专利名称：治疗或预防角结膜上皮细胞损伤的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及眼科用治疗或预防角结膜上皮细胞损伤药物。具体而言，是针对由药物特别是抗炎药物等导致的角结膜上皮细胞损伤以及前列腺素类减少等造成的角结膜上皮细胞损伤具有治疗和/或预防效果的眼药。
背景技术：
透明的覆盖在眼球最前面的晶状体前房上的角膜是由上皮细胞、前弹力膜、基质层、角膜后弹力层以及内皮细胞层构成的井然排列的分层构造组织。角结膜上皮细胞损伤既包括伴随内源性疾病，如角膜疱疹、细菌性角膜溃疡、神经麻痹性角膜炎、糖尿病性角膜症、斯耶格伦氏综合症、干眼症等产生的角结膜上皮细胞损伤，还包括术后、药物性、外伤、佩戴隐形眼镜等外源性疾病或物理性、化学性损伤等原因造成的损伤，由所述病因最严重的可发展成上皮无法再生的顽固性角膜损伤，导致视力损伤和/或失明。由于某些原因，在形成角膜基质规则、井然排列的、格子样结构过程中，角膜上皮细胞受到某种原因的损伤的情况下，推测发挥角膜细胞功能的物质对角膜损伤的治愈具有重要作用。
角膜溃疡等角膜炎是白内障手术、视网膜手术和玻璃体切除术、角膜癌的放射线治疗等治疗的并发症。为了治疗或预防该角膜炎常使用倍他米松等类固醇以及双氯芬酸钠等非类固醇抗炎药物。这些药物在治疗上针对炎症症状非常有效。可是已知使用，尤其是长期使用这类药物会诱发角结膜上皮细胞损伤、角结膜溃疡，玻璃体液化以至于失明(JulianneC.Lin等，ARCH OPHTHALMOL.118 AUG 2000 1129-1132)。
恢复视力要求角膜上皮迅速的正常再生覆盖。治愈角结膜上皮细胞损伤的机制包括第1到第3阶段。其中第1阶段包括上皮细胞的黏附、伸展、迁移；第2阶段包括上皮细胞的增殖；第3阶段包括上皮细胞的分化。直到经过第3阶段才能恢复到具有井然排列层状结构的上皮。亟待开发恢复上述过程的，具有透明质酸、纤维结合蛋白的眼药所不具备的效果的药物。
一方面，在哺乳类的组织或者器官中含有的前列腺素类(下面称为“PG”)，包含一组具有广泛生理活性的有机羧酸，并具有作为一般结构特征的前列腺酸骨架。
已知PGE1、PGE2和PGE3具有扩张血管、降低血压、减少胃酸分泌、令肠蠕动亢进、收缩子宫、利尿、扩张支气管以及抗溃疡作用。PG在眼科领域中应用的报道有PGF2α同系物具有降低眼压作用(Alm，ThePotential of Prostaglandin Derivatives in Glaucoma Therapy，CurrentOpinion in Ophthamology，Volume 4，No.11，44-50；1993)。
在Pedro Cortina等(Graefe’s Arch Clin Exp Ophthalmol 235；180-185；1997)中公开了下述结果，通常在厌氧、还原状态下体外培养晶状体上皮细胞的过程中，25、50以及100μM的双氯芬酸钠可抑制上皮细胞的增殖，由此抑制白内障手术副作用的后发性白内障。而添加1、10、50以及100μM的PGE2时，引起上皮细胞增殖，这个现象暗示后发白内障等细胞增殖疾病和PGE2有关。可是未见关于恢复角膜上皮细胞损伤的报道。
山本在日本眼科学协会杂志(103(3)P-164；1999)中公开了对家兔眼角膜片研究结果如下。单独使用前列腺素合成抑制剂双氯芬酸钠和吲哚美辛不影响角膜上皮的伸展，但如果同时添加表皮生长因子(EGF)，EGF使上皮伸展促进作用受到抑制。通过上皮细胞培养发现双氯芬酸钠等对上皮增殖以及EGF的增殖促进作用没有影响，不过与对照组相比，添加了EGF的含上皮细胞的溶液中PGE2、PGE2α的浓度有所上升。
