专利名称：经加工的人参提取物及从中分离的皂角甙的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及经加工的人参提取物及从中分离的皂角甙化合物在预防和治疗人类或哺乳动物脑中风和脑部疾病中的新用途。本发明更特别地涉及药理学功效增强的经加工的人参制品的新用途，其中所述的药理学功效的增强是由于一系列的处理方法带来的，所述处理方法即酸处理和后续的生物转化处理如乳酸发酵和肠道细菌发酵方法。
背景技术：
脑中风由两种类型组成，即缺血性中风和出血性中风，前者是由于供应到脑部的血流受阻或减少造成脑组织缺血病症而引发的，后者是由于脑部血管出血而引发的，其中前者占所有脑中风患者中的大约80％。
已报道脑神经细胞损伤的原因是兴奋性神经递质的过量释放、自由基的产生、蛋白合成的抑制、基因异常表达以及免疫反应的激活等等，然而，目前还没有开发出治疗上有效的药剂来避免脑神经细胞的损伤。
抑制环氧化酶-2(COX-2)可以保护脑神经细胞的活性，这是由通过抑制PGE2(前列腺素E2)的再生来抑制谷氨酸盐的释放而完成的。因此，由于许多患风湿性疾病和疼痛症的患者已经服用了COX-2抑制剂，有关脑中风发生率和服药人群之间相关性的临床研究结果就引起了人们的很大兴趣，COX-2抑制剂可能成为研究预防或治疗脑中风的有效药剂的新目标(Iadecola，C.等，PNAS，30，pp1294-1299，2001)。
已知有许多隶属于五加科(Araliaceae)的人参属(Panax genus)植物，例如分布或栽培于以下地区和国家的人参亚洲远东地区的高丽参(Panax ginseng)，美国和加拿大的西洋参(Panax quinquefolia)，中国的三七(Panax notoginseng)，北美洲东部地区的三叶人参(Panax trifolia)，日本、中国和尼泊尔的竹节参(Panax japonica)，尼泊尔的假人参(Panaxpseudoginseng)，越南的越南人参(Panax vietnamensis)，Panax elegatior，大叶三七(Panax wangianus)和羽叶三七(Panax bipinratifidus)等。
至今，人参作为一种有代表性的营养滋补剂已经广为人知。最近，已经有许多关于人参的化学组成和药理功效的科学研究的报道，因此可以运用现代科学手段来关注其神秘的药理功效。直到现在，人参一直被认为具有多种药理功效，如防止衰老、抗动脉硬化、治疗高脂血、治疗肝功能不全、改善肝功能、避免辐射伤害、提高免疫力、改善脑功能、抗血栓形成、抗应激、抗糖尿病、抗高血压、抗肿瘤的功效等等。
目前已知，人参属植物的主要成分是达玛烷骨架型皂角甙。人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1和Re是高丽参的主要皂角甙。根据它们的化学结构的不同，它们的生物活性互有不同。
已经进行了很多尝试来对皂角甙的结构进行改性，以便通过加工来提高它们的药理学效能。
在1997年1月21号公开的韩国专利申请No.10-1997-000239中，公开了用于制备经加工的人参的方法，其通过对含有高含量人参皂甙Rg3和Rg5的人参进行高温处理，由此获得效能提高而不同于人参原始形态的经加工人参。
在1997年9月12号公开的韩国专利申请No.10-1997-061909中，公开了使用肠道细菌从人参皂甙生产皂角甙代谢物如化合物K的方法。
然而，还没有公开或提示采用一系列以下处理方法来制备经加工的人参属植物的方法，所述处理方法包括酸处理和后续的使用乳酸菌或肠道细菌发酵的发酵处理。
本发明的发明人对人参的化学成分和药理功效进行了深入的科学研究，特别是对人参的加工方法和经加工人参的生理学活性进行了深入的研究。作为研究的结果，本发明人发现通过使用以下系列处理方法，即包括酸处理和后续的使用乳酸菌或肠道细菌对人参提取物的发酵处理，经加工的人参提取物显示出显著提高的药理学功效，尤其是它们对脑中风的预防或治疗活性，由此发明人最终完成了本发明。
