专利名称：一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种以中草药为原料的药物的制备方法，特别是一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法。
背景技术：
现有技术中，由本申请人申请的申请号为01815449.2、名称为“一种中草药药物组合物及其制备方法”的专利公开了一种用于治疗妇科血瘀症疾病的药物组合物，其是由桂枝、白芍、茯苓、桃仁和牡丹皮按所需重量比经水蒸汽蒸馏、乙醇提取、浓缩、制粒、干燥等步骤制成胶囊。该药物组合物具有疗效确切、无毒副作用、质量标准可控、易于吸收的特点。其缺陷在于及该方法制备的药物的有效成份含量相对较低，服用量较大。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供另一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，通过该方法制备的药物有效成份含量高，服用量少，属精制药物。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，它以中草药桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁为原料，其特点是，其步骤如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超临界流体萃取挥发油，得肉桂油备用；药渣合并桃仁用10～12倍量水提取2次，桃仁沸下，每次1.5～2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1.5～2g药材，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为70％～80％，醇沉12～48小时，滤过，取上清液回收乙醇，浓缩，70℃～80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分别加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩，70℃～80℃真空干燥，得浸膏II；茯苓药渣，加入7～9倍、5～7倍量的水提取2次，每次1.5～2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于0.8～1.2g药材，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为75％～85％，醇沉12～48小时，滤过，取滤渣70℃～80℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸馏得丹皮酚备用；药渣合并白芍分别加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每毫升药液相当于0.8～1.2g药材离心，取上清液上D-101大孔吸附树脂柱，以4～6倍柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以18～22倍柱体积20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，60℃～70℃减压干燥，得干浸膏IV；
(4)取肉桂油，加入8～12倍量的β-环糊精的65～75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5～2小时，冷藏24～48小时，抽滤，40～50℃干燥，得肉桂油β-环糊精包合物；(5)取丹皮酚结晶，加入5～7倍量乙醇使溶解，然后加入8～12倍量的β-环糊精的65～75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5～2小时，冷藏24～48小时，抽滤，40～50℃干燥，得丹皮酚β-环糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-环糊精包合物和丹皮酚β-环糊精包合物，加入常规药用辅料，制成药剂学上所述的任何一种剂型的药物。
以下是本发明的优选的技术方案一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特点是，其步骤如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超临界流体萃取挥发油，得肉桂没备用；药渣合并桃仁用12倍量水提取两次，桃仁沸下，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于2g药材(在45～50℃时测得其比重为1.04～1.08)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为70％，醇沉24小时，滤过，取上清液回收乙醇，浓缩，80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分别加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取两次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓药渣，加入8倍、6倍量的水提取两次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1g药材(在45～50℃时测得其比重为1.00～1.05)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为80％，醇沉24小时，滤过，取滤渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸馏得丹皮酚备用；药渣合并白芍分别加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取两次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每毫升药液相当于1g药材(在45～50℃时测得其比重为1.02～1.06)，离心，取上清液上D-101大孔吸附树脂柱，以5倍柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以20倍柱体积20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，70℃减压干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合2小时，冷藏24小时，抽滤，50℃干燥，得肉桂油β-环糊精包合物；(5)取丹皮酚结晶，加入6倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5小时，冷藏24小时，抽滤，50℃干燥，得丹皮酚β-环糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-环糊精包合物和丹皮酚β-环糊精包合物，加入适量糊精或淀粉，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，装胶囊，压铝塑板，包装，得成品桂枝茯苓胶囊剂；或者整粒后压片得片剂；或者直接制成颗粒剂。
