构式
[0047] 姜祗素B数据归属如下：
[0048] 4" '-〇-(1α, 2β,5β,S-hydroxybis油ola_3,l〇-diene-9-〇ne)-但一4" ')-3 "-demethoxycurcumin(curcubis曰bolinsB)
[0049] Yellowamo;rphouspowder(CH3OH) ;m.p. 101-103°C;[a],,、88k0. 10,CH3OH); UV(CH30H)AmaxQoge)41 加m(61360) ;IR(邸r)Vmax3912, 3763, 3696, 3635, 3170, 2018,1 656,1579,1402,1074,790,670:?NMRand"cNMRwereexhibitedinT油le. 2-land T油le. 2-3negativeESIMSm/z571 [M-田；HRESIMSm/z595.26739[M+Na]+(calcd.for C35H40O术a, 595. 26662)
[0050] 做姜祗素C
[0051] curcubis油olinsC，黄色粉末。高分辨质谱（HRESIM巧精确分子式为：〔3化斯（实 测值：565. 25606[M+Na]+，计算值：565. 25476,forC34册806化）。UV365下显示黄色巧光， 1H-NMR(400MHz，ACET0N)。古NMR和"CNMR见表 1、表 2。
[0052] 姜祗素A、姜祗素B、姜祗素C可W依据其姜黄素母核和倍半祗母核链接位点归纳 为"C-0-C"链接。
[0053] 姜祗素C数据归属如下：
[0054] 4"'-O-Oiydroxybis油ola-3, 10-diene-9-〇ne)-(2一4"')-bisdemethoxycur cumin(curcubisabolinsC)
[00巧]Yellowamo;rphouspowder(CH3OH),m.p. 103-105°C '=64k0. 10,邸3地）； UV(CH30H)λmax(logε)415nm巧5840);IR(邸r)Vmax3868, 3761，3696, 3181，2002, 1656, 159 2, 1479, 1575, 1465, 1074, 798, 669 ;1hNMRand"cNMRdatawereshowninT油le. 2_2and T油le. 2-4negativeESIMS。m/z541 [M-田；HRESIMSm/z565.25742[M+Na] +(calcd.for 〔3化8〇6化，565. 25606)
[005引 实施例2
[0057] Ξ种姜黄素类化合物对活性研究，
[0058] 1、姜祗素A(cu;r州bis油olinΑ)、姜祗素B(cu;r州bis油olinΒ)、姜祗素 "curcubis油olinC)对胆总管扎结肝纤维化模型大鼠的治疗作用
[0059] (1)胆总管扎结造成肝纤维化实验模型建立，方法如下：
[0060] 6周的SD大鼠，雌雄各半，体重约200±15g，由四川大学实验动物中屯、提供。饲养 溫度18-22°C，相对湿度60% -75%。将所有大鼠随机分组，每组10只：分组分别为：空白 对照组，模型组，用量都为30mg/kg.d的姜祗素A低剂量组、姜祗素B低剂量组和姜祗素C 低剂量组，用量都为60mg/kg.d的姜祗素A中剂量组、姜祗素B中剂量组和姜祗素C中剂量 组；用量都为90mg/kg.d的姜祗素A高剂量组、姜祗素B高剂量组和姜祗素C高剂量组。
[0061] 假手术组操作选择分离大鼠的总胆管，不进行胆管扎结，然后缝合。胆总管扎结在 手术后3天进行，给药组分别给予高、中、低计量药物，空白对照组灌胃等计量生理盐水。给 药3周后，于第25天处死老鼠，在肝口静脉取血，静置离屯、后取血清。检测HA(透明质酸 酶）、LN蛋白、V型胶原、总蛋白、总胆红素，分析实验结果。
[0062] 实验结果表明：给予高中低计量的姜祗素A、姜祗素B、姜祗素C对于胆总管扎结引 起的肝纤维化有明显的抑制作用，结果见表3。
[0063]实验结论：由表3可见，模型组的各项指标均显著高于假手术组，证明建模成功； 在给药组中，姜祗素A低剂量组、姜祗素B低剂量组、姜祗素C低剂量组；姜祗素A中剂量 组、姜祗素B中剂量组、姜祗素C中剂量组；姜祗素A高剂量组、姜祗素B高剂量组、姜祗素 C高剂量组，均能够显著降低HA(透明质酸酶）、LN蛋白、V型胶原、总蛋白、总胆红素等指 标，显示姜祗素A、姜祗素B、姜祗素C对胆总管扎结引起的肝纤维化有显著的抑制作用。
[0064] 表3B化实验生化监测指标
[0065]
[0066] (2)CCL4诱导的肝纤维化模型实验，具体操作方法如下：