发明内容
因此，本发明的一个目的是提供经加工的人参提取物及从中分离出的皂角甙化合物在制备预防或治疗脑中风疾病的药物中的用途，其中获得该经加工人参提取物的方法包括以下必要步骤对人参提取物进行酸处理以及用乳酸菌或肠道细菌进行随后的发酵处理。
同时，本发明的另一目的是提供治疗或预防哺乳动物的脑中风疾病的方法，该方法包括将有效量的上述提取物和从中提取的皂角甙化合物与可药用的载体一起施用于所述哺乳动物。
根据本发明，本发明提供了含有作为活性成分的经加工的人参提取物以及可药用的载体的药物组合物，其中所述经加工的人参提取物的含量为治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的有效量，其中获得该经加工人参提取物的方法包括以下必要步骤对人参提取物进行酸处理及用乳酸菌或肠道细菌进行随后的发酵处理。
本发明还提供了人参提取物在制备预防或治疗脑中风和脑部疾病的药物中的用途，其中获得该经加工人参提取物的方法包括以下必要步骤对人参提取物进行酸处理及用乳酸菌或肠道细菌进行随后的发酵处理。
此外，本发明还提供治疗或预防哺乳动物脑中风疾病的方法，该包括将有效量的上述提取物与可药用的载体一起施用于所述哺乳动物。
上述提取物可以用下列步骤制备1.步骤1如下所述，步骤1是对植物原料进行以下酸处理的步骤。
(1)酸处理步骤特别的是，在步骤1中，对人参属的干植物原料，如高丽参的根，进行以下的酸处理；如，在植物原料中加入大约1到50倍、优选5到20倍的0.01％到50％、优选0.1％到10％的酸性组分(优选醋酸、柠檬酸、乳酸或含酸的食物如五味子(Schizandra chinensis)的果实)，然后在20℃到80℃、优选40℃到70℃的温度范围内，温育1到48小时，优选温育3到12小时。在其中加入有机溶剂如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙醚和乙酸乙酯，然后进行抽提，以获得可溶于有机溶剂的提取物；最后用碱中和该提取物，以获得化学加工的人参提取物。
在比加工过程中加热温度低的温度即在常温至80℃温度下，使用已知方法对由此加工的人参进行干燥，以获得干燥的加工人参，或者如果需要，进一步加工制成人参粉。
作为选择，可以用已知方法抽提经加工的人参，以获得经加工的人参提取物。特别是，使用溶剂抽提经加工的人参，然后在真空中或冻干机中除去该溶剂，以获得干粉形式的经加工的人参提取物。
可在此使用的溶剂包括水、诸如甲醇、乙醇等的低级醇、诸如丙酮、甲基乙基酮等的低级酮、超临界流体或它们的混合溶剂。
可使用的植物原料包括并不限于人参属植物本身，如鲜人参、红白参、人参细根或人参叶或其提取物，在使用时可以用其原本形式、将其切细或研成粉末、其加工产品和它们包含达玛烷型皂角甙的副产品，优选以下人参的根、茎、花、叶和果，和它们的组织培养物及其提取物高丽参、西洋参、三七、三叶人参、竹节参、假人参、越南人参、Panaxelegatior、大叶三七、羽叶三七和Panax angustifolium。
可在对植物原料进行上述步骤(1)的处理后进行以下的步骤2。
2.步骤2发酵步骤随后，如下所述，对上述步骤1获得的提取物进行以下的生物转化法处理如用乳酸或肠道细菌进行发酵例如，在步骤1获得的提取物中加入乳酸菌或肠道细菌，并在20℃到50℃、优选25℃到40℃的温度范围，温育8小时到8天、优选24小时到3天，以获得用细菌发酵的提取物。
温育时间可根据所使用的细菌属的不同而改变。
可采用的乳酸菌包括能将人参皂甙Rg3代谢为人参皂甙Rh2的任何一种乳酸菌，优选双岐杆菌属的乳酸菌，更优选从下列菌种中选出的至少一种菌或混合菌婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、双岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、双歧杆菌K-103(Bifidobacterium K-103)、双歧杆菌K-506、双歧杆菌K-513、双歧杆菌K-525、双歧杆菌KK-1和KK-2(发表于《药学研究档案(Arch.Pharm.Res.)》，21，p54-61，1988)。
