH和PMSG诱导的大鼠。在一群大鼠(每种治疗6只大鼠)中，给予化合物2或对照介质后18小时计算输卵管内的卵母细胞，确定排卵情况。为了评估生育率，将另一群大鼠(每种治疗6只大鼠)各自与一只已确认有生育能力的成年雄性大鼠关在笼中一晚。第二天，取走雄性大鼠，将雌性大鼠按组别关在一起直至分娩。记录分娩时观察到的妊娠足月存活幼鼠数目。参见图10，注射单剂化合物2诱导预先用FSH和PMSG处理的大鼠排卵。另外，用化合物2治疗的大鼠分娩出的存活幼鼠数目较多。排卵和存活幼鼠的结果以平均值±标准方差表示。此实施例数据显示，非多肽cAMP水平调节剂，在此实施例是PDE抑制剂即化合物2，可诱导能够进行体内受精的卵母细胞排卵。
本发明并不限制于此处叙述的具体实施例的范围。事实上，除了此处叙述的实施例之外，本领域技术人员给合本说明书和附图还可以轻易对本发明作各种改变。这些改变属于所附权利要求书的范围之内。本申请引用的全部文献、专利和公开的专利申请的全文被纳入作为参考。
权利要求
1.一种诱导雌性宿主排卵的方法，其特征在于所述方法包括把非多肽环一磷酸腺苷(cAMP)水平调节剂给予所述宿主。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述非多肽cAMP水平调节剂是磷酸二酯酶抑制剂。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述磷酸二酯酶抑制剂是磷酸二酯酶4同种型的抑制剂。
4.一种诱导雌性宿主排卵的方法，其特征在于所述方法包括在所述宿主排卵周期的黄体期之前把非多肽cAMP水平调节剂给予所述宿主。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述非多肽cAMP水平调节剂是磷酸二酯酶抑制剂。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述磷酸二酯酶抑制剂是磷酸二酯酶4同种型的抑制剂。
7.一种刺激雌性宿主卵泡发育和排卵诱导的综合治疗方法，其特征在于所述方法包括在所述宿主排卵周期的卵泡期期间给予能增大所述宿主体内卵泡刺激素浓度的药剂，以及在所述宿主排卵周期的黄体期之前把非多肽cAMP水平调节剂给予所述宿主。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述药剂是卵泡刺激素。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述药剂是氯米芬。
10.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述药剂是选择性雌激素受体调节剂。
11.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述药剂是芳香酶抑制剂。
12.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述药剂是导致雌激素总体产生减少的相关类固醇生成酶抑制剂。
13.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述非多肽cAMP水平调节剂是磷酸二酯酶抑制剂。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于所述磷酸二酯酶抑制剂是磷酸二酯酶4同种型的抑制剂。
15.如权利要求7所述的方法，其特征在于在所述宿主排卵周期的黄体期之前还把黄体生成激素给予所述宿主诱导排卵。
16.如权利要求7所述的方法，其特征在于在所述宿主排卵周期的黄体期之前给予的黄体生成激素浓度与现有方案给予所述宿主以诱导排卵的浓度相比是降低的。
17.如权利要求7所述的方法，其特征在于在所述宿主排卵周期的黄体期之前还把绒毛膜促性腺激素给予所述宿主诱导排卵。
18.如权利要求7所述的方法，其特征在于在所述宿主排卵周期的黄体期之前给予的绒毛膜促性腺激素浓度与现有方案给予所述宿主以诱导排卵的浓度相比是降低的。
19.一种诱导雌性宿主排卵的方法，其特征在于所述方法包括在现有排卵诱导方案中给予所述宿主hCG或LH的时间点，把非多肽cAMP水平调节剂给予所述宿主。
20.如权利要求19所述的方法，其特征在于非多肽cAMP水平调节剂与hCG或LH共同给予。
21.如权利要求19所述的方法，其特征在于非多肽cAMP水平调节剂是单独给予的，不与hCG或LH共同给予。
22.一种非多肽cAMP水平调节剂，其特征在于它用作排卵诱导剂。
23.一种非多肽cAMP水平调节剂，其特征在于它在治疗排卵障碍中的应用。
24.一种含有非多肽cAMP水平调节剂的药物组合物，其特征在于所述组合物在治疗排卵障碍中的应用。
25.非多肽cAMP水平调节剂在治疗排卵障碍的药物组合物中的应用。
26.非多肽cAMP水平调节剂在制备用于治疗排卵障碍的药物中的应用。
27.一种采集体外受精的卵母细胞的方法，其特征在于所述方法包括给予非多肽cAMP水平调节剂。