本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特点是，其中，中草药原料的重量配比为，桂枝 700-750茯苓 700-750牡丹皮 700-750白芍 700-750桃仁 700-750。
其中，优选的中草药原料的重量配比为，桂枝 720茯苓 720牡丹皮 720白芍 720桃仁 720。
本发明方法制备的药物的质量标准如下鉴别(1)取成品内容物1g，研细，乙醇10ml超声(20℃，250w，40kHz)30分钟，取续滤液作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品适量，加乙醇10ml配成浓度为1mg/ml的对照品溶液。照色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃-90℃)∶醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以二硝基苯肼乙醇显色剂。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的桔红色斑点。
(2)取成品内容物10g，研细，加乙醚50ml，加热回流1h，滤过，滤液挥干，残渣加环己烷1ml使溶解，作为供试品液。另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)∶丙酮∶醋酸乙酯(84∶15∶1)为展开剂，饱和15min，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定(《中国药典》2000年版一部附录IL)。
含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VID)测定。
白芍、牡丹皮色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；以乙腈-水-磷酸-三乙胺(14∶86∶0.08∶0.08)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算，应不低于5000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细，取约0.1g，精密称定，置50ml容量瓶中，精密加入50％乙醇40ml，超声处理(250w，40kHz)30分钟，取出，放冷，用50％乙醇补足至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
成品胶囊剂每粒含白芍、牡丹皮以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于10.0mg。
桃仁色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；以流动相甲醇-水溶液(20∶80)为流动相；检测波长为218nm。理论板数按苦杏仁苷峰计算，应不低于5000。
对照品溶液的制备取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细。取0.2g的成品粉末，精密加入25毫升乙醇，称重，回流1.5小时，取出，放冷，称重，加入乙醇补足重量，精密取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作供试溶液，测定苦杏仁苷的含量。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
成品胶囊剂每粒含桃仁以苦杏仁苷(C20H27NO11)计，不得少于4.5mg。
牡丹皮色谱条件与系统适应性试验安捷伦GC6890，用hp-5涂布毛细管柱；进样口温度；200℃，柱温150℃，检测器温度；240℃，理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于30000。
对照品溶液的制备取丹皮酚对照品适量，精密称定，加入正十五烷内标，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的丹皮酚，0.1mg的正十五烷溶液，即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细。取约0.2g的成品粉末，精密称定，置25ml量瓶中，加入乙醇20ml，超声处理(250w，40kHz)30分钟，取出，放冷，用乙醇补足至刻度，滤过，精密取9ml的续滤液，加入1ml的c＝1mg/ml的正十五烷内标液，配成10ml的溶液，作供试品，测定丹皮酚的含量.
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
成品胶囊剂每粒含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于6.0mg。
与现有技术相比，用本发明方法制备的药物除具有原桂枝茯苓胶囊的作用外，还大大地提高了其治疗效果，且药物中的有效成份含量高，药物质量标准可控；药物的日服用量大大减少，是现有技术的三分之一。
具体实施例方式
实施例1。一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，分别称取桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁各720克，其制备步骤如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超临界流体萃取挥发油，得肉桂没备用；药渣合并桃仁用12倍量水提取两次，桃仁沸下，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于2g药材(在45℃时测得其比重为1.06)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为70％，醇沉24小时，滤过，取上清液回收乙醇，浓缩，80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分别加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取两次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓药渣，加入8倍、6倍量的水提取两次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