可采用的肠道细菌包括可将人参皂甙Rg3代谢为人参皂甙Rh2的任何一种肠道细菌，优选以下属的肠道细菌拟杆菌属(Bacterioides)、梭杆菌属(Fusobacterium)或真细菌属(Eubacterium)，更优选从下列菌种中选出的至少一种菌或混合菌拟杆菌JY-6(发表于《生物制药通报(Biol.Pharm.Bull.)》，23，pp1481-1485，2000)、粪便拟杆菌(Bacteriodesstercoris)、梭杆菌K-60(Fusobacterium K-60)(发表于《生物制药通报》，同上)和真细菌L-8(Eubacterium L-8)(发表于《生物制药通报》，同上)。
为了从上述步骤2获得的提取物中分离皂角甙组分或皂角甙化合物，可在上述步骤基础上进行下列步骤。
3.步骤3分离步骤为了从步骤2中制备的提取物中分离具有药理活性的组分或皂角甙化合物，可使用下列物质作为合适的溶剂从步骤2中制备的提取物中萃取或分离上述的组分或化合物水、诸如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等的低级醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、己烷、乙醚或它们的混合溶剂。
作为选择，可以用特殊的提取方法抽提或分离活性成分，如用超临界流体提取方法(SFE)来获得部分纯化的皂角甙组分，并进一步用硅胶柱色谱法从中分离单一的皂角甙。
在上述步骤之后，如有必要，除上述步骤之外还可以采用下列步骤如通过冻干法进行的干燥步骤、搅拌或稀释步骤。
根据本发明产品的最终形式，可选择下列步骤中的任一种或两种。
4.步骤4干燥步骤(1)将步骤2或3中获得的上述人参提取物经真空浓缩后，用冻干法或喷雾干燥法进行干燥。
(2)步骤2或3中获得的上述人参提取物通过离心除去其中的杂质和沉淀，将上清液经真空浓缩后，用冻干法或喷雾干燥法进行干燥。
在上述步骤1和步骤2的过程中，由于步骤1中的酸处理或热处理，植物原料中含有的皂角甙如人参皂甙Rb1、Rb2、Rc等被转化为经化学改性的人参皂甙如Rg3，然后经改性的皂角甙3位上的糖基进一步被降解而形成含有降解的人参皂甙Rh2的经进一步改性的皂角甙。
本发明还提供含有作为活性成分的皂角甙化合物以及可药用的载体的药物组合物，其中所述皂角甙化合物的含量为治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的有效量，该皂角甙化合物选自下列物质或其混合物人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、20-人参皂甙Rg3，优选20-人参皂甙Rg3。
本发明还提供皂角甙化合物在制备治疗或预防脑中风和脑部疾病的药物中的用途，其中所述的皂角甙化合物选自下列物质及其混合物人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、20-人参皂甙Rg3，优选20-人参皂甙Rg3。
另外，本发明还提供治疗或预防哺乳动物的脑中风和脑部疾病的方法，该方法包括将有效量的皂角甙化合物连同可药用的载体施用于上述哺乳动物，所述皂角甙化合物选自下列物质及其混合物人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、20-人参皂甙Rg3，优选20-人参皂甙Rg3。
另外，根据所使用的方法，本发明的组合物可以含有传统的载体、佐剂或稀释剂。所用的上述载体优选为适用于其用途和施用方法的适当物质，但这也不是限制性的。适用的稀释剂在Remington的《制药科学(Pharmaceutical Science)》(Mack出版公司Mack Publishing Co.，EastonPA)的书面版本中列出。
