专利名称：治疗肺纤维化的中药制剂的制作方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域。具体涉及一种治疗肺纤维化的中药制剂。
背景技术：
肺纤维化是呼吸系统疾病中的难治病，其发病率随着工业化的发展呈上升趋势，严重威胁着人们的生命健康。在治疗上，西医主要以肾上腺皮质激素及免疫抑制剂治疗。但疗效不理想，且副作用明显。寻求新的副作用较小的治疗药物，显得特别的迫切而有较大意义。
在中医古代文献中，没有与肺纤维化完全相对应的病名。根据本病特点和临床表现，一般将其归入”咳嗽”、”肺瘘”、”肺胀”等门中。本病病因病机为本虚标实，本虚为肺肾气阴两虚，标实为痰瘀热毒蕴肺阻络。由于本虚，致病因素易侵入肺内，损伤正气，日久肺肾俱虚，正气不运，痰瘀等邪气内生；痰瘀蕴久化热，进一步，耗伤肺肾，肺肾俞虚则痰瘀阻络愈甚，从而形成恶性循环，此种互为因果的关系，导致本病呈进行性发展，造成肺、肾、脾等多脏损伤。《内经》对肺病咳嗽有专篇论述。《素问.宣明五气论篇》说“五气所病……肺为咳”。《医学三字经.咳嗽》篇指出“肺为脏腑之华盖，呼之则虚，吸之则满，只受得本然之正气，受不得外来之客气，客气干之则呛而咳矣；亦只受得脏腑之清气，受不得脏腑之病气，病气干之亦呛而咳矣”。明确阐述了肺与其他脏腑密切而不可分的关系。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于研究设计疗效、副作用小的中药制剂，本发明提供了一种治疗肺纤维化的中药制剂(中药国圣一号)，该制剂的活性成分包括下列组分的中药，按重量百分含量计算生首乌3-15％、丹参3-20％、赤芍3-15％、当归3-15％、白蒺藜2-10％、败酱草5-30％、莱菔子3-12、夜交藤5-30％。
本方以生首乌、莱菔子补肾益肺，降气消痰，治其本为君药，以丹参、当归、赤芍养血活血祛痰为臣药，以败酱草清热解毒而治痰瘀热毒蕴肺，以夜交藤、白蒺藜祛风通络使气运畅通共为佐药，莱菔子归肺络兼使药。八味药并举，共奏补肾益肺消痰瘀、解热毒、通络活血之功效。
本发明的中药制剂是以上述各味药的含量配比按常规制备方法制成口服制剂如口服液、片剂、胶囊剂等。
本发明的中药制剂(中药国圣一号)的药效试验如下中药国圣一号对博来霉素致大鼠肺纤维化的作用观察结果如下目的探讨中药国圣一号对博莱霉素(BLM)所致大鼠肺间质纤维化的干预作用及机制。
1.材料和方法1.1.材料博来霉素A5由天津太河制药有限公司提供；雄性Wistar大鼠48只，由第二军医大学实验动物中心提供，身体质量在170g±10g；羟脯氨酸试剂盒，由南京建成生物研究所提供。显微照相系统(OLYMPUS，日本)，显微图像分析系统(Smatscape)。
1.2.方法1.2.1.分组及建立动物模型2动物常规饲养3天后，随机分为四组。①博来霉素模型组(BLM组)12只，乙醚麻醉后，切开颈部皮肤，钝性分离皮下组织及肌肉，暴露气管，直视下在气管环间穿刺注入5mg/ml配制好的博来霉素溶液0.2-0.3ml(5mg/kg)，注射后立即将动物直立并旋转，使药液在肺内分布均匀；②正常对照组12只，在同样条件下气管内注入等体积生理盐水。③氢化考的松组12只，造模同BLM组，造模后第二日开始每日给予氢化考的松2mg(10mg/kg.d)。④中药国圣一号组12只，造模同BLM组，造模后第二日给予胃管内注射国圣一号1ml/只，每日一次。每周给大鼠测一次体重，以调整药物剂量。第14天和28天分两批处死各组动物，提取肺组织，称重，取左肺上叶10％福尔马林固定，HE染色，免疫组化法分析IL-6和TGF-β1在肺组织中的表达。剪取大鼠右肺中叶，按1g肺组织加9ml生理盐水比例配成匀浆，按试剂盒提示完成处理后，测定羟脯氨酸含量(A550)代表肺组织胶原含量。