28.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述磷酸二酯酶抑制剂选自由下列化合物组成的组咯利普兰、阿罗茶碱(Almirall药厂)、Ariflo(SmithKline Beecham)、Roflumilast(Byk Gulden)、登布茶碱(SmithKline Beecham)、RS-17597(Syntex)、SDZ-ISQ-844(Novartis)、4-[2，3-二(羟甲基)-6，7-二乙氧基萘基-1-(2-羟乙基)氢化吡啶-2-酮(T-440；TanabeSeiyaku)、3-[6-(2H-3，4，5，6-四氢吡喃-2-基氧基)-2-(3-噻吩基羰基)苯并[b]呋喃-3-基]丙酸甲酯(Bayer)、2-甲基-1-[2-(甲乙基)(8-氢化吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)]丙-1-酮(Ibudilast；Kyorin)、N-(3，5-二氯(4-吡啶基))(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)羧酰胺(RP 73401；Rhne-Poulenc Rorer)、(1E)-1-氮杂-2-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)丙-1-烯基氨基酸盐(PDA-641；American HomeProducts)、4-氰基-4-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)环己烷羧酸(SB207499；SmithKline Beecham)、西潘茶碱(Cipamfylline)(SmithKline Beecham)、5-[3-((2S)二环[2.2.1]庚-2-氧基)-4-甲氧基苯基]-1，3-diazaperhydroin-2-one(CP-80633；Pfizer)、1-(3-硝基苯基)-3-(3-吡啶基甲基)-1，3-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二酮(RS-25344；Syntex)、4-((1R)-1-苯基-2-(4-吡啶基)乙基)-2-环戊氧基-1-甲氧基苯(CDP-840；Celltech)、(3-{[(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)甲基]氨基}吡唑-4-基)甲-1-醇、Ro-20-1724(Roche Holding AG)、吡拉米司特(Piclamilast)、多索茶碱(Doxofylline)(Instituto Biologico ChemioterapicoABC SpA)、RPR-132294(Rhne-Poulenc Rorer)、RPR-117658A(Rhone-Poulenc Rorer)、L-787258(Merck Frosst Canada)、E-4021(Eisai Co.Ltd.)、GF-248(Glaxo Wellcome)、SKF-107806(SmithKline Beecham)、IPL-4088(Inflazyme Pharmaceuticals Ltd.)、{3-[(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)甲基]-8-(甲乙基)嘌呤-6-基}乙胺(V-11294A；Napp Research Centre Ltd.)、Atizoram(Pfizer)、5-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)吡啶-2-羧酰胺(CP-353164；Pfizer)、3-[2，4-二氧-3-苄基-1，3-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶基]苯甲酸甲酯(CP-77059；Pfizer)、CP-146523(Pfizer)、CP-293321(Pfizer)、CI-1044(Pfizer)、PD-189659(Pfizer)、CI-1018(Pfizer)、CP-220629(Pfizer)、1-(3-硝基苯基)-3-(4-吡啶基甲基)-1，3-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二酮(RS-25344-000；RocheBioscience)、Mesopram(Schering AG)、N-(2，5-二氯(3-吡啶基))(8-甲氧基(5-喹啉基))羧酰胺(D-4418；Chiroscience)、T-2585(Tanabe Seiyaku)、4-[4-甲氧基-3-(5-苯基戊氧基)苯基]-2-甲基苯甲酸、XT-044(HokurikuUniversity)、XT-611(Kanzawa University)、WAY-126120(Wyeth-AyerstPharmaceuticals Inc.)、1-氮杂-10-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)-7，8-二甲基-3-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-2-酮(WAY-122331；Wyeth-Ayerst PharmaceuticalsInc.)