下文中，下面的配制方法和赋形剂只是作为示范，而决不是为了限制本发明。
如本发明所述的组合物可以作为一种药物组合物提供，其中该药物组合物包含可药用的载体、佐剂或稀释剂，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、白明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。另外，该制剂可以包含填充剂、抗凝剂、润滑剂、湿润剂、香味剂、乳化剂、防腐剂等等。本发明的组合物可以通过本领域已知的任何方法配制，使其在施用于患者后能快速、持续或延迟地释放活性成分。
例如，本发明的组合物可以被溶解在油、丙二醇、或其他制备注射剂时普遍使用的溶剂中。适用的载体的例子包括但不限于生理盐水、聚乙二醇、乙醇、植物油、异丙基肉豆蔻酸酯等。在局部施用时，本发明的化合物可被配制成软膏和乳膏形式。
含有该组合物的药物制剂可以用任何形式制备，如口服剂形式(粉剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、水性药品、糖浆、酏剂、丸剂、粉剂、袋剂、粒剂)，或局部施用制剂(乳膏、软膏、洗剂、凝胶剂、香膏、贴片、糊剂、喷雾剂、烟雾剂等等)，或可注射制剂(溶液、混悬液、乳剂)。
本发明的药物制剂形式的组合物也可以以其可药用盐的形式使用，也可以单独或以合适的联合的形式使用，也可以与其它具有药学活性的化合物联合使用。
本发明中发明的提取物或化合物的合理剂量可根据患者病症和体重、严重程度、药物形式、施用的途径和周期的不同而改变，并且可以由本领域技术人员选择。然而，为了获得理想的效果，一般来说推荐本发明中发明的提取物或化合物的施用量的范围以体重计是每天0.01g/kg～10g/kg，优选1到5g/kg。这一剂量可以每天一次施用或分成几次施用。使用组合物的话，复合草药成分以重量计应该占组合物总重的0.01％到80％，优选0.5％到50％。
本发明的药物组合物可以通过多种途径在受试动物如哺乳动物(大鼠、小鼠、家畜或人)上施用。考虑到所有施用方法，如可以进行口服、直肠给药或通过静脉内、肌肉内、皮下、皮内、胸腔内、硬膜外或脑室内注射进行给药。
通过完成本领域所熟知的体内试验如中脑动脉闭塞模型试验，本发明者证明了含有上述本发明的人参提取物或化合物的组合物具有预防或治疗脑中风的活性。其中所述的中脑动脉闭塞模型试验包括下列步骤，即在颈内动脉中插入尼龙丝，使中脑动脉堵塞，120分钟后又移去尼龙丝使动脉再灌注。
同样，本发明的另一目的是提供一种健康保健食品来预防脑中风和脑部疾病，其中该食品包含用上述步骤制备的本发明的上述提取物或化合物，及营养学上可用的添加剂。
其中可将上述组合物添加到食品、添加剂或饮品中来预防脑中风疾病。其中，为了预防脑中风疾病，在食品或饮品中，本发明的上述提取物或化合物的含量一般来说可占健康食品组合物总重量的0.1重量％到15重量％之间，优选1重量％到10重量％之间，在每100ml健康饮品组合物中占1到30g，优选3到10g。
假如本发明的健康饮品组合物中包含作为必需成分并以所示的比例存在的本发明的上述提取物或化合物，那么对于其它的液体成分没有特别的限制，其中所述的其它液体成分可以是各种芳香剂或天然碳水化合物等，如传统饮品。前述天然碳水化合物的例子有单糖，如葡萄糖、果糖等；二糖，如麦芽糖、蔗糖等；传统的糖，如糊精、环状糊精；以及糖醇，如木糖醇、赤藻糖醇等。也可以根据喜好使用除前述芳香剂外的其它的芳香剂，其中包括天然芳香剂，如taumatin，甜菊提取物如levaudioside A、甘草甜素等，以及合成的芳香剂如糖精、阿斯巴甜等。上述的天然碳水化合物的含量一般来说在100ml该饮品组合物中大约占1到20g，优选5到12g。
