治疗女性性功能障碍和鉴定可用于治疗女性性功能障碍的化合物的方法

专利名称：治疗女性性功能障碍和鉴定可用于治疗女性性功能障碍的化合物的方法
技术领域：
本发明提供了治疗与女性性功能障碍有关的各种疾病、病症和情况的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素(melanocortin)受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。任选地，本发明的上述方法还包括黑皮质素受体激动剂。任选地，上述方法还可与可用于治疗女性性功能障碍的其它化合物例如雌激素激动剂/拮抗剂、可以升高环鸟苷3’，5’-一磷酸水平的化合物以及选择性地含有孕激素的雌激素联合使用。本发明还涉及药物组合物以及含有该组合物的药盒。
本发明还提供了鉴定可用于治疗女性性功能障碍的化合物的方法，该方法包括如下步骤1)测定化合物是否可以影响刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合；2)测定化合物是否可以影响α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合；和3)选择可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
背景技术：
已证实刺鼠相关蛋白是一种有效的、选择性的melancortin-3(MCR-3)和黑皮质素-4(MCR-4)受体的内源性拮抗剂，它与性功能(在男性中的Melanotan II数据)和体重调节有关。还证实了人类AGRP在转基因小鼠中的遍在表达会导致肥胖。相反，α-黑素细胞刺激激素(α-MSH)会减少进食并且是MCR-4和MCR-3的内源性激动剂。此外，合成的MCR3/MCR4激动剂MTII在人类中是有效的导致勃起的物质(参见，例如，H.Wessells等，“α-黑素细胞刺激激素类似物在患有器质性勃起功能障碍的男性中对阴茎勃起和性欲的影响”，Urology，56641-646(2000))。据信α-MSH(以及MTII)和AGRP在黑皮质素-4受体上的结合位点是不同的，但可能有部分重叠。还进行了鉴定选择性的人melanocrtin-3受体的其它研究(参见，例如，P.Grieco等，“γ-黑素细胞-刺激激素的D-氨基酸扫描Trp8对人MC3受体选择性的重要性”，J.Med.Chem.，43(26)，4998-5002(2000))。此外，2001年1月16日申请的美国非临时专利申请序列号09/761,320(也以EP1125579公开)公开了治疗肥胖和鉴定可用于治疗肥胖的化合物的方法。
在一个实施方案中，本发明提供了鉴定可用于治疗女性性功能障碍的化合物的方法，该化合物选自可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
女性性功能障碍(FSD)包括许多种类的疾病、情况和病症。例如，FSD包括例如如下疾病、情况和病症性欲低下、性快感缺乏、交媾困难、性唤起障碍和阴道痉挛。
女性正常的性功能取决于性反应周期，该周期由先行的精神定向(性冲动状态或性欲状态)、有效的血管充血唤起(肿胀和润滑)、性高潮和消退组成。在女性中，性高潮伴随着阴道外三分之一肌肉的收缩(并不总能感觉到这样)。经常会出现广泛的肌肉紧张、会阴收缩以及不自觉的骨盆推进(每0.8秒一次)。高潮过后是消退，一种全身性的愉快、幸福的感觉以及肌肉的松弛。在该阶段，女性几乎可以立即对另外的刺激产生反应。(一般性的综述可以参见C.M.Meston等，“性功能的神经生物学”，Arch.Gen.Psychiatry(2000)，57(11)，1012-1030)。
性反应周期受到交感和副交感神经系统之间精细、平衡的相互作用的调节。血管充血主要受副交感神经(胆碱能的)外流的调节；性高潮主要由交感神经(肾上腺素能的)调节。这些反应很容易被皮层的影响或受损的激素、神经或血管机制而抑制。性反应障碍可能涉及周期的一个或多个阶段。通常，性欲、唤起和愉快的主观成分以及性行为、血管充血和性高潮的客观成分均出现障碍，尽管受得影响可能不同。性功能障碍可能是终身的(从未有过有效的性行为，通常是由于内心的矛盾引起的)或后天的(在经过一段正常的功能后)；普遍的或是仅限于特定的情况或特定的伴侣；并且可以是完全的或部分的。
性欲低下是一种性幻想和对性活动的欲望的持续或反复的减弱或缺乏的病症，会引起明显的痛苦或与人交往的困难。性欲低下可以是终身的或后天的、普遍的或处境性的(伴侣特异性的)。性欲是一个基于大脑活动(以可变的周期的方式运行的“发生器”或“传动器”)的复杂的身心过程，是一种不很确定的激素环境和认知描述，包括性渴望和冲动。这些成分的不协调导致了性欲低下。
性欲低下的后天形式通常是由于在长期相处中的厌烦或不快乐、抑郁(其通常导致对性的兴趣降低，引起男性的阳痿或抑制女性的兴奋)、对酒精或精神药物的依赖、处方药物(例如，抗高血压的药物、抗抑郁药)的副作用和激素的缺乏所引起的。该病症可继发于性反应周期的性唤起或性高潮期的受损的性功能。
性欲低下的症状和迹象包括患者主诉对性缺乏兴趣，即使是在通常的性爱情境下。该病症通常伴随着性活动很少，经常会引起严重的婚姻冲突。某些患者的性交非常频繁以取悦其伴侣并且在性交时也没有困难，但却持续地性冷淡。当厌烦是起因时，与平常的伴侣的性交频率减少，但对其他人的性欲可能是正常的甚至很强(处境形的)。
临床上显著的性功能障碍会引起个体的抑郁或与人交往的问题，并且通常完全可以通过身体障碍的直接的生理学影响进行解释。由于身体障碍引起的性功能障碍通常是普遍的(对具体的伴侣或处境没有特异性)。当来自患者病史、身体检查或实验室评估的证据可以在生理学上解释功能障碍并且能够排除可以更好地对其进行解释的精神障碍时，可以作出诊断。身体障碍的消退通常可以导致性功能障碍的消退或改善。当性功能障碍的起因是生理和心理因素的组合时，适当的诊断是由于组合的因素引起的性功能障碍。
性快感缺乏(在性活动中快感降低或缺乏)不是一种正式的诊断。它通常划分在性欲低下的类型下，因为快感的丧失通常会引起性欲的丧失(虽然性欲的丧失可能首先出现)。如果快感缺乏是后天的和普遍的(与所有的伴侣在所有的处境下)，其起因可能是抑郁或药物；如果快感缺乏仅限于一个伴侣或一种处境，其起因可能是人与人之间的因素；或者当快感缺乏是终身的时，其起因可能是由于家族性的功能障碍或儿童期的创伤所引起的压抑的因素(例如，内疚、羞耻)。在终身的情况下，可能的诊断是性厌恶。
性唤起障碍是持续的或反复的无法达到或维持性兴奋的润滑-肿胀反应直至性活动结束。尽管性刺激足够的集中、强烈和持久，该障碍仍然会出现。该病症可能是终身的，或者更常见的是，后天的并且仅限于某个伴侣。患者的主诉通常涉及缺乏性高潮，但也有些妇女称缺乏兴奋感。
虽然妇女在其一生中都可以达到性高潮，但由于伴侣的相对缺乏和未经治疗的生理学改变(例如，阴道粘膜的萎缩，它会引起干涩和性交疼痛)，60岁以后的性活动通常会减少。
在阴道和阴蒂以及其它性器官发生生理学的变化以前，女性性唤起的性反应期很难与性欲期相区分。性兴奋和性快感伴随着血管和神经肌肉的活动，导致阴蒂、阴唇和阴道壁的充血，阴道润滑的增加和阴道腔的扩张(参见，例如，Levin，R.J.，Clin.Obstet.Gynecol.，19807；213-252；Ottesen，B.，Gerstenberg，T.，Ulrichsen，H.等，Eur.J.Clin.Invest.，198313；321-324；Levin，R.J.，Exp.Clin.Endocrinol.，199198；61-69；Levin，R.J.，Ann.Rev.SexRes.，19923；1-48；Masters，W.H.，Johnson，V.E.Human SexualResponse.Little，BrownBoston，1996；Berman，J.R.，Berman，L.& Goldstein，L.，Urology，199954；38-391)。
阴道充血能够产生渗出物，该过程与阴道润滑的增加有关。渗出使血浆能够通过上皮流出并流到阴道表面上，其驱动力是性唤起状态时阴道毛细血管床内血流的增加。此外，充血还可以导致阴道长度和阴道腔直径的增加，特别在阴道的外2/3处。阴道腔的扩张是由于阴道壁平滑肌的松弛和骨盆底肌肉的骨骼肌松弛的共同作用引起的。某些性交疼痛障碍例如阴道痉挛被认为至少部分是由于松弛的不充分阻碍了阴道的扩张；仍需确定是否这主要是平滑肌或骨骼肌的问题(参见，例如，Masters，W.H.，Johnson，V.E.Human Sexual Response.Little，BrownBoston，1996；Berman，J.R.，Berman，L.&Goldstein，L.，Urology，199954；385-391)。
FSD的分类最好是通过将它们与正常女性的性反应阶段性欲、性唤起和性高潮相对照来定义。性欲或性冲动是性表达的驱动力。它的表现通常包括当与感兴趣的伴侣在一起时或者当接触到其它色情刺激时的性想法。性唤起是血管对性刺激的反应，是阴道润滑和阴道伸长的重要部分。性高潮是在性唤起过程中达到高潮的性紧张的释放。
因此，当妇女在性欲、性唤起或性高潮的任一阶段有不充分或不满意的反应时，便会发生FSD。FSD的类型包括，例如，性欲低下，性唤起障碍、性高潮障碍和性交疼痛障碍。
如果一个妇女没有或很少有性欲并且没有或者很少有性想法或性幻想，则该妇女可能存在性欲低下。这种FSD可由睾酮水平低所引起，这是由于自然绝经或手术造成的绝经引起的。其它原因包括疾病、药物、疲劳、抑郁和焦虑。
性唤起障碍(FSAD)的特点是生殖器对性刺激的反应不充分。生殖器不经历正常性唤起特征性的充血。阴道壁的润滑很差，从而出现性交疼痛。性高潮可能会受到妨碍。性唤起障碍可由绝经期、生育孩子后和哺乳期的雌激素减少所引起，也可由与血管成分有关的疾病例如糖尿病和动脉粥样硬化所引起。其它原因是由于用利尿药、抗组胺药、抗抑郁药例如SSRI或抗高血压药治疗所引起的。
性交疼痛障碍(包括交媾困难和阴道痉挛)的特点是由于插入引起的疼痛，它可由减少润滑的药物、子宫内膜异位、骨盆炎性疾病、炎性肠疾病或尿道问题所引起。
交媾困难是疼痛的性交或未成功的性交。交媾困难通常是在进入时，但也可以发生在性交前、性交过程这和性交之后。将原因包括绝经退化以及粘膜的干涩和变薄。主要的主诉是性交过程中或性交后的疼痛。
FSD的流行情况难以确定，这是因为该术语包括数种类型的问题，某些问题难以衡量并且也是因为最近才对FSD的治疗产生兴趣。许多妇女的性问题与女性的衰老过程直接相关或者与慢性疾病例如糖尿病或高血压有关。
对FSD的发病率和流行情况有各种各样的报道，一部分使用不同的评价标准来解释，但大部分研究人员报道有相当比例的健康妇女有一种或多种FSD亚型的症状。例如，比较配偶间性功能障碍的研究表明63％的妇女有性唤起或性高潮障碍而40％的男性有勃起或射精障碍(参见，例如，Frank，E.，Anderson，C.&Rubinstein，D.，N.Engl.J.Med.，11229；111-115)。但是，女性性唤起障碍的流行情况在不同的调查中有明显差别。在最近的国家健康和社会生活调查(National Health and Social Life Survey)中报道19％的妇女有润滑困难而在临床妇科门诊中报道有14％的妇女有类似的润滑困难(Rosen，R.，Taylor，J.，Leiblum，S.等，J.Sex Marital Ther.，199319；171-188)。
许多研究报道了在糖尿病的妇女中存在性唤起功能障碍(高大47％)，包括阴道润滑的降低(Wincze，J.P.，Albert，A.& Bansal，S.，Arch.Sex Behav.，199322；587-601)。在神经病和性功能障碍之间没有联系。许多研究还表明总体上有11-48％的妇女可随着年龄的增长而性欲降低。类似地，报道有11-50％的妇女有性唤起和润滑的问题，所以有性交疼痛的经历。阴道痉挛较少见，大约有1％的妇女受其影响。对有性经历的妇女的研究表明5-10％有原发性的性快感缺失。另外10％偶尔有性高潮并且还有10％经历不协调的性高潮(Spector，I.P.&Carey，M.P.，Arch.Sex.Behav.，199019；389-408)。
FSAD是非常普遍地影响绝经前、绝经期间和绝经后(±HRT)妇女的性功能障碍。其伴随有例如抑郁、心血管疾病、糖尿病UG障碍等伴发的疾病。FSAD的第一个后果是缺乏充血/肿胀、缺少润滑和缺少愉快的生殖器感觉。FSAD的第二个后果是性欲降低、性交疼痛和难以达到性高潮。最近有人提出假设，至少一部分具有FSAD症状的患者是由于心血管方面的原因(Goldstein，L.& Berman，J.R.，Int.J.Impot.Res.，199810；S84-S90)，并且动物数据支持该观点(Park，K.，Goldstein，I.，Andry，C.等，Int.J.Impotence Res.，19979；27-37)。
根据本文中的教导，本发明所鉴定的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物可用于治疗女性性功能障碍。
雌激素对男性和女性的血管系统均有深刻的影响，尽管给药雌激素会伴随着一些可能是不希望的其它作用。雌激素可以增加血管扩张并抑制血管对损伤的反应以及动脉粥样硬化的进展。雌激素诱导的血管扩张在雌激素给药5至20分钟后出现并且不依赖于基因表达的改变；雌激素的这一作用有时称为“非基因组的”。雌激素诱导的抑制对血管损伤的反应和雌激素对动脉粥样硬化的预防作用在用雌激素治疗数小时或数天内出现并且依赖于血管组织中基因表达的改变；这些作用有时称为“基因组的”。
有两种雌激素受体，雌激素受体α和雌激素受体β，这两种受体均是甾族激素受体超家族的成员(Walter P.等，Proc Nad Acad Sci USA1985；827889-93；Ku iper G.G.J.M.等，Proc Nad Acad Sci USA1996；935925-30)。雌激素受体α和β具有相当的同源性，并且，象所有的甾族激素受体一样，当其被激活时是改变基因表达的转录因子(WalterP.等，Proc Nad Acad Sci USA1985；827889-93；Kuiper G.G.J.M.等，Proc Nad Acad Sci USA1996；935925-30；Shibata H.等，RecentProg Horm Res1997；52141-5；EVans R.M.，Science1988；240889-95；Brown M.，Hematol Oncol Clin North Am1994；8101-12)。血管是复杂的结构，具有含有平滑肌细胞的血管壁和内皮细胞内层。血管内皮和平滑肌细胞以高亲和性与雌激素结合(Mendelsohn M.E.等，Curr Opin Cardiol1994；9619-26；Farhat M.Y.等，FASEB J1996；10615-24)，并且在女性和男性的两种类型的血管细胞(Karas R.H.等，Circulation1994；891943-50；Losordo D.W.等，Circulation1994；891501-10；Venkov C.D.等，Circulation 1996；94727-33；Kim-Schulze S.等，Circulation1996；941402-7；Caulin-GlaserT.等，J Clin Invest1996；9836-42)以及心肌细胞(Grohe C.等，FEBS Lett1997；416107-12)中均发现了雌激素受体α。
雌激素受体α可以激活血管平滑肌和内皮细胞中的特定的靶基因(Karas R.H.等，Circulation1994891943-50，Venkov C.D.等，Circulation1996；94727-33；Kim-Schulze S.等，Circulation1996；941402-7；Caulin-Glaser T.等，J Clin Invest1996；9836-42；Koike H.等，J Vasc Sura1996；23477-82)。雌激素受体β在结构和功能上与雌激素受体α不同。功能性的雌激素受体β还存在于心肌细胞中，其在该细胞中调节一氧化氮合酶的表达。
在绝经前的妇女中，由卵巢生产的17β-雌二醇是主要的循环雌激素。血清雌二醇的浓度在青春前期的女孩中较低并在月经初潮时增加。在女性中，其范围从卵泡期的约100pg每毫升(367pmol每升)至排卵时的约600pg每毫升(2200pmol每升)。在怀孕期间，其浓度可以上升至接近20,000pg每毫升(70,000pmol每升)。绝经后，血清雌二醇的浓度下降至接近或低于同龄男性的值(5至20pg每毫升[18至74pmol每升])(Yen，S.S.C.和Jaffe，R.B.编，ReproductiveEndocrinologyPhysiology，Pathophysiology and ClinicalManagement，第3版，PhiladelphiaW.B.Saunders，1991)。
虽然雌激素的作用可以提供血管方面的益处并可在绝经后的妇女中预防和逆转阴道萎缩，但单独给药雌激素可能会产生有害的作用。例如，乳腺癌是一种激素依赖性的疾病。卵巢无功能并且从未接受过雌激素替代疗法的妇女不会出现乳腺癌。该疾病女性与男性的比例为150比1。大量的发现表明，激素在该疾病中起促进剂的重要作用。对于大部分上皮的恶性肿瘤，发病率和年龄的对数-对数曲线表明随着生命中的每一年直线增加。关于乳腺癌的类似曲线显示了同样的直线增加，但斜率从绝经的年龄开始下降。在女性生命中，对乳腺癌的发病率有重要影响的三个日期是月经初潮的年龄、第一次全程妊娠的年龄以及绝经的年龄。在16岁时经历月经初潮的女性在其一生中发生乳腺癌的危险性仅为在12岁时经历月经初潮的女性的50％至60％。同样，在中年(52岁)的10年前出现绝经，无论是自然的还是手术引起的，均可使一生中发生乳腺癌的危险性降低约35％。与未生育过的女性相比，在18岁时有过第一次全程妊娠的女性有30％至40％乳腺癌的危险性。因此，月经生命的长度-特别是在第一次全程妊娠之前的那部分-是乳腺癌的全部危险因素的重要部分。该因素可以解释在不同国家乳腺癌的频率相差70％至80％。
国际间的差异对于激素的致癌作用提供了最为重要的线索。在北美，活到80岁的妇女发生侵入性乳腺癌的机会为1/9。亚洲的妇女发生乳腺癌的危险性为北美或西欧妇女的1/5至1/10。亚洲妇女具有明显低的雌激素和孕酮浓度。这些差异不能在遗传的基础上进行解释，因为生活在西方环境中的亚洲妇女的危险性与西方的妇女相同。这些妇女在其身高和体重上也与生活在亚洲的亚洲妇女有明显差异；身高和体重是月经初潮年龄的决定性的调节剂，并且对血浆的雌激素浓度有实质性的影响(Lippman，M.E.，Breast Cancer，第91章，Harrison’s Principles of Internal Medicine，第14版，1998)。因此，虽然雌激素具有维持健康的有益作用，但给药雌激素也会引起对个体健康的不利影响，例如乳腺癌的危险性增加。
在美国，绝经在平均年龄50至51岁时自然发生。随着卵巢的老化，对垂体促性腺激素(卵泡刺激激素[FSH]和黄体化激素[LH])的应答降低，开始引起更短的卵泡期(从而使月经周期更短)、排卵更少、孕酮的生产减少以及周期的更加不规则。最后，卵泡将无法应答并且不能生产雌激素。过渡期在绝经前开始，女性在该期间告别生育阶段。其被称为更年期或绝经期间，但也有许多人将其称为绝经期。
过早绝经是指在40岁以前发生的不明原因的卵巢衰竭。它可能与吸烟、在高海拔下生活或营养状况差有关。人工绝经可能由卵巢切除术、化疗、对骨盆的辐射或任何其它可以损伤卵巢血液供给的处置所引起。
本发明所确定的化合物可用于治疗女性性功能障碍。这些化合物可以单独给药或与其它用于治疗女性性功能障碍的物质例如雌激素激动剂/拮抗剂联合给药，以下将进行进一步的描述。