、[(3S)-3-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基-5-氧吡唑烷基]-N-(3-吡啶基甲基)羧酰胺(WAY-127093B；Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.)、PDB-093(Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.)、3-(1，3-二氧苯并[c]唑啉-2-基)-3-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)丙酰胺(CDC-801；Celgene Corp.)、CC-7085(Celgene Corp.)、CDC-998(Celgene Corp.)、NCS-613(CNRS)、CH-3697(Chiroscience)、CH-3442(Chiroscience)、CH-2874(Chiroscience)、CH-4139(Chiroscience)、RPR-114597(Rhone-Poulenc Rorer)、RPR-122818(Rhne-Poulenc Rorer)、(7aS，7R)-7-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)-7a-甲基-2，5，6，7，7a-五氢-2-氮杂吡咯嗪-3-酮、GW-3600(Glaxo-Wellcome)、KF-19514(KyowaHakko Kogyo Co Ltd.)、CH-422(Celltech Group)、CH-673(CelltechGroup)、CH-928(Celltech Group)、D-22888(Asta Medica)、AWD-12-232(Asta Medica)、YM-58997(Yamanouchi)、IC-485(ICOS Corp.)、KW-4490(Kyowa Hakko Kogyo Co.Ltd.)、YM-976(Yamanouchi)、Sch-351591(Celltech Group)、AWD-12-343(Asta Medica)、N-(3，5-二氯(4-吡啶基))-2-{1-[(4-氟苯基)甲基]-5-羟基吲哚-3-基}-2-氧乙酰胺(AWD-12-281；AstaMedica)、异丁司特(Ibudilast)(Kyorin Pharmaceutical Co.Ltd.)、Cilomilast(SmithKline Beecham)、BAY-19-8004(Bayer)、3-{2-[(4-氯苯基)羰基]-6-羟基苷并[b]呋喃-3-基}丙酸甲酯、5-甲基-4-[(4-甲基硫苯基)羰基]-4-咪唑啉-2-酮、5，6-二乙氧基苯并[b]噻吩-2-羧酸(Tibenelast)以及4-(3-溴苯基)-1-乙基-7-甲基氢化吡啶并[2，3-b]吡啶-2-酮(YM-58897；Yamanouchi)。
29.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述磷酸二酯酶抑制剂选自由下列化合物组成的组茶碱、异丁基甲基黄嘌呤、AH-21-132、Org-30029(Organon)、Org-20241(Organon)、Org-9731(Organon)、扎达维林(Zardaverine)、长春西汀(vinpocetine)、EHNA(MEP-1)、咪利酮(Milrinone)、氰胍佐旦(Siguazodan)、扎普司特(Zaprinast)、SK+F 96231、托拉芬群(Tolafentrine)(Byk Gulden)、非明司特(Filaminast)(Wyeth-Ayerst药厂)。
30.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述磷酸二酯酶抑制剂选自由下列化合物组成的组顺-4-氰基-4-(3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯基)环己烷-1-羧酸、3-(环戊氧基)-N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-4-甲氧基苯甲酰胺、2-(4-(6，7-二乙氧基-2，3-二(羟甲基)萘-1-基)吡啶-2-基)-4-(3-吡啶基)pthalazin-1(2H)-酮盐酸盐、7-苄氨基-6-氯-2-哌嗪并-4-吡咯烷蝶啶。
全文摘要
本发明涉及诱导雌性宿主排卵的方法，所述方法包括把非多肽环一磷酸腺苷(cAMP)水平调节剂给予该雌性宿主。本发明另一方面提出在宿主排卵周期的黄体期之前特异性给予磷酸二酯酶抑制剂。优选的非多肽cAMP水平调节剂包括磷酸二酯酶抑制剂，特别是磷酸二酯酶4同种型的抑制剂。
文档编号A61K31/00GK1582146SQ01823951
公开日2005年2月16日 申请日期2001年12月14日 优先权日2001年12月14日
发明者S·帕尔玛, M·泰珀, S·麦克肯纳, M·C·麦克纳米, A·艾斯克尔 申请人:应用研究系统Ars股份公司