同一研究小组的月山等人在第66届中部眼科学协会讲演文集(E-W-2；2000)中发表了下述结果。单层培养角膜上皮细胞，制造一定面积缺损，添加EGF会使缺损部分减小。单独添加前列腺素合成阻断剂对缺损面积没有影响，可是当它和EGF同时添加时，能够显著抑制上皮创伤治愈促进作用。在添加EGF的培养液中PGE2、PGE2α的浓度显著上升，不过尚未见到外部添加PG会产生怎样结果的报道。
同样月山等人在日本眼科学协会杂志(105 P35；2001)中公开了如下结果在单层培养的角膜上皮细胞中制造缺损，添加EGF能够促进创伤治愈。添加双氯芬酸钠能够抑制上皮创伤治愈、并且补充添加PGF2α衍生物(Latanoprost)可观察到上皮创伤治愈的显著恢复，当单独加入Latanoprost时没有效果。此外无论单独加入PGE2衍生物16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)，还是和EGF、双氯芬酸钠同时加入，都未观察到对角膜上皮创伤的治愈效果。某种角度上看，该结果没有暗示PGE2衍生物对角结膜上皮细胞损伤有任何疗效。
抗炎药物的典型副作用是当经口给药时引起胃粘膜损伤。PG类具有粘膜保护作用，Scand J Rheumatol 21(2)85-91(1992)中报道双氯芬酸钠和PG衍生物米索前列醇(下称(MS))的合剂能够抑制胃溃疡的发生，同时维持其抗炎活性。
同样地，在WO 92/21350中记述了合用非类固醇抗炎药物和前列腺素E类的米索前列醇、前列腺素E1(PGE1)、前列腺素E2(PGE2)、15R-甲基前列腺素E2(15R-甲基PGE2)、16，16-二甲基前列腺素E1(16，16-二甲基PGE1)、16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)能减轻副作用，可用于关节风湿病、骨质疏松症的治疗。
为了减轻对胃粘膜的损伤，非类固醇类抗炎药物中的环氧化酶(下称“COX”)选择性的药物，美洛昔康这样的COX-2选择性药物，在开发的市场上受到了一定的好评。不过，不能完全没有对胃粘膜的损伤。这是因为选择性是相对的，会在某种程度上残留COX-2活性。
在眼科领域进行眼睛的白内障手术的时候，据报道使用美洛昔康这样的选择性COX-2抗炎药物代替非选择性COX抑制剂的抗炎药物能够减轻角膜细胞的损伤(WO99/59634)。可是，这类药物的COX的选择性是相对的，不能完全抑制COX-2的活性，需要采用其它手段治疗或预防角结膜上皮细胞损伤。
发明内容
鉴于上述情况，本发明的目的是提供治疗或预防角结膜上皮细胞损伤、尤其是PGE类减少导致的角结膜上皮细胞损伤或药物造成的角结膜上皮细胞损伤的药物。
本发明涉及以前列腺素类为有效成分的治疗或预防因为各种原因导致的角结膜上皮细胞损伤的眼药。
即本发明提供如下所示的治疗或预防角结膜上皮损伤的眼药。
1、以前列腺素E为有效成分的治疗或预防角结膜上皮细胞损伤的眼药。
2、上述1记载的眼药中的前列腺素E类选自米索前列醇、前列腺素E1(PGE1)、前列腺素E2(PGE2)、15R-甲基前列腺素E2(15R-甲基PGE2)、16，16-二甲基前列腺素E1(16，16-二甲基PGE1)、16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)、オキシプロスト一ル以及它们的低级烷基酯。
3、上述1或2记载的眼药，其中所述的角结膜上皮细胞损伤是由前列腺素E类减少引起的。
4、上述1或2记载的眼药，其中所述的角结膜上皮细胞损伤是由药物引起的。
5、上述4中记载的眼药，其中引起角结膜上皮细胞损伤的药物是抗炎药物。
6、上述5中记载的眼药，其中引起角结膜上皮细胞损伤的抗炎药物是环氧化酶的非选择性抑制剂。
7、上述6中记载的眼药，其中能够非选择性抑制导致角结膜上皮细胞损伤的环氧化酶的药物是双氯芬酸钠。