此外，为了对患有性功能障碍的女性进行治疗，可将本发明所确定的化合物单独给药或与可以升高环鸟苷3’，5’-一磷酸(cGMP)水平的物质联合给药。可以升高cGMP水平的物质是公知的，并且可以通过多种机制起作用。其中的一个例子是可以选择性地抑制主要参与cGMP破坏的酶例如cGMP依赖性的磷酸二酯酶的物质。
具体地讲，环鸟苷3’，5’-一磷酸磷酸二酯酶(cGMP PDE)抑制剂是广为人知的用于治疗心绞痛、高血压和充血性心衰等病症的心血管药物。最近发现，可以抑制V型磷酸二酯酶(cGMP PDEv)的cGMP PDE抑制剂可有效地治疗男性勃起功能障碍，重要的是通过口服给药。参见，例如PCT/EP94/01580，以WO 94/28902公开，其指定了美国。
附图概述

图1是PPTN和17β-雌二醇对人雌激素受体的对数线性竞争结合曲线。X轴表示放射性标记的雌激素与受体结合的百分比。Y轴表示加入的配体的摩尔浓度。数值是平均值±SEM。
发明概述本发明提供了治疗女性性功能障碍的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
本发明还提供了治疗女性性功能障碍的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者联合施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和黑皮质素受体激动剂化合物。
在治疗女性性功能障碍的方法的一个优选实施方案中，女性性功能障碍不是性欲低下、性快感缺乏或交媾困难。
本发明提供了在女性患者中治疗性唤起障碍的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
本发明提供了在女性患者中治疗阴道痉挛的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
本发明提供了在女性患者中增加性高潮的频率或强度的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
本发明提供了在女性患者中增强性欲、优选强于正常值的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
在本发明方法的一个优选的实施方案中，黑皮质素受体是黑皮质素-3和/或4受体。
在本发明方法的一个更优选的实施方案中，黑皮质素受体是黑皮质素-4受体。
本发明的另一方面提供了上述的方法，该方法包括施用上述化合物并共同施用治疗有效量的雌激素激动剂/拮抗剂。
本发明的另一方面提供了上述的方法，该方法包括施用上述化合物并共同施用治疗有效量可以升高3’，5’-一磷酸水平的物质。
在本发明的一个优选实施方案中，患者是女性患者。例如，女性患者可以是绝经后的女性个体。
本发明的另一方面提供了上述的方法，该方法包括施用上述化合物并共同施用治疗有效量的选择性地含有孕激素的雌激素。
本发明的另一方面提供了上述的方法，该方法包括施用上述化合物并共同施用治疗有效量的选自下列的化合物前列腺素；阿朴吗啡；催产素调节剂；α-2肾上腺素拮抗剂；雄激素；选择性的雄激素受体调节剂(SARM)；丁氨苯丙酮；血管活性肠肽(VIP)；中性内肽酶抑制剂(NEP)；和神经肽Y受体拮抗剂(NPY)。
本发明还提供了鉴定可用于治疗女性性功能障碍的化合物的方法，该方法包括如下步骤1)测定化合物是否可以影响刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合；2)测定化合物是否可以影响α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合；和3)选择可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
在鉴定化合物的方法的一个优选实施方案中，测定化合物是否可以影响刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合是用竞争性的结合试验完成的。
在鉴定化合物的方法的一个优选实施方案中，测定化合物是否可以影响α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合是用竞争性的结合试验完成的。
在鉴定化合物的方法的一个更优选的实施方案中，测定化合物是否可以影响刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合是用竞争性的结合试验完成的，并且测定化合物是否可以影响α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合是用竞争性的结合试验完成的。
在鉴定化合物的方法的一个优选实施方案中，黑皮质素受体是黑皮质素-3和/或黑皮质素-4受体。
在鉴定化合物的方法的一个更优选的实施方案中，黑皮质素受体是黑皮质素-4受体。
本发明还提供了用于治疗女性性功能障碍的药物组合物，该组合物含有可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
本发明还提供了用于治疗女性性功能障碍的药物组合物，该组合物含有1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和2)黑皮质素受体激动剂化合物。
本发明还提供了含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物，该化合物可用于治疗女性性功能障碍；2)黑皮质素受体激动剂化合物；和3)用于治疗女性性功能障碍的第二种化合物。
本发明还提供了含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物，该化合物可用于治疗女性性功能障碍；和2)用于治疗女性性功能障碍的第二种化合物。
本发明还提供了用于治疗女性性功能障碍的药盒，该药盒含有a)含有可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物的第一种药物组合物；b)含有用于治疗女性性功能障碍的第二种化合物的第二种药物组合物；和c)用于包含第一种和第二种组合物的容器。
另一方面，本发明提供了用于由消费者、优选绝经后的女性使用来治疗女性性功能障碍的药盒。该药盒含有a)含有可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和可药用载体、赋形剂或稀释剂的第一种药物组合物；和，选择性的，b)含有雌激素激动剂/拮抗剂和可药用载体、赋形剂或稀释剂的第二种药物组合物；和，选择性的，c)描述使用药物组合物来治疗女性性功能障碍的方法的说明。当药盒含有本发明的化合物和雌激素激动剂/拮抗剂时，还可选择性地将它们合并在同一药物组合物中。
另外的药盒含有a)含有可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和可药用载体、赋形剂或稀释剂的第一种药物组合物；和，选择性的，b)含有可以升高cGMP水平的物质和可药用载体、赋形剂或稀释剂的第二种药物组合物；和，选择性的，c)描述使用药物组合物来治疗女性性功能障碍的方法的说明。当药盒含有本发明的化合物和可以升高cGMP水平的物质时，还可选择性地将它们合并在同一药物组合物中。
本发明还提供了如下药物组合物和药盒，例如含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物，和2)雌激素激动剂/拮抗剂或其可药用盐。
含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物；2)黑皮质素受体激动剂化合物；和3)雌激素激动剂/拮抗剂或其可药用盐。
在这些组合物的一个优选的实施方案中，所述雌激素激动剂/拮抗剂是(-)-顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇或其光学或几何异构体；可药用盐、N-氧化物、酯、季铵盐或其前药。更优选所述的雌激素激动剂/拮抗剂是D-酒石酸盐的形式。
在这些组合物的一个优选的实施方案中，所述雌激素激动剂/拮抗剂选自他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、苯并二氢吡喃、艾多昔芬、6-(4-羟基-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基]-萘-2-醇、{4-[2-(2-氮杂-双环[2.2.1]庚-2-基)-乙氧基]-苯基}-[6-羟基-2-(4-羟基-苯基)-苯并[b]噻吩-3-基]-甲酮、EM-652、EM-800、GW5638、GW7604、TSE-424及其光学或几何异构体；及其可药用盐、N-氧化物、酯、季铵盐和前药。
用于治疗女性性功能障碍的药物组合物，其含有1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和2)选自可以升高环鸟苷3’，5’-一磷酸水平的物质的化合物。在该组合物的一个优选的实施方案中，所述可以升高环鸟苷3’，5’-一磷酸水平的物质是PDEv磷酸二酯酶抑制剂。在一个更优选的实施方案中，所述PDEv磷酸二酯酶抑制剂是1-[[3-(6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基)4-乙氧基-苯基]磺酰基]-4-甲基哌嗪柠檬酸盐。
含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和2)选择性地含有孕激素的雌激素。在所述组合物的一个优选的实施方案中，雌激素是Premarin。
含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和2)选自下列的化合物前列腺素；阿朴吗啡；催产素调节剂；α-2肾上腺素拮抗剂；雄激素；选择性的雄激素受体调节剂(SARM)；丁氨苯丙酮；血管活性肠肽(VIP)；中性内肽酶抑制剂(NEP)；和神经肽Y受体拮抗剂(NPY)。
用于治疗女性性功能障碍的药物组合物，其含有1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物；2)黑皮质素受体激动剂化合物；3)选自可以升高环鸟苷3’，5’-一磷酸水平的物质的化合物。在一个优选实施方案中，所述可以升高环鸟苷3’，5’-一磷酸水平的物质是PDEv磷酸二酯酶抑制剂。在一个更优选的实施方案中，所述PDEv磷酸二酯酶抑制剂是1-[[3-(6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基)4-乙氧基-苯基]磺酰基]-4-甲基哌嗪柠檬酸盐。
含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物；2)黑皮质素受体激动剂化合物；和3)选择性地含有孕激素的雌激素。在一个优选实施方案中，雌激素是Premarin。
含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物；2)黑皮质素受体激动剂化合物；和3)选自下列的化合物前列腺素；阿朴吗啡；催产素调节剂；α-2肾上腺素拮抗剂；雄激素；选择性的雄激素受体调节剂(SARM)；丁氨苯丙酮；血管活性肠肽(VIP)；中性内肽酶抑制剂(NEP)；和神经肽Y受体拮抗剂(NPY)。
含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物，该化合物可用于治疗性唤起障碍、治疗阴道痉挛、增强性欲强于正常情况或增加性高潮的频率或强度；2)黑皮质素受体激动剂化合物；和3)用于治疗性唤起障碍、治疗阴道痉挛、增强性欲强于正常情况或增加性高潮的频率或强度的第二种化合物。
含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物，该化合物可用于治疗性唤起障碍、治疗阴道痉挛、增强性欲强于正常情况或增加性高潮的频率或强度；和2)用于治疗性唤起障碍、治疗阴道痉挛、增强性欲强于正常情况或增加性高潮的频率或强度的第二种化合物。
用于治疗性唤起障碍、治疗阴道痉挛、增强性欲强于正常情况或增加性高潮的频率或强度的药盒，其含有a)含有可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物的第一种药物组合物；b)含有用于治疗性唤起障碍、治疗阴道痉挛、增强性欲强于正常情况或增加性高潮的频率或强度的第二种化合物的第二种药物组合物；c)用于包含第一种和第二种组合物的容器。
发明详述本发明提供了治疗女性性功能障碍的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。优选该受体是黑皮质素-3和/或黑皮质素-4受体。更优选该受体是黑皮质素-4受体。
本发明还提供了鉴定可用于治疗女性性功能障碍的化合物的方法，该方法包括如下步骤1)测定化合物是否可以影响刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合；2)测定化合物是否可以影响α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合；和3)选择可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。在该方法的一个优选实施方案中，黑皮质素受体是黑皮质素-3和/或黑皮质素-4受体。更优选该受体是黑皮质素-4受体。
术语“治疗有效量”是指可以改善、减弱或消除具体疾病或病症的一种或多种症状或预防或延迟具体疾病或病症的一种或多种症状发作的化合物或化合物的联合形式的量。
术语“患者”是指动物，例如狗、猫、牛、马、羊、鹅和人。特别优选的患者是哺乳动物，包括雄性和雌性。
术语“可药用的”是指物质或组合物必需能够与制剂的其它成分相容并且对患者无害。
术语“绝经后的妇女”不仅包括已经经过了绝经期的老龄妇女，而且还包括进行了子宫切除或由于其它原因抑制了雌激素的生产的妇女，例如长期服用皮质类固醇、患有Cushions综合征或生殖腺发育不全的妇女。
关于抑制AGRP或α-MSH结合的术语“减弱”是指化合物可以阻止AGRP或α-MSH与黑皮质素受体的结合或降低AGRP与黑皮质素受体的结合亲和性。在减弱AGRP结合的情况下，优选所试验的化合物可以抑制25％的AGRP结合。更优选化合物可以抑制50％、首选大于75％AGRP与黑皮质素受体的结合。类似地，关于α-MSH与黑皮质素受体的结合，优选的化合物阻断不超过50％的α-MSH结合。更优选化合物阻断不超过25％的α-MSH结合。在更优选的实施方案中，所测试的化合物可以阻断大于75％的AGRP结合并阻断小于25％的α-MSH结合。结合的抑制百分比很容易由本领域技术人员通过竞争和其它抑制试验根据本说明书的描述进行测定。阻断可以是竞争性的、非竞争性的或它们的组合。在一个优选实施方案中，结合的减弱是针对MCR-3和/或MCR-4测定的，更优选MCR-4。
术语“反应惰性溶剂”或“惰性溶剂”是指不会与原料、试剂、中间体或产物以对所需产物有不利影响的方式相互作用的溶剂或溶剂的混合物。
术语“治疗”包括预治(例如预防性的)和对症治疗。
短语“本发明所确定的化合物”及其语法上的改变形式是指可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物或该化合物的立体异构体、化合物的可药用盐、化合物的前药或前药的可药用盐。用于和本发明所确定的化合物联用的任何另外的药物活性化合物也可以是该另外的活性化合物的立体异构体、该另外的活性化合物的盐、该另外的化合物的前药或前药的盐的形式。
短语“可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物”包括化合物的立体异构体、化合物的盐、化合物的前药以及前药的盐。
有患有女性性功能障碍危险性的患者的特点是本领域技术人员已知的，包括有心血管疾病、包括高血压和动脉粥样硬化家族史的患者、肥胖患者、很少运动的患者、有高胆固醇血症、高脂血症和/或高甘油三酯血症的患者、存在高LDL或Lp(a)水平的患者、存在低HDL水平(低α脂蛋白血症)的患者等。
术语可药用盐或前药是指在可靠的医学判断范围内的、适于患者使用而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等、有合理的益处/危险性比并且对其应用有效的本发明化合物的盐和前药，以及两性离子形式，如果可能的话。
术语“盐”是指化合物的无机和有机盐。这些盐可以在最终的分离和纯化化合物的过程中就地制备，或通过将游离碱形式的纯净化合物与适宜的有机或无机酸反应然后分离所形成的盐制得。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、乙磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。其可以包括基于碱金属和碱土金属的阳离子，例如钠、锂、钾、钙、镁等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不仅限于，铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。参见，例如，S.M.Berge等，”药物盐”J Pharm Sci，661-19(1977)。
术语“前药”是指可以在体内转化形成活性化合物的化合物。转化可以通过各种机制发生，例如通过在血液中水解。关于前药的用途的讨论可以参见T.Higuchi和W.Stella，“作为新的释放系统的前药”，A.C.S.专题论文集第14卷，Bioreversible Carriers in DrugDesign，Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press，1987。
例如，如果活性化合物含有羧酸功能基，则前药可以含有通过将酸基团的氢原子用如下基团代替所形成的酯例如，(C1-C8)烷基、(C1-C12)链烷酰氧基甲基、含有4至9个碳原子的1-(链烷酰氧基)乙基、含有5至10个碳原子的1-甲基-1-(链烷酰氧基)乙基、含有3至6个碳原子的烷氧基羰基氧基甲基、含有4至7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基、含有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、含有3至9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨基甲基、含有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-苯并呋喃酮基、4-巴豆内酯基、γ-丁内酯-4-基、二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(例如β-二甲基氨基乙基)、氨基甲酰基-(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基氨基甲酰基-(C1-C2)烷基和1-哌啶基-、1-吡咯烷基-或4-吗啉基(C2-C3)烷基。
类似地，如果化合物含有醇功能基，则前药可以通过将醇基团的氢原子用如下基团代替而形成例如，(C1-C6)链烷酰氧基甲基、1-((C1-C6)链烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)链烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)链烷酰基、α-氨基(C1-C4)链烷酰基、芳酰基和α-氨基酰基或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中的各α-氨基酰基彼此独立地选自天然的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(除去糖的一个半缩醛形式的羟基所形成的基团)。
