专利名称：干扰素tau的口服给药的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及细胞因子的口服释放，尤其涉及干扰素的口服。
背景技术：
最近几年，由于很大程度上多肽和蛋白质作为药物使用的增长，用于治疗生理状态和病状的药物的种类得到了相当地发展。多肽在替代治疗中和作为药物制剂的重要作用反映在通过重组DNA技术合成大量蛋白质的努力方向上。
使用蛋白质和多肽作为药物的一个限制因素是当肠道外给药时会通过血浆蛋白而新陈代谢。由于胃中的蛋白水解，口服给药的途径存在更多问题，在到达其预定目标之前其中的酸性条件会破坏分子。例如，通过胃酶和胰酶作用产生的多肽和蛋白质片段，通过肠绒毛边缘膜的外肽酶和内肽酶裂解产生二肽和三肽。如果可以避免胰酶的蛋白水解，多肽受到绒毛边缘肽酶降解。通过胃还可以残存的多肽或蛋白质在肠粘膜中被代谢，肠粘膜中的穿透屏障防止其进入细胞。
尽管这些障碍，还是可以获得蛋白质和多肽在治疗上有益的口服，为了在胃和肠道中残存直至通过肠粘膜吸收，典型地通过将分子配制于保护性剂量形式中。例如，蛋白质可以和蛋白酶抑制剂一起服用，用聚合材料稳定，或将液体或聚合物颗粒装入胶囊。另一个处理是完全避开胃肠道，通过以锭剂的形式将蛋白质传递至口咽部分或将溶液在口腔中保持一段时间。
在复合物口服中必须考虑的另一个因素是，食品药品的相互作用可能改变口服药物的药物动力学和药效概貌。食品对药物吸收和生物利用率的影响已经对小的药物分子进行了研究(参见如，Singh，B.，Clin.Pharmacokinet37(3)213，(1999))，但是关于食品对蛋白质和多肽的药物吸收和生物利用率的影响知道得很少，而且较小的药物化合物用于蛋白质和多肽的机理是不清楚的。甚至对于小的药物化合物，胃容物对化合物的影响是推理不出的。典型地有五种食品对小药物分子吸收有影响它们导致(1)减少(2)延迟；(3)增加；或(4)加速吸收，和(5)食品中那些没有显著影响。在食品的不同影响和餐后生物利用度之间的接触存在着大量变数(i)物理化学特性和药物的成分；(2)用餐时间与服药时间的关系；(iii)用餐量和成分；和(iv)剂量。进一步，“食品影响”的机理可能包括对食品的生理和感觉回应，如胃肠道环境的改变和胃的排空率，以及回流作用(Id.)尽管有大量关于食品对小药物化合物影响的文献，但是仍然没有基础来预测食品对特定化学实体或药物化学分类的影响(Id.)。此外，没有知道对于小药物化合物的研究是否适用于蛋白质和多肽的基础；即使它们存在，也没有办法知道是什么食品和/或水摄入影响将作用于口服非天然蛋白质如干扰素TAU。
干扰素TAU(在下文为“IFN-τ”或干扰素-τ)已经作为由反刍动物胎体滋养外胚层产生的妊娠识别激素原始公开(Imakawa，K.，等，Nature330337-379，(1987)；Bazer，F.W.和Johnson，H.M.，Am J ReproImmunol2619-22，(1991))。尽管IFN-τ基因的分布局限于包括牛、绵羊和山羊的反刍动物，(Alexenko，A.P.，等，J Interferon andCytokine Res 191335-1341，(1999))IFN-τ在属于其他物种包括人和鼠的细胞中显示出活性(Pontzer，C.H.，等，Cancer Res515304-5307，(1991)；Alexenko，A.P.，等，J Interferon andCytokine Res 20817-822，(2000))。例如，IFN-τ已经证明具有抗病毒活性，(Pontzer，C.H.，等，Biochem Biophys Res Commun152801-807，(1988))，抗增生活性(Pontzer，C.H.，等，1991)和免疫调节活性(Assal-Meliani，A.，Am J Repro Immunol33267-275，(1995))。
而IFN-τ显示了许多分类上与如干扰素-α和干扰素-βI型IFN有关的活性，IFN-τ和其他I型IFN之间存在相当的差异。最主要的区别是IFN-τ在反刍物种妊娠中的作用。其他I型IFN在妊娠识别上没有相似活性。其他差别是病毒感应。所有I型IFN，除了IFN-τ，很容易被病毒和dsRNA诱导(Roberts，等，Endocrine Reviews13432(1992))。诱导的IFN-α和IFN-β的表达是瞬时的，持续大约几个小时。相反，一旦诱导IFN-τ合成，将保持几天以上(Godkin，等，.J.Reprod Fert.65141(1982))。以每个细胞为基础，产生比其他I型IFN多300倍的IFN-τ(Cross，J.C.和Roberts，R.M.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA883817-3821(1991))。
另一个区别是IFN-τ和其他I型干扰素的氨基酸序列。干扰素α2b、β1、ω1、γ，和τ之间氨基酸序列相似性的百分比总结于下表。
序列比较从以下参考文献获得确定Taniguchi等，Gene，10(1)11(1980).