8、以前列腺素E类和导致角结膜上皮细胞损伤的药物为有效成分的治疗或预防角结膜上皮细胞损伤的眼药。
9、上述8中记载的眼药，其中导致角结膜上皮细胞损伤的药物是抗炎药物。
10、上述9记载的眼药中前列腺素E类和抗炎类药物的质量比在1∶25～50000的范围。
11、上述10记载的眼药中的前列腺素E类为米索前列醇，抗炎药物为双氯芬酸钠。
12、上述11中记载的眼药，其中的米索前列醇的浓度在0.01μM到10μM的范围。
13、上述11中记载的眼药，其中的双氯芬酸钠的浓度在0.01％到0.5％的范围。
附图的简单说明
图1表示本发明的MS对角膜上皮细胞损伤的效果图。
图2表示本发明的MS对结膜上皮细胞损伤的效果图。
的最佳实施方案本发明使用的前列腺素类可以是任何一种前列腺素E类，优选MS、PGE1、PGE2、15R-甲基PGE2、16，16-二甲基PGE1、16，16-二甲基PGE、オキシプロステロ一ル以及这些物质的低级烷基酯(如碳原子数为1～5的低等低级烷基酯)，最优选MS。
本发明可以单独使用MS，也可以和在眼科领域应用的造成角结膜上皮细胞损伤的非选择性抗炎药物配合成合剂使用。
本发明所用的非选择性抗炎药物包括如双氯酚酸、吲哚美辛、氟比洛芬、布洛芬等，优选双氯酚酸。
在单独使用或合剂使用时，推荐前列腺素类的用量从0.001μM到10μM的范围。考虑到用药时会被泪液所稀释，用量可以在10μM以上。此外，使用双氯芬酸钠这类抗炎药物时，推荐根据抗炎药物的浓度，按照每1单位质量的抗炎药物使用1/25～1/50000的单位质量的MS。当用普通的抗炎药物作为眼药时，其用量可以在0.01％～0.5％的范围内，最优选0.1％。在这种情况下，推荐相对于抗炎药物的质量1，MS的用量为1/25～1/50000。但本发明中的各组分浓度并不限于上述范围。
本说明书中所用的“眼药”包括滴眼液、眼环流液、眼软膏制剂以及冻干剂。即包括全部与眼睛治疗相关的剂型。本发明的眼药可以以任意剂型用作角结膜上皮细胞损伤的治疗或预防药。尤其优选滴眼液、眼环流液、膏剂、眼软膏剂或冻干剂为剂型。不过本发明并不局限与此。用滴眼液、眼软膏剂、膏剂时，可以使用常规采用的脱氢醋酸钠、甲基对氧苯甲酸等防腐剂、氯化钠、甘油等等渗剂、羧甲基纤维素、聚乙烯醇等增稠剂，依地酸钠、多糖等稳定剂。对这些物质并没有限定，只要是眼生理允许就可以。向上述各种剂型中添加的缓冲液优选等渗的pH4-9、pH5-9的无刺激物质。
本发明的眼药水如下例所示制剂例1米索前列醇 0.002％磷酸缓冲液 1.0％苯扎氯铵 0.001％聚山梨酸酯80 0.5％纯水 使总量为100％根据患者的症状、年龄相应变动本发明角膜疾病治疗药物的用法、用量，眼药水通常1日1-5次，每次1-5滴。眼软膏通常每天1-3次，适量途布于角结膜囊内。
下面，根据具体实施例说明本发明，本发明不受实施例的限定。
实施例[实施例]MS由双氯芬酸钠引起人角膜上皮细胞损伤以及人结膜细胞损伤的效果。
使用细胞角膜细胞SV40无限增殖的人角膜上皮细胞株(HCEC)(Araki-Sasaki等.IOVS 36614-621，1995)，结膜细胞Chang人结膜细胞株(CCL-20.2)(ATC CCCL-20.2)。
实验用含有10％血清的增殖培养基将细胞调整到5×104细胞/mL，在96孔板中按照100μL/孔接种，在37℃中培养过夜。达到30-50％铺满后，溶入新鲜培养基中，另外添加梯度稀释的MS，双氯芬酸钠，在37℃条件下培养24小时。培养结束后，洗涤每孔，按照新鲜培养基100μL/孔、WST-8(同仁化学Cell Counting Kit-8)10μL/孔添加，在培养1.5小时后，测定450nm-660nm的吸光度，计算残存的细胞数。