如果化合物含有胺功能基，则前药可以是通过将氨基中的一个氢原子用如下基团代替所形成的基团例如，R-羰基、RO-羰基、NRR’-羰基，其中R和R’彼此独立地是((C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、苄基，或者R-羰基是天然的α-氨基酰基或天然的α-氨基酰基-天然的α-氨基酰基、-C(OH)C(O)OY，其中(Y是H、(C1-C6)烷基或苄基)、-C(OY0)Y1，其中Y0是(C1-C4)烷基，Y1是((C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷基、氨基(C1-C4)烷基或单-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基烷基、-C(Y2)Y3，其中Y2是H或甲基，Y3是单-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基、4-吗啉基、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基。
本发明所确定的化合物可以含有不对称或手性中心，因此可以以不同的立体异构体形式存在。化合物的所有立体异构体形式及其混合物、包括外消旋混合物，均构成了本发明的一部分。此外，本发明包括所有的几何和位置异构体。例如，如果化合物含有双键，则顺式和反式的形式以及混合物的形式均包括在本发明的范围内。
异构体、包括立体异构体的混合物可以根据其物理化学的差异通过本领域技术人员已知的方法例如色谱法和/或分级结晶的方法分离成其单个的异构体。对映体可以通过将对映体混合物与适宜的光学活性的化合物(例如醇)反应转化成非对映体混合物，分离非对映体并将单个的非对映体转化(例如水解)成相应的纯净对映体来分离。此外，某些本发明的化合物还可以是阻转异构体(例如取代的联芳基化合物)并且构成了本发明的一部分。
本发明所确定的化合物可以以非溶剂化物的形式以及与可药用溶剂例如水、乙醇成的溶剂化物的形式存在。本发明涉及并包括溶剂化物以及非溶剂化物的形式。
本发明所确定的化合物还可以以不同的互变异构体的形式存在。本发明涉及本发明化合物的所有互变异构体。例如，咪唑部分的所有互变异构体形式均包括在本发明的范围内。此外，所有的酮-烯醇或亚胺-烯胺形式的化合物也包括在本发明的范围内。
本领域技术人员可以理解，本文中所包含的化合物名称可以基于化合物的特定互变异构体。尽管可能使用仅一种特定的互变异构体的名称，但所有的互变异构体均包括在特定的互变异构体的名称中并且所有的互变异构体均构成了本发明的一部分。
还应当理解，本文所公开的发明包括用实验室技术例如合成化学家所熟知的技术在体外合成的化合物；或用体内的方法例如通过代谢、发酵、消化等合成的化合物。本发明还涉及可以用体外和体内方法的组合来合成的化合物。
本发明还包括同位素标记的化合物，该化合物与本文中描述的化合物相同，但有一个或多个原子被原子质量或原子数不同于自然界中常见的原子质量或原子数的原子所代替。可以掺入到本发明所确定的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明所确定的化合物、其前药以及所述化合物或所述前药的可药用盐均包括在本发明的范围内。某些同位素标记的本发明化合物，例如掺入了放射性同位素3H和14C的化合物，可用于药物和/或底物组织分布试验。特别优选氚(即3H)和碳-14(即14C)同位素，因其易于制备和检测。此外，用较重的同位素例如氘(即2H)取代可以因代谢稳定性较大而产生某些治疗上的优点，例如体内半衰期增加或所需剂量减少，因此在某些情况下是优选的。同位素标记的化合物可以通过用易得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂进行制备。
本发明所确定的化合物以治疗有效量向患者给药。可将化合物单独给药或作为可药用组合物的一部分给药。此外，可将化合物或组合物单次(例如，通过快速浓注)、分多次(例如，通过一组片剂)给药或在一段时间内基本均匀地释放(例如，使用经皮释放)。还应注意，化合物的剂量可以随着时间而改变。
此外，本发明所确定的化合物可以单独、与本发明所确定的其它化合物联合或与其它药物活性化合物联合给药。其它药物活性化合物可以是用于治疗与本发明所确定的化合物相同的疾病或病症或不同的疾病或病症的。如果患者准备接受或正在接受多种药物活性化合物，可将化合物同时或以任何顺序顺序给药。例如，在片剂的情况下，活性化合物可以存在于一种片剂或不同的片剂中，这些片剂可以同时给药或以任何顺序顺序给药。此外，应当理解，组合物可以是不同的形式。例如，可将一种或多种化合物通过片剂给药，而将另一种通过注射或以糖浆的形式口服给药。本发明涉及所有的联合形式、给药方法以及给药顺序。
例如，将本发明所确定的化合物和雌激素激动剂/拮抗剂，可以升高cGMP的物质或其它活性物质“共同给药”是指可将这些成分以组合物的形式或作为相同的单元剂量形式的一部分一起给药。“共同给药”还包括将本发明所确定的化合物和雌激素激动剂/拮抗剂、可以升高cGMP的物质以及其它活性物质分别但作为同一治疗程序或方案的一部分给药。各成分无需以基本相同的时间给药，但在需要时也可以这么做。因此，“共同给药”包括例如将本发明所确定的化合物和雌激素激动剂/拮抗剂、可以升高cGMP的物质或其它活性物质以不同的剂量或剂量形式但在相同的时间给药。“共同给药”还包括在不同的时间以任何顺序分别给药。例如，如果合适的话，患者可以在早晨服用一种或多种治疗成分而在晚上服用一种或多种另外的成分。
由于本发明的一个方面涉及用可以分别给药的药物活性成分的联合形式治疗疾病/病症，因此本发明还涉及将不同的药物组合物以药盒的形式合并。例如，药盒可以含有两种不同的药物组合物本发明所确定的化合物；和第二种药物活性化合物。药盒还含有用于包含不同组合物的容器，例如分开的药瓶或分开的箔包装。容器的其它例子包括注射器、盒子、药袋等。通常，药盒含有用于给药不同成分的说明。当所述不同的组分优选以不同的剂型(例如口服和胃肠外)、以不同的给药间隔给药或者当需要由处方医生确定组合中每个组分的用量时，药盒的形式是特别有利的。
所述药盒的一个实例是凸泡包装。凸泡包装是包装工业熟知的，并被广泛用于包装药物单位剂量形式(片剂、胶囊等)。凸泡包装通常由相对较硬材料的薄片组成，其上覆盖有优选是透明塑料材料的箔。在包装过程中，在塑料箔上形成凹穴。所述凹穴与待包装片剂或胶囊的大小和形状相同。然后，将片剂或胶囊放在凹穴中，并在与凹穴形成相反的表面，将相对较硬材料的薄片与塑料箔密封。结果，片剂或胶囊被密封在塑料箔和所述薄片之间的凹穴内。优选所述薄片的强度是用手压在凹穴上时可在凹穴处的薄片形成开口，这样可从凸泡包装中取出片剂或胶囊。然后经所述开口取出所述片剂或胶囊。
还可在药盒上提供记忆辅助装置，例如在片剂或胶囊旁边的数字，该数字与应当摄取片剂或胶囊的给药方案的天数相对应。所述记忆辅助装置的另一实例是印在卡片上的日历，例如“第一周，星期一、星期二…等…，第二周，星期一、星期二…”等。记忆辅助装置的其它改变形式是显而易见的。“每日剂量”可以是单个片剂或胶囊或是需要在一天内摄入的多个片剂或胶囊。此外，本发明所确定的化合物的每日剂量还可由一粒片剂或胶囊组成，而第二种化合物的每日剂量可由数粒片剂或胶囊组成，反之亦然。记忆辅助装置应说明这些情况并帮助正确地服用活性成分。
本发明的另一具体实施方案提供了一种分散器，该分散器被设计成可以按照其使用顺序每次分散一个每日剂量。优选在分散器上配有记忆辅助装置，从而更有利于遵从给药方案。所述记忆辅助装置的一个实例是一个机械计数器，该计数器显示已经分散的每日剂量数。所述记忆辅助装置的另一个实例是一个与液晶读数器相连的以电池为能源的微芯片记忆装置，或可发声的提醒信号装置，所述装置可读出上一次服药的日期和/或提醒下一次服药日期。
配制方法是本领域熟知的并且公开于例如RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy，Mack出版公司，Easton，Pa.，第19版(1995)。用于本发明的药物组合物可以是无菌、无热源的液体溶液或混悬液、包衣的胶囊、栓剂、冷冻干燥的粉末、经皮贴剂或本领域已知的其它形式。
如需要，可将本发明所确定的化合物和其它药物活性化合物向患者口服、直肠、胃肠外(例如，静脉内、肌肉内或皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(例如，散剂、软膏或滴剂)给药，或以颊部含片或鼻喷雾的形式给药。
适于胃肠外注射的组合物可以包括生理可接受的无菌含水或非水溶液、分散液、混悬液或乳液，以及用于重建成无菌可注射的溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的例子包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其适宜的混合物、甘油三酯，包括植物油例如橄榄油以及可注射的有机酯例如油酸乙酯。优选的载体是Miglyol。可以通过使用包衣例如卵磷脂、在分散液的情况下通过保持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来保持适宜的流动性。
这些组合物还可以含有辅剂例如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸等来防止组合物被微生物污染。还可以含有等渗剂例如糖、氯化钠等。可以通过使用能够延缓吸收的物质例如一硬脂酸铝和明胶来延长可注射药物组合物的吸收。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、散剂和颗粒剂。在所述固体剂量形式中，将活性化合物与至少一种惰性的常用赋形剂(或载体)例如柠檬酸钠或磷酸二钙或(a)填料或增量剂例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)湿润剂例如甘油；(d)崩解剂例如琼脂、碳酸钙、土豆或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；(e)溶解迟延剂例如石蜡；(f)吸收促进剂例如季铵化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(h)吸附剂，例如高龄土和膨润土；和/或(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠或其混合物混合。在胶囊和片剂的情况下，剂型中还可含有缓冲剂。
相同类型的固体组合物还可以在使用乳糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的填充的软或硬明胶胶囊中用作填料。
片剂、糖衣丸、胶囊和颗粒剂等固体剂型可以用包衣和外壳、例如肠溶包衣和本领域已知的其它包衣来制备。它们还可以含有不透明剂，并且还可以是能够以延迟的方式释放活性化合物的组合物形式。可以使用的包埋组合物的例子是聚合物和蜡。活性化合物还可以是微胶囊的形式，如需要，可以含有一种或多种上述的赋形剂。
用于口服给药的液体剂型包括可药用的乳液、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油、特别是棉子油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油、Miglyol、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯或这些物质的混合物等。
除了所述惰性稀释剂外，组合物中还可含有辅剂，例如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。
除活性化合物外，混悬剂中还可含有助悬剂，例如乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂和西黄蓍胶或这些物质的混合物等。
用于直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂，其可以通过将本发明的化合物与适宜的无刺激性的赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，这些赋形剂或载体在常温下为固体，但在体温下为液体，从而可以在直肠或阴道内熔化并释放出活性成分。
用于局部给药本发明化合物的剂型包括软膏、粉末、喷雾剂和吸入剂。将活性化合物在无菌条件下与可药用载体以及可能需要的各种防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。眼科制剂、眼用软膏、粉末和溶液也包括在本发明的范围内。
本发明所确定的化合物可以以约0.7至约7000mg每天的剂量水平向患者给药。对于体重约为70kg的正常成年人，适宜的剂量通常为约0.01至约100mg每公斤体重。可以使用的具体剂量和剂量范围取决于多种因素，包括患者的需要、所治疗的病症或疾病的严重程度以及所给药的化合物的药理学活性。对于具体患者的剂量范围和最佳剂量的确定是本领域技术人员熟知的，特别是参照本发明所公开的内容。
以下段落描述了用于非人类动物的示例性的制剂、剂量等。药物活性化合物的给药可以通过口服或非口服(例如通过注射)的方式进行。给药一定量的本发明化合物以达到有效的剂量，当向动物口服给药时，通常是0.01至1000mg/kg体重、优选0.1至50mg/kg体重的每日剂量。方便地，可将化合物加入到饮用水中从而使治疗剂量的化合物随着每日的水供给一起被摄取。可将化合物直接计量加入饮用水中，优选以液体的、水溶性浓缩物(例如水溶性盐的水溶液)的形式加入。方便地，还将化合物直接或以动物饲料添加剂的形式(也称为预混物或浓缩物)加入到饲料中。化合物在载体中的预混物或浓缩物常用于在饲料中包含药物。适宜的载体是液体或固体，例如水、各种粗粉例如苜蓿粉、大豆粉、棉籽油粉、亚麻籽油粉和玉米粉、糖蜜、脲、骨粉和无机物混合物例如常用于家禽饲料的那些。特别有效的载体是各种动物饲料本身；即，一小部分该饲料。载体有助于化合物在与预混物混合的最终的饲料中均匀分布。将化合物充分混入预混合物中然后再混入饲料中是非常重要的。就此而言，可将化合物分散或溶解在适宜的油性赋形剂例如大豆油、玉米油、棉籽油等或挥发性的有机溶剂中然后与载体混合。应当理解，化合物在浓缩物中的比例可以有很大的变化，因为在最终的饲料中的活性化合物的量可以通过将适当比例的预混物与饲料混合进行调整以达到所需的化合物的水平。
高效浓缩物可由饲料生产商与蛋白质载体例如大豆油粉和以上描述的其它粗粉混合，以生产适于直接喂给动物的浓缩的添加剂。在该情况下，可以使动物进食常规的食物。或者，可将所述浓缩的添加剂直接添加到饲料中以产生营养平衡的、含有治疗有效量的本发明化合物的最终饲料。将混合物通过常规方法(例如在双壳拌合机中)充分混合以确保均匀。
如果将添加剂用作饲料的顶部饲料，还有助于确保化合物在施加的饲料的顶部分布均匀。
优选的含有药物的猪、牛、绵羊和山羊的饲料含有1至400克活性化合物/吨饲料，对于这些动物的最佳量通常为约50至300克/吨饲料。
优选的家禽和家养宠物饲料通常含有约1至400克、优选10至400克活性化合物/吨饲料。
对于动物的胃肠外给药，可将本发明化合物制成糊剂或小药丸的形式并以植入剂的形式给药，通常是植入动物头部或耳部的皮肤下。
通常，胃肠外给药涉及注射足够量的本发明化合物以向动物提供0.01至100mg/kg体重每天的活性成分。对于家禽、猪、牛、绵羊、山羊和家养宠物的优选剂量为0.1至50mg/kg/天。
糊剂可以通过将本发明的化合物分散在油例如花生油、芝麻油、玉米油等中进行制备。
含有有效量活性化合物的小药丸可以通过将混合物与稀释剂例如碳蜡、巴西棕榈蜡等混合进行制备并可加入润滑剂例如硬脂酸镁或硬脂酸钙以改善造粒过程。
当然，应当理解，可以向动物给药一个以上的小药丸以达到所需的剂量水平。此外，还发现可以在动物治疗期内定期地进行植入以在动物体内保持适宜的活性物质水平。
本发明的治疗方法还包括联合疗法，其中，将用于治疗女性性功能障碍的其它药物活性成分与本发明所确定的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物联合使用。例如，可将可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物与其它用于治疗女性性功能障碍的化合物联合使用。
“雌激素激动剂/拮抗剂”是可以影响某些、但不是全部可以被雌激素影响的相同受体的化合物，在某些情况下，它可以拮抗或阻断雌激素。它并被称为“选择性的雌激素受体调节剂”(SERM)。雌激素激动剂/拮抗剂还指抗雌激素，尽管它们在某些雌激素受体上具有雌激素活性。因此，雌激素激动剂/拮抗剂不是通常所指的“纯粹的抗雌激素”。也可以起激动剂作用的抗雌激素称为I型抗雌激素。I型抗雌激素可以激活雌激素 受体在核内长时间地紧密结合但会影响受体的再生(Clark等，Steroids1973；22707，Capony等，Mol Cell Endocrinol，1975；3233)。
当将雌激素激动剂/拮抗剂作为同一组合物的一部分或以另外的组合物的形式与本发明所鉴定的化合物共同给药时，可有效地治疗女性性功能障碍。通过治疗女性性功能障碍，本发明的组合物和方法适于治疗各种病症。这些病症包括性唤起、疼痛和性高潮障碍，例如女性性唤起障碍；性欲低下；性快感缺乏；交媾困难和阴道痉挛。雌激素激动剂/拮抗剂可以全身或局部给药。对于全身性的应用，可将本发明的化合物按照常规方法配制成用于胃肠外(例如静脉内、皮下、肌肉内、腹膜内、鼻内或经皮)或经肠(例如，口服或直肠)给药的形式。静脉内给药可以通过一系列的注射或较长时间内的连续输注来完成。通过注射或其它间隔的给药途径的给药可以以一周为间隔或每天一至三次来进行。
优选的本发明的雌激素激动剂/拮抗剂包括US5,552,412中所记载的化合物。这些化合物由以下给出的式(I)所表示 其中A选自CH2和NR；B、D和E彼此独立地选自CH和N；Y是(a)苯基，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(b)萘基，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(c)C3-C8环烷基，其选择性地被1-2个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(d)C3-C8环烯基，其选择性地被1-2个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(e)含有最多两个选自-O-、-NR2-和-S(O)n-的杂原子的5元杂环，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(f)含有最多两个选自-O-、-NR2-和-S(O)n-的杂原子的6元杂环，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；或(g)由一个与苯环稠合的5或6元杂环组成的二环环系，所述杂环含有最多两个选自-O-、-NR2-和-S(O)n-的杂原子，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；Z1是(a)-(CH2)pW(CH2)q-；(b)-O(CH2)pCR5R6-；