1g药材(在45℃时测得其比重为1.02)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为80％，醇沉24小时，滤过，取滤渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸馏得丹皮酚备用；药渣合并白芍分别加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取两次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每毫升药液相当于1g药材(在45℃时测得其比重为1.04)，离心，取上清液上D-101大孔吸附树脂柱，以5倍柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以20倍柱体积20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，70℃减压干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合2小时，冷藏24小时，抽滤，50℃干燥，得肉桂油β-环糊精包合物；(5)取丹皮酚结晶，加入6倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5小时，冷藏24小时，抽滤，50℃干燥，得丹皮酚β-环糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-环糊精包合物和丹皮酚β-环糊精包合物，加入适量糊精，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，装胶囊，压铝塑板，包装，得成品精制桂枝茯苓胶囊1000粒，每粒0.30克。用于治疗妇科血瘀症疾病，一天3次，每次1粒。
实施例2。一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，称取中草药桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁各750克，其制备步骤如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超临界流体萃取挥发油，得肉桂油备用；药渣合并桃仁用11倍量水提取2次，桃仁沸下，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1.5g药材(在45℃时测得其比重为1.04)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为70％，醇沉12小时，滤过，取上清液回收乙醇，浓缩，70℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分别加入7倍、5倍量的70％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩，70℃真空干燥，得浸膏II；茯苓药渣，加入9倍、7倍量的水提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于0.8g药材(在50℃时测得其比重为1.00)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为75％％，醇沉12小时，滤过，取滤渣70℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸馏得丹皮酚备用；药渣合并白芍分别加入7倍、5倍量的70％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每毫升药液相当于0.8g药材(在50℃时测得其比重为1.02)，离心，取上清液上D-101大孔吸附树脂柱，以4倍柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以18倍柱体积20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，70℃减压干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入8倍量的β-环糊精的65℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5小时，冷藏24小时，抽滤，40℃干燥，得肉桂油β-环糊精包合物；(5)取丹皮酚结晶，加入7倍量乙醇使溶解，然后加入8倍量的β-环糊精的65℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5小时，冷藏24小时，抽滤，40℃干燥，得丹皮酚β-环糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-环糊精包合物和丹皮酚β-环糊精包合物，加入适量淀粉，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，压片，得成品精制桂枝茯苓片1000片，每片0.30克。用于治疗妇科血瘀症疾病，一天3次，每次1片。
实施例3。一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，称取中草药桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁各700克，其制备步骤如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超临界流体萃取挥发油，得肉桂油备用；药渣合并桃仁用10倍量水提取2次，桃仁沸下，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1.8g药材(在50℃时测得其比重为1.08)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为75％，醇沉48小时，滤过，取上清液回收乙醇，浓缩，65℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分别加入9倍、7倍量的75％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓药渣，加入9倍、7倍量的水提取2次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1.0g药材(在50℃时测得其比重为1.05)，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为85％，醇沉48小时，滤过，取滤渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸馏得丹皮酚备用