毒性评价法以不添加任何被检测物质的组为阴性对照，将其吸光度值定为生存率100％，根据各个被检测物质浓度下的细胞生存率绘制用量相关曲线。
表1以及图1表示米索前列醇使SV40无限增殖人角膜上皮细胞免受非类固醇抗炎药物引起的角膜损伤的效果。
非类固醇抗炎药物双氯芬酸钠在0.25mM到1mM的范围内引起细胞损伤，米索前列醇在0.01μM到100μM的用量范围内改善细胞损伤。在100μM的高浓度下，可以观察到米索前列醇本身对细胞的损伤。
表1米索前列醇对双氯芬酸钠引起的角膜上皮细胞损伤的效果
从图1以及表1中可以看出0.25、0.5以及1mM的双氯芬酸钠以用量依赖性的方式抑制角膜上皮细胞的增殖。此浓度相当于抑制晶状体上皮细胞增殖的浓度的10倍。MS从0.01μM增加到10μM能够显著促进细胞增殖。可以观察到100μM的MS本身对细胞的毒性作用。
表2以及图2表示米索前列醇对人结膜上皮细胞的非类固醇抗炎药物引起的角膜损伤的防预效果。
米索前列醇对双氯芬酸钠引起的结膜上皮细胞损伤的效果。
从图2以及表2中可以看出0.125、0.25以及0.5mM的双氯芬酸钠以用量依赖性的方式抑制结膜上皮细胞的增殖。0.1、1以及10μM的MS能够恢复细胞增殖损伤。高浓度的双氯芬酸钠效果降低。可以观察到100μ的MS本身对细胞的毒性作用。
生产上应用的可能性本发明的以米索前列醇这样的前列腺素E类为有效成分的治疗或者预防用的角结膜上皮细胞损伤眼药水对物理性、化学性、机械损伤引起的角膜或者结膜的损伤以及内因性角膜或者结膜损伤具有高度的治疗效果。尤其是双氯芬酸钠这样的非类固醇类抗炎药物对角膜损伤即细胞增殖障碍具有抑制效果。
权利要求
1.以前列腺素E为有效成分的治疗或预防角结膜上皮细胞损伤的眼药。
2.如权利要求1所述的眼药中的前列腺素E类选自米索前列醇、前列腺素E1(PGE1)、前列腺素E2(PGE2)、15R-甲基前列腺素E2(15R-甲基PGE2)、16，16-二甲基前列腺素E1(16，16-二甲基PGE1)、16，16-二甲基前列腺素E2(16，16-二甲基PGE2)、オキシブロスト一ル以及它们的低级烷基酯。
3.如权利要求1或2所述的眼药，其中所述的角结膜上皮细胞损伤是由前列腺素E类减少引起的。
4.如权利要求1或2所述的眼药，其中所述的角结膜上皮细胞损伤是由药物引起的。
5.如权利要求4所述的眼药，其中引起角结膜上皮细胞损伤的药物是抗炎药物。
6.如权利要求5所述的眼药，其中引起角结膜上皮细胞损伤的抗炎药物是环氧化酶的非选择性抑制剂。
7.如权利要求6所述的眼药，其中能够非选择性抑制导致角结膜上皮细胞损伤的环氧化酶的药物是双氯芬酸钠。
8.以前列腺素E类和导致角结膜上皮细胞损伤的药物为有效成分的治疗或预防角结膜上皮细胞损伤的眼药。
9.如权利要求8所述的眼药，其中导致角结膜上皮细胞损伤的药物是抗炎药物。
10.如权利要求9所述的眼药，其中，前列腺素E类和抗炎类药物的质量比在1∶25～50000的范围。
11.如权利要求10所述的眼药，其中的前列腺素E类为米索前列醇，抗炎药物为双氯芬酸钠。
12.如权利要求11所述的眼药，其中的米索前列醇的浓度在0.01μM到10μM的范围。
13.如权利要求12所述的眼药，其中的双氯芬酸钠的浓度在0.01％到0.5％的范围。
全文摘要
本发明提供了以前列腺素E类如米索前列醇为有效成分的用于治疗或预防角结膜上皮损伤细胞的眼药；以前列腺素E类和抗炎药物为有效成分的用于治疗或者预防角结膜上皮细胞损伤的眼药。对物理性、化学性、机械性损伤造成的角膜或结膜损伤以及内源性角膜或结膜上皮细胞损伤具有高度治疗和/或预防效果。
文档编号A61P27/02GK1665514SQ03815748
公开日2005年9月7日 申请日期2003年7月2日 优先权日2002年7月2日
发明者秋叶清, 保科太, 阿形光治 申请人:若素制药株式会社