Adolf等，Biochim，Biophys.Acta，1089(2)167(1991).
Streuli等，Science，2091343(1980).
Imakawa等，Nature，330377(1987).
重组绵羊IFNτ(rOvIFNτ)与IFNα2b的同源性为48.4％，与IFNβ1的同源性为33.8％。由于IFNτ与IFNα之间以及IFNτ与IFNβ之间有限的同源性，不能预测当口服时IFNτ是否表现出与IFNα或IFNβ相同的方式。本领域对IFNα、IFNβ，或其他任何非-tau干扰素口服的教导未能提供任何期望可用于IFNτ的基础。
发明概述因此，本发明的一方面包括在规定食物和/或摄水方案后将干扰素-τ给患者服用的方法。该方法包括给患者口服一定量的干扰素-τ，使其全血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶(OAS)含量相对于给患者也口服了干扰素-τ但是没有进行规定食物和/或摄水方案患者所获得的能有效地得到提高，。
一个实施方案中，干扰素-τ是绵羊或牛干扰素-τ。
干扰素-τ可以以固体药剂形式或液体药剂形式服用。典型的剂量至少约为1×104单位/天。
另一方面，本发明考虑了服用干扰素-τ的方法，包括(i)不给予选自服用干扰素-τ患者的食物；和(ii)给患者口服干扰素-τ，使其全血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶相对于从进食后口服了干扰素-τ患者所得血中的2’，5’-寡腺苷酸合成酶的含量能有效的得到提高。
在一个实施方案中，不给予进一步包括不给予患者的水。在另一个实施例中，不给予包括在口服之前不给予患者的食物至少一个小时，更优选，至少四小时，仍然更优选至少六小时。
另一个实施方案中，本发明的方法，发现可用于处理自体免疫的状态，病毒感染，或与细胞增殖有关的状态。
还是另一个方面，考虑了干扰素-τ口服方法的改进。该改进包括在给患者口服IFNτ之前不给予患者的食物。该不给予使全血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量相对于从进食后口服干扰素-τ患者所得血中的2’，5’-寡腺苷酸合成酶的含量能有效的得到提高。
当结合下面附图的详细描述时，本发明的这些目的和特征将变得更加清楚。
附图概述
图1A-1D是柱状图，显示了禁食条件对服用OvIFN-τ小鼠中血OAS诱导的影响。血OAS的诱导，用无干扰素的10％麦芽糖溶液处理小鼠中的血OAS作为对照百分比来表示。所示摄食状况处理小鼠六小时后接受了104U的OvIFN-τ(通过腹膜内注射或口服)图1A，无食物和无水；图1B，有水无食物；图1C，有食物无水；图1D，食物和水都有。每个柱具有相似结果的两次进行的一个实验(3只小鼠)的平均值±S.E.。
图2的柱状图显示了以pmol/dL计，若干个小鼠品系中(ICR、BALB/c、C57BL，NZW/N和SJL/J)口服OvIFN-τ(105U)后的血OAS浓度。对照小鼠口服无干扰素的10％麦芽糖溶液。每个柱表示一个实施例(3~5只小鼠)两种方式的平均±S.E.，具有相似的结果。
图3A-3B的柱状图显示了6小时禁食后服用OvIFN-τ后小鼠中血OAS活性的诱导。口服IFN-τ或通过腹膜内注射。图3A显示了血OAS含量，以对照百分比表达(参见以上对图1的描述)在服用IFN-τ(105U)后的零时间和8小时、16小时，和24小时取血样。图3B显示了，以对照百分比表达，以0，102，103，104，和105U的浓度服用OvIFN-τ24小时后的血OAS含量。每个柱具有相似结果的两次进行的一个实验(3只小鼠)的平均值±S.E.。
图4的柱状图显示了血OAS活性的诱导，以对照百分比表达(参见以上对图1的描述)，通过给ICR小鼠口服或腹膜内注射服用MuIFNα(0，102，103和104IU)。在服用IFNα16小时后分析血中OAS的活性。每个柱具有相似结果的两次进行的一个实验(3只小鼠)的平均值±S.E.。
序列简述SEQ ID NO1是编码绵羊IFN-τ合成基因的核苷酸序列。同时显示了被编码氨基酸的序列。
SEQ ID NO2是成熟OvIFN-τ蛋白的氨基酸序列。
发明详述I.定义“禁食状态”或“禁食状态”意味着放弃所有食物和饮料仅仅在口服药物如蛋白质或多肽前，至少约一小时饮水，优选至少约两小时，更优选至少约四小时，最优选至少约六小时。
“禁食状态还不包括水”意味着禁食所有食物和所有流体，包括但不限于水，在口服药物如蛋白质或多肽之前，至少约一小时，优选至少约两小时，更优选至少约四小时，最优选至少约六小时。
“非禁食状态”或“进食状态”意味着在口服药物如蛋白质或多肽之前的任何时间消耗食物和/或水。
“不给予食物”是指禁食状态。
“口服(Orally administering)”或“口服(Oral administration)”意味着将化合物传递至患者的胃和或/胃肠道系统。这些术语不包括口-咽传递，其中化合物的全身传递通过口腔或咽部分吸收而完成的。
“肽”和“多肽”在此可以交换使用，指通过肽键连接的氨基酸残基链构成的化合物。除非另外指出，所给肽的序列是从氨基末端至羧基末端的顺序。