；药渣合并白芍分别加入9倍、7倍量的75％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每毫升药液相当于1.2g药材(在50℃时测得其比重为1.06)，离心，取上清液上D-101大孔吸附树脂柱，以6倍柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以22倍柱体积20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，70℃减压干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合2小时，冷藏48小时，抽滤，50℃干燥，得肉桂油β-环糊精包合物；(5)取丹皮酚结晶，加入5倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合2小时，冷藏48小时，抽滤，50℃干燥，得丹皮酚β-环糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-环糊精包合物和丹皮酚β-环糊精包合物，制成颗粒剂。
实施例4。实施例1所制备的精制桂枝茯苓胶囊的质量标准鉴别方法如下，(1)取成品内容物1g，研细，乙醇10ml超声30分钟，取续滤液作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品适量，加乙醇10ml配成浓度为1mg/ml的对照品溶液；照色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚∶醋酸乙酯17∶3为展开剂，展开，取出，晾干；喷以二硝基苯肼乙醇显色剂；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的桔红色斑点；(2)取成品内容物10g，研细，加乙醚50ml，加热回流1h，滤过，滤液挥干，残渣加环己烷1ml使溶解，作为供试品液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚∶丙酮∶醋酸乙酯为84∶15∶1为展开剂，饱和15分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。实施例5。实施例1所制备的精制桂枝茯苓胶囊的成份含量测定方法如下，(1)白芍、牡丹皮色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；以乙腈-水-磷酸-三乙胺14∶86∶0.08∶0.08为流动相；检测波长为230nm；理论板数按芍药苷峰计算，应不低于5000；对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细，取约0.1g，精密称定，置50ml容量瓶中，精密加入50％乙醇40ml，超声处理30分钟，取出，放冷，用50％乙醇补足至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；(2)桃仁色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；以流动相甲醇-水溶液20∶80为流动相；检测波长为218nm；理论板数按苦杏仁苷峰计算，应不低于5000；对照品溶液的制备取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细；取0.2g的成品粉末，精密加入25毫升乙醇，称重，回流1.5小时，取出，放冷，称重，加入乙醇补足重量，精密取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作供试溶液，测定苦杏仁苷的含量；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；(3)牡丹皮色谱条件与系统适应性试验安捷伦GC6890，用hp-5涂布毛细管柱，进样口温度，200℃，柱温150℃，检测器温度，240℃，理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于30000；对照品溶液的制备取丹皮酚对照品适量，精密称定，加入正十五烷内标，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的丹皮酚，0.1mg的正十五烷溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细；取约0.2g的成品粉末，精密称定，置25ml量瓶中，加入乙醇20ml，超声处理30分钟，取出，放冷，用乙醇补足至刻度，滤过，精密取9ml的续滤液，加入1ml的c＝1mg/ml的正十五烷内标液，配成10ml的溶液，作供试品，测定丹皮酚的含量；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
按本实施例方法测得所制备的成品胶囊剂每粒含白芍、牡丹皮以芍药苷C23H28O11计为10.0mg；每粒含桃仁以苦杏仁苷C20H27NO11计为4.5mg，每粒含牡丹皮以丹皮酚计为6.0mg。
实施例6。下面是发明人用实施例1所制备的精制桂枝茯苓胶囊所作的药理实验。
用体外注射雌二醇和黄体酮造成大鼠子宫肌瘤的模型，在给予精制桂枝茯苓胶囊后实验表明，精制桂枝茯苓胶囊对大鼠子宫肌瘤具有明显的治疗作用，能明显降低子宫系数，降低宫体和宫颈直径，与原桂枝茯苓胶囊比较有显著性差异，有降低雌二醇和黄体酮含量的趋势。病理组织学观察结果表明，模型组表现为子宫壁肌层增厚，平滑肌细胞呈环行或局灶性，排列紊乱，并向系膜区延伸，增生的平滑肌细胞体积变大，胞核大，核仁大而明显。此外宫内膜上皮也较正常上皮增生，呈高柱状，并出现鳞状细胞化生，宫内膜腺体数目减少，有部分子宫肌瘤病变严重，宫壁组织坏死，局部有大量炎细胞浸润(化脓性改变)，精制桂枝茯苓胶囊有减小子宫平滑肌增生程度，大剂量组未见化脓性改变，提示大剂量组除对子宫肌瘤有治疗作用外，还有一定程度的抗炎作用。应用激光多普勒血流计实验表明，精制桂枝茯苓胶囊对正常子宫内膜血流量有明显影响，大、中剂量组能明显增加子宫内膜血流量，小剂量组也有较好的效果。精制桂枝茯苓胶囊对正常子宫张力无明显影响，对正常子宫幅度有很好的降低作用，对正常子宫频率也无明显的影响；精制桂枝茯苓胶囊对催产素作用下的子宫张力有明显的松弛作用，对催产素作用下的子宫幅度及频率有明显的降低作用。精制桂枝茯苓胶囊能明显改善小鼠耳廓微循环，对小鼠耳廓微动脉及微静脉具有显著扩张作用，对血液流速无明显影响。精制桂枝茯苓胶囊对全血粘度有很好的降低作用，对血浆粘度、血沉、压积的影响不大。精制桂枝茯苓胶囊对大鼠棉球肉芽肿有抑制作用，能降低肉芽肿的重量。与模型组相比，大剂量组和中剂量组差异具有显著性。三个剂量组与二甲苯所致模型组相比可以抑制耳廓肿胀的程度但无显著差异。与巴豆油所致模型组相比可以抑制耳廓肿胀的程度，有显著差异。对化学性疼痛模型具有一定的镇痛作用，能减少冰醋酸所致小鼠扭体反应的次数，较原剂型组相比，具有显著性差异。精制桂枝茯苓胶囊有明显的镇痛作用，能提高痛阈值，其作用效果随剂量的增加而增加，与模型组相比，大剂量组和中剂量组差异具有显著性。综合以上结果，抗炎镇痛、改善血液流变学、减低子宫张力，舒张子宫平滑肌，增加子宫内膜血流量，改善微循环是桂枝茯苓胶囊治疗子宫肌瘤的药理学基础。
