专利名称：毛形属线虫在防治人和动物免疫功能低下引起疾病的医用用途及药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及毛形属(Trichinella)线虫的医用用途，尤其是公开了一种毛形属线虫在防治人和动物免疫功能低下引起疾病的医用用途，同时提供了相应的药物制剂，属于生物制药技术领域。
背景技术：
多年来，人们一直认为寄生虫是一种寄生在人或动物体内的害虫，但从辩证唯物主义观点看，寄生虫也应有其有益可利用的一面。在长期生物进化过程中，旋毛形线虫(Trichinella spiralis，Owen 1835)简称旋毛虫在人或动物体内生存，产生了许多有益的天然抗原物质，这些复杂的物质虽然迄今尚未搞清其结构和功能，但它确实有非特异性增强人或动物的免疫功能的作用。
发明内容
本发明公开了一种毛形属线虫在防治人和动物免疫功能低下引起疾病的医用用途，同时提供了相应的药物制剂。
本发明的技术方案如下旋毛形线虫细胞苗制备无菌收集旋毛形线虫500-1,000条后，放入改良的RPMI1640或MEM培养基(培养基中含动物肌肉蛋白酶消化液)中，将虫体研碎后，离心取上清进行原代培养，待细胞基本长成单层后，倒掉上悬液加入新的培养基进行传代培养，待细胞传至30代，测定其生长率曲线、细胞集落形成率及传代细胞染色体数。后用于人或动物。
旋毛形线虫致弱苗制备其制备方法之一将旋毛形线虫通过大白鼠、兔或马属动物等，连续传代10-15代，其间每隔1个月用旋毛形线虫(500-10000条虫体)接种免疫，共3-5次。收集其虫体用于人或动物。
制备方法之二直接收集感染旋毛形线虫动物肌肉中的虫体，放入PBS中，用10-20千伦琴(Kγ)剂量的钴-60(Co60)照射(或采用其它物理方法致弱)，用于人或动物。
旋毛形线虫生物活性物质制备将体外培养的旋毛形线虫排泄分泌物或收集的旋毛形线虫虫体破碎后加入不同浓度的有机溶剂如乙醇、石油醚和乙酸乙酯等进行萃取或进行生化分离提取，获得不同的生物活性物质， 经浓缩、灭菌处理后分装，用于人或动物。
通过肌肉接种旋毛形线虫细胞苗、经口接种旋毛形线虫致弱苗于人或动物体内，通过注射或经口给旋毛形线虫生物活性物质于人或动物体内，使其产生复杂的天然抗原物质，来增强人和动物免疫力，进而达到防治人和动物免疫功能低下或缺陷引起疾病之目的，同时也可作防治人和动物旋毛形线虫病的虫苗。
〖适应症〗主要用于肿瘤病、早期癌症、性功能低下以及艾滋病等免疫功能低下或缺陷引起疾病的预防和治疗，同时也可作防治人和动物旋毛形线虫病的虫苗。
〖使用方法〗；旋毛形线虫细胞苗以1×103-1×1010个细胞给动物和人一次肌肉注射，间隔3个月重复一次，其剂量和次数视人和动物的病情、年龄、性别、体质和防治目的等而定。
旋毛形线虫致弱苗以50-10,000个虫体给人或动物一次口服，间隔3个月重复一次，其剂量和次数视人和动物的病情、年龄、性别、体质和防治目的等而定。
旋毛形线虫生物活性物质根据模型动物实验结果，确定给人用药的途径和用量。
下述的药理实验证实了本发明药物制剂在防治人和动物免疫功能低下引起疾病的医用用途案例1将健康纯系的BALB/C鼠(雌雄各半，体得18-20g)，随机分为7组，每组10只，除第1组注射Hanks氏液100μL外，2-4组小鼠，分别给予50、100、200个致弱的旋毛形线虫虫体，3周后，分别以100μL含1×106个SP2/0骨髓瘤细胞于鼠的左后肢皮下注射。5-7组小鼠分别以100μL含1×106个SP2/0骨髓瘤细胞于鼠的左后肢皮下注射，3周后分别经口给予50、100、200个致弱的旋毛形线虫虫体，结果在小鼠荷瘤前和荷瘤后应用旋毛形线虫免疫的小鼠体内肿瘤体积明显小于不用旋毛形线虫免疫的对照组小鼠肿瘤体积，且个别小鼠未见肿瘤发生，说明旋毛形线虫具有很强的抗肿瘤作用(见表1)。