除前述组合物外的其它成分可以是各种营养物质、维生素、矿物质或电解质、合成的香味剂、着色剂和改进剂(就干酪巧克力等而言)、果胶酸及其盐、褐藻酸及其盐、有机酸、防护性胶粘剂、pH控制剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、在碳酸饮品中使用的碳酸化剂等等。前述成分以外的其它成分可以是用于制造天然果汁、果汁饮品和蔬菜饮品的果汁，其中这些成分可以单独使用或联合使用。这些成分的比例并不太重要，但一般来说在每100重量％的该组合物中大约占0到20重量％。
含有本发明前述的提取物或化合物的可添加食品的例子有各种食品、饮品、口香糖、维生素复合物、保健食品等等。
显然对于本领域技术人员来说，在本发明的组合物、应用和制备中可以在不脱离本发明的精神或范围的前提下进行多种改进和变化。
通过下列与图结合的详细图示将更清楚地了解本发明上述的和其它的目的、特征以及其它优点。
图1显示经加工的人参提取物及从中得到的皂角甙化合物的功效。
具体实施例方式
本发明可以通过下列实施例得到更具体地解释。然而，应该理解，本发明决不是仅限于这些实施例。
实施例1经加工的人参提取物(1)的制备从Kyung Dong市场(Kyung Dong Market)获得500g六年生的高丽参根，将其切成片状，用5L甲醇分五次抽提，然后浓缩得到25g未加工的人参提取物。将该提取物溶解到30ml的蒸馏水中，用1500ml的丁醇分四次萃取，然后浓缩得到10g丁醇组分。在其中加入10g双歧杆菌KK-1(Bifidobacterium KK-1)(保藏编号KCCM 10364)和10g双歧杆菌KK-2(保藏编号KCCM 10365)，然后于37℃温育72小时，得到其培养产物。该培养产物用丁醇提取、浓缩并干燥，得到4g经加工的人参提取物，下文中被称为GBM。
实施例2经加工的人参提取物(2)的制备将1kg六年生的高丽参根切成片状，用10L甲醇分五次抽提，然后浓缩得到50g人参提取物。将该提取物溶解到50ml的蒸馏水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后浓缩得到20g丁醇组分，下文中被称为GB。
实施例3经加工的人参提取物(3)的制备将10g六年生的高丽参根切成片状。在其中加入1L含0.1％乳酸的蒸馏水，在60℃温育5小时。将培养物的pH调到6.8-7.0，用3L的丁醇分三次提取，得到6.5g经加工的人参提取物，下文中被称为GA。
实施例4经加工的人参提取物(4)的制备将10g六年生的高丽参根切成片状。在其中加入1L含0.1％乳酸的蒸馏水，在60℃温育5小时。将培养物的pH调到6.8-7.0，用3L的丁醇分三次提取，得到6.5g经加工的人参提取物。在其中加入5g(湿重)双歧杆菌KK-1(保藏编号KCCM 10364)和双歧杆菌KK-2(保藏编号KCCM 10365)，然后于37℃温育72小时，得到其培养产物。该培养产物用丁醇提取、浓缩并干燥，得到3.5g经加工的人参提取物，下文中被称为GAM。
实施例5经加工的人参提取物(5)的制备1kg切成片状的高丽参用10L甲醇分五次提取，然后真空浓缩，得到50g提取物。将该提取物溶解到50ml的蒸馏水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后浓缩得到20g丁醇组分。进一步对该组分进行硅胶柱色谱法(柱尺寸3.5×60cm，展开剂系统氯仿∶甲醇＝10∶1)分离，得到2g含有大量人参皂甙Re、Rf和Rg1的皂角甙组分，下文中被称为GPT。
实施例6经加工的人参提取物(6)的制备1kg切成片状的高丽参用10L甲醇分五次提取，然后真空浓缩，得到50g提取物。将该提取物溶解到50ml的蒸馏水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后浓缩得到20g丁醇组分。进一步对该组分进行硅胶柱色谱法(柱尺寸3.5×60cm，展开剂系统氯仿∶甲醇＝10∶1)分离，得到2g含有大量人参皂甙Re、Rf和Rg的皂角甙组分。在其中各加入3g(湿重)双歧杆菌KK-1(保藏编号KCCM 10364)和双歧杆菌KK-2(保藏编号KCCM 10365)，然后37℃温育72小时，得到其培养产物。将该培养产物用丁醇提取、浓缩并干燥，得到1.2g经加工的人参提取物，下文中被称为GPTM。