当第一个肽或多肽被认为与第二个肽或多肽片断“一致”或“同源”时，使用ALIGN程序突变间隙矩阵(mutation gap matrix)如果它们排列得分(alignment score)＞5(在标准偏差单位中)以及间隙罚分(gappenalty)为6或更高，意味着肽或片断具有相似的氨基酸残基(Dayhoff，M.O.，蛋白质序列和结构图册(1972)Vol.5，NationalBiomedical Research Foundation，pp.101-110，以及该卷的附录2，pp.1-10.)当使用上述提及的ALIGN程序最优排序时，如果它们的氨基酸同一性高于或等于50％，更优选为70％，依然更优选为80％，两个序列(或其部分)更优选为同源。
当其具有作为另一个序列或片断部分的氨基酸残基同一序列时，多肽序列或片断是“源”自另一个多肽序列或片断。
干扰素τ多肽是源自干扰素τ氨基酸编码序列的具有15-172个氨基酸的多肽，其中所述的15-172个氨基酸在天然干扰素τ中是邻接的。这样15-172个氨基酸部分还可以集合成多肽，其中通常在天然蛋白中不连续的两个或多个这样的干扰素τ片段连接起来。
治疗疾病指的是服用治疗物质有效来减少疾病的症状和/或减轻疾病的严重程度。
II干扰素服用的方法A.干扰素-τ例如，美国专利No.5,958,402，以及在此如SEQ ID NO2阐明了绵羊IFNτ的172个氨基酸序列。与绵羊IFNτ有相似特性和活性的IFNτ序列已经从其他反刍物种包括牛和山羊中分离得到(Bartol，F.F.，等，Biol.Reprod.32681-693，(1985)；Gnatek，G..G等，Biol.Reprod.41655-664，(1989)；Helmer，S.D.，等，J.Reprod.Fert.7983-91，(1987)；和Imakawa，K.，等，Mol.Endocrinol.3127(1989))。牛IFNτ(BoIFNτ)和OvIFNτ(i)在妊娠成熟认知上有相似功能，和(ii)在成熟蛋白质之间具有高度氨基酸和核酸序列同源性。OvIFNτ和BoIFNτ之间核酸序列同源性对于5’非编码片段为76.3％，对于编码片段为89.7％，对于3’非编码片断为91.9％。氨基酸序列同源性为80.4％。同源的牛IFNτ序列已经得到描述，例如，在Helmer等，J.Reprod.Fert.7983-91，(1987)和K.，等，Mol.Endocrinol.3127(1989)。从这些参考文献获得的绵羊IFNτ和牛IFNτ序列在此并入作为参考。
B.服用方法在为支持本发明进行的研究中，给小鼠口服OvIFN-τ以及监控全血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶(OAS)活性的诱导，OAS活性是IFN作用的认知标记(Shindo，M.，等，Hepatology8366-370，(1988))。在以下描述的所有研究中，跟随实施例1所示的过程。在服用OvIFN-τ之前，小鼠至少六小时没有进食和饮水，IFN-τ通过口(p.o.)服给药，以及对照通过腹膜内(i.p.)注射。当口服时，使用口服喂养针将IFN-τ直接引入胃的上部。
在最初的研究中，评价了禁食状况对服用OvIFN-τ小鼠血OAS诱导的影响。在这个研究中，小鼠接受规定的食物和摄水方案六小时。该六小时状况以后，通过口管饲法或通过腹膜内注射与食物和水一起服用104UOvIFN-τ。摄食状况如下所示状态I，食物和水都未给；状态II，给水但未给食物；状态III，只给食物；状态IV，食物和水都给。24小时时从心脏获得全血，测定了OAS活性水平。结果显示于图1A-1D。
图1A-1D与接受状态I-状态IV各自相对应于上一段定义的食物和水摄入状况。图1A-1D的结果显示了血OAS的诱导，用无干扰素的10％麦芽糖溶液处理小鼠的血OAS作为对照百分比来表达。结果显示了禁食状态患者通过口服IFN-τ诱导了较高的血OAS含量，如图1A和图1B没有接受食物的小鼠中最高。
在该研究中，观察到在有或无水供应几乎相同量的食物消化。然而，摄入水没有食物(状态I和状态II)比有食物(状态III和状态IV)较低。在一些动物中，禁食六小时后，口服喂食含有蓝色染料的0.2ml麦芽糖溶液，观察到染料分散在胃和肠道中(数据未显示)。接着食物的消化(状态III和状态IV)，小鼠的胃胀大以及染料主要停留在胃中，可能因为食物吸收了染料。然而，当没有食物消化时染料很快转移至肠道。该观察显示了口服OvIFN-τ可以在肠道发挥其效果来诱导血中高水平的OAS活性。
图2显示了在各种小鼠品系中ICR、BALB/c、C57BL/9，NZW/N和SJL/J，OvIFN-τ胃服用对于血中OAS活性诱导的影响。所有测试小鼠口服了OvIFN-τ(105U)。对照小鼠口服无IFN-τ的10％麦芽糖溶液。每个柱具有相似结果的两次进行的一个实验(3只小鼠)的平均值±S.E.。
如图2所示，在所有小鼠品系中口服OvIFN-τ后OAS活性水平提高了，尽管提高的幅度随品系而改变。ICR，C57BL/9和NZW/N小鼠中诱导的活性水平比BALB/c和SJL/J小鼠中的高。
在另一个研究中，在服用IFN-τ后以时间函数来监控OAS活性，在该研究中，动物(ICR小鼠)在服用IFN-τ(105U)之前接受了六小时禁食(有水但无食物)。在服用IFN-τ后8小时、16小时和24小时取血样。结果显示于图3A。