急性毒性试验结果显示精制桂枝茯苓胶囊一次性灌服最大体积(0.4ml/10g)、最大浓度(6g生药/ml)，小鼠未见死亡，无法测出LD50。24小时内以最大体积(0.3ml/10g)、最大浓度(6g生药/ml)灌服给药两次，结果小鼠未见死亡，则小鼠一日内对精制桂枝茯苓胶囊的最大给药量为360g生药/kg，相当于临床剂量的2337倍。
药物长期毒性是评价药物的一项重要指标，本实验主要观察大鼠连续重复给予精制桂枝茯苓胶囊后所产生的毒性反应、首先出现的症状及严重程度，并观察精制桂枝茯苓胶囊毒副反应的靶器官和其恢复及发展情况，确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供参考。
本实验设对照组、精制桂枝茯苓胶囊低、中、高剂量组，剂量分别为1.54g/kg、6.17g/kg、10.80g/kg(生药量表示)，其中高、中、低剂量组分别为临床用药剂量的70、40及10倍，对照组给予等容量的蒸馏水，试验周期为六个月，给药途径为灌胃。结果在给药三个月、六个月及停药两周后，各组大鼠行为活动、毛发均正常，各组大鼠体重也均稳定增长，进食量也无明显差异。血液学指标给药三个月后，仅见小剂量组WBC、LY升高，高、中剂量未见指标明显变化；给药六个月及恢复期均未见血液学指标有明显变化。血液生化指标给药三个月后，高剂量组ALP\TG降低、BUN\ALB\TBIL升高，中剂量组AST升高，低剂量ALP降低、TBIL升高；给药六个月高剂量组ALP\TG降低，TBIL升高；恢复期各给药组变化指标均恢复正常。各期给药组脏器指数与对照组比较均无明显差异。病理学检查了心，肝，肺，脾，肾，肾上腺，甲状腺，胸腺，脑，胃，十二指肠，睾丸，附睾，前列腺，子宫，卵巢，膀胱等主要脏器及腺体，结果未显示精制桂枝茯苓胶囊所致的各种实质细胞变性坏死，间质血管扩张、充血，炎细胞浸润等病理变化。
权利要求
1.一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，它以中草药桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁为原料，其特征在于，其步骤如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超临界流体萃取挥发油，得肉桂油备用；药渣合并桃仁用10～12倍量水提取2次，桃仁沸下，每次1.5～2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1.5～2g药材，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为70％～80％，醇沉12～48小时，滤过，取上清液回收乙醇，浓缩，70℃～80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分别加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩，70℃～80℃真空干燥，得浸膏II；茯苓药渣，加入7～9倍、5～7倍量的水提取2次，每次1.5～2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于0.8～1.2g药材，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为75％～85％，醇沉12～48小时，滤过，取滤渣70℃～80℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸馏得丹皮酚备用；药渣合并白芍分别加入7～9倍、5～7倍量的70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每毫升药液相当于0.8～1.2g药材，离心，取上清液上D-101大孔吸附树脂柱，以4～6倍柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以18～22倍柱体积20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，60℃～70℃减压干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入8～12倍量的β-环糊精的65～75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5～2小时，冷藏24～48小时，抽滤，40～50℃干燥，得肉桂油β-环糊精包合物；(5)取丹皮酚结晶，加入5～7倍量乙醇使溶解，然后加入8～12倍量的β-环糊精的65～75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5～2小时，冷藏24～48小时，抽滤，40～50℃干燥，得丹皮酚β-环糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-环糊精包合物和丹皮酚β-环糊精包合物，加入常规药用辅料，制成药剂学上所述的任何一种剂型的药物。
2.根据权利要求1所述的一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特征在于，其步骤如下，(1)取桂枝粉碎成最粗粉，用CO2超临界流体萃取挥发油，得肉桂没备用；药渣合并桃仁用12倍量水提取两次，桃仁沸下，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于2g药材，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为70％，醇沉24小时，滤过，取上清液回收乙醇，浓缩，80℃真空干燥，得浸膏I；(2)取茯苓分别加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取两次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩，75℃真空干燥，得浸膏II；茯苓药渣，加入8倍、6倍量的水提取两次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩至每毫升药液相当于1g药材，冷却至室温后加入95％乙醇使乙醇浓度为80％，醇沉24小时，滤过，取滤渣75℃真空干燥，得浸膏III；(3)取牡丹皮粉碎成粗粉，水蒸汽蒸馏得丹皮酚备用；药渣合并白芍分别加入8倍、6倍量的80％乙醇回流提取两次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每毫升药液相当于1g药材，离心，取上清液上D-101大孔吸附树脂柱，以5倍柱体积水洗脱，弃去水洗液，再以20倍柱体积20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，70℃减压干燥，得干浸膏IV；(4)取肉桂油，加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合2小时，冷藏24小时，抽滤，50℃干燥，得肉桂油β-环糊精包合物；(5)取丹皮酚结晶，加入6倍量乙醇使溶解，然后加入10倍量的β-环糊精的75℃饱和水溶液中，固定转速为900r/min，包合1.5小时，冷藏24小时，抽滤，50℃干燥，得丹皮酚β-环糊精包合物；(6)合并上述浸膏I、II、III、IV，肉桂油β-环糊精包合物和丹皮酚β-环糊精包合物，加入适量糊精或淀粉，用95％乙醇制粒，50℃烘干，整粒，装胶囊，压铝塑板，包装，得成品桂枝茯苓胶囊剂；或者整粒后压片得片剂；或者直接制成颗粒剂。