1.2.2.病理各组动物取左上肺标本行HE染色，根据Szapiel等提供的方法3，确定肺泡炎及肺纤维化程度，进行病理半定量分析。肺泡炎分级0级无肺泡炎；1级轻度肺泡炎，病变范围局限在全肺20％以下；2级中度肺泡炎，病变范围占全肺20％～50％；3级弥漫性肺泡炎，病变范围大于50％。肺间质纤维化分级0级无肺间质纤维化；1级轻度肺间质纤维化，病变范围局限在全肺20％以下；2级中度肺间质纤维化，病变范围占全肺20％～50％；3级重度肺间质纤维化，病变范围大于50％，肺泡融合，肺实质结构紊乱。将病理切片置于显微成像系统的显微镜上，随机选取10个高倍镜视野，测出相应各区的面积值(像素/视野)，取平均值。
统计学处理所有结果用X±S表示，两组间统计采用t检验，使用SAS统计软件进行分析。
2.结果2.1.肉眼观察空白对照组双肺呈粉红色，表面光滑。模型14d、28d组大鼠，体重较空白对照组明显减轻，活动减少，反应迟钝，双肺体积略缩小，可见小片状凹凸不平的苍白灶，氢考治疗组和中药治疗组均有不同程度的苍白灶，但要明显比BLM组少。各组肺系数变化见表1。氢化考的松治疗14d、28d组大鼠体重明显小于空白对照组，也小于模型组；中药国圣一号14d、28d治疗组大鼠体重明显大于模型组，与正常组无明显区别。由表1可见，模型组14d、28d肺系数明显大于对照组(P＜0.01)，氢考治疗组14d、28d组肺系数均明显小于模型组(P＜0.05)，明显大于正常对照组(P＜0.05)；国圣一号治疗14d组肺系数大于正常对照组小于BLM造模组，28d组肺系数小于BLM模型组，但与正常对照组无明显区别(P＜0.05)。本研究氢化考的松治疗组所测肺系数大于中药国圣一号组，而光镜观察结果提示氢考组纤维化程度相对较轻，可能与氢考治疗组大鼠的体重明显减轻有关，氢考组的肺系数改变与肺纤维化的关系有待于进一步探讨。
2.2.光镜观察模型14d组呈重度肺泡炎，光学显微镜下见肺泡间隔增厚，以巨噬细胞，淋巴细胞浸润为主，成纤维细胞大量增生，肺泡腔变窄，间质胶原纤维增生呈带状，部分视野下可见大片的团块状炎症浸润和纤维化灶，肺泡腔几乎消失；28d模型组呈中重度肺纤维化改变，胸膜增厚，胸膜上有大量淋巴细胞和巨噬细胞增生，肺泡结构破坏，肺泡腔呈裂隙状，部分肺泡融合呈囊状，肺泡间隔明显增宽，成纤维细胞增生，胶原纤维积聚呈小片状，淋巴细胞浸润，病损范围广泛，28d的纤维化区明显较14d的大(P＜0.05)，肺泡腔则较14d时减少(P＜0.05)，证明本实验的模型复制是成功的。
氢化考的松治疗14d组呈轻度肺泡炎，肺泡隔增厚较轻，肺泡腔轻度被挤压，未见有大片团块状炎性浸润和纤维化灶，肺泡炎面积、纤维化面积较BLM组明显减小(P＜0.01)，部分肺泡保持了基本正常的结构；氢考治疗28d组呈轻中度肺纤维化改变，病变呈局灶性分布，胸膜和肺泡间隔胶原纤维沉积呈束状，少量淋巴细胞浸润，纤维化和肺泡炎均比BLM28d组明显减轻(P＜0.01)。国圣一号14d、28d治疗组呈中度肺泡炎和肺纤维化表现，肺纤维化较BLM组明显减轻(P＜0.01)，与氢考治疗组无明显差别。肺泡炎程度与BLM组无明显差别(P＞0.05)，明显较氢考治疗组重(P＜0.05)。各组病理积分见表2，各部分面积比较见表3。
表1 治疗对BLM大鼠肺系数的影响(X±S)14d 28d组别动物数 肺系数动物数 肺系数正常对照组6 0.410±0.01560.426±0.021BLM模型组 5*0.535±0.0375*0.539±0.035氢考治疗组5*0.465±0.0245*0.488±0.043中药治疗组6 0.445±0.01460.416±0.017*表示在治疗过程中大鼠死亡1只。
表2 国圣一号和氢化考的松治疗后肺组织病理积分比较肺泡炎积分 肺纤维化积分时间组别0123 0123对照组51 42模型组 55*14d氢考组23 5*中药组 6 6对照组66模型组 3232*28d氢考组 5 5*中药组 6 6注*表示该组死亡动物1只。