实施例7经加工的人参提取物(7)的制备将1kg切成片状的六年生高丽参用10L甲醇分五次提取，然后真空浓缩得到50g提取物。将该提取物溶解到50ml的蒸馏水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后浓缩得到20g丁醇组分。进一步对该组分进行硅胶柱色谱法(柱尺寸3.5×60cm，展开剂系统氯仿∶甲醇＝10∶1)，分离，得到2.5g含有大量人参皂甙Rb1、Rb2、Rc和Rd的皂角甙组分，下文中被称为GPD。
实施例8经加工的人参提取物(8)的制备将1kg切成片状的六年生的高丽参用10L甲醇分五次提取，然后真空浓缩，得到50g提取物。将该提取物溶解到50ml的蒸馏水中，用3000ml的丁醇分四次提取，然后浓缩得到20g丁醇组分。进一步对该组分进行硅胶柱色谱法(柱尺寸3.5×60cm，展开剂系统氯仿∶甲醇＝10∶1)，分离到2.5g含有大量人参皂甙Rb1、Rb2、Rc和Rd的皂角甙组分。在其中各加入3g(湿重)双歧杆菌KK-1(保藏编号KCCM 10364)和双歧杆菌KK-2(保藏编号KCCM 10365)，然后37℃温育72小时，得到其培养产物。将该培养产物用丁醇提取、浓缩并干燥，得到2g经加工的人参提取物，下文中被称为GPDM。
对比例1未经加工的人参提取物的制备将20g切成片状的五年生的高丽参，用5倍蒸馏水在60℃抽提5小时，用蒸发器(Eyella，KN-IN型，日本)进行真空浓缩，并用冻干法(Samwon Nangyul Co.，SFDSM24L型，韩国)干燥，得到1g未经加工的人参粉末。
对比例2酸处理的人参提取物的制备将20g五年生的高丽参根切成片状。在其中加入2000ml含0.1％乳酸的蒸馏水，在60℃温育5小时。在其中加入5000ml的丁醇，抽提并用蒸发器(Eyella，KN-IN型，日本)进行真空浓缩，用冻干法(SamwonNangyul Co.，SFDSM24L型，韩国)干燥，得到1.5g酸处理的人参提取物。
实验例1含量分析实验从上述对比例1、2和实施例1和4中得到的提取物中各取2g用100ml甲醇分三次提取。真空浓缩甲醇可溶层，并用100ml蒸馏水重悬。将该悬浮液用100ml乙醚溶剂分三次提取，真空浓缩。然后，将该浓缩物用100ml丁醇分三次提取，真空浓缩，得到它们的浓缩物。将上述浓缩物溶于100ml甲醇，得到100mg的皂角甙组分。用TLC(薄层色谱法，溶剂体系氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10，喷显剂5％甲醇的硫酸溶液(methanolic sulfuric acid solution)进行含量分析，使用TLC扫描仪(日本岛津，CS-9301PC)作为检测器。由此获得的结果如下表1所示。
表1对比例(CE)1、2和实施例(E)1、4中皂角甙的含量
结果，在用乳酸菌处理的实施例1中，人参皂甙F2和化合物K的含量显著提高，而在用酸及后续的乳酸菌处理的实施例4中，人参皂甙Rg3、人参皂甙Rh2和原人参萜二醇的含量显著提高。
实验例2对脑中风的预防或治疗活性为了证实经加工的人参提取物和从中分离的皂角甙化合物对脑中风的预防或治疗活性，并将对比例1中的未经加工的人参提取物和对比例2中的酸处理的人参提取物的活性与本发明人参提取物的活性进行比较，通过下列程序进行实验。
方法在再灌注前大约五分钟时，对脑缺血动物模型施用不同浓度的待测样品。然后开始再灌注。在操作1后24小时，处死该动物，取出脑部，然后进一步用脑模具将脑切成2mm宽的脑片，用2，3，5-氯化三苯基四唑(TTC)染色法进行染色。通过图像分析系统对脑梗塞形成区域进行分析。