[0067] 6周的SD大鼠，雌雄各半，体重约200±15g，由四川大学实验动物中屯、提供。饲养 溫度18-22°C，相对湿度60%-75%。将所有大鼠随机分组，每组10只：分组同上，为空白 对照组、模型组、姜祗素A低剂量组、姜祗素B低剂量组、姜祗素C低剂量组、姜祗素A中剂 量组、姜祗素B中剂量组、姜祗素C中剂量组；姜祗素A高剂量组、姜祗素B高剂量组、姜祗 素c高剂量组。Ξ种姜黄素类化合物用量同上。
[006引各组大鼠按照2. 5血/kg的剂量腹腔注射35 %的0化4花生油溶液，每周注射2次， 持续6周注射，诱导肝纤维化模型的形成。第7周开始给药组灌胃给药，模型组和空白组灌 胃等量的生理盐水。共给药=周，在=周后处死大鼠，于肝口静脉处取血，静置离屯、后取血 清。检测HA(透明质酸酶），Piii、TBII等指标，结果见表4。
[0069] 表4CCL4实验生化监测指标
[0070]
[0071] 实验结论：由表4可见，模型组的各项指标均显著高于假手术组，证明建模成功； 在给药组中，姜祗素A低剂量组、姜祗素B低剂量组、姜祗素C低剂量组；姜祗素A中剂量 组、姜祗素B中剂量组、姜祗素C中剂量组；姜祗素A高剂量组、姜祗素B高剂量组、姜祗素 C高剂量组，均能够显著降低HA(透明质酸酶）、TBII值、Piii值等指标，显示姜祗素A、姜 祗素B、姜祗素C对CCL4诱导的慢性肝纤维化有显著的抑制作用。
[0072] 体外实验表明所分离的Ξ种化合物都具有显著降低胆总管扎结和CCL4诱导的肝 纤维化模型大鼠血清中ALT/AST的浓度，改善肝纤维化症状，表明该类化合物在制备预防 或治疗肝纤维化或肝硬化的临床药物或保健食品开发上具有潜在的价值。
【主权项】
1. 姜黄素类化合物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤： (1) 5kg干燥的姜黄根茎经过粉碎后，用甲醇提取3次，分别为，第1次用64升甲醇提 取3小时，第2次用48升甲醇提取2小时，第3次用32升甲醇提取2小时，最终得到提取 物浸膏812g; (2) 将浸膏以水溶解，置于水和乙酸乙酯中萃取分层，得到乙酸乙酯层600g; (3) 将乙酸乙酯层600g通过硅胶柱用不同比例的氯仿：甲醇溶剂分段梯度洗脱，氯 仿与甲醇体积比例为从90:10至5:95 ;依次得到10个馏分，编号为馏分1~馏分10 ;选 取6. 5g的馏分3进一步由ODS反相柱分离，ODS反相柱分离使用的甲醇：水体积比分别为 40:60、55:45、60:40、75:25、95:5,依次得到编号馏分3-1~馏分3-5的5个馏分，其中馏分 3-4 为 1.5g，馏分 3-5 为lg; (4) 馏分3-4和馏分3-5进一步通过S印hadexLH-20甲醇凝胶反复除去色素得到 400mg馏分 3-4-3 ; (5) 馏分3-4-3进一步以半制备液相色谱进行制备，Agilent1200HPLCSeries;YMC ODS-Acolumn, 5μπι, 10X250mm,Acetonitrile/H20作为洗脱相，分别得到三种姜黄素类化 合物的单体纯品，包括：40mg姜砲素Ajcetonitrile/Hjjf^jfe脱比例：50:50,3mL/min,出峰 时间tR= 125min;10mg姜砲素B,Acetonitrile/H20 洗脱比例：50:50, 3mL/min,出峰时间 tR= 110min;10mg姜砲素C，Acetonitrile/H20 洗脱比例：50:50, 3mL/min,出峰时间1^ = 140min〇2. 根据权利要求1所述的姜黄素类化合物的提取方法所得的姜黄素类化合物，其特征 在于：所述的姜萜素A的化学结构为：α3. 根据权利要求1所述的姜黄素类化合物的提取方法所得的姜黄素类化合物，其特征 在于：所述的姜萜素Β的化学结构为：4. 根据权利要求1所述的姜黄素类化合物的提取方法所得的姜黄素类化合物，其特征 在于：所述的姜萜素C的化学结构为：5.根据权利要求2到4任一项所述的姜黄素类化合物，其特征在于：应用于预防或治 疗肝纤维化或肝硬化的临床药物或保健食品。
【专利摘要】本发明涉及从中药姜黄中分离得到的有效成分，具体为姜黄素类新化合物及其提取方法和抗肝纤维化的应用。利用硅胶柱层析、反相柱层析、葡聚糖凝胶LH-20柱层析和制备高效液相色谱法，从姜黄中分离得到全新的姜黄素类化合物，姜萜素A、姜萜素B和姜萜素C，这些新化合物的结构通过一维、二维NMR技术以及质谱手段得以确认和阐明，该类化合物可以用于制备预防或治疗肝纤维化或肝硬化的临床药物或保健食品。
【IPC分类】C07C45/80, C07C45/79, C07C49/255, C07C45/78, A61P1/16
【公开号】CN105254481
【申请号】CN201510855396
【发明人】李锐, 贾坤, 罗静雯, 陈琛, 何宇新, 李玲
【申请人】西华大学
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月27日