(c)-O(CH2)pW(CH2)q-；(d)-OCHR2CHR3-；或(e)-SCHR-CHR3-；G是(a)-NR7R8；(b) 其中n是0、1或2；m是1、2或3；Z2是-NH-、-O-、-S-或-CH2-；其选择性地在相邻的碳原子上与一个或两个苯环稠合并且选择性地彼此独立地在碳上被1至3个取代基取代，并且选择性地彼此独立地在氮上被选自R4的化学上适宜的取代基取代；或(c)含有5至12个碳原子的二环胺，其可以是桥接或稠合的并且选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；或者 Z1和G合在一起可以是W是(a)-CH2-；(b)-CH＝CH-；(c)-O-；(d)-NR2-；(e)-S(O)n-；(f)-C(＝O)-；(g)-CR2(OH)-；(h)-CONR2-；(i)-NR2CO-；(j) ；或(k)-C≡C-；R是氢或C1-C6烷基；R2和R3彼此独立地是(a)氢；或(b)C1-C4烷基；R4是(a)氢；(b)卤素；(c)C1-C6烷基；(d)C1-C4烷氧基；(e)C1-C4酰氧基；(f)C1-C4烷硫基；(g)C1-C4烷基亚磺酰基；(h)C1-C4烷基磺酰基；(i)羟基(C1-C4)烷基；(j)芳基(C1-C4)烷基；(k)-CO2H；(i)-CN；(m)-CONHOR；(n)-SO2NHR；(o)-NH2；(p)C1-C4烷基氨基；(q)C1-C4二烷基氨基；(r)-NHSO2R；(s)-NO2；(t)-芳基；或(u)-OH；R5和R6彼此独立地是C1-C8烷基或合在一起形成C3-C10碳环；R7和R8彼此独立地是(a)苯基；(b)饱和或不饱和的C3-C10碳环；(c)含有最多两个选自-O-、-N-和-S-的杂原子的C3-C10杂环；(d)H；(e)C1-C6烷基；或(f)与R5或R6形成3至8元含氮的环；线性或环状的R7和R8可以选择性地被最多3个彼此独立地选自C1-C6烷基、卤素、烷氧基、羟基和羧基的取代基所取代；由R7和R8形成的环可以选择性地与苯环稠合；e是0、1或2；m是1、2或3；n是0、1或2；p是0、1、2或3；q是0、1、2或3；其光学和几何异构体；及其无毒的可药用酸加成盐酸加成盐、N-氧化物、酯、季铵盐和前药。
卤代是指氯代、溴代、碘代或氟代，卤素是指氯、溴、碘或氟。
烷基是指直链或支链的饱和烃。所述烷基的例子(假定指定的长度包括特定的例子)是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基和异己基。
烷氧基是指通过氧连接的直链或支链的饱和烷基。所述烷氧基的例子(假定指定的长度包括特定的例子)是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基和异己氧基。
在本文的命名中所用的括号内的负号或正号是指具体的立体异构体使平面偏振光旋转的方向。
其它优选的本发明化合物公开于美国专利号5,552,412中，并且由式(IA)所表示 其中G是 或 R4是H、OH、F或Cl；B和E彼此独立地选自CH和N。
特别优选的用于本发明的组合物和方法的化合物是(顺)-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇；(-)-顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇(也称为lasofoxifene)；顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇；顺-1-[6’-吡咯烷基乙氧基-3’-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢萘；1-(4’-吡咯烷基乙氧基苯基)2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；顺-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶基-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇；1-(4’-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉及其可药用盐。
特别优选的(-)-顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇的盐是酒石酸盐。
其它优选的雌激素激动剂/拮抗剂公开于美国专利5,047,431中。这些化合物的结构式如下式(II)所示 其中R1A和R2A可以相同或不同并且分别是H、甲基、乙基或苄基；其光学或几何异构体；及其可药用盐、N-氧化物、酯、季铵盐和前药。
其它优选的雌激素激动剂/拮抗剂是他莫昔芬(乙胺，2-[-4-(1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基)-N，N-二甲基，(Z)-2-，2-羟基-1，2，3-丙烷三甲酸酯(1∶1))和美国专利4,536,516中公开的其它化合物；4-羟基他莫昔芬(其中的2-苯基部分在4位带有羟基的他莫昔芬)和美国专利4,623,660中公开的其它化合物；屈洛昔芬(3-羟基他莫昔芬；或(E)-3-[1-[4-(2-(二甲基氨基)乙氧基苯基-1-丁烯基)苯酚)；雷洛昔芬(甲酮，[6-羟基-2-(4-羟基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)-乙氧基]苯基]-，盐酸盐)和美国专利4,418,068；5,393,763；5,457,117；5,478,847和5,641,790中公开的其它化合物；托瑞米芬(乙胺，2-[4-(4-氯-1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基]-N，N-二甲基-，(Z)-，2-羟基-1，2，3-丙烷三甲酸酯(1∶1)和美国专利4,696,949和4,996,225中公开的其它化合物；苯并二氢吡喃1-[2-[[4-(-甲氧基-2，2-二甲基-3-苯基-苯并二氢吡喃-4-基)苯氧基]乙基]-吡咯烷和美国专利3,822,287中公开的其它化合物；艾多昔芬吡咯烷，1-[-[4-[[1-(4-碘苯基)-2-苯基-1-丁烯基]苯氧基]乙基]和美国专利4,839,155中公开的其它化合物；6-(4-羟基-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基]-萘-2-醇和美国专利5,484,795中公开的其它化合物；以及{4-[2-(2-氮杂-双环[2.2.1]庚-2-基)乙氧基]苯基}-[6-羟基-2-(4-羟基-苯基)-苯并[b]噻吩-3-基]-甲酮和公开的国际专利申请WO-95/10513中公开的其它化合物。其它优选的化合物包括GW5638和GW7604，其合成记载于Willson等，J.Med.Chem.，1994371550-1552。
其它优选的雌激素激动剂/拮抗剂包括EM-652(如式(III)所示)和EM-800(如式(IV)所示)。EM-652和EM-800的合成和各种对映体的活性记载于Gauthier等，J.Med.Chem.，1997；402117-2122。
其它优选的雌激素激动剂/拮抗剂包括TSE-424和美国专利5,998,402、美国专利5,985,910、美国专利5,780,497、美国专利5,880,137以及欧洲专利申请EP 0802183 A1中公开的其它化合物，包括下式V和VI的化合物 其中R1B选自H、OH或其C1-C12酯(直链或支链的)或C1-C12(直链或支链或环状的)烷基醚或卤素；或是C1-C4卤代的醚，包括三氟甲基醚和三氯甲基醚。
R2B、R3B、R4B、R5B和R6B彼此独立地选自H、OH或其C1-C12酯(直链或支链的)或C1-C12(直链或支链或环状的)烷基醚、卤素或C1-C4卤代的醚，包括三氟甲基醚和三氯甲基醚、氰基、C1-C6烷基(直链或支链的)或三氟甲基，条件是，当R1B是H时，R2B不是OH。
XA选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基和卤素；s是2或3；YA选自a)下式的基团
其中R7B和R8B彼此独立地选自H、C1-C6烷基或选择性地被CN、C1-C6烷基(直链或支链的)、C1-C6烷氧基(直链或支链的)、卤素、-OH、-CF3或-OCF3取代的苯基；b)含有最多两个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-、-N＝和-S(O)u-的杂原子的5元饱和、不饱和或部分不饱和的杂环，其中u是0至2的整数，其选择性地被1-3个彼此独立地选自下列的取代基取代氢、羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR18、-NH2、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、-NHSO2R1B、-NHCOR1B、-NO2和选择性地被1-3个(C1-C4)烷基取代的苯基；c)含有最多两个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-、-N＝和-S(O)u-的杂原子的6元饱和、不饱和或部分不饱和的杂环，其中u是0至2的整数，其选择性地被1-3个彼此独立地选自下列的取代基取代氢、羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR1B、-NH2、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、-NHSO2R1B、-NHCOR1B、-NO2和选择性地被1-3个(C1-C4)烷基取代的苯基；d)含有最多两个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-、-N＝和-S(O)u-的杂原子的7元饱和、不饱和或部分不饱和的杂环，其中u是0至2的整数，其选择性地被1-3个彼此独立地选自下列的取代基取代氢、羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR1B、-NH2、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、-NHSO2R1B、-NHCOR1B、-NO2和选择性地被1-3个(C1-C4)烷基取代的苯基；或e)桥接或稠合的含有6至12个碳原子并且含有最多两个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-和-S(O)u-的杂原子的二环杂环，其中u是0至2的整数，其选择性地被1-3个彼此独立地选自下列的取代基取代氢、羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR1B、-NH2、-N＝、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、-NHSO2R1B、-NHCOR1B、-NO2和选择性地被1-3个(C1-C4)烷基取代的苯基；其光学或几何异构体；及其无毒的可药用酸加成盐、N-氧化物、酯、季铵盐及前药。
更优选的本发明化合物是具有以上通式V或VI的化合物，其中R1B选自H、OH或其C1-C12酯或烷基醚以及卤素；R2B、R3B、R4B、R5B和R6B彼此独立地选自H、OH或其C1-C12酯或烷基醚、卤素、氰基、C1-C6烷基或三卤代甲基，优选三氟甲基，条件是，当R1B是H时，R2B不是OH；XA选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基和卤素；YA是下式的基团 R7B和R8B彼此独立地选自H、C1-C6烷基或通过-(CH2)w-结合(其中w是2至6的整数)形成环，该环选择性地被最多3个选自下列的取代基取代氢、羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONH(C1-C4)、-NH2、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基、-NHSO2(C1-C4)、-HNCO(C1-C4)和-NO2；其光学和几何异构体；及其无毒的可药用酸加成盐、N-氧化物、酯、季铵盐及前药。
上述通过R7B和R8B连接形成的环可以包括但不仅限于，氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、六亚甲基胺或七亚甲基胺环。
首选的上述式V和VI的化合物是如下化合物，其中R1B是OH；R2B-R6B如上所定义；XA选自Cl、NO2、CN、CF3或CH3；YA是下式的基团 R7B和R8B以-(CH2)t-(其中t是4至6的整数)的形式连接在一起，形成选择性地被最多3个选自下列的取代基取代的环氢、羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONH(C1-C4)烷基、-NH2、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、-NHSO2(C1-C4)烷基、NHCO(C1-C4)烷基和-NO2；其光学和几何异构体；及其无毒的可药用酸加成盐、N-氧化物、酯、季铵盐及前药，包括下式(Va)的TSE-424 本发明的雌激素激动剂/拮抗剂的可药用酸加成盐可由化合物本身或其酯形成，包括药物化学领域常用的可药用盐。例如，盐可与无机或有机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磺酸，包括萘磺酸、甲磺酸和甲苯磺酸、硫酸、硝酸、磷酸、酒石酸、焦硫酸、偏磷酸、琥珀酸、甲酸、邻苯二甲酸、乳酸等形成，优选与盐酸、柠檬酸、苯甲酸、马来酸、乙酸和丙酸形成。
以上讨论的本发明的雌激素激动剂/拮抗剂可以以酸加成盐的形式给药。盐可以通过将碱性化合物与适宜的酸、例如以上所讨论的酸反应而形成。盐以高收率在温和的温度下迅速形成，通常是通过在合成的最后步骤中用适宜的酸洗涤而分离得到。将成盐的酸溶于适宜的有机溶剂或含水的有机溶剂，例如醇、酮或酯中。另一方面，如果本发明的化合物需要游离碱的形式，该形式可以按照常规的方法通过碱性的最后洗涤步骤分离得到。优选的制备盐酸盐的方法是将游离碱溶于适宜的溶剂然后将溶液用分子筛充分干燥，然后向其中通入氯化氢气体。优选的(-)-顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇的盐是D-(-)-酒石酸盐。可以理解，还可以给药无定形形式的雌激素激动剂/拮抗剂。
对于女性性功能障碍的治疗，可将升cGMP剂与本发明所确定的化合物分别或以单一组合物的形式共同给药。
优选的升cGMP剂是cGMP PDE抑制剂。特别优选对cGMP PDE的选择性大于环状的腺苷3’，5’，-一磷酸磷酸二酯酶(cAMP PDE)和/或是cGMP PDEv同功酶的选择性抑制剂的cGMP PDE抑制剂。所述特别优选的cGMP PDE抑制剂公开于美国专利5,250,534；5,346,901；5,272,147以及指定了美国的公开号为WO 94/28902的国际专利申请，所有这些均引入本文作为参考。
优选的cGMP PDEv(也称为PDE5)抑制剂包括式(VII)的化合物 其中R1B是H；C1-C3烷基；C1-C3全氟代烷基；或C3-C5环烷基；R2B是H；选择性地被C3-C6环烷基取代的C1-C6烷基；C1-C3全氟代烷基；或C3-C6环烷基；
R3B是选择性地被C3-C6环烷基取代的C1-C6烷基；C1-C6全氟代烷基；C3-C5环烷基；C3-C6链烯基；或C3-C6链炔基；R4B是选择性地被OH、NR5BR6B、CN、CONR5BR6B或CO2R7B取代的C1-C4烷基；选择性地被CN、CONR5BR6B或CO2R7B取代的C2-C4链烯基；选择性地被NR5BR6B取代的C2-C4链烷酰基；选择性地被NR5BR6B取代的(羟基)C2-C4烷基；选择性地被OH或NR5BR6B取代的(C2-C3烷氧基)C1-C2烷基；CONR5BR6BCO2R7B；卤素；NR5BR6B；NHSO2NR5BR6B；NHSO2R8B；SO2NR9BR10B或苯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基或三唑基，所有这些基团均选择性地被甲基取代；R5B和R6B彼此独立地是H或C1-C4烷基，或与它们所连接的氮原子合在一起形成吡咯烷基、1-哌啶基、4-吗啉基、4-N(R11B)-哌嗪基或咪唑基，其中所述的基团选择性地被甲基或OH取代；R7B是H或C1-C4烷基；R8B是选择性地被NR5BR6B取代的C1-C3烷基；R9B和R10B与它们所连接的氮原子合在一起形成吡咯烷基、1-哌啶基、4-吗啉基或4-N(R12B)-哌嗪基，其中所述的基团选择性地被C1-C4烷基、C1-C3烷氧基、NR13BR14B或CONR13BR14B取代；R11B是H；选择性地被苯基取代的C1-C3烷基；(羟基)C2-C3烷基或C1-C4链烷酰基；R12B是H；C1-C6烷基；(C1-C3烷氧基)C2-C6烷基；(羟基)C2-C6烷基；(R13BR14BN)C2-C6烷基；(R13BR14BNOC)C1-C6烷基；CONR13BR14B；CSNR13BR14B或C(NH)NR13BR14B；R13B和R14B彼此独立地是H；C1-C4烷基；(C1-C3)烷氧基C2-C4烷基或(羟基)C2-C4烷基；或其可药用盐；或含有任意物质的可药用组合物。
优选的cGMP PDEv抑制剂包括西地那非(优选柠檬酸盐)(Viagra){1-[[3-(6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基-苯基]磺酰基]-4-甲基哌嗪}，其具有式(VIII)的结构 及其可药用盐，具有式(IX)结构的化合物 及其可药用盐，以及下式(X)的化合物，3-乙基-5-{5-[(4-乙基-1-哌嗪基)磺酰基]-2-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基}-2-(2-吡啶基甲基)-6，7-二氢-2H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮 式(IX)化合物公开于，例如美国专利5,272,147和5,426,107中。
其它优选的cGMP PDEv抑制剂是公开于PCT/EP95/00183(公开号为WO95/19978，其中指定了美国，该专利引入本文作为参考)的化合物，所述化合物具有式(XI)的结构 其盐和溶剂化物，其中R0C表示氢、卤素或C1-C6烷基；R1C表示氢、C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C2-C6链炔基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基C1-C3烷基、芳基C1-C3烷基或杂芳基C1-C3烷基；R2C表示选择性取代的选自苯、噻吩、呋喃和吡啶的单环芳香族环或选择性取代的二环 其通过苯环的碳原子之一与分子的其余部分连接，并且其中稠合的环A是5-或6-元环，其可以是饱和的或部分或完全不饱和的并且含有碳原子和选择性的一个或两个选自氧、硫和氮的杂原子；R3C表示氢或C1-C3烷基，或者R1C和R3C合在一起表示3-或4-元烷基或烯基环。
一组优选的化合物具有式XIa的结构(也公开于WO95/19978)，包括下式化合物 其盐及其溶剂化物，其中R0C表示氢、卤素或C1-C6烷基；R1C表示氢、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C3烷基、芳基C1-C3烷基或杂芳基C1-C3烷基；R2C表示选择性取代的选自苯、噻吩、呋喃和吡啶的单环芳香族环或选择性取代的二环 其通过苯环的碳原子之一与分子的其余部分连接，并且其中稠合的环A是5-或6-元环，其可以是饱和的或部分或完全不饱和的并且含有碳原子和选择性的一个或两个选自氧、硫和氮的杂原子。