表1.不同组小鼠接种致弱的旋毛形线虫虫体后荷瘤情况组别肿瘤大小(cm)无肿瘤鼠数(只)1 2.00-2.50×3.00-3.3002 1.20-1.50×1.10-1.2013 1.10-1.30×1.10-1.2014 1.10-1.30×1.00-1.1525 1.00-1.20×1.00-1.1026 0.98-1.10×0.90-1.1027 0.90-1.10×1.00-1.152案例2某男，71岁，长期体质虚弱，2001年12月15日服用旋毛形线虫致弱苗4000个虫体，20天后有轻微发热反应，采用药物校正，转为正常，三个月后体质恢复，至今精力充沛，头发变黑，未发生感冒。
本发明的积极效果在于旋毛形线虫细胞苗可达到旋毛形线虫致弱苗免疫的效果，易大量制备，成本低，安全、疗效高，作用范围广。旋毛形线虫致弱苗制备容易，使用方便，成本低，效果好，作用范围广。旋毛形线虫生物活性物质成份单一，作用目标明确。
具体实施例方式实施例1旋毛形线虫细胞苗制备
无菌收集旋毛形线虫5000条，放入研钵中将虫体研碎，用0.25％胰酶消化30min制成细胞悬液，用PH7.2PBS离心洗涤三次，再用改良的RPMI1640培养液将细胞沉淀物制成悬液，分装于3个容量为30ML且预先用胶原包被的细胞培养瓶内，塞上胶塞，37℃恒温箱内培养，待细胞基本长成单层时，倒掉上悬液，用GNH(即Hanks氏液配方中去掉钙盐、镁盐和磷酸盐)洗涤一次，用预温的0.25％胰酶液浸泡20min使细胞脱盐，然后离心，倒掉上清液，加入6ml新培养液，混匀，分装两瓶，继续培养，连续传代培养30代，观察其生长率曲线，细胞集落形成率。
实施例2旋毛形线虫致弱苗制备将人工感染旋毛形线虫的大白鼠处死，取肌肉用搅肉机将肌肉搅碎，放入消化液(胃蛋白酶0.5g，盐酸0.7ml，水100ml)中，消化后收集虫体，将虫体放入PBS中以12千伦琴剂量进行Co60照射后保存。
实施例3旋毛形线虫生物活性物质化学提取法将100,000条虫体破碎后称重，放入圆底烧瓶中加适量70％乙醇浸泡过夜，后加热回流2-3h，过滤，浓缩乙醇提取液，剩余残渣继续使用70％乙醇加热回流4-5次，合并乙醇浓缩液，剩余残渣再用水煮沸2次，浓缩水煮液，合并至乙醇浓缩液中，残渣晒干称重备用。取部分乙醇浓缩液加适量石油醚萃取多次，剩余残渣继续用乙酸乙酯萃取多次。最后获得乙醇总提取物、乙醇总提取物残渣、石油醚提取物、乙酸乙醚提取物和残渣5个部分备用。
权利要求
1.毛形属线虫在防治人和动物免疫功能低下引起疾病的医用用途。
2.一种旋毛形线虫细胞苗制备方法，包括以下步骤无菌收集旋毛形线虫500-1,000条后，放入改良的RPMI1640或MEM培养基中，培养基中含动物肌肉蛋白酶消化液，将虫体研碎后，离心取上清进行原代培养，待细胞基本长成单层后，倒掉上悬液加入新的培养基进行传代培养，待细胞传至30代后，测定其生长率曲线、细胞集落形成率及传代细胞染色体数。
3.一种旋毛形线虫致弱苗制备方法，包括以下步骤将旋毛形线虫通过大白鼠、兔或马属动物等，连续传代10-15代，其间每隔1个月用旋毛形线虫接种免疫，共3-5次，收集其虫体用于人及动物。
4.一种旋毛形线虫致弱苗制备方法，包括以下步骤直接收集感染旋毛形线虫动物肌肉中的虫体，放入PBS中，用10～20千伦琴剂量的钴-60照射致弱，后用于人及动物。
5.一种旋毛形线虫生物活性物质制备方法，包括以下步骤将体外培养的旋毛形线虫排泄分泌物或收集的旋毛形线虫虫体破碎后加入不同浓度的有机溶剂如乙醇、石油醚和乙酸乙酯等进行萃取或进行生化分离提取，获得不同的生物活性物质， 经浓缩、灭菌处理后分装。
全文摘要
发明公开了一种毛形属线虫在防治人和动物免疫功能低下引起疾病的医用用途，同时提供了相应的药物制剂旋毛形线虫细胞苗、旋毛形线虫致弱苗、旋毛形线虫生物活性物质。通过肌肉接种旋毛形线虫细胞苗、经口接种旋毛形线虫致弱苗于人或动物体内，通过注射或经口给旋毛形线虫生物活性物质于人或动物体内，使其产生复杂的天然抗原物质，来增强人和动物免疫力，进而达到防治人和动物免疫功能低下或缺陷引起疾病之目的，同时也可作防治人和动物旋毛形线虫病的虫苗。
文档编号A61K39/00GK1439428SQ03111080
公开日2003年9月3日 申请日期2003年2月25日 优先权日2003年2月25日
发明者张西臣, 李建华, 尹继刚 申请人:中国人民解放军军需大学