图3A显示了OAS含量，以对照百分比表达(参见上述图1的描述)，在服用IFN-τ后按所示时间间隔取血样。在图3A中，每个柱具有相似结果的两次进行的一个实验(3只小鼠)的平均值±S.E.。在全血中OAS活性以与口服或腹膜内注射途径无关而依赖时间的方式提高了，然而，在24小时时间点观察到口服比腹膜内注射较高的含量。
在另一个研究中，OvIFN-τ以不同的浓度(0，102，103，104和105U)给六小时禁食后的小鼠服用。24小时后取血，分析OAS活性，结果显示于图3B。
图3B显示了OvIFN-τ以0，102，103，104，和105U浓度服用24小时后血OAS含量，以对照百分比表达(参见上述图1的描述)。每个柱具有相似结果的两次进行的一个实验(3只小鼠)的平均值±S.E.。腹膜内注射后，活性水平在OvIFN-τ低剂量(102U)相当高，在较高剂量饱和(104和105U)。相反，口服后的活性水平依赖剂量而提高。
图3A-3B的数据显示了比腹膜内注射诱导较高的口服IFN-τ诱导的血OAS活性水平。尤其是，在IFN-τ剂量高于103U和在服用时间大于约8小时以后，口服诱导的血OAS水平比通过腹膜内注射诱导的血OAS水平高。
做了对照研究来测量口服MuIFN-α对血OAS含量的影响。在该研究中，以不同浓度(0，102，103和104IU)的MuIFN-α通过口服或腹膜内注射途径处理ICR小鼠。测定服用MuIFN-α16小时后血中的OAS活性。结果如图4所示，其中每个柱具有相似结果的两次进行的一个实验(3只小鼠)的平均值±S.E.。
图4是柱状图，显示了口服或通过肠膜内注射MuIFNα(0，102，103和104IU)后血OAS活性的诱导，以对照百分比表达(参见上述图1的描述)。任一种服用途径的OAS活性水平随剂量增加，用肠膜内注射血OAS活性诱导的结果比口服好。与观察服用IFN-τ的结果相反，其中口服IFN-τ比肠膜内注射IFN-τ达到较高的血OAS含量。此外，当服用MuIFN-α时小鼠体温轻微升高，当使用OvIFN-τ时但没有(数据未显示)。
III.实用性A.对IFN-τ敏感状态的处理如上所述，IFN-τ具有作为抗病毒剂、抗增殖剂和治疗自体免疫失调的生物活性(参见如美国专利No.5,958,402；5,942,223；6,060,450；6,372,206，其在此并入作为参考)。因此，本发明考虑了口服IFN-τ来用于治疗当通过注射时对IFN-τ敏感的任何状态。可以使用本发明的方法来处理的状态和疾病包括自体免疫、炎性的、增生的和高增生疾病，以及免疫介导的疾病。
尤其是，本发明的方法对于处理与免疫系统超敏反应相关的状态是有优势的。存在四种类型的免疫系统超敏反应(Clayman，C.B.，Ed.，American Medical Association Encyclopediaof Medicine，Ramdon House，New York，N.Y.，(1991))。I型，或速发型/过敏性超敏反应，是由于对过敏原(例如，花粉)应答而肥大细胞失粒，包括哮喘、过敏性鼻炎(花粉热)、风疹(荨麻疹)、过敏性休克，以及过敏性质的其他疾病。II型，或自体免疫超敏反应，是由于抗体作用于体内自身细胞感知到的“抗原”。III型超敏反应是由于抗原/抗体免疫复合物的形成，其进入并固定在各种组织并激活进一步的免疫应答，以及是对如血清病、过敏性肺泡炎以及有时在激发剂接种后产生的大肿块这样状态的应答。IV型超敏反应是由于敏化T细胞中淋巴因子的释放，其导致了炎症反应。实例包括接触性皮炎、麻疹的发疹，以及对特定药物的“过敏性”反应。
在一些个体中通常不能很好地了解到可导致超敏反应的特定状况的机理，但是可能同时包括遗传和外源因素。例如，细菌、病毒或药物可能在已经具有免疫失调遗传诱因的个体中起引起免疫应答的作用。已经知道一些类型超敏反应的发生率可能与其他有关。例如，已经证实具有特定普通过敏反应的个体对自体免疫失调更敏感。
自体免疫失调可以松散地归合成那些主要局限于特定器官或组织以及那些影响整体。器官特定失调(器官受到影响)的实例包括多发性脑脊髓硬化症(髓磷脂披覆在神经突出上)，I型糖尿病(胰腺)、淋巴瘤性甲状腺肿(甲状腺)、恶性贫血(胃)、艾迪生氏病(肾上腺)、重症肌无力(神经肌肉接点的乙酰胆碱受体)、类风湿性关节炎(jointlining)、葡萄膜炎(眼睛)、牛皮癣(皮肤)、Guillain-Barre综合症(神经细胞)和Grave’s疾病(甲状腺)。系统自体免疫疾病包括系统狼疮和皮肌炎。
超敏反应失调的其他例子包括哮喘、湿疹、遗传过敏性皮炎、接触性皮炎、其他湿疹性皮炎、面游风、鼻炎、扁平苔癣、Pemplugus、大疱性类天疱疮、表皮松解、斑秃、动脉粥样硬化、夏科氏肝硬变和肾病综合症。相关的疾病包括肠炎，如乳糜泄、直肠炎、嗜酸粒细胞增多肠胃炎、肥大细胞病、炎症性肠病、Chrohn’s疾病和溃疡性结肠炎，以及食物有关的过敏反应。
自体免疫疾病尤其适用使用本发明的方法来处理包括多发性脑脊髓硬化症、I型(胰岛素依赖性)糖尿病、红斑狼疮、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、Crohn’s疾病、类风湿性关节炎、口腔炎、哮喘、葡萄膜炎、过敏反应和牛皮癣。
本发明的方法可以用于治疗以及因此减轻如上所述那些自体免疫的失调。
另一个实施例中，本发明的方法用于处理与病毒感染有关的状态。IFN-τ的抗病毒活性具有宽泛的治疗应用而无通常与IFNα有关的毒性作用，以及IFN-τ发挥其治疗活性而对细胞无反作用。IFN-τ细胞毒性的相对缺乏使其成为活体内非常有价值的药物，以及使IFN-τ与大多数其他公知抗病毒剂和所有其他公知的干扰素区分开来。