适用于本发明的cGMP PDE5抑制剂包括EP-A-0463756中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；EP-A-0526004中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开的国际专利申请WO93/06104中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开的国际专利申请WO93/07149中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物异构体；公开的国际专利申请WO93/12095中公开的喹唑啉-4-酮化合物；公开的国际专利申请WO94/05661中公开的吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮化合物；公开的国际专利申请WO94/00453中公开的嘌呤-6-酮化合物；公开的国际专利申请WO98/49166中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；公开的国际专利申请WO99/54333中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；EP-A-0995751中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-4-酮化合物；公开的国际专利申请WO00/24745中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮化合物；EP-A-0995750中公开的吡唑并[4，3-d]嘧啶-4-酮化合物；公开的国际申请WO95/19978中公开的化合物；公开的国际申请WO99/24433中公开的化合物以及公开的国际申请WO93/07124中公开的化合物。
应当理解，以上公开的专利申请的内容、特别是其中的通式和所列举的化合物均全部引入本文作为参考。
优选的用于本发明的V型磷酸二酯酶抑制剂包括5-[2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(西地那非)，也称为1-[[3-(6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺酰基]-4-甲基哌嗪(参见EP-A-0463756)；5-(2-乙氧基-吗啉代乙酰基苯基)-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见EP-A-0526004)；3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-正丙氧基苯基]-2-(吡啶-2-基)甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO98/49166)；3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基]-2-(吡啶-2-基)甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO99/54333)；(+)-3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-(2-甲氧基-1(R)-甲基乙氧基)吡啶-3-基]-2-甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，也称为3-乙基-5-{5-[4-乙基哌嗪-1-基磺酰基]-2-([(1R)-2-甲氧基-1-甲基乙基]氧基)吡啶-3-基}-2-甲基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见WO99/54333)；5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-[2-甲氧基乙基]-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，也称为1-{6-乙氧基-5-[3-乙基-6，7-二氢-2-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-2H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基]-3-吡啶基磺酰基}-乙基哌嗪(参见以下的实施例1)；5-[2-异丁氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-(1-甲基哌啶-4-基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见以下的实施例2)；5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-苯基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见以下的实施例3)；5-(5-乙酰基-2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-异丙基-3-氮杂环丁基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见以下的实施例4)；5-(5-乙酰基-2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-氮杂环丁基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(参见以下的实施例5)；(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-甲基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2’，1’6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮(IC-351)(Cialis)，即公开的国际申请WO95/19978的实施例78和95的化合物以及实施例1、3、7和8的化合物；2-[2-乙氧基-5-(4-乙基-哌嗪-1-基-1-磺酰基)-苯基]-5-甲基-7-丙基-3H-咪唑并[5，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮(vardenafil)(BAY38-9456)，也称为1-[[3-(3，4-二氢-5-甲基-4-氧代-7-丙基咪唑并[5，1-f]-as-三嗪-2-基)-4-乙氧基苯基]磺酰基]-4-乙基哌嗪，即公开的国际申请WO99/24433的实施例20、19、337和336的化合物；和公开的国际申请WO93/07124(EISAI)的实施例11的化合物；和Rotella DP，J.Med.Chem.，2000，43，1257的化合物3和14。
可用于本发明的又一种cGMP PDE5抑制剂包括4-溴-5-(吡啶基甲基氨基)-6-[3-(4-氯苯基)-丙氧基]-3(2H)哒嗪酮；1-[4-[(1，3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基甲基)氨基]-6-氯-2-喹唑啉基]-4-哌啶甲酸一钠盐；(+)-顺-5，6a，7，9，9，9a-六氢-2-[4-(三氟甲基)-苯基甲基-5-甲基-环戊二烯并[4，5]咪唑并[2，1-b]嘌呤-4(3H)酮；furazlocillin；顺-2-己基-5-甲基-3，4，5，6a，7，8，9，9a-八氢环戊二烯并[4，5]咪唑并[2，1-b]嘌呤-4-酮；3-乙酰基-1-(2-氯苄基)-2-丙基吲哚-6-甲酸酯；3-乙酰基-1-(2-氯苄基)-2-丙基吲哚-6-甲酸酯；4-溴-5-(3-吡啶基甲基氨基)-6-(3-(4-氯苯基)丙氧基)-3-(2H)哒嗪酮；1-甲基-5-(5-吗啉代乙酰基-2-正丙氧基苯基)-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；1-[4-[(1，3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基甲基)氨基]-6-氯-2-喹唑啉基]-4-哌啶甲酸一钠盐；Pharmaprojects No.4516(Glaxo Wellcome)；Pharmaprojects No.5051(Bayer)；Pharmaprojects No.5064(Kyowa Hakko；参见WO96/26940)；Pharmaprojects No.5069(Schering Plough)；GF-196960(Glaxo Wellcome)；E-8010和E-4010(Eisai)；Bay-38-3045&38-9456(Bayer)和Sch-51886。
具体的cGMP PDE5抑制剂的适合性很容易通过用文献中的方法评估其效力和选择性然后按照常规的药学实践评估其毒性、吸收、代谢、药动学等来确定。
优选地，cGMP PDE5抑制剂具有小于100纳摩尔的IC50值，更优选小于50纳摩尔的IC50值，仍更优选小于10纳摩尔的IC50值。
cGMP PDE5抑制剂的IC50值可以用已经建立的文献中的方法，例如EP0463750-B1和EP0526004-A1中描述的方法来测定。
优选所用的cGMP PDE5抑制剂对PDE5酶是选择性的。优选它们对PDE3具有选择性，更优选对PDE3和PDE4具有选择性。优选地，cGMPPDE5抑制剂对PDE3、更优选对PDE3和PDE4的选择性比值大于100，更优选大于300。
选择性比值很容易由技术人员进行确定。对PDE3和PDE4酶的IC50值可以用已经建立的文献中的方法来测定，参见S A Ballard等，Journal of Urology，1998，159卷，2164-2171页。cGMP实施例12-(甲氧基乙基)-5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮 将以下步骤i)的产物(0.75mmol)、二(三甲基硅烷基)氨基钾(298mg，1.50mmol)和乙酸乙酯(73微升，0.75mmol)在乙醇(10ml)中的混合物于120℃下在密封的容器中加热12小时。将冷却的混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液之间进行分配，然后分层。将有机相干燥(MgSO4)然后减压蒸发。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)作为洗脱剂得到标题化合物，164mg；实测值C，53.18；H，6.48；N，18.14；C23H33N7O5S；0.20C2H5CO2CH3的理论值C，53.21；H，6.49；N，18.25％；δ(CDCl3)1.04(3H，t)，1.40(3H，t)，1.58(3H，t)，2.41(2H，q)，2.57(4H，m)，3.08(2H，q)，3.14(4H，m)，3.30(3H，s)，3.92(2H，t)，4.46(2H，t)，4.75(2H，q)，8.62(1H，d)，9.04(1H，d)，10.61(1H，s)；LRMSm/z 520(M+1)+；mp161-162℃。原料的制备a)吡啶-2-氨基-5-磺酸
将2-氨基吡啶(80g，0.85mol)在30分钟内分批加入到发烟硫酸(320g)中并将形成的溶液于140℃加热4小时。冷却后，将反应液倒在冰(200g)上并将混合物在冰/盐浴中继续搅拌2小时。将形成的悬浮液过滤，将固体用冰水(200ml)和冷的IMS(200ml)洗涤并在抽吸下干燥得到固体状标题化合物，111.3g；LRMSm/z 175(M+1)+b)吡啶-2-氨基-3-溴-5-磺酸 将溴(99g，0.62mol)在1小时内滴加到热的步骤a)的产物(10g，0.62mol)的水(600ml)溶液中并保持稳定的回流。加料结束时，将反应液冷却并将形成的混合物过滤。将固体用水洗涤并在抽吸下干燥得到标题化合物，53.4g；δ(DMSOd6，300MHz)8.08(1H，s)，8.14(1H，5)；LRMSm/z 253(M)+。c)吡啶-3-溴-2-氯-5-磺酰氯 将亚硝酸钠(7.6g，110.0mmol)的水(30ml)溶液滴加到冰冷的步骤b)的产物(25.3，100.0mmol)的盐酸(115ml，20％)溶液中并保持温度低于6℃。将反应液于0℃搅拌30分钟，然后于室温下继续搅拌1小时。将反应混合物减压蒸发并将残余物在70℃下真空干燥72小时。将该固体、五氯化磷(30.0g，144mmol)和三氯氧磷(1ml，10.8mmol)的混合物于125℃加热3小时然后冷却。将反应混合物倒在冰(100g)上，将形成的固体过滤并用水洗涤。将产物溶于二氯甲烷，干燥(MgSO4)然后减压蒸发得到黄色固体状标题化合物，26.50g；δ(CDCl3，300MHz)8.46(1H，s)，8.92(1H，s)。d)3-溴-2-氯-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶 将1-乙基哌嗪(11.3ml，89.0mmol)和三乙胺(12.5ml，89.0mmol)的二氯甲烷(150ml)溶液滴加到用冰冷却的步骤c)的产物(23.0g，79.0mmol)的二氯甲烷(150ml)溶液中并将反应液于0℃下搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩并将残余的棕色油通过硅胶柱色谱纯化，采用二氯甲烷∶甲醇(99∶1至97∶3)的梯度洗脱得到橙色固体状标题化合物，14.5g；δ(CDCl3，300MHz)1.05(3H，t)，2.42(2H，q)，2.55(4H，m)，3.12(4H，m)，8.24(1H，s)，8.67(1H，s)。e)3-溴-2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶 将步骤d)的产物(6.60g，17.9mmol)和乙醇钠(6.09g，89.55mmol)在乙醇(100ml)中的混合物加热回流18小时然后冷却。将反应混合物减压浓缩，将残余物在水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)之间进行分配，然后分层。将水层用乙酸乙酯(2×100ml)萃取，将合并的有机溶液干燥(MgSO4)然后减压蒸发得到棕色固体状的标题化合物，6.41g；实测值C，41.27；H，5.33；N，11.11。C13H20BrN3O3S的理论值C，41.35；H，5.28；N，10.99％；δ(CDCl3，300MHz)1.06(3H，t)，1.48(3H，t)，2.42(2H，q)，2.56(4H，m)，3.09(4H，m)，4.54(2H，q)，8.10(1H，s)，8.46(1H，s)；LRMSm/z 378，380(M+1)+。f)吡啶2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-3-甲酸乙酯 将步骤e)的产物(6.40g，16.92mmol)、三乙胺(12ml，86.1mmol)和三(三苯基膦)钯(O)在乙醇(60ml)中的混合物于100℃和200psi下、在一氧化碳气氛下加热18小时然后冷却。将反应混合物减压蒸发并将残余物通过硅胶柱色谱纯化，采用二氯甲烷∶甲醇(100∶0至97∶3)的洗脱梯度得到橙色油状的标题化合物，6.2g；δ(CDCl3，300MHz)1.02(3H，t)，1.39(3H，t)，1.45(3H，t)，2.40(2H，q)，2.54(4H，m)，3.08(4H，m)，4.38(2H，q)，4.55(2H，q)，8.37(1H，s)，8.62(1H，s)；LRMSm/z 372(M+1)+g)吡啶2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-3-甲酸 将步骤f)的产物(4.96g，13.35mmol)和氢氧化钠水溶液(25ml，2N，50.0mmol)在乙醇(25ml)中的混合物于室温下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩至一半体积，用乙醚洗涤然后用4N盐酸酸化至pH5。将水溶液用二氯甲烷(3×30ml)萃取，将合并的有机萃取液干燥(MgSO4)然后减压蒸发得到黄褐色固体状的标题化合物，4.02g；δ(DMSOd6，300MHz)1.18(3H，t)，1.37(3H，t)，3.08(2H，q)，3.17-3.35(8H，m)，4.52(2H，q)，8.30(1H，s)，8.70(1H，s)。h)4-[2-乙氧基-5(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基甲酰氨基]-1H-3-乙基吡唑-5-甲酰胺 将4-氨基-3-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺(WO9849166，制备例8)(9.2g，59.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(60ml)溶液加入到步骤g)的产物(21.7g，62.9mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(10.1g，66.0mmol)和三乙胺(13.15ml，94.3mmol)的二氯甲烷(240ml)溶液中。加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(13.26g，69.2mmol)并将反应液室温搅拌6小时。减压蒸除二氯甲烷，将剩余的溶液倒入乙酸乙酯(400ml)中，然后将该混合物用碳酸氢钠水溶液(400ml)洗涤。滤出析出的结晶，用乙酸乙酯洗涤然后真空干燥，得到白色粉末状标题化合物，22g；δ(CDCl3+1滴DMSOd6)0.96(3H，t)，1.18(3H，t)，1.50(3H，t)，2.25-2.56(6H，m)，2.84(2H，q)，3.00(4H，m)，4.70(2H，q)，5.60(1H，br s)，6.78(1H，br s)，8.56(1H，d)，8.76(1H，d)，10.59(1H，s)，12.1-12.30(1H，s)；LRMSm/z 480(M+1)+。i)2-甲氧基乙基-4-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基甲酰氨基]-3-乙基吡唑-5-甲酰胺 将1-溴-2-甲氧基乙烷(1.72mmol)加入到步骤h)的产物(750mg，1.56mmol)和碳酸铯(1.12g，3.44mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中并将反应液于60℃搅拌18小时。将冷却的混合物在水和乙酸乙酯之间进行分配，然后分层。将有机层干燥(MgSO4)，减压浓缩然后与甲苯共沸得到固体。将该产物用乙醚重结晶得到白色固体状的标题化合物。