3.根据权利要求2所述的一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特征在于，所制备的成品胶囊剂每粒含白芍、牡丹皮以芍药苷C23H28O11计，不少于10.0mg；每粒含桃仁以苦杏仁苷C20H27NO11计，不少于4.5mg，每粒含牡丹皮以丹皮酚计，不少于6.0mg。
4.根据权利要求1或2所述的一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特征在于，其中，中草药原料的重量配比为，桂枝 700-750茯苓 700-750牡丹皮 700-750白芍 700-750桃仁 700-750。
5.根据权利要求1或2所述的一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特征在于，其中，中草药原料的重量配比为，桂枝 720茯苓 720牡丹皮 720白芍 720桃仁 720。
6.根据权利要求1或2所述的一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特征在于，所制备的成品鉴别方法如下，(1)取成品内容物1g，研细，乙醇10ml超声30分钟，取续滤液作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品适量，加乙醇10ml配成浓度为1mg/ml的对照品溶液；照色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚∶醋酸乙酯17∶3为展开剂，展开，取出，晾干；喷以二硝基苯肼乙醇显色剂；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的桔红色斑点；(2)取成品内容物10g，研细，加乙醚50ml，加热回流1h，滤过，滤液挥干，残渣加环己烷1ml使溶解，作为供试品液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚∶丙酮∶醋酸乙酯为84∶15∶1为展开剂，饱和15分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
7.根据权利要求1或2所述的一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，其特征在于，所制备的成品中成份含量测定方法如下，(1)白芍、牡丹皮色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；以乙腈-水-磷酸-三乙胺14∶86∶0.08∶0.08为流动相；检测波长为230nm；理论板数按芍药苷峰计算，应不低于5000；对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细，取约0.1g，精密称定，置50ml容量瓶中，精密加入50％乙醇40ml，超声处理30分钟，取出，放冷，用50％乙醇补足至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；(2)桃仁色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；以流动相甲醇-水溶液20∶80为流动相；检测波长为218nm；理论板数按苦杏仁苷峰计算，应不低于5000；对照品溶液的制备取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细；取0.2g的成品粉末，精密加入25毫升乙醇，称重，回流1.5小时，取出，放冷，称重，加入乙醇补足重量，精密取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作供试溶液，测定苦杏仁苷的含量；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；(3)牡丹皮色谱条件与系统适应性试验安捷伦GC6890，用hp-5涂布毛细管柱，进样口温度，200℃，柱温150℃，检测器温度，240℃，理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于30000；对照品溶液的制备取丹皮酚对照品适量，精密称定，加入正十五烷内标，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的丹皮酚，0.1mg的正十五烷溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物适量，研细；取约0.2g的成品粉末，精密称定，置25ml量瓶中，加入乙醇20ml，超声处理30分钟，取出，放冷，用乙醇补足至刻度，滤过，精密取9ml的续滤液，加入1ml的c＝1mg/ml的正十五烷内标液，配成10ml的溶液，作供试品，测定丹皮酚的含量；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
全文摘要
一种治疗妇科血瘀症疾病的药物的制备方法，它以中草药桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍和桃仁为原料，其特征在于，其步骤是分别制取桂枝桃仁浸膏、茯苓浸膏、牡丹皮白芍浸膏、肉桂油β－环糊精包合物、丹皮酚β－环糊精包合物，加入常规药用辅料制成。用本发明方法制备的药物除具有原桂枝茯苓胶囊的作用外，还大大地提高了其治疗效果，且药物中的有效成分含量高，药物质量标准可控；药物的日服用量大大减少，是现有技术的三分之一。
文档编号A61K9/16GK1583102SQ20041004121
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月6日 优先权日2004年6月6日
发明者肖伟, 戴翔翎, 廖正根, 邹红, 仲艳, 柳于介, 张孝法 申请人:江苏康缘药业股份有限公司