可以口服含有IFN-τ的配方来抑制病毒的复制。可以通过口服IFN-τ来治疗的特定病毒疾病的实例包括但不限制于，甲肝，乙肝，丙肝，非甲型、非乙型、非丙型肝炎，Epstein-Barr病毒感染，HIV感染，疱疹病毒(EB，CML，单纯疮疹)，乳头状瘤，痘病毒，细小核糖核酸病毒，鼻病毒，HTLVI，HTLVII，以及人轮状病毒。
另一个实施例中，本发明的方法考虑用来处理以高增生为特征的状态。IFN-τ显示出有效的抗细胞增生活性。因此，为了抑制、防止或减慢不受控制的细胞增长，考虑了通过口服IFN-τ来抑制细胞生长的方法。
可以通过口服IFN-τ来治疗特定细胞增殖失调的实例包括但不限制于，毛细胞白血病、卡波济氏肉瘤、慢性粒性白血病、多发性骨髓瘤、表面膀胱癌、皮肤癌(基底细胞癌和恶性黑色素瘤)，肾细胞癌、轻度淋巴细胞的和皮肤T细胞淋巴瘤，以及神经胶质瘤。
本发明的方法除了上面详细描述的用途以外，值得欣赏的是该方法还可用于治疗家养或野生动物遭受的各种免疫系统失调。例如，由于甲状腺渐进破坏引起的狗甲状腺机能减退，其可能与淋巴细胞的甲状腺炎有关(Kemppainen，R.J.，和Clark，T.P.，Vet Clin NAm Small AnimPract24(3)467-476，(1994))。淋巴细胞的甲状腺炎，其与人类的Hashimoto‘s甲状腺炎类似，被认为是自体免疫失调。根据在此提出的指导，由于淋巴细胞甲状腺炎引起的狗甲状腺机能减退可以如上所述用IFN-τ来治疗。
狗的另一种可以用IFN-τ处理来减轻的免疫失调是以抗核抗体(ANA)正性、发热和血清反应阴性关节炎为特征的(Day，M.J.，等ClinImmunol Immunopathol35(1)85-91，(1985))。使用本发明的方法还可以有效治疗免疫介导的血小板减少症(ITP；Kristensen，A.T.，等，J Vet Intern Med8(1)36-39(1994)；Werner，L.L.，等，Vet ImmunolImmunopathol8(1-2)183-192，(1985))，系统红斑狼疮(Kristensen，等，1994)，以及白细胞减少症和库姆斯氏正象溶血性贫血(Werner等，1985)。
B.配方和剂量含有IFN-τ的口服制剂可以根据公知的制备药物组合物的方法来配制。通常，为了易于组合物有效的口服，IFN-τ治疗组合物以达到IFN-τ的有效量与合适的附加剂、载体和/或赋形剂结合来配制。例如，含有IFN-τ的片剂和胶囊可以通过将IFN-τ(如冻干的IFN-τ蛋白)与附加剂如制药学上可接受的载体(如α型淀粉、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮)，崩解剂(如羧甲基纤维素钙、淀粉、低取代的羟丙基纤维素)，表面活性剂(如吐温80，聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物)，抗氧化剂(如L-半胱氨酸、亚硫酸钠、抗坏血酸钠)，润滑剂(如，硬脂酸镁、滑石)，等等混合。
进一步，本发明的IFN-τ多肽可以和固体、粉状的或其他载体混合，例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇，甘露醇，淀粉，如土豆淀粉、玉米淀粉，纤维素衍生物或明胶，以及还可以包括润滑剂，如镁或硬脂酸钙，或聚乙二醇蜡敷布在片剂构造上。通过使用若干层载体或稀释剂，可以制得缓慢释放作用的片剂。
用于口服的液体制备可以以酏剂、糖浆或悬浮液的形式来制得，例如含有约0.1％至约30％重量的IFN-τ，糖和乙醇、水、甘油、丙烯、乙二醇的混合物，以及可能常规性质的其他附加剂的溶液。
以对于个体治疗需要的治疗有效量来服用口服活性的IFN-τ药物组合物，剂量可以相应改变以及依赖于如失调的严重程度、病人的年龄和体重、病人可能服用的其他药物等等因素。量或剂量通常由主治医师来决定。剂量通常为约1×104至1×109单位/天，更优选1×105至1×108单位/天，优选约1×106至1×107单位/天。一个特定实施例中，IFN-τ以高于约1×104单位/天的剂量口服，优选高于约1×106单位/天，更优选高于约1×108单位/天。
以约每二至四小时的频率来服用对于需要血浆中有稳定升高含量IFN-τ的失调是有利的，而其他失调，如多发性脑脊髓硬化症，可以通过服用治疗有效剂量至少间隔如48小时一次的频率来有效地治疗。个体药剂服用的频率通常由主治医生来调节以至能够服用最低总剂量而来缓和所治疗疾病的严重程度。
一旦病人状态发生好转，如果需要可以保持服用药剂。其后，作为症状函数的服用剂量或频率，或两者，可以减少至保持改善状况的含量。
如上所述，IFN-τ的口服与规定食物/水摄入状况来开药方。令人欣赏的是选自于与图1A-3B相对应描述的支持研究的食物/水摄入状况仅仅是示例。本发明考虑在服用蛋白质之前可以不给予食物和/或水各种时间，在此所例解的为多或少于六小时。优选实施例中，在IFN-τ的口服之前食物和/或水不给予至少约一小时，更优选为不给予至少约两小时，仍然更优选为至少约六小时。