cGMP实施例25-[2-异丁氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-(1-甲基哌啶-4-基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮 将以下步骤b)的产物(90mg，0.156mmol)、二(三甲基硅烷基)氨基钾(156mg，0.78mmol)和乙酸乙酯(14mg，0.156mmol)在异丙醇(12ml)中的混合物在密封的容器中于130℃搅拌6小时。将冷却的混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(60ml)中，用乙酸乙酯(60ml)萃取。将合并的有机萃取液干燥(MgSO4)然后减压蒸发得到胶状物。将粗产物用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(92.6∶6.6∶0.6)通过硅胶柱色谱纯化得到淡棕色泡沫状标题化合物，36mg；δ(CDCl3)1.01(3H，t)，1.12(6H，d)，1.39(3H，t)，1.94(2H，m)，2.15(2H，m)，2.22-2.44(6H，m)，2.55(6H，m)，3.02(4H，m)，3.14(4H，m)，4.22(1H，m)，4.43(2H，d)，8.60(1H，d)，9.00(1H，d)，10.54(1H，s)。原料的制备a)2-(1-叔丁氧羰基哌啶-4-基)-4-[2-乙氧基-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基甲酰氨基]-3-乙基吡唑-5-甲酰胺 将氢化钠(64mg，60％矿物油分散液，1.6mmol)加入到实施例1，步骤h)的产物(1.46mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液中，然后将溶液搅拌10分钟。加入4-[(甲基磺酰基)氧基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(WO9319059)(1.60mmol)并将反应液于60□搅拌3天。将冷却的混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液之间进行分配然后分液。将水层用乙酸乙酯萃取，将合并的有机溶液干燥(MgSO4)然后减压蒸发。将残余物通过硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)作为洗脱剂得到白色泡沫状的标题化合物，310mg；δ(CDCl3)1.02(3H，t)，1.23(3H，t)，1.49(9H，s)，1.57(3H，m)，1.93(2H，m)，2.16(2H，m)，2.40(2H，q)，2.54(4H，m)，2.82-2.97(4H，m)，3.10(4H，m)，4.30(3H，m)，4.79(2H，q)，5.23(1H，s)，6.65(1H，s)，8.63(1H，d)，8.82(1H，d)，10.57(1H，s)。b)4-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基甲酰氨基]-3-乙基-2-(1-甲基哌啶-4-基)吡唑-5-甲酰胺 将三氟乙酸(1.5ml)加入到以上步骤a)的产物(320mg，0.48mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中并将该溶液室温搅拌2.5小时。将反应混合物减压蒸发并将残余物用乙醚充分研磨然后真空干燥，得到白色固体。将甲醛(217微升，37％水溶液，2.90mmol)加入到中间体胺的二氯甲烷(8ml)溶液中，然后将溶液剧烈搅拌30分钟。加入乙酸(88微升，1.69mmol)，将溶液继续搅拌30分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(169mg，0.80mmol)并将反应液室温搅拌16小时。将反应混合物倒入碳酸氢钠水溶液中并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液干燥(MgSO4)然后减压蒸发。将残余物通过硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(91.75∶7.5∶0.75)作为洗脱剂得到标题化合物，70mg；δ(CDCl3)1.02(3H，t)，1.22(3H，t)，1.58(3H，t)，1.92(2H，m)，2.14(2H，m)，2.25-2.45(7H，m)，2.54(4H，m)，2.91(2H，q)，2.99-3.16(6H，m)，4.08(1H，m)，4.78(2H，q)，5.11(1H，brs)，6.65(1H，brs)，8.63(1H，d)，8.83(1H，d)，10.53(1H，s)。cGMP实施例35-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-苯基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮 将吡啶(0.1ml，1.08mmol)加入到以下步骤a)的产物(250mg，0.54mmol)、乙酸铜(II)一水合物(145mg，0.72mmol)、苯硼酸(132mg，1.08mmol)和4埃分子筛(392mg)在二氯甲烷(5ml)中的混合物中，将反应液室温搅拌4天。将反应混合物过滤然后将滤液减压蒸发。将粗产物用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(97∶3∶0.5)作为洗脱剂通过硅胶柱色谱纯化，然后用乙醚∶己烷研磨。将形成的固体过滤然后用异丙醇∶二氯甲烷重结晶得到固体状标题化合物，200mg，δ(CDCl3)1.02(3H，t)，1.47(3H，t)，1.60(3H，t)，2.42(2H，q)，2.58(4H，m)，3.10(2H，q)，3.17(4H，m)，4.76(2H，q)，7.40(1H，m)，7.51(2H，m)，7.80(2H，d)，8.67(1H，d)，9.16(1H，s)，10.90(1H，s)；LRMSm/z 538(M+1)+。原料的制备a)5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮 将二(三甲基硅烷基)氨基钾(8.28g，41.6mmol)加入到实施例1，步骤h)(10.0g，20.8mmol)和乙酸乙酯(2ml，20mmol)的乙醇(160ml)溶液中并将反应混合物在密封的容器中于120℃加热12小时。将冷却的混合物减压蒸发并将残余物用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(95∶5∶0.5)作为洗脱剂通过硅胶柱色谱纯化得到标题化合物，3.75g；δ(CDCl3)1.03(3H，t)，1.42(3H，t)，1.60(3H，t)，2.42(2H，q)，2.58(4H，m)，3.02(2H，q)，3.16(4H，m)，4.78(2H，q)，8.66(1H，d)，9.08(1H，d)，11.00(1H，s)11.05-11.20(1H，brs)，LRMSm/z 462(M+1)+。cGMP实施例45-(5-乙酰基-2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-异丙基-3-氮杂环丁基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮
将以下步骤h)的产物(0.23mmol)溶于二氯甲烷(10ml)并加入丙酮(0.01ml)。搅拌30分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.51mmol)并继续搅拌14小时。补加丙酮(0.01ml)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.51mmol)并继续搅拌4.5小时。仍有原料剩余，于是再加入丙酮(0.01ml)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.51mmol)并继续搅拌18小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释，依次用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)然后浓缩。通过快速柱色谱纯化(用94∶6∶0.6二氯甲烷/甲醇/0.88氨洗脱)得到固体状的产物，M.p.162.8-163.6℃；1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝1.00(app.d，9H)，1.30(t，3H)，1.84(app.q，2H)，2.60(s，3H)，2.62-2.72(m，1H)，3.00-3.10(q，2H)，3.75(t，2H)，3.90(t，2H)，4.50(t，2H)，5.25(t，1H)，8.70(s，1H)，8.90(s，1H)；LRMS(TSP-正离子)439(MH+)；分析实测值C，61.92；H，6.84；N，18.70。C23H30O3N6.0.1CH2Cl2的计算值C，62.07；H，6.81；N，18.80。原料的制备a)2-丙氧基-5-碘烟酸 将N-碘代琥珀酰亚胺(18.22g，0.08mol)、三氟乙酸(100ml)和三氟乙酸酐(25ml)加入到2-丙氧基烟酸(0.054mol)中。将混合物回流2.5小时，冷却然后蒸除溶剂。将残余物用乙酸乙酯从水中萃取并将有机层用水(两次)和盐水(两次)洗涤，干燥(MgSO4)然后浓缩。将红色的残余物重新溶于乙酸乙酯，用硫代硫酸钠溶液(两次)、水(两次)、盐水(两次)洗涤，再次干燥(MgSO4)然后浓缩得到固体状的所需产物；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝1.05(t，3H)，1.85-2.0(m，2H)，4.5(t，2H)，8.5(s，1H)，8.6(s，1H)；分析实测值C，35.16；H，3.19；N，4.46。C9H10INO3的计算值C，35.19；H，3.28；N，4.56％。b)N-[3-(氨基羰基)-5-乙基-1H-吡唑-4-基]-5-碘-2-丙氧基-烟酰胺 将草酰氯(15.9mmol)加入到搅拌中的步骤a)的产物(3.98mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中并加入3滴N，N-二甲基甲酰胺。2.5小时后，蒸除溶剂并将残余物与二氯甲烷共沸3次。将残余物重新悬浮在二氯甲烷(4ml)中然后加入到搅拌中的4-氨基-3-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺(按照WO 98/49166中的描述制备)(3.58mmol)和三乙胺(7.97mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。1小时后，蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。分出有机相并用2N HCl(两次)、碳酸氢钠溶液(两次)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)然后浓缩。将产物用乙醚研磨然后过滤得到固体状的标题产物。将母液浓缩然后通过快速柱色谱纯化(用80％乙酸乙酯∶己烷洗脱)得到另一批产物；1H NMR(300MHz，d4-MeOH)δ＝1.0(t，3H)，1.25(t，3H)，1.85-2.0(m，2H)，2.8(q，2H)，4.5(t，2H)，8.5(s，1H)，8.6(s，1H)；LRMS(TSP)444(MH+)c)3-碘-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯
将3-[(甲基磺酰基)氧基]-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯(按照Synlett 1998，379中的描述制备；5.0g，19.9mmol)和碘化钾(16.5g，99.4mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(25ml)中的混合物于100℃加热42小时。将冷却的混合物在水和乙酸乙酯之间进行分配然后分层。将有机相用MgSO4干燥，减压浓缩并将残余物与二甲苯共沸。将粗产物通过快速柱色谱纯化(用二氯甲烷作为洗脱剂)得到标题化合物，3.26g；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ＝1.43(s，9H)，4.28(m，2H)，4.46(m，1H)，4.62(m，2H)；LRMS(TSP)284(MH)+d)3-(3-(氨基羰基)-5-乙基-4-{[(5-碘-2-丙氧基-3-吡啶基)羰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯 将碳酸铯(3.59mmol)在氮气氛下加入到搅拌中的步骤b)的产物(1.79mmol)和步骤c)的产物(2.15mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。将混合物于80℃加热24小时。将混合物冷却然后用乙酸乙酯从水中萃取。将有机层干燥(MgSO4)然后浓缩得到棕色的油。通过快速柱色谱纯化(从100％二氯甲烷至90％二氯甲烷/MeOH梯度洗脱)得到标题产物；1H NMR(400MHz，DMSO)δ＝0.95(t，3H)，1.05(t，3H)，1.40(s，9H)，1.78-1.88(m，2H)，2.68(q，2H)，4.22-4.35(m，4H)，4.40(t，2H)，5.33 (t，1H)，7.35(bs，1H)，7.52(bs，1H)，8.40(s，1H)，8.55(s，1H)，10.10(s，1H)；LRMS(TSP-正离子)373.2(MH+-BOC和I)；分析实测值C，45.11；H，5.07；N，13.56。C23H31O5N6I.0.2DCM的计算值C，45.28；H，5.14；N，13.66。e)3-[3-乙基-5-(5-碘-2-丙氧基-3-吡啶基)-7-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-2-基]-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯 将步骤d)的产物(28.4mmol)溶于正丙醇(200ml)，加入乙酸乙酯(6ml)和叔丁醇钾(28.4mmol)并将形成的混合物加热回流6小时。补加叔丁醇钾(14.2mmol)并将混合物继续加热2小时，然后真空蒸除溶剂。将残余物在水(50ml)和二氯甲烷(100ml)之间进行分配并将有机相分离。将水相用二氯甲烷(2×100ml)萃取，将合并的有机相用MgSO4干燥然后浓缩得到固体。通过柱色谱纯化(用乙酸乙酯洗脱)得到标题化合物；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.05(t，3H)，1.30(t，3H)，1.43(s，9H)，1.87-1.96(m，2H)，3.00(q，2H)，4.34(t，2H)，4.49(t，2H)，4.60(br s，2H)，5.20(t，1H)，8.41(d，1H)，8.94(s，1H)，10.75(br s，1H)；LRMS(TSP-正离子)598.1(MNH4+)；分析实测值C，47.54；H，5.02；N，14.09。C23H29O4N6IC，47.60；H，5.04；N，14.48。f)3-[3-乙基-7-氧代-5{2-丙氧基-5[(三甲基硅烷基)乙炔基]-3-吡啶基}6，7-二氢-2H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯
将步骤e)的产物(0.25mmol)悬浮在三乙胺(2ml)和三甲基硅烷基乙炔(0.39mmol)和乙腈(2ml以试图溶解反应物)中。加入Pd(PPh3)2Cl2(0.006mmol)和碘化亚铜(0.006mmol)并搅拌反应混合物。1小时后，补加一份三甲基硅烷基乙炔(0.19mmol)并继续搅拌2小时。蒸除溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)然后浓缩。通过快速柱色谱纯化(从100％二氯甲烷至99％二氯甲烷/甲醇)得到标题化合物；1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝0.25(s，9H)，1.05(t，3H)，1.31(t，3H)，1.44(s，9H)，1.87-1.96(m，2H)，3.00(q，2H)，4.33(t，2H)，4.52(t，2H)，4.54-4.80(m，2H)，5.1-5.25(m，1H)，8.32(d，1H)，8.74(d，1H)；LRMS(TSP-正离子)569(MNH4+)，452.0(MH+)；分析实测值C，60.82；H，6.90；N，15.15。C28H38O4N6Si的计算值C，61.07；H，6.95；N，15.26。g)3-[3-乙基-5-(5-乙炔基-2-丙氧基-3-吡啶基)-7-氧代-6，7-二氢-2H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-2-基]-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯 将氟化钾(0.38mmol)于0℃下加入到搅拌中的步骤f)的产物(0.19mmol)的含水N，N-二甲基甲酰胺(2ml N，N-二甲基甲酰胺/0.2ml水)溶液中。10分钟后，将反应液升温至室温并搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用水、1N盐酸(3次)和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)然后浓缩得到固体状标题化合物；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.05(t，3H)，1.30(t，3H)，1.43(s，9H)，1.8-2.00(m，2H)，3.00(q，2H)，3.19(s，1H)，4.35(app t，2H)，4.52(appt，2H)，4.60-4.80(br s，2H)，5.22(t，1H)，8.39(s，1H)，8.80(s，1H)，10.75(br s，1H)；LRMS(TSP-正离子)496(MNH4+)。h)5-(5-乙酰基-2-丙氧基-3-吡啶基)-2-(3-氮杂环丁基)-3-乙基-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮 将步骤g)的产物(1.44g，3.0mmol)在丙酮(50ml)和硫酸(1N，3ml)中的溶液用硫酸汞(268mg，9.0mmol)处理然后加热回流6小时。将反应混合物真空浓缩至约20ml，倒入碳酸氢钠(饱和水溶液，20ml)中然后用二氯甲烷(6×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，用MgSO4干燥然后浓缩得到棕色的油，将其加入40％三氟乙酸的二氯甲烷(50ml)和水(1ml)溶液中然后室温搅拌1小时。真空蒸发后，将残余物通过柱色谱纯化(用95∶5∶1二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨洗脱)得到白色吸湿性泡沫状的标题化合物(1.65g)；m.p.128.5-130.0℃；1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝1.00(t，3H)，1.30(t，3H)，1.7-1.90(m，2H)，2.60(s，3H)，3.00-3.10(q，2H)，4.50(t，2H)，4.60-4.70(m，4H)，5.65-5.78(m，1H)，8.65(s，1H)，8.90(s，1H)；LRMS(TSP-正离子)397(MH+)。cGMP实施例55-(5-乙酰基-2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-氮杂环丁基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮 将原料(120mg，0.28mmol)和碳酸铯(274mg，0.84mmol)溶于正丁醇(4ml)然后和分子筛一起在氮气氛下于90℃加热96小时。然后将混合物在水(10ml)和二氯甲烷(10ml)之间进行分配。分出有机层并将水层用二氯甲烷(3×15ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)然后真空浓缩。将粗产物通过快速柱色谱纯化(95∶5∶0.5-90∶10∶1乙酸乙酯∶甲醇∶0.88 NH3作为洗脱剂)得到无色玻璃状的标题化合物(77mg，0.18mmol)；m.p.91.6-93.7℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.00-1.05(m，6H)，1.38(t，3H)，1.50-1.62(m，2H)，1.90-2.00(m，2H)，2.63(s，3H)，2.63-2.70(m，2H)，3.02(q，2H)，3.75(t，2H)，3.90(t，2H)，4.68(t，2H)，5.10-5.20(m，1H)，8.84(s，1H)，9.23(s，1H)，10.63(br s，1H)；LRMS(TSP-正离子)439(MH+)；分析实测值C，60.73；H，7.06；N，18.03。C23H30O3N6.0.2MeOH.0.1 DIPE的计算值C，60.88；H，7.26；N，17.90。原料的制备5-(5-乙酰基-2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-异丙基-3-氮杂环丁基)-2，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮
