姜黄素类化合物及其提取方法和抗肝纤维化的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及从中药姜黄中分离的有效成分，具体为姜黄素类化合物及其提取方法 和应用。
【背景技术】
[0002] 姜黄化rcuma longa来自姜科姜黄属植物。在传统中医理论中，其干燥根茎被称 为中药"姜黄"，用W行气解郁。姜黄的化合成分已被广泛研究，研究表明姜黄富含姜黄类色 素和倍半祗类化合物。但是目前尚未对姜黄所含的有效物质进行充分的提取和应用研究。
【发明内容】
[0003] 针对上述技术问题，本发明提供一种提取方法W及对所得的提取物进行确定和应 用，具体的技术方案为：
[0004] 姜黄素类化合物的提取方法，包括W下步骤：
[000引 （1) 5kg干燥的姜黄根茎经过粉碎后，用甲醇提取3次，分别为，第1次用64升甲醇 提取3小时，第2次用48升甲醇提取2小时，第3次用32升甲醇提取2小时，最终得到提 取物浸膏812g;
[000引 似将浸膏W水溶解，置于水和乙酸乙醋中萃取分层，得到乙酸乙醋层600g;
[0007] (3)将乙酸乙醋层600g通过硅胶柱用不同比例的氯仿：甲醇溶剂分段梯度洗脱， 氯仿与甲醇体积比例为从90:10至5:95 ;依次得到10个馈分，编号为馈分1~馈分10 ;选 取6. 5g的馈分3进一步由0DS反相柱分离，0DS反相柱分离使用的甲醇：水体积比分别为 40:60、55:45、60:40、75:25、95:5,依次得到编号馈分3-1~馈分3-5的5个馈分，其中馈分 3-4 为 1.5g，馈分 3-5 为Ig;
[0008] (4)馈分3-4和馈分3-5进一步通过Se地adex LH-20甲醇凝胶反复除去色素得到 400mg馈分3-4-3 ;
[0009] (5)馈分3-4-3进一步W半制备液相色谱进行制备，Agilent 1200 HPLC Series; YMC ODS-A column, 5μηι, 10X250mm,4。日1:〇]1；[付;[16/!120作为洗脱相，分别得到^种姜黄素 类化合物的单体纯品，包括：40mg姜祗素A, Acetonitrile/HzO洗脱比例：50:50, 3血/min, 出峰时间1：[；=125111；[]1;1〇1]^姜祗素8,4。61:〇]1；[付;[16/!120洗脱比例：50:50,3血/111；[]1,出峰 时间tR=llOmin ;10mg姜祗素C,Acetonit;rile/H2〇洗脱比例：50:50,3mL/min,出峰时间 ?κ= 140min。
[0010] 其中，姜祗素A, curcubis油olin A的化学结构为：
[0011]
[0012] 姜祗素B，cur州bis油olinB的化学结构为：
[0013]
[0014] 姜祗素C，cur州bis油olinC的化学结构为：
[0015]
[0016]Ξ种姜黄素类化合物可W用于制备预防或治疗肝纤维化或肝硬化的临床药物或 保健食品。
[0017] 本发明提供的姜黄素类化合物及其提取方法，利用硅胶柱层析、反相柱层析、葡聚 糖凝胶LH-20柱层析和制备高效液相色谱法，从姜黄中分离得到新的姜黄素类化合物，运 些新化合物的结构通过一维、二维NMR技术W及质谱手段得W确认和阐明，体外实验表明 所分离的Ξ种化合物都具有显著降低胆总管扎结和CCL4诱导的肝纤维化模型大鼠血清中 ALT/AST的浓度，改善肝纤维化症状，表明该类化合物在制备预防或治疗肝纤维化或肝硬化 的临床药物或保健食品开发上具有潜在的价值。
【具体实施方式】
[0018] 结合实施例说明本发明的【具体实施方式】。
[001引 实施例1
[0020] 提取分离姜黄素类化合物：
[0021] (1) 5kg干燥的姜黄根茎经过粉碎后，用甲醇提取3次，分别为，第1次用64升甲醇 提取3小时，第2次用48升甲醇提取2小时，第3次用32升甲醇提取2小时，最终得到提 取物浸膏812g;
[002引 似将浸膏W水溶解，置于水和乙酸乙醋中萃取分层，得到乙酸乙醋层600g;
[002引 （3)将乙酸乙醋层600g通过硅胶柱用不同比例的氯仿：甲醇溶剂分段梯度洗脱， 氯仿与甲醇体积比例为从90:10至5:95 ;依次得到10个馈分，编号为馈分1~馈分10 ;选 取6. 5g的馈分3进一步由0DS反相柱分离，0DS反相柱分离使用的甲醇：水体积比分别为 40:60、55:45、60:40、75:25、95:5,依次得到编号馈分3-1~馈分3-5的5个馈分，其中馈分 3-4 为 1.5g，馈分 3-5 为Ig;
[0024] (4)馈分3-4和馈分3-5进一步通过Se地adexLH-20甲醇凝胶反复除去色素得到 400mg馈分 3-4-3 ;