当然，可以理解本发明IFN-τ的口服可以和其他治疗法结合使用。例如，IFN-τ可以结合介导自体免疫应答的抗原来服用。实例包括共服用髓磷脂碱性蛋白和IFN-τ共同作用来治疗多发性脑脊髓硬化症；胶原蛋白和IFN-τ来治疗关节炎，以及乙酰胆碱受体多肽和IFN-τ来治疗重症肌无力。
进一步，IFN-τ可以和公知的免疫抑制剂如类固醇一起口服来治疗自体免疫疾病如多发性硬化症。免疫抑制剂可以和IFN-τ协同作用达到IFN-τ或免疫抑制剂单独等量药剂得到的多效治疗。
相同地，治疗癌症和病毒疾病中，IFN-τ可以和如治疗有效量的一种或多种化疗剂一起服用，化疗剂如白消安、5-氟尿嘧啶(5-FU)、叠氮胸苷(ATZ)、甲酰四氢叶酸、苯丙氨酸氮芥、强的松、环磷酰胺、氮烯唑胺、顺氯氨铂、双嘧哌胺醇，等等。
IV.实施例下列实施例说明但不限制本发明。
实施例1口服的方法ICR、BALB/c、C57BL/9、NZW/N和SJL/J系的无病原体的5周雌性小鼠从Japan SLC.Inc.，Hamamatsu购得。在实验前这些小鼠在实验室饲养一周。
重组绵羊IFN-τ(Ov IFN-τ)从Pepgen Corporation(Alameda，CA)获得。该IFN属于Ov IFN-τ1的亚型。用于该研究的制剂具有特定的5×108单位(U)/mg蛋白的活性，在MDBK细胞用VSV激发测定以及相对于人IFN-α作为标准。天然鼠IFN-α(Mu IFN-α)由SumitomoPharmaceutical Co.(Osaka，Jspan)供应，其特定活性为1×108国际单位(IU)/mg蛋白质。
为了给小鼠服用，将IFN-τ溶解于含有10％麦芽糖的溶液中。将0.2ml的样品通过口(p.o.)服或肠膜内(i.p.)注射给小鼠(6周雌性)服用。当口服时，使用20计器口服喂养针，将样品直接导入胃的上部。在服用之前，小鼠禁食和饮料6小时，从下午一点开始至下午7点结束。禁食以后，在6小时通过口服或肠膜内注射途径服用IFN，以及给予食物和饮料。然后，24小时时从心脏得到全血。
全血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶(OAS)活性用Eiken’s 2-5A RIA试剂盒测定。稀释的血和聚C-琼脂糖凝胶混合，胶洗脱后加入ATP，通过RIA方法测定所产生的2-5A(Shindo，M.，等，1988)。每个样品进行两次该试验。为了测定血OAS含量，至少使用三只小鼠。
序列表<110>派普根公司<120>干扰素TAU的口服给药<130>55600.8009.WO0<140>Not Yet Assigned<141>Filed Herewith<150>US 60/349,658<151>2002-01-16<160>3<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>516<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>编码羊干扰素tau的合成基因<221>CDS<222>(1)...(516)<223>编码的氨基酸序列<400>1tgc tac ctg tcg cga aaa ctg atg ctg gac gct cga gaa aat tta aaa48Cys Tyr Leu Ser Arg Lys Leu Met Leu Asp Ala Arg Glu Asn Leu Lys1 5 10 15ctg ctg gac cgt atg aat cga ttg tct ccg cac agc tgc ctg caa gac96Leu Leu Asp Arg Met Asn Arg Leu Ser Pro His Ser Cys Leu Gln Asp20 25 30cgg aaa gac ttc ggt ctg ccg cag gaa atg gtt gaa ggt gac caa ctg144Arg Lys Asp Phe Gly Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Asp Gln Leu35 40 45
caa aaa gac caa gct ttc ccg gta ctg tat gaa atg ctg cag cag tct192Gln Lys Asp Gln Ala Phe Pro Val Leu Tyr Glu Met Leu Gln Gln Ser50 55 60ttc aac ctg ttc tac act gaa cat tct tcg gcc gct tgg gac act act240Phe Asn Leu Phe Tyr Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr Thr65 70 75 80ctt cta gaa caa ctg tgc act ggt ctg caa cag caa ctg gac cat ctg288Leu Leu Glu Gln Leu Cys Thr Gly Leu Gln Gln Gln Leu Asp His Leu85 90 95gac act tgc cgt ggc cag gtt atg ggt gaa gaa gac tct gaa ctg ggt336Asp Thr Cys Arg Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Glu Leu Gly100 