结果如图1所示，实施例1的经加工的人参提取物(GBM)、实施例3的皂角甙组分(GA)、实施例7(GPD)和实施例8(GPDM)的皂角甙化合物显示出显著的脑神经细胞保护活性，并且证实了它们的活性优于作为阳性对照的Ebselin(Sigma Co.，)和黄苓苷元。只用载体处理的对照组被称为Cont，实施例1被称为GBM，实施例2被称为GB，实施例3被称为GA，实施例4被称为GAM，实施例5被称为GPT，实施例6被称为GPTM，实施例7被称为GPD，实施例8被称为GPDM。“*”是指该值与对照组相比在95％显著水平上显著。
如上所述，已证实本发明制备的经加工的人参提取物显示出了对脑中风的治疗和预防功效，因此，所述提取物可用于抗脑中风的药物或健康保健食品。
实验例3毒性测试方法(1)用实施例1中的提取物对ICR小鼠(平均体重25±5g)和Sprague-Dawley大鼠(235±10g，Hyochang Science)进行急性毒性检测。通过口服和腹膜内施用，对由10只小鼠或大鼠组成的四个组分别施用500mg/kg、725mg/kg、1000mg/kg和5000mg/kg的测试样品或溶剂(0.2ml，腹膜内施用)，观察2周。
方法(2)用实施例1中的提取物对ICR小鼠和Sprague-Dawley大鼠进行急性毒性检测。通过腹膜内施用，对由10只小鼠或大鼠组成的四个组分别施用25mg/kg、250mg/kg、500mg/kg和725mg/kg的测试样品或溶剂(0.2ml，腹膜内施用)，观察24小时。
结果处理方法对任何组或任一性别的死亡率、临床征兆、体重改变以及肉眼所见的现象没有相关的影响。这些结果暗示本发明制备的提取物是有效且安全的。
下文中，将描述赋形剂的配制方法和种类，但本发明并不局限于此。代表性制品的例子如下所述。
粉剂的制备实施例1中的干粉 50mg乳糖100mg滑石10mg将上述成分混合并填充到密封容器中来制备粉剂制品。
片剂的制备实施例1中的干粉 50mg玉米淀粉100mg乳糖100mg硬脂酸镁2mg将上述成分混合并压片来制备片剂制品。
胶囊剂的制备实施例1中的干粉 50mg玉米淀粉100mg乳糖100mg硬脂酸镁2mg将上述成分混合来制备片剂制品，并用传统的胶囊剂制备方法将其填充到明胶胶囊中。
注射剂的制备实施例1中的干粉 50mg用于注射的蒸馏水适量pH控制剂适量用传统的注射剂制备方法溶解活性成分、调节pH到7.5左右，然后将所有成分装到2ml安瓿中并消毒，以此来制备注射制品。
液体药剂的制备实施例1中的干粉0.1～80g糖 5～10g柠檬酸 0.05％～0.3％焦糖 0.005％～0.02％维生素C0.1％～1％蒸馏水 79％～94％CO2气体0.5％～0.82％用传统的液体药剂的制备方法溶解活性成分、装入所有成分并消毒，以此来制备液体药剂。
健康保健食物制品实施例1中的提取物 1000mg维生素混合物适量维生素A醋酸盐 70μg维生素E 1.0mg维生素B10.13mg维生素B20.15mg维生素B60.5mg维生素B120.2μg维生素C 10mg生物素 10μg烟酰胺 1.7mg叶酸50μg泛酸钙 0.5mg矿物质混合物适量硫酸亚铁1.75mg氧化锌 0.82mg碳酸镁 25.3mg磷酸二氢钾 15mg
磷酸二钙 55mg柠檬酸钾 90mg碳酸钙 100mg氯化镁 24.8mg上述维生素和矿物质混合物可以在很多方面有所改变。这样的变化不能被认为是脱离本发明的精神和范围。
健康饮品制品实施例1中的提取物1000mg柠檬酸 1000mg寡聚糖 100g杏仁浓缩液 2g牛磺酸 1g蒸馏水 900ml用传统的健康饮品制备方法，将活性成分溶解，混合，在85℃搅拌1小时，过滤，然后将所有成分放入1000ml的安瓿中并进行消毒。
因此，很明显，所述的发明可以在许多方面进行改变。这样的变化不能被认为是脱离本发明的精神和范围，并且对于本领域技术人员来说显然所有这样的改进应该被认为包括在下列权利要求的范围内。
工业实用性如本发明所述，该组合物含有经加工的人参提取物，显示出对脑中风的预防或治疗功效，其中所述的经加工的人参提取物先用酸处理，随后用乳酸菌或肠道细菌通过生物处理进行发酵。因此，它可用于预防或治疗人类或哺乳动物中的脑中风。
权利要求