表3 国圣一号和氢化考的松治疗后图像分析面积比较(pix/视野，X±S)时间 组别 动物数 无染区深染区 浅染区正常对照组 6 284421±11019 64872±596293074±7195博来霉素对照组5 128260±18390△132297±7999▲181809±13278▲14d国圣一号组 6 170565±8324*124903±10463◆146898±4940*氢化考的松组 5 201135±6149**97085±13592**△144147±15144**△△正常对照组 6 281551±809166235±6320 94580±6814博来霉素对照组5 118641±17155 111680±13378▲212046±15166▲28d国圣一号组 6 180274±7901*120523±8507◆141571±5445*氢化考的松组 5 186852±8310**△△108664±7228**△146851±4504**△△
注与正常对照组比较，▲P＜0.01；与博来霉素对照组比较，*P＜0.01，**P＜0.01◆P＞0.05，；与国圣一号组比较，△P＜0.05，△△P＞0.052.3.羟脯氨酸测定表4 造模后28d羟脯氨酸浓度测定(ug/ml)组别 羟脯氨酸浓度值对照组2.638±0.807模型组8.33755±1.24氢考组5.682±0.485中药组5.932±1.667由上表可知，模型组大鼠肺羟脯氨酸含量明显较正常对照组高(P＜0.01)，氢考和中药国圣一号治疗28天组，羟脯氨酸含量明显较BLM模型组减轻，比对照组明显增高(P＜0.01)。中药治疗组和氢考治疗组羟脯氨酸含量无明显区别。
2.4.TGF-β1和IL-6在大鼠肺中的表达肺内许多细胞能分泌TGF-β1，如肺泡上皮细胞、肺泡巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞等，其中肺泡吞噬细胞被认为是分泌TGF-β1的主要细胞，特别是在急性肺损伤期。本研究用免疫组化法显示TGF-β1在未经博来霉素处理正常大鼠肺组织只有少量TGF-β1弱表达，BLM处理后14天，TGF-β1广泛分布于支气管、细支气管粘膜上皮细胞侧、肺泡上皮、巨噬细胞中，具体见表5。由表可见14d和28d氢考组和国圣一号组大鼠肺组织中的TGF-β1均要比模型组弱。因而国圣一号和氢考可能抑制了TGF-β1在肺纤维化大鼠肺组织中的表达，从而减轻了肺纤维化程度。本研究结果显示BLM处理28d后TGF-β1在肺组织仍有强表达。但蔡后荣等报道的博来霉素处理后肺组织TGF-β1表达在3-7天达到高峰然后下降。
表5 TGF-β1在大鼠肺组织中的表达变化14d 28d-++++++-++++++正常组 51 42BLM组22 13 2氢考组 32 3 2国圣一号组 33 4 2IL-6是肺纤维化中主要的炎症细胞因子之一，它可以调节免疫反应、急性期反应和血细胞生成，并在宿主防御机制中起关键作用，由多种细胞产生，包括T细胞、B细胞、单核细胞、成纤维细胞及内皮细胞等；对多种细胞的生长、分化或基因表达均有影响，其主要功能为诱导B细胞分化，是B细胞产生抗体所必须的。有研究表明BLM致大鼠肺纤维化过程中，巨噬细胞可以通过释放IL-6参与肺损伤及肺纤维化的全过程，且在BLM造模后28天IL-6达到高峰。5关于IL-6在肺纤维化中作用的可能机理，认为BLM刺激AM或其他有核细胞表达IL-6基因，而IL-6诱导B细胞生长、分化并产生免疫球蛋白，形成免疫复合物，造成肺损伤。6最近还有研究表明IL-6可能减缓了肺纤维化过程中的纤维母细胞凋亡，从而促进了纤维化的发展7。我们的研究显示，正常组大鼠IL-6在支气管上皮、肺泡上皮有少量表达。BLM组28d时IL-6表达强于14d，该结果与文献报道相符和；而氢考治疗组28d时IL-6表达较14d减弱；国圣一号组28d时IL-6表达与14d无明显变化。研究中还发现，14天时，IL-6在支气管粘膜下纤维母细胞、基底膜有强表达，28天时主要表达于支气管和肺泡上皮以及巨噬细胞。从上述结果可见，氢化考的松可能抑制了IL-6在大鼠肺中的表达，国圣一号对IL-6的抑制作用不明显。结果显示肺纤维化大鼠28d时IL-6仍有高表达，证明IL-6不仅在肺纤维化急性炎症期有作用，可能在肺纤维化期中也起到了重要作用。