[00巧](5)馈分3-4-3进一步W半制备液相色谱进行制备，Agilent1200HPLCSeries;YMCODS-Acolumn，5ym，10X250mm，Acetonitrile/H20作为洗脱相，分别得到Ξ种姜黄素 类化合物的单体纯品，包括：40mg姜祗素A,Acetonitrile/HzO洗脱比例：50:50, 3血/min, 出峰时间1：[；=125111；[]1;1〇1]^姜祗素13,4。61:〇]1；[付;[16/!120洗脱比例：50:50,3血/111；[]1,出峰 时间tR=llOmin;10mg姜祗素C,Acetonitrile/HzO洗脱比例：50:50, 3mL/min,出峰时间 ?κ= 140min。
[0026] 对所取得的Ξ种姜黄素类化合物进行结构鉴定
[0027] 经过全面的一维、二维NMR分析W及高分辨质谱分析，3个化合物的结构得W阐 明，为全新骨架的姜黄素类化合物。在ESI-MS"分析表明，姜祗素A在负离子模式产生与 姜黄素相同的m/z217/173/149的分子离子峰；姜祗素B在负离子模式产生与脱甲氧基姜 黄素相同的m/z217/187/173/143/149/119的分子离子峰；姜祗素C在负离子模式产生 与双脱甲氧基姜黄素相同的m/z187/143/119的分子离子峰。此外，姜祗素A的分子离子 峰为m/z601[M-H]，姜祗素B的分子离子峰:m/z571[M-H]，姜祗素C的分子离子峰：m/z 54UM-H]。Ξ种姜黄素类化合物的分子离子峰依次相差30化，为在苯环上甲氧基（-OCH3) 数量的差异，与姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素的差异一致。因此，推测Ξ种姜 黄素类化合物的具有与姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素相同骨架结构。
[002引将Ξ种姜黄素类化合物的与Ξ种已知姜黄素的电NMR和"CNMR列出作为对比， 如表1和表2所示，最终确定了Ξ种姜黄素类化合物的的化学结构。
[0029] 表1为Ξ种姜黄素类化合物（"C-0-C"链接）的碳谱（"CNMR)数据 (400MHz，Aceton)与姜黄素（curcumin)、脱甲氧基姜黄素（DMC)、双脱甲氧基姜黄素度DMC) 的数据列出作为参比。
[0030] 表2为S种姜黄素类化合物（"C-0-C"链接）的氨谱伯NMR)数据 (400MHz，Aceton)与姜黄素（curcumin)、脱甲氧基姜黄素（DMC)、双脱甲氧基姜黄素度DMC) 的数据列出作为参比。
[00引]表1
[0032]
[0033]
[0034] 表 2
[0035]
[0036]
[0037] Ξ种姜黄素类化合物姜祗素A、姜祗素B、姜祗素C的理化常数及光谱数据：
[003引 （1)姜祗素A
[0039] curcubis油olinsA，黄色粉末。高分辨质谱（HRESIM巧精确分子式为：[36??. 实测值：625. 27719 [M+Na]+，计算值：625. 27762,forC36H4208化。UVses下显示黄色巧光， 1H-NMR(400MHz，ACET0N)。古NMR和"CNMR见表 1 和表 2。
[0040] 结构式为：
[0041] 姜祗素A数据归属如下：
[0042] 4" ' -〇-(1α, 2β, 5β,S-hydroxybis油ola_3,l〇-diene-9-〇ne)-但一4" ')-c urcumin(curcubisabolinsA)；
[0043] Yellow amo;rphous powder(CH3OH), m. p. 100-102 °C ; [a];, 76 k 0. 10,CH3OH); UV(CH30H) AmaxQog ε )421nm(62320) ;IR(KBr) V max 3857, 3747, 3684, 3631，3176, 19 60，1891，1718，1668，1592，1479，1402，1001，716,631;1h匪R ancPc醒R data were shown in Table. 2-land Table. 2-3 ;negative ESIMS。m/z 601[M-田；HRESIMS m/ z 625. 27762 [M+Nar(calcd. for〔36&208化，625. 27719)，641. 25019 [Μ+ΚΓ baled, for CsfftzOsK, 641. 25058)
[0044] 似姜祗素B
[0045]curcubis油olinsB，黄色粉末。高分辨质谱（HRESIM巧精确分子式为：〔35成。〇7。 实测值：595. 26662 [M+Na]+，计算值：595. 26739,forC35H4007化。UV365下显示黄色巧光， 1H-NMR(400MHz，ACETON)。古NMR和"cNMR见表1、表2。
[0046] 结