将氰基硼氢化钠(92mg，1.47mmol)在氮气氛和室温下加入到搅拌中的实施例4的步骤h)的产物(500mg，0.98mmol)和乙酸钠(161mg，1.96mmol)的甲醇(10ml)溶液中。1小时后，将混合物倒入NaHCO3(饱和水溶液，20ml)中并用二氯甲烷(3×15ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)然后真空浓缩。将粗产物通过快速柱色谱纯化(95∶5∶0.5-80∶20∶1乙酸乙酯∶甲醇∶0.88 NH3作为洗脱剂)得到白色固体状的标题化合物(140mg，0.33mmol)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.97(t，3H)，1.03(t，3H)，1.30(t，3H)，2.82-2.97(m，2H)，2.58-2.65(m，5H)，2.98(q，2H)，3.68(t，2H)；3.85(dd，2H)，4.58(dd，2H)，5.05-5.17(m，1H)，8.79(s，1H)，9.18(s，1H)，10.62(brs，1H)；LRMS(TSP-正离子)426(MH+)。
上述升cGMP剂的口服日剂量范围可以从约1mg至约200mg，优选的范围从约20mg至约100mg。在性活动前约15分钟至约4小时服药。对于局部剂量形式例如霜剂或气雾剂，可以对给药的剂量和时间进行调整。本发明的升cGMP剂包括所述化合物的前药、立体异构体、水合物、互变异构体和盐。本发明的升cGMP剂可以按照以上关于雌激素激动剂/拮抗剂的描述进行配制和给药。
可以在本发明中用作升cGMP剂的cGMP PDE抑制剂可以选自本领域已知的或随后发现和/或开发的那些。适宜的cGMP PDE抑制剂包括在以下美国专利中所公开的那些US4,666,908中公开的5-取代的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；US4,634,706、4,783,532、5,498,819、5,532,369、5,556,975和5,616,600中公开的griseolic酸衍生物；US4,885,301中公开的2-苯基嘌呤酮衍生物；US5,254,571中公开的苯基吡啶酮衍生物；US5,047,404中公开的稠合的嘧啶衍生物；US5,075,310中公开的稠合的稠合的嘧啶衍生物；US5,162,316中公开的嘧啶并嘧啶衍生物；US5,073,559中公开的嘌呤化合物；
US5,147,875中公开的喹唑啉衍生物；US5,118,686中公开的苯基嘧啶酮衍生物；US5,055,465和5,166,344中公开的咪唑并喹喔啉酮衍生物；US5,290,933中公开的苯基嘧啶酮衍生物；US5,436,233或5,439,895中公开的4-氨基喹唑啉衍生物；US5,405,847中公开的4，5-二氢-4-氧代-吡咯并[1，2-a]喹喔啉衍生物；US5,393,755中公开的多环的胍衍生物；US5,576,322中公开的含氮杂环化合物；US4,060,615中公开的喹唑啉衍生物；US5,294,612中公开的6-杂环基吡唑并[4，3-d]嘧啶-4-酮；和US5,436,233中公开的4-氨基喹唑啉衍生物；其它关于cGMP PDE抑制剂的公开文献包括如下文献，所有这些文献均引入本文作为参考欧洲专利申请(EPA)公开号0428268；欧洲专利0442204；国际专利申请公开号WO 94/19351；日本专利申请5-222000；European Journal of Pharmacology，251，(1994)，1；国际专利申请公开号WO 94/22855；欧洲专利申请0636626中公开的吡唑并嘧啶衍生物；欧洲专利申请0640599中公开的4-氨基嘧啶衍生物；国际专利申请WO95/06648中公开的咪唑并喹唑啉衍生物；国际专利申请WO95/18097中公开的邻氨基苯甲酸衍生物；国际专利申请WO95/19978中公开的四环衍生物；欧洲专利申请0668280中公开的咪唑并喹唑啉衍生物；和欧洲专利申请0669324中公开的喹唑啉化合物。
化合物的cGMP PDE抑制作用可以通过本领域常规的试验来测定，例如US5,250,534中所公开的试验。优选相对于cAMP PDE而言是cGMPPDE的选择性抑制剂的化合物，在US5,250,534中也教导了对该化合物的测定方法。特别优选可以选择性地抑制PDEv同功酶的化合物，例如在上述PCT/EP94/01580(公开号为WO 94/28902)中公开的化合物。
可以理解，某些上述升cGMP剂含有游离的羧酸或游离的胺基团作为化学结构的一部分。此外，本发明范围内的某些升cGMP剂含有内酯部分，其与游离的羧酸形式平衡存在。这些内酯可以通过制备内酯的可药用盐而保持羧酸盐的形式。因此，本发明包括这些羧酸或胺基团的可药用盐。
词语“可药用盐”包括可药用的酸加成盐以及可药用的阳离子盐。词语“可药用的阳离子盐”包括但不仅限于碱金属盐(例如钠和钾)、碱土金属盐(例如钙和镁)、铝盐、铵盐以及与有机胺例如苯乍生(N，N’-二苄基乙二胺)、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)、苄乙胺(N-苄基苯乙基胺)、二乙胺、哌嗪、氨丁三醇(2-氨基-2-羟基甲基-1，3-丙二醇)和普鲁卡因形成的盐。词语“可药用的酸加成盐”包括但不仅限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐和对甲苯磺酸盐。还应当理解，可以给药升cGMP剂的无定形形式。
含有游离羧酸的升cGMP剂的可药用阳离子盐可以通过将升cGMP剂与适宜的碱(通常是1当量)在共溶剂中反应制得。典型的碱是氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、氢化钠、甲醇钾、氢氧化镁、氢氧化钙、苯乍生、胆碱、二乙醇胺、哌嗪和氨丁三醇。盐通过浓缩至干或加入不良溶剂进行分离。在许多情况下，盐优选通过将酸的溶液与不同的阳离子盐(例如，乙基己酸钠或钾、油酸镁)的溶液混合进行制备，采用可以析出所需的阳离子盐的溶剂(例如，乙酸乙酯)，或者可以通过浓缩和/或加入不良溶剂进行分离。
含有游离胺基团的升cGMP剂的可药用酸加成盐很容易通过将升cGMP剂的游离碱与适宜的酸反应进行制备。当盐是一元酸的盐(例如，盐酸盐、氢溴酸盐、对甲苯磺酸盐、乙酸盐)、二元酸的氢形式(例如，硫酸氢盐、琥珀酸盐)或三元酸的二氢形式(例如，磷酸二氢盐、柠檬酸盐)时，采用至少1摩尔当量、通常是1摩尔过量的酸。但是，当需要硫酸盐、半琥珀酸盐、磷酸氢盐或磷酸盐等盐时，通常使用适宜和精确化学当量的酸。通常将游离碱和酸在所需的盐可以析出沉淀的共溶剂中混合，或者可以通过浓缩和/或加入不良溶剂进行分离。
本领域普通技术人员可以理解，当本发明所确定的化合物与某些以上描述的雌激素激动剂/拮抗剂或与某些以上描述的升cGMP剂联合使用时，激动剂/拮抗剂或升cGMP剂可以含有一个或多个可以是特定的立体化学、互变异构或几何构型的原子，从而产生立体异构体、互变异构体和构型异构体。所有这些异构体及其混合物均包括在本发明内。还包括本发明化合物的水合物和溶剂化物。
本发明还包括同位素标记的雌激素激动剂/拮抗剂或升cGMP剂，这些化合物可与本发明所确定的化合物联合使用，并且与以上公开的化合物结构相同，只是有一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中常见的原子质量或质量数的原子所代替。可以掺入到本发明化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，例如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物、其前药以及所述化合物或所述前药的可药用盐均包括在本发明的范围内。
药物化学家很容易理解，带有可反应的羟基的生理学活性化合物通常以可药用酯的形式给药。涉及这些化合物例如雌二醇的文献提供了大量的这些酯的例子。正如药物化学领域的技术人员可以预期的，本发明的化合物在这方面没有例外，并且可以有效地以在羟基上形成的酯的形式给药。正如在药物化学中早就已知的，可以通过适当地选择酯基团来调节化合物的起效速率或持续时间。
某些酯优选作为本发明化合物的组成部分。如上所述，本发明所确定的化合物可与雌激素激动剂/拮抗剂或升cGMP剂、包括式I、IA、II、III、IV、V、Va、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XIa的化合物联合使用，这些化合物可以在以上所定义的各个位置上含有酯基团，这些基团用-COOR表示，R是C1-C14烷基、C1-C3氯代烷基、C1-C3氟代烷基、C5-C7环烷基、苯基或被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基单或二取代的苯基。
当然，根据本发明，化合物的具体给药剂量应根据与病例有关的具体情况来确定，例如，所给药的化合物、给药途径、患者的身体状况、所治疗的病理学情况的严重程度等。向个体给药的本发明化合物的剂量可以有很大变化，并且应由主治医师来判断。应当注意，当将化合物以盐例如月桂酸盐(其成盐部分具有较大的分子量)的形式给药时，需要对化合物的剂量进行调整。
下述剂量以及在本说明书和所附的权利要求书中列出的其它剂量是针对体重约为65kg至约70kg的一般人类个体的。根据患者的病史和个体所存在的疾病，例如糖尿病，熟练的医师很容易确定对于体重在65kg至70kg范围之外的个体所需的剂量。本文中以及所附的权利要求书中所列出的所有剂量均是雌激素激动剂/拮抗剂或升cGMP剂的游离碱形式的每日剂量。对于游离碱的其它形式例如盐或水合物的剂量的计算很容易通过将所涉及的各物质的分子量进行简单地比较来完成。
雌激素激动剂/拮抗剂的有效给药速率的一般范围从约0.001mg/天至约200mg/天。优选的速率范围从约0.010mg/天至100mg/天。当然，实际上通常是将化合物的每日剂量分几份在一天内的不同时间给药。但是，在任何给定的情况下，化合物的给药量均取决于具体的雌激素激动剂/拮抗剂的效力、化合物的溶解度、所用的制剂以及给药途径等因素。
对于女性性功能障碍的治疗，可将雌激素以及，选择性的，孕激素与本发明所确定的化合物分别或在单一的组合物中共同给药。
可用于本发明的联合形式的雌激素包括雌酮、雌三醇、马烯雌酮、雌二烯、马萘雌酮、乙炔基雌二醇、17-雌二醇、17α-二氢马萘雌酮、17β-二氢马萘雌酮(美国专利2,834,712)、17α-二氢马烯雌酮、17β-二氢马烯雌酮、炔雌甲醚和结合的雌激素，例如Wyeth-AyerstLaboratories’Premarin产品中的那些。植物雌激素，例如雌马酚或肠内酯也可用于本发明的制剂和方法。酯化的雌激素，例如由SolvayPharmaceuticals，Inc.以Estratab商标名销售的那些，也可用于本发明的联合形式。同样优选用于本发明的是可采用的雌激素的盐，首选钠盐。这些优选的盐的例子是硫酸雌酮钠、硫酸马烯雌酮钠、硫酸17α-二氢马烯雌酮钠、硫酸17α-雌二醇钠、硫酸δ8，9-脱氢雌酮钠、硫酸马萘雌酮钠、硫酸17β-雌二醇钠、硫酸17β-二氢马萘雌酮钠、硫酸雌酮3-钠、硫酸马烯雌酮3-钠、硫酸17α-二氢马烯雌酮3-钠、硫酸3β-羟基-雌-5(10)，7-二烯-17-酮3-钠、硫酸5α-孕烷-3β-20R-二醇20-钠、硫酸5α-孕烷-3β，16α-二醇-20-酮3-钠、硫酸δ(8，9)-脱氢雌酮3-钠、硫酸雌-3β，17α-二醇3-钠、硫酸3β-羟基-雌-5(10)-烯-17-酮3-钠或硫酸5α-孕烷-3β，16α，20R-三醇3-钠。优选的雌酮的盐包括但不仅限于，钠盐和哌嗪盐。以下将讨论其它的盐。
另一种可用于本发明的化合物是合成的的甾族化合物例如替勃龙(Livia)。优选用于治疗女性性功能障碍，例如用于增强性欲、治疗交媾困难、治疗性唤起障碍、治疗性欲低下、治疗阴道痉挛或增加性高潮的频率或强度的本发明所确定的化合物与替勃龙的联合形式。替勃龙和本发明所确定的化合物的应用还可以选择性地包含孕激素。
孕激素是本领域技术人员熟知的。可用于本发明的具体孕激素的例子包括但不仅限于，左炔诺孕酮、炔诺酮、炔诺醇、去氧孕烯、炔诺孕酮、肟炔诺酯和甲羟孕酮。在药物组合物中，通常使用孕激素的盐，所述的盐如下所述。
如果可以采用的话，雌激素和孕激素的可药用酸加成盐包括与无机或有机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磺酸，包括萘磺酸、甲磺酸和甲苯磺酸、硫酸、硝酸、磷酸、酒石酸、焦硫酸、偏磷酸、琥珀酸、甲酸、邻苯二甲酸、乳酸等形成的酸，首选与盐酸、柠檬酸、苯甲酸、马来酸、乙酸和丙酸形成的盐。
这些盐可以通过将化合物与适宜的酸反应而形成。盐通常以高收率在温和的温度下形成，通常是通过在合成的最后步骤中用适宜的酸洗涤而分离得到。将成盐的酸溶于适宜的有机溶剂或含水的有机溶剂，例如醇、酮或酯中。另一方面，如果本发明的化合物需要游离碱的形式，该形式可以按照常规的方法通过碱性的最后洗涤步骤分离得到。优选的制备盐酸盐的方法是将游离碱溶于适宜的溶剂然后将溶液用分子筛充分干燥，然后向其中通入氯化氢气体。还应当理解，还可以给药无定形形式的雌激素和孕激素。
本领域普通技术人员可以理解，某些雌激素或孕激素可以含有一个或多个可以是特定的立体化学、互变异构或几何构型的原子，从而产生立体异构体、互变异构体和构型异构体。所有这些异构体及其混合物均包括在本发明内。还包括本发明化合物的水合物和溶剂化物。
可以接受的雌激素的剂量范围包括但不仅限于，约0.001mg/天至约100mg/天。优选的雌激素剂量范围包括但不仅限于，约0.010mg/天至约2mg/天。可以接受的孕激素的剂量范围包括但不仅限于约0.001mg/天至约1000mg/天。优选的孕激素剂量范围为约0.1mg/天至约500mg/天。
对于女性性功能障碍的治疗，可将本发明所确定的化合物与其它活性成分联合使用，例如如下的活性成分前列腺素(参见，例如，J.L.Yeager等，“含有前列腺素的组合物和改善人类女性性功能障碍的方法”，PCT国际申请WO0033825(2000))；阿朴吗啡；催产素调节剂(参见，例如，T.Smock和P.Stark，“哺乳动物性行为的肽基础”，Prog.Brain Res.(1998)，119(Advances inBrain Vasopressin)，467-481；还可参见A.Argiolas，“神经肽和性行为”，Neurosci.Biobehav.Rev.(1999)，23(8)，1127-1142)；α-2肾上腺素拮抗剂，例如育亨宾和rauwolscine(参见，例如，C.M.Meston等，“可乐定对主观的和生理性的女性性唤起的抑制作用”，Psychosom.Med.(1997)，59(4)，399-407)；雄激素和选择性的雄激素受体调节剂(SARM)(参见，例如，S.H.M.Van Goozen等，“行为的性差异交叉性激素的激活作用”，Psychoneuroendocrinology(1995)，20(4)，343-63)；丁氨苯丙酮(Zyban)(联合的去甲肾上腺素/多巴胺(NE/DA)重吸收阻断剂)；血管活性肠肽(VIP)(参见，例如，B.Ottesen等，“血管活性肠多肽(VIP)刺激正常女性的阴道润滑”，Peptides(1987)，8(5)，797-800)；中性内肽酶抑制剂(NEP)(参见，例如，G.N.Maw和C.P.Wayman，“用于治疗女性性功能障碍的NEP(中心内肽酶)抑制剂”，欧洲专利申请1097719(2001))；和神经肽Y受体拮抗剂(NPY)(参见，例如，G.N.Maw和C.P.Wayman，“用于治疗女性性功能障碍的神经肽Y(NPY)拮抗剂”，欧洲专利申请1097718(2001))。
在一个实施方案中，本发明提供了治疗女性性功能障碍的方法，该方法包括向需要所述治疗的女性患者联合施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和黑皮质素受体激动剂化合物。
特别优选的黑皮质素受体激动剂是黑皮质素-4受体激动剂。黑皮质素-4受体激动剂的例子包括melanotan II(MTII)、α-MSH和NDP-MSH。
可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体、特别是黑皮质素-4受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物的例子是8，16-二-(4-硝基-苯基)-5，6，8，8a，13，14，16，16a-八氢-[1，2，4，5]三嗪并[6，1-a；3，4-a’]二异喹啉，该化合物可以按照Deyrup，J.等，Tetrahedron Letters，24，2191-2(1971)或Grashey，R.等，Angew.Chem，74(8)292-293(1962)。
该专利申请中引用的所有文献均引入本文作为参考。
以下实施例是用来举例说明本发明的具体实施方案的，并不以任何方式限定本发明、包括权利要求的范围。