1.一种治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的药物组合物，该药物组合物含有作为活性成分的经加工的人参提取物以及可药用的载体，其中所述经加工的人参提取物的含量为治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的有效量，该经加工的人参提取物由包括下列必要步骤的方法得到对人参提取物进行酸处理及用乳酸菌或肠道细菌进行随后的发酵处理。
2.如权利要求1所述的治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的药物组合物，其中所述的植物原料包括根、茎、花、叶和果实以及它们的组织培养物。
3.如权利要求1所述的治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的药物组合物，其中所述的酸是醋酸、柠檬酸、乳酸或含酸的食物。
4.如权利要求1所述的治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的药物组合物，其中所述的乳酸菌属于双歧杆菌属或乳杆菌属细菌。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其中所述的乳酸菌包含选自下列菌种中的至少一种菌或混合菌婴儿双歧杆菌、双岐双岐杆菌、乳酸乳杆菌、丁酸梭菌、双歧杆菌K-103、双歧杆菌K-506、双歧杆菌K-513、双歧杆菌K-525、双歧杆菌KK-1或双歧杆菌KK-2。
6.如权利要求1所述的治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的药物组合物，其中所述的肠道细菌属于拟杆菌属、梭杆菌属或真细菌属细菌。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述的肠道细菌包括选自下列菌种中的至少一种菌或混合菌拟杆菌JY-6、粪便拟杆菌、梭杆菌K-60或真细菌L-8。
8.一种治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的药物组合物，该药物组合物含有作为活性成分的皂角甙化合物以及可药用载体，其中所述的皂角甙化合物的含量为治疗或预防人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病的有效量，该皂角甙化合物选自下列物质或其混合物人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1和20-人参皂甙Rg3。
9.如权利要求1到8任一项所述的药物组合物，其中，所述药物组合物在可药用的载体中作为粉剂、粒剂、片剂、胶囊剂、水性药剂或注射剂来提供。
10.人参提取物在制备预防或治疗脑中风和脑部疾病的药物中的用途，其中所述的人参提取物由包括以下必要步骤的方法得到对人参提取物进行酸处理及用乳酸菌或肠道细菌进行随后的发酵处理。
11.一种预防癌症或过敏性疾病的健康保健食品，该健康保健食品含有权利要求1中所述的提取物和营养学上可接受的添加剂。
12.如权利要求11所述的健康保健食品，该健康保健食品以饮品形式提供。
全文摘要
本发明涉及经加工的人参提取物的新用途，所述人参提取物具有预防或治疗脑中风的活性。本发明更特别地涉及药理学功效增强的经加工的人参提取物，其中所述的药理学功效的增强是由于后续的处理方法带来的，所述后续的处理方法即人参的酸处理和生物转化处理如乳酸菌发酵和肠道细菌发酵过程。本发明的经加工的人参提取物对脑中风有预防或治疗功效。因此，它可用于预防或治疗人类或哺乳动物的脑中风和脑部疾病。
文档编号A61K31/045GK1646150SQ03807770
公开日2005年7月27日 申请日期2003年4月8日 优先权日2002年4月8日
发明者金东铉, 柳钟勋, 斐银俄, 韩明珠, 秋珉京, 朴恩境 申请人:弘林通产株式会社