105 110aac atg gat ccg atc gtt act gtt aaa aaa tat ttc cag ggt atc tac384Asn Met Asp Pro Ile Val Thr Val Lys Lys Tyr Phe Gln Gly Ile Tyr115 120 125gac tac ctg cag gaa aaa ggt tac tct gac tgc gct tgg gaa atc gta432Asp Tyr Leu Gln Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Ile Val130 135 140cgc gtt gaa atg atg cgg gcc ctg act gtg tcg act act ctg caa aaa480Arg Val Glu Met Met Arg Ala Leu Thr Val Ser Thr Thr Leu Gln Lys145 150 155 160cgg tta act aaa atg ggt ggt gac ctg aat tct ccg516Arg Leu Thr Lys Met Gly Gly Asp Leu Asn Ser Pro165 170<210>2<211>172<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SEQ ID NO1编码的氨基酸<400>2Cys Tyr Leu Ser Arg Lys Leu Met Leu Asp Ala Arg Glu Asn Leu Lys
1 5 10 15Leu Leu Asp Arg Met Asn Arg Leu Ser Pro His Ser Cys Leu Gln Asp20 25 30Arg Lys Asp Phe Gly Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Asp Gln Leu35 40 45Gln Lys Asp Gln Ala Phe Pro Val Leu Tyr Glu Met Leu Gln Gln Ser50 55 60Phe Asn Leu Phe Tyr Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr Thr65 70 75 80Leu Leu Glu Gln Leu Cys Thr Gly Leu Gln Gln Gln Leu Asp His Leu85 90 95Asp Thr Cys Arg Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Glu Leu Gly100 105 110Asn Met Asp Pro Ile Val Thr Val Lys Lys Tyr Phe Gln Gly Ile Tyr115 120 125Asp Tyr Leu Gln Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Ile Val130 135 140Arg Val Glu Met Met Arg Ala Leu Thr Val Ser Thr Thr Leu Gln Lys145 150 155 160Arg Leu Thr Lys Met Gly Gly Asp Leu Asn Ser Pro165 170<210>3<211>172<212>PRT<213>Ovis aries<400>3Cys Tyr Leu Ser Arg Lys Leu Met Leu Asp Ala Arg Glu Asn Leu Lys1 5 10 15Leu Leu Asp Arg Met Asn Arg Leu Ser Pro His Ser Cys Leu Gln Asp20 25 30Arg Lys Asp Phe Gly Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Asp Gln Leu35 40 45Gln Lys Asp Gln Ala Phe Pro Val Leu Tyr Glu Met Leu Gln Gln Ser50 55 60Phe Asn Leu Phe Tyr Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr Thr65 70 75 80Leu Leu Glu Gln Leu Cys Thr Gly Leu Gln Gln Gln Leu Asp His Leu85 90 95Asp Thr Cys Arg Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Glu Leu Gly100 105 110Asn Met Asp Pro Ile Val Thr Val Lys Lys Tyr Phe Gln Gly Ile Tyr115 120 125
Asp Tyr Leu Gln Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Ile Val130 135 140Arg Val Glu Met Met Arg Ala Leu Thr Val Ser Thr Thr Leu Gln Lys145 150 155 160Arg Leu Thr Lys Met Gly Gly Asp Leu Asn Ser Pro165 170