实施例为了确定可以减弱AGRP与黑皮质素受体、特别是黑皮质素3和/或4受体的结合但不减弱α-MSH与黑皮质素受体的结合的化合物，可以采用一系列双放射性配体结合试验。第一种放射性配体结合试验是[125I]AGRP竞争结合试验。该试验将检测可以减弱[125I]AGRP或AGRP结合的化合物。注意可以通过与黑皮质素3和/或4受体结合或通过与AGRP本身结合而减弱AGRP与黑皮质素3和/或4受体结合的化合物。第二种放射性配体结合试验是使用放射性标记的黑皮质素配体例如[125I]去亮氨酸D-苯丙氨酸黑素细胞刺激激素([125I]NDP-MSH)。在放射性配体结合试验中使用从表达黑皮质素3或4受体的细胞制备的膜。[125I]AGRP和[125I]NDP-MSH的制备和应用是本领域熟知的。参见例如，Dang等，Molecular Endocrinology，13，148-155(1999)。此外，表达黑皮质素3或4受体的细胞的膜的制备和应用也是本领域熟知的。参见Bass等，Molecular Pharmacology，50，709-715(1996)。实施例1 放射性配体结合试验[125I]AGRP竞争结合试验[125I]AGRP的比活性为2200Ci/mmol。[125I]AGRP的最终浓度为100pM。因此，需要在结合缓冲液中制备2nM(20X)的储备液。[125I]AGRP的浓度在40-60nM之间变化。[125I]AGRP可以从New England Nuclear，Boston，MA获得。
竞争试验可以在96孔板中进行。96孔板的最后一行(H行)应用于总的(“总数”)每分钟计数(cpm)结合(H1，2)、1μM AGRP(H3，4)、1μMNDP-MSH(H5，6)和滤膜空白(仅有结合缓冲液，没有膜；H7，8)。其它的行(A-G)用于待测试的化合物。在96孔格式的7点竞争曲线中，最多可以测定7种化合物。各化合物的前6行可用于一式两份地测试6种浓度下的6种化合物。以下给出了对于一种化合物的例子。下一种化合物应在A-F行的第3和4列。第7种化合物可以置于G1-12行。
以如下储备液浓度在结合缓冲液中制备样品10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8M。终浓度将小一个数量级(10-4至10-9)。化合物的储备液浓度通常为25mM，因此需要25∶1的稀释。准备6个标记有-4至-9的试管。向每个试管中加入100μl结合缓冲液。向标记有-4的试管中加入4μl25mM的储备液。旋涡振荡然后取出11μl-4的样品加入到-5的试管中。如此重复直至制备了所有的稀释液。对于每一行，化合物看起来象是这样A1，2-9(nM)B1，2-8(10nM)C1，2-7(100nM)D1，2-6(1μM)E1，2-5(10μM)F1，2-4(100μM)向各孔中按顺序加入向“总的”孔(H1，2)中加入20μl结合缓冲液。向孔H3，4中加入20μl 10μM AGRP。向孔H5，6中加入20μl 10μM NDP-MSH。向孔H7，8中加入170μl结合缓冲液。向所有的孔中加入10μl 2nM[125I]AGRP。向除H7，8之外的所有孔中加入170μl在结合缓冲液中稀释至5μg/170μl的膜。步骤1.设立96孔过滤系统试验(UnlfilterGF/CTM，Packard InstrumentCompany，Mer iden，CT)。2.保温90-120分钟，室温下振荡。3.使用细胞收集器，将样品吸到处理头内。使用预先浸湿的(0.3％聚环乙亚胺)滤纸。4.用冷的洗涤缓冲液洗涤4次。5.将平板干燥，向各孔中加入25μl闪烁液。6.计数样品。结合缓冲液50mM Hepes/10mM MgCl2，pH7.4(从10倍的储备液制得)0.2％BSA(V部分)蛋白酶抑制剂(制成100倍的储备液)。
100μg/ml杆菌肽100μg/ml苄脒5μg/ml抑肽酶5μg/ml亮抑蛋白酶肽蛋白酶抑制剂可以从Sigma，St Louis，MO获得。洗涤缓冲液50mM Hepes/10mM MgCl2，pH7.4，冰冷的(从10倍的储备液制得)。[I125]NDP-MSH竞争结合试验[125I]NDP-MSH的比活性为2200Ci/mmol。[125I]NDP-MSH的最终浓度为250pM。因此，需要在结合缓冲液中制备5nM(20X)的储备液。[125I]NDP-MSH的浓度在40-60nM之间变化。[125I]NDP-MSH可以从NewEngland Nuclear，Boston，MA获得。
竞争试验可以在96孔板中进行。96孔板的最后一行(H行)应用于总的cpm结合(H1，2)、1μM AGRP(H3，4)、1μM NDP-MSH(H5，6)和滤膜空白(仅有结合缓冲液，没有膜；H7，8)。其它的行(A-G)用于待测试的化合物。在96孔格式的7点竞争曲线中，最多可以测定7种化合物。各化合物的前6行可用于一式两份地测试6种浓度下的6种化合物。以下给出了对于一种化合物的例子。下一种化合物应在A-F行的第3和4列。第7种化合物可以置于G1-12行。
以如下储备液浓度在结合缓冲液中制备样品10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8M。终浓度将小一个数量级(10-4至10-9)。化合物的储备液浓度通常为25mM，因此需要25∶1的稀释。准备6个标记有-4至-9的试管。向每个试管中加入100μl结合缓冲液。向标记有-4的试管中加入4μl 25mM的储备液。旋涡振荡然后取出11μl-4的样品加入到-5的试管中。如此重复直至制备了所有的稀释液。对于每一行，化合物看起来象是这样A1，2-9B1，2-8C1，2-7D1，2-6E1，2-5F1，2-4向各孔中按顺序加入向“总的”孔(H1，2)中加入20μl结合缓冲液。向孔H3，4中加入20μl 10μM AGRP。向孔H5，6中加入20μl 10μM NDP-MSH。向孔H7，8中加入170μl结合缓冲液。向所有的孔中加入10μl 2nM[125I]NDP-MSH。向除H7，8之外的所有孔中加入170μl在结合缓冲液中稀释至5μg/170μl的膜步骤1.设立96孔过滤系统试验(UnlfilterGF/CTM，Packard InstrumentCompany，Meriden，CT)。2.保温90-120分钟，室温下振荡。3.使用细胞收集器，将样品吸到处理头内。使用预先浸湿的(0.3％聚环乙亚胺)滤纸。4.用冷的洗涤缓冲液洗涤4次。5.将平板干燥，向各孔中加入25μl闪烁液。6.计数样品。结合缓冲液50mM Hepes/10mM MgCl2，pH7.4(从10倍的储备液制得)0.2％ BSA(V部分)蛋白酶抑制剂(制成100倍的储备液)。
100μg/ml杆菌肽100μg/ml苄脒5μg/ml抑肽酶5μg/ml亮抑蛋白酶肽洗涤缓冲液50mM Hepes/10mM MgCl2，pH7.4，冰冷的(从10倍的储备液制得)。实施例2雌激素受体结合。
通过如下方法测定雌激素和雌激素激动剂/拮抗剂结合亲和性人ERα的cDNA克隆通过RT-PCR用ExpandTMHigh Fidelity PCRSystem按照生产商的说明(Boehringer-Mannheim，Indianapolis，IN)从人乳腺癌细胞mRNA克隆人ERα的编码区。将PCR产物克隆到pCR2.1TA克隆试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)中并测序。将各受体编码区亚克隆到哺乳动物表达载体pcDNA3((Invitrogen，Carlsbad，CA)中。
哺乳动物细胞表达。将受体蛋白在293T细胞中过表达。这些细胞从HEK-3细胞(ATCC，Manassas，VA)衍化而来，已对其进行了改造以稳定地表达大量T抗原，从而可以复制含有SV40复制起点的质粒至高的拷贝数。将293T细胞用hERα-pcDNA3或hERβ-pcDNA3用脂转染胺按照生产商的描述(Gibco/BRL，Bethesda，MD)进行转染。转染48小时后，将细胞收集在含有0.5mM EDTA的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。将细胞沉积物用PBS/EDTA洗涤一次。通过用dounce匀化器在TEG缓冲液(50mM Tris pH7.4，1.5mM EDTA，50mM NaCl，10％甘油，5mM DTT，5μg/ml抑肽酶，10μg/ml亮抑蛋白酶肽，0.1mg/ml Pefabloc)中匀化制备全细胞溶解产物。将提取物以100,000xg在4℃下离心2小时然后收集上清液。用BioRad试剂(BioRad，Hercules，CA)测定总蛋白浓度。
竞争结合试验。通过竞争结合试验，用葡聚糖包衣的木炭按照文献中的描述(Leake RE，Habib F 1987甾族激素受体检测和鉴定。B.Green和R.E.Leake(编).Steroid Hormone a Practical Approach.IRL Press Ltd，Oxford.67-92)测定各种化合物抑制[3H]-雌二醇结合的能力。将表达hERα或hERβ的293T细胞提取物在浓度逐渐增加的待测试化合物和固定浓度的[3H]-雌二醇(141μCi/mmol，New EnglandNuclear，Boston，MA)的存在下在50mM TrisHCl pH7.4，1.5mM EDTA，50mM NaCl，10％甘油，5mM DTT，0.5mg/mL β-乳球蛋白中以0.2mL的最终体积进行保温。将所有待测试的化合物溶于二甲亚砜。受体的最终浓度为50pM和0.5nM[3H]-雌二醇。于4℃下16小时后，加入葡聚糖包衣的木炭(20μL)。室温下15分钟后，通过离心除去木炭，然后通过闪烁计数测定上清液中存在的放射性配体。若无另外说明，所有试剂均从Sigma(St Louis，MO)获得。
(-)-顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]--5，6，7，8-四氢-萘-2-醇(PPTN)和17β-雌二醇的结合亲和性用重组的人雌激素受体(ER)测定。图1给出了结合实验的结果，从其中可以看出，PPTN的结合与17β-雌二醇相似。实施例3在体外对人乳腺肿瘤细胞生长的抑制用两种类型的人乳腺癌细胞系测试了(-)-顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇(PPTN)的体外抗增殖作用第一种，MCF-7细胞，其含有ER以及孕酮受体(PgR)，第二种，MDA-MB-231细胞，其缺乏ER和PgR，能够用来测定不依赖于ER机制的作用。PPTN对这些不同的细胞系生长的影响通过将细胞与各种浓度的化合物一起保温6天来测定。
然后通过直接细胞计数测定抗增殖作用。PPTN抑制ER-阳性细胞系MCF-7的生长。生长抑制的IC50值约为3至5×10-11M。在ER-阴性的细胞系MDA-MB-231中，化合物不能抑制细胞增殖。这些结果表明生长抑制作用是ER特异性的，并不是由于细胞毒性，因为化合物对ER-阴性的细胞系没有明显影响。实施例4在绝经后的妇女中测定性功能在52周的、安慰剂对照的临床研究中评估绝经后妇女的性功能和满意程度，用改进的妇女健康调查表(WHQ)作为衡量方法。在开始研究前，将绝经后妇女分成两组，每组5至100名妇女。一组为安慰剂对照组。另一组为接受含有雌激素激动剂/拮抗剂的药物组合物的试验组。在研究开始时，两个组的所有参加者均完成一份WHQ。对照组的参加者接受每天的安慰剂组合物。试验组的参加者接受含有雌激素激动剂/拮抗剂的组合物。在研究结束时，两个组的参加者再完成一份WHQ。然后将对照组和试验组的WHQ结果进行比较。
妇女健康调查表(WHQ)提供了对绝经期和绝经后妇女所经历的小的心理和身体变化的详细调查(Hunter M.等，Maturitas；8217，1986)。WHQ在可靠性和有效性上得到了充分的证实。调查表有36个分4个分值的问题。分值越高，苦恼和功能障碍越明显。这36个项目合成了9个描述身体症状、压抑的情绪、认知困难、焦虑/恐惧、性功能、血管舒缩症状、睡眠问题、月经症状和吸引力的因素。用于该研究的改进的妇女健康调查表包含关于女性性功能障碍、包括例如性欲低下、性唤起障碍、交媾困难和阴道痉挛的具体问题。
权利要求
1.可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物在制备用于治疗女性患者的性唤起障碍的药物中的用途。
2.可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物在制备用于治疗女性患者的阴道痉挛的药物中的用途。
3.可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物在制备用于在女性患者中增加性高潮的频率或强度的药物中的用途。
4.可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物在制备用于增强女性患者的性欲强于正常情况的药物中的用途。
5.权利要求1、2、3或4的用途，其中的黑皮质素受体是黑皮质素-4或黑皮质素-3受体。
6.含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物和2)雌激素激动剂/拮抗剂或其可药用盐。
7.含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物；2)黑皮质素受体激动剂化合物；和3)雌激素激动剂/拮抗剂或其可药用盐。
8.权利要求6或7的药物组合物，其中所述的雌激素激动剂/拮抗剂是下式(I)的化合物 其中A选自CH2和NR；B、D和E彼此独立地选自CH和N；Y是(a)苯基，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(b)萘基，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(c)C3-C8环烷基，其选择性地被1-2个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(d)C3-C8环烯基，其选择性地被1-2个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(e)含有最多两个选自-O-、-NR2-和-S(O)n-的杂原子的5元杂环，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；(f)含有最多两个选自-O-、-NR2-和-S(O)n-的杂原子的6元杂环，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；或(g)由一个与苯环稠合的5或6元杂环组成的二环环系，所述杂环含有最多两个选自-O-、-NR2-和-S(O)n-的杂原子，其选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；Z1是(a)-(CH2)pW(CH2)q-；(b)-O(CH2)pCR5R6-；(c)-O(CH2)pW(CH2)q-；(d)-OCHR2CHR3-；或(e)-SCHR-CHR3-；G是(a)-NR7R8；(b) 其中n是0、1或2；m是1、2或3；Z2是-NH-、-O-、-S-或-CH2-；其选择性地在相邻的碳原子上与一个或两个苯环稠合并且选择性地彼此独立地在碳上被1至3个取代基取代，并且选择性地彼此独立地在氮上被选自R4的化学上适宜的取代基取代；或(c)含有5至12个碳原子的二环胺，其可以是桥接或稠合的并且选择性地被1-3个彼此独立地选自R4的取代基所取代；或者 Z1和G合在一起可以是W是(a)-CH2-；(b)-CH＝CH-；(c)-O-；(d)-NR2-；(e)-S(O)n-；(f)-C(＝O)-；(g)-CR2(OH)-；(h)-CONR2-；(i)-NR2CO-；(j) ；或(k)-C≡C-；R是氢或C1-C6烷基；R2和R3彼此独立地是(a)氢；或(b)C1-C4烷基；R4是(a)氢；(b)卤素；(c)C1-C6烷基；(d)C1-C4烷氧基；(e)C1-C4酰氧基；(f)C1-C4烷硫基；(g)C1-C4烷基亚磺酰基；(h)C1-C4烷基磺酰基；(i)羟基(C1-C4)烷基；(j)芳基(C1-C4)烷基；(k)-CO2H；(i)-CN；(m)-CONHOR；(n)-SO2NHR；(o)-NH2；(p)C1-C4烷基氨基；(q)C1-C4二烷基氨基；(r)-NHSO2R；(s)-NO2；(t)-芳基；或(u)-OH；R5和R6彼此独立地是C1-C8烷基或合在一起形成C3-C10碳环；R7和R8彼此独立地是(a)苯基；(b)饱和或不饱和的C3-C10碳环；(c)含有最多两个选自-O-、-N-和-S-的杂原子的C3-C10杂环；(d)H；(e)C1-C6烷基；或(f)与R5或R6形成3至8元含氮的环；线性或环状的R7和R8可以选择性地被最多3个彼此独立地选自C1-C6烷基、卤素、烷氧基、羟基和羧基的取代基所取代；由R7和R8形成的环可以选择性地与苯环稠合；e是0、1或2；m是1、2或3；n是0、1或2；p是0、1、2或3；q是0、1、2或3；或其光学或几何异构体；或其可药用盐、N-氧化物、酯、季铵盐或前药。
9.权利要求8的组合物，其中所述的雌激素激动剂/拮抗剂是式(IA)的化合物 其中G是 或 R4是H、OH、F或Cl；B和E彼此独立地选自CH和N，或其光学或几何异构体；或其可药用盐、N-氧化物、酯、季铵盐或前药。
10.权利要求9的组合物，其中所述的雌激素激动剂/拮抗剂是(-)-顺-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇或其光学或几何异构体；其可药用盐、N-氧化物、酯、季铵盐或前药。
11.权利要求10的组合物，其中所述的雌激素激动剂/拮抗剂是D-酒石酸盐的形式。
12.用于治疗女性性功能障碍的药物组合物，该组合物含有1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物，和2)选自升环鸟苷3’，5’-一磷酸剂的化合物。
13.权利要求12的药物组合物，其中所述的升环鸟苷3’，5’-一磷酸剂是PDEv磷酸二酯酶抑制剂。
14.权利要求13的药物组合物，其中所述的PDEv磷酸二酯酶抑制剂是1-[[3-(6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基-苯基]磺酰基]-4-甲基哌嗪柠檬酸盐。
15.含有如下成分的药物组合物1)可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α-黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物，和2)选择性地含有孕激素的雌激素。
全文摘要
本发明提供了治疗女性性功能障碍的方法，该方法包括向存在或有可能存在与女性性功能障碍有关的一种或多种病症或情况的患者施用治疗有效量的可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α－黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。本发明还提供了鉴定可用于治疗或预防女性性功能障碍的化合物的方法，该方法包括如下步骤1)测定化合物是否可以影响刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合；2)测定化合物是否可以影响α－黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合；和3)选择可以减弱刺鼠相关蛋白与黑皮质素受体的结合但不减弱α－黑素细胞刺激激素与黑皮质素受体的结合的化合物。
文档编号A61P15/02GK1403157SQ02129870
公开日2003年3月19日 申请日期2002年8月20日 优先权日2001年8月21日
发明者P·A·卡皮诺, J·R·N·哈德科克 申请人:辉瑞产品公司