表6 IL-6在大鼠肺组织中的表达变化14d28d- ++++++-++++++正常组6 15BLM组 2 2 1 3 2氢考组 3 2 32国圣一号组1 1 4 2 43.讨论博来霉素属于抗肿瘤抗生素，主要的副作用为肺毒性，引起肺泡炎并很快进展为肺纤维化。自从Thrall证实给大鼠气管内一次灌注小剂量BLM 可形成类似于人类弥漫性肺间质纤维化的病变，BLM诱导的鼠肺纤维化模型已成为当今国际上研究肺间质纤维化普遍采用的试验方法。
弥漫性肺间质纤维化是一组异质性疾病，以肺泡结构的破坏及间质胶原纤维的大量积聚为病理特征，病人多因呼吸衰竭而死亡，其中尤以特发性肺纤维化(IPF)的诊治最为困难。皮质激素是IPF治疗的首选药物，但是有许多严重的副反应如真菌感染、柯兴氏综合症、骨质疏松等，而且并不能延长患者的存活时间。这就使中医中药治疗肺间质纤维化成为IPF可供选择的治疗方案。文献报道8，9，中药川芎嗪、丹参以及雷公藤多甙等药对BLM所致肺纤维化有抑制作用。本研究探索了对肝纤维化有明显疗效的药方国圣一号对博来霉素致肺纤维化大鼠的治疗作用，并与氢化考的松的治疗作用进行比较。
本实验中，用博来霉素A5造成的大鼠肺纤维化模型是成功的，病理结果与文献描述一致；应用氢化考的松进行干预在抗炎和抗肺纤维化方面均取得了良好的治疗效果，应用中药国圣一号干预，结果发现14、28d时该组纤维化程度较BLM组有明显减轻，且不劣于氢化考的松治疗组，但肺泡炎症程度重，与博来霉素造模组无明显区另。因此建议下一步实验应设立氢考、国圣一号联合治疗组观察疗效。本实验观察了细胞因子TGF-β1、IL-6在肺纤维化大鼠肺组织的表达情况，发现氢化考的松和国圣一号均抑制了TGF-β1在肺组织中的表达，氢化考的松还抑制了IL-6在肺中的表达，而国圣一号则对IL-6无明显抑制。氢化考的松和国圣一号可能通过上述机制抑制了肺纤维化进程。本研究显示IL-6在造模后28d仍有高表达，显示IL-6不仅在早期通过抗原抗体复合物造成肺损伤，可能在肺纤维化形成后仍然发挥一定作用。
本研究证明了国圣一号对肺纤维化具有一定的疗效，但是抗肺泡炎作用较弱，因而可以作为激素的辅助用药以减少激素用量，减少副作用。国圣一号抗肺纤维化的机制有待于进一步研究。
具体实施例方式
实施例1 合剂配方生首乌15g、丹参15g、当归12g、赤芍15g、白蒺藜12g、败酱草30g、莱菔子15g、夜交藤30g。
按常规方法制成合剂。
实施例2 胶囊剂配方生首乌10g、丹参10g、当归8g、赤芍10g、白蒺藜10g、败酱草20g、莱菔子10g、夜交藤30g。
按常规方法制成胶囊剂。
实施例3 片剂配方生首乌15g、丹参10g、当归8g、赤芍15g、白蒺藜12g、败酱草24g、莱菔子12g、夜交藤30g。
按常规方法制成片剂。
权利要求
1.一种治疗肺纤维化的中药制剂，其特征在于该中药制剂包括下列中药组成的活性成分与药用辅料组成以重量百分含量计算生首乌3-15％、丹参3-20％、赤芍3-15％、当归3-15％、白蒺藜2-10％、败酱草5-30％、莱菔子3-12、夜交藤5-30％。
全文摘要
本发明属于中药制剂技术领域。本发明公开了一种治疗肺纤维化的中药制剂。本发明的制剂包括本首乌、丹参、赤勺、当归、白蒺藜、败酱草、莱菔子和夜交藤等中药组成。经药效试验证实本发明的中药制剂对肺纤维化具有一定的疗效。
文档编号A61P11/00GK1650912SQ200410016139
公开日2005年8月10日 申请日期2004年2月5日 优先权日2004年2月5日
发明者刘智华 申请人:上海国圣医疗科技有限公司