权利要求书(按照条约第19条的修改)1.用于治疗对干扰素-τ敏感状态的组合物，包括口服药剂形式的干扰素-τ，所述药剂形式给禁食状态的患者服用，使血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量相对于非禁食状态病人口服干扰素-τ后所得血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量得到提高。
2.根据权利要求1的组合物，其中所述的干扰素-τ为绵羊或牛干扰素-τ。
3.根据权利要求1或2的组合物，其中所述干扰素-τ具有对应于如SEQ ID NO2所示氨基酸序列的序列。
4.根据前任一权利要求的组合物，其中所述的口服通过以固体药剂形式或液体药剂形式来口服。
5.根据权利要求4的组合物，其中所述的口服至少以约1×104单位/天的剂量服用。
6.根据权利要求5的组合物，其中所述的对干扰素-τ敏感的状态是自体免疫的状态、病毒感染，或以细胞增生为特征的紊乱。
7.组合物用于制造口服干扰素-τ药物的用途，，使禁食状态患者血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量相对于进食患者口服干扰素-τ后所得血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量得到提高。
8.根据权利要求7的用途，其中所述的禁食状态是通过在口服之前至少一小时不给予所述患者食物达到的。
9.根据权利要求7的用途，其中所述的禁食状态是通过在口服之前至少两小时不给予所述患者食物达到的。
10.根据权利要求7的用途，其中所述的禁食状态是通过在口服之前至少六小时不给予所述患者食物达到的。
11、根据权利要求7-10任一项的用途，其中所述的禁食状态是不给予说的禁食状态。
12.根据权利要求7-10任一项的用途，其中所述的干扰素-τ为绵羊或牛干扰素-τ。
13.根据权利要求12的用途，其中所述干扰素-τ具有对应于如SEQ IDNO2所示氨基酸序列的序列。
14.根据权利要求12的用途，其中所述的药剂为固体药剂形式或液体药剂形式。
15.根据权利要求14的用途，其中所述的药剂形式包括干扰素-τ的剂量至少为1×104单位/天。
16.根据权利要求14用于治疗自体免疫状态、病毒感染，或以细胞增殖为特征的紊乱的用途。
权利要求
1.用于治疗对干扰素-τ敏感状态的组合物，包括口服药剂形式的干扰素-τ，所述药剂形式给禁食状态的患者服用，使血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量相对于非禁食状态病人口服干扰素-τ后所得血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量得到提高。
2.根据权利要求1的组合物，其中所述的干扰素-τ为绵羊或牛干扰素-τ。
3.根据权利要求1或1的组合物，其中所述干扰素-τ具有对应于如SEQ ID NO2所示氨基酸序列的序列。
4.根据前任一权利要求的组合物，其中所述的口服通过以固体药剂形式或液体药剂形式来口服。
5.根据权利要求4的组合物，其中所述的口服至少以约1×104单位/天的剂量服用。
6.根据权利要求5的组合物，其中所述的对干扰素-τ敏感的状态是自体免疫的状态、病毒感染，或以细胞增生为特征的紊乱。
7.组合物用于制造口服干扰素-τ药物的用途，，使禁食状态患者血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量相对于进食患者口服干扰素-τ后所得血中2’，5’-寡腺苷酸合成酶含量得到提高。
8.根据权利要求7的用途，其中给所述患者禁水。
9.根据权利要求7或8的用途，其中所述的禁食状态是通过在口服之前至少一小时不给予所述患者食物达到的。
10.根据权利要求7或8的用途，其中所述的禁食状态是通过在口服之前至少两小时不给予所述患者食物达到的。
11.根据权利要求7或8的用途，其中所述的禁食状态是通过在口服之前至少六小时不给予所述患者食物达到的。
12.根据权利要求7-11任一项的用途，其中所述的干扰素-τ为绵羊或牛干扰素-τ。
13.根据权利要求12的用途，其中所述干扰素-τ具有对应于如SEQ IDNO2所示氨基酸序列的序列。
14.根据权利要求12的用途，其中所述的药剂为固体药剂形式或液体药剂形式。
15.根据权利要求14的用途，其中所述的药剂形式包括干扰素-τ的剂量至少为1×104单位/天。
16.根据权利要求14用于治疗自体免疫状态、病毒感染，或以细胞增殖为特征的紊乱的用途。
全文摘要
本发明描述了规定食物和/或水摄入状况后给患者服用干扰素－τ的方法。该方法包括在禁食和/或禁食结合控制或无流体摄入之后，给患者口服一定量的干扰素－τ，使血中2’，5’－寡腺苷酸合成酶含量相对于没有扣留规定食物和/或水摄入状况的患者口服干扰素－τ后血中2’，5’－寡腺苷酸合成酶的含量能有效提高。
文档编号A61K47/26GK1615154SQ03802248
公开日2005年5月11日 申请日期2003年1月16日 优先权日2002年1月16日
发明者Y·索卡瓦, C－P·刘 申请人:派普根公司