组合物及其在治疗或预防肾纤维化药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及有机合成和药物化学领域，具体设及组合物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 肾纤维化(包括肾间质纤维化和肾小球硬化)是各种原因引起的肾脏损害最后阶 段的主要病理基础，肾纤维化发生机制较为复杂，与多种因素有关，其中主要与细胞外基质 细胞产生细胞的增殖和活化，血管活性物质、细胞因子W及细胞外基质转换失衡有关，肾间 质纤维化几乎是所W原发或继发肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径。急需研发高效 低毒的抗肾纤维化药物。
[0003] 肾纤维化的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物中寻 找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物有重 要价值。
[0004] 本发明设及的化合物I是一个20 11年发表（Antone 1 Ia Maggio et al .， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia a化a(Asteraceae)from Sicily Jetr址e化on Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 们对化合物I进行了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物HI和化合物IV制备了组合物并对该组合物抗肾纤维化活性进行了评价，其具有抗肾纤 维化活性。
【发明内容】
[0005] 本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物HI和化合物IV组成，该组合物 中化合物HI和化合物IV的质量百分数分别为85 %和15 %。
[0007] 本发明公开的组合物可W制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
[0008] 药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗肾纤维化作用。本发明的药学上 可接受的盐具有同样的药效。
[0009] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加 W限定。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1化合物Arta化ic acid的制备
[0011] 化合物Arta化ic acid(I)的制备方法参照Antonella Maggio等人发表的文献 (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0013] 实施例2 Arta化ic acid的0-漠乙基衍生物（II)的合成
[0014] 将化合物I(266mg，l.OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四下基漠化锭（TBAB) (0.08g)，1，2-二漠乙烧(3.760g，20.0 Ommol)和6mL的50%氨氧化钢溶液。混合物在40摄氏 度揽拌16h"l加之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烧萃取两次，合并有机相溶液。然 后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涂5次，再用无水硫酸钢干燥，最后减压浓缩去除 溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬= 100: l.〇，v/v)， 收集栋色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的栋色粉末(272mg，73%)。
[001引 Ih NMR(500MHz，DMS0-d6)Sll.41(s，lH)，6.06(s，lH)，5.76(s，lH)，4.99(s，lH), 4.71(s,lH),4.56(s,lH),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,lH),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s，lH)，1.64(s，3H)，1.54(s，lH)，1.44(s，2H)，0.95(s，3H).Uc NMR(125MHz，DMS0-d6) 5201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05(s),109.43(s),81.86(s),70.27 (s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s),33.36(s),30.72(s),20.44(s), 18.42(s).
[0018] 实施例3 Arta化ic acid的0-(赃嗦基）乙基衍生物（III)的合成 [0019] 将化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟（：M5mg， 2.5mmo 1)，舰化钟(84mg，0.5mmo 1)和无水赃嗦（3446mg，40mmo 1)，混合物加热回流4h。反应 结束后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烧萃取2次，合并有机相。依次用水和饱和 食盐水洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产 物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬= 100:1.5，v/v)，收集淡栋色集中洗脱 带并挥去溶剂即得到化合物HI的栋色粉末（124.7mg，66 % )。
[0020] Ih 醒R(500MHz，DMS0-d6)Sll.56(s，lH)，6.22(dt，J=3.9，1.8Hz，lH)，5.92(dt，J = 4.0，1.9Hz，lH)，4.91-4.80(m，2H)，4.76-4.67(m，lH)，3.65(t，J = 7.6Hz，2H)，2.80(m， 5H)，2.70-2.62(m，6H)，2.45(td，J=12.2,0.6Hz，4H)，2.23(dd，J = 24.7，17.4Hz，lH)，1.79 (t，J = 2.0Hz，3H)，1.72-1.51(m，3H)，1.20(s，lH)，1.10(s，3H).
[00別]"C NMR(125MHz，DMS0-d6)S202.02(s),176.02(s),149.24(s),148.28(s),117.20 (s)，109.50(s)，81.95(s)，67.17(s)，57.81(s)，54.66(s)，54.31(s)，45.42(s)，41.39(s), 39.17(s)，38.98(s)，35.78(s)，30.84(s)，20.53(s)，18.53(s).
[0024] 实施例4 Arta化ic acid的0-(咪挫基）乙基衍生物（IV)的合成
[0025] 将化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟（345mg， 2.5mmo 1)，舰化钟(84mg，0.5mmo 1)和咪挫(870mg，IOmmo 1)，混合物加热回流地。反应结束后 将反应液倒入35mL冰水中，用等量二氯甲烧萃取S次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水 洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品 用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬=100:0.6，v/v)，收集褐色集中洗脱带并挥去 溶剂即得到化合物IV的栋色粉末（109.8mg，61%)。
[0026] Ih NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl9.91(s，lH)，8.07(s，lH)，7.：M(s，lH)，6.95(s，lH)， 6.28(s，lH)，5.93(s，lH)，4.86(d，J=12.0Hz，2H)，4.77(s，lH)，4.19(d，J=16.7Hz，2H)， 4.04(s，2H)，2.81(s，lH)，2.71(s，2H)，2.64(s，2H)，2.14(s，lH)，1.83(d J=12.0Hz，5H), 1.66(s，lH)，1.14(s，3H).
[0027] "C NMR(125MHz，DMS0-d6)S202.12(s),176.12(s),149.34(s),148.38(s),139.96 (s),128.96(s),119.59(s),117.28(s),109.63(s),82.08(s),67.99(s),57.89(s),44.05 (s)，41.50(s)，39.28(s)，39.04(s)，35.89(s)，30.95(s)，20.64(s)，18.64(s).
[002引 HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C2地29化04:361.2127;found:361.2122。
[0030] 实施例5组合物对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
[0031] 1.1材料
[0032] 贝那普利，北京诺华制药有限公司生产;径脯氨酸化YP)试剂盒，南京建成生物公 司;纤维连结蛋白（FN)试剂盒购自上海生物制品所。
[0033] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的85mg化合物III的粉末和研磨之后过200 目网的15mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用满轮揽拌仪混合即得到IOOmg组合物， 使用时用水溶解运IOOmg的组合物即得到组合物的溶液。
[0034] 实验动物:普通级Wistar大鼠，雄性，体重150-200g，SD大鼠。
[0035] 1.2试验方法与结果
[0036] 大鼠60只，随机分6组，即假手术组、模型组、苯那普利灌胃lOmg/kg组、组合物灌胃 lOmg/kg组、化合物III灌胃lOmg/kg组、化合物IV灌胃lOmg/kg组，动物喂养1周，各大鼠 W 10%水合氯醒3.OmLAg腹腔注射麻醉后，将大鼠右侧邸位固定与手术台上，剪毛后用舰酒、 75%酒精消毒手术区，行左侧腹切口，逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，暴露并分离左侧输 尿管，假手术组仅切开腹腔并游离左侧输尿管，但不结扎和剪断，其他各组大鼠用4-0丝线 结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，然后在两道结扎点剪断输尿管，逐层缝合，术 后10天10%水合氯醒麻醉后处死各组动物，取血，按纤维连结蛋白测定说明测定说明纤维 联接蛋白（FN)。生理盐水反复灌洗后留取左侧肾脏，肾组织经4%的多聚甲醒缓冲液固定。 切取适量肾组织，按径脯氨酸试剂盒测定说明测定径脯氨酸。
[0037] 常规病理学检①肉眼观察:假手术组肾脏颜色鲜红，表明光滑，包膜光泽，无粘连。 模型对照组肾脏体积增大，颜色苍白，表明呈颗粒状，类似人体大白肾，少数区域肾包膜粘 连。②光镜检查:假手术组肾单位结果清晰，肾小球囊无扩张或炎细胞浸润。模型对照组大 片肾小管坏死，肾间质纤维细胞增生，肾小管扩张，内有大量栋黄色遮光物质或坏死脱落的 上皮细胞，肾小球数目减少，部分肾小球纤维化并与包曼氏囊壁粘连，囊腔消失。组合物给 药组病变与模型对照组类似，但均有不同程度的形态学改善，与模型对照组比较有明显差 异。而化合物HI给药组和化合物IV给药组与模型对照组无显著性差异。
[0038] 表1组合物对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
[0039]
[0040] *p<0.05,与模型组相比较
[0041 ] 对各组FN、HYP进行T检验。结果见表1，组合物灌胃lOmg/kg显著降低FN、HYP水平 (与模型对照组比较，P<〇.05或0.01);而化合物III和化合物IV灌胃lOmg/kg未能显著降低 FN、HYP 水平。
[0042] 结论:组合物能够显著降低肾间质纤维化FN、肌P水平的升高，抑制肾间质纤维化， 可W用来制备抗肾纤维化药物。化合物III和化合物IV不能够显著降低肾间质纤维化FN、 HYP水平的升高，不能抑制肾间质纤维化，不可W用来制备抗肾纤维化药物。
[0043] 实施例6本发明所设及组合物片剂的制备
[0044] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0045] 实施例7本发明所设及组合物胶囊的制备
[0046] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为85%和15%，2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为:将化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照质量百分数分别为85 %和15 %充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为:所述肾纤维化 为肾间质纤维化。5. 如权利要求4所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为:所述肾间质纤 维化为单侧输尿管阻塞形成的肾间质纤维化。6. 如权利要求3所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为:所述组合物降 低肾纤维化引起的纤维连结蛋白FN的升高。7. 如权利要求3所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为:所述组合物降 低肾纤维化引起的羟脯氨酸的升高。
【专利摘要】本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其在制备预防或治疗肾纤维化药物上的用途。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有预防或治疗肾纤维化的作用，具有开发预防或治疗肾纤维化药物的价值。
【IPC分类】A61P13/12, A61K31/495, A61K31/4164
【公开号】CN105476993
【申请号】CN201510888135
【发明人】丁秋菊
【申请人】南京海澳斯生物医药科技有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月7日