专利名称：山楂叶总黄酮针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种以山楂叶总黄酮为主要成分，对冠心病、心绞痛以及脑中风具有显著疗效的针剂及其制备方法。
背景技术：
山楂叶中含有丰富的黄酮类化合物，主要成分有牡荆素鼠李糖甙、牡荆素葡萄糖甙、金丝桃甙等，具有广泛的药理活性，主要为舒张血管，增加冠脉流量，抗心肌缺氧、抗脑缺血以及保护脑组织解除局部淤血状态。临床上主要用于气结血淤、胸闷憋气、冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不足等症。
目前上市的以山楂叶总黄酮为功效成分治疗冠心病、心绞痛的药物制剂有益心酮片、心安胶囊、复心片等，口服制剂疗效发挥比较慢，而冠心病、心绞痛属于临床急症，发病快，需要急救药物，针剂是最好的剂型。由于山楂叶总黄酮制成水针剂在工艺上有一定的难度，所以一直没有相关的产品问世。我们经过研究解决了一系列的难题，最终研制成功。药效实验证明山楂叶总黄酮针剂具有活血化瘀，理气舒络，宣通心脉的功能，能增加冠脉流量、扩张冠脉血管，对治疗冠心病、心绞痛有显著的疗效。实验结果表明针剂中PH范围在6.0-7.5为最佳PH值范围，与PH7.5以上相比较，不但制剂颜色较浅，活性成分更稳定。
经过检索，本发明的提取工艺与申请号为03120841X一种由山楂叶提取物为主要功效成分制成的制剂工艺有相似之处，本发明的工艺对该工艺进行了改进，直接采用了一定规格的聚酰胺层析分离，摸索出了最佳的工艺条件，省去了大孔树脂，提高了收率，生产成本大大降低。药效实验证明，制备的总黄酮药效确切，符合注射剂的质量要求。
发明内容
本发明涉及一种具有对冠心病、心绞痛有显著疗效的山楂叶总黄酮针剂及其制备方法。其特征在于用于制备针剂的山楂叶总黄酮含量为80-99.9％，其中牡荆素鼠李糖甙含量为10-50％，牡荆素葡萄糖甙含量为3-30％。其中针剂包括水针剂、输液剂、粉针剂及冻干粉针剂。
制备山楂叶总黄酮水针剂，将山楂叶总黄酮，溶于适量注射用水中，加入计量的注射用水溶性辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH至6.0-7.5，经微孔滤膜超滤后，补充注射用水至规定量，灌装于安瓿瓶中或输液瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得。每安瓿山楂叶总黄酮含量为3.0-50.0mg/ml；规格为2ml、5ml。输液剂中山楂叶总黄酮含量为0.5-10.0mg/ml，规格为50ml、100ml、150ml和200ml。
制备山楂叶总黄酮粉针剂，将山楂叶总黄酮溶于适量注射用水中，加入计量的药用辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜超滤后，真空或喷雾干燥，无菌分装于西林瓶中，每瓶含山楂叶总黄酮10-200mg，轧盖，经检验合格后，包装即得。
制备山楂叶总黄酮冻干粉针剂，将山楂叶总黄酮溶于适量注射用水中，加入计量的药用辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热源，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜超滤后，分装于安瓿中，每安瓿含山楂叶总黄酮10-200mg，经冷冻干燥后熔封，检验合格后，包装即得。
用于制备山楂叶总黄酮的水针剂和粉针剂，其中的药用辅料是指抗氧化剂，包括亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、维生素C中的一种或两种。
用于制备山楂叶总黄酮的冻干粉针剂，其中的药用辅料是指冻干粉支持剂，包括以下辅料中的一种或两种乳糖、甘露醇、肌醇、葡聚糖、甘氨酸。
本发明的山楂叶总黄酮提取物的制备方法如下取山楂叶，加10-16倍量的稀乙醇温浸提取三次，每次1-5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，浓缩至无醇味，加水适量，冷藏24-48小时，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并，用水饱和的正丁醇等倍量萃取三次，合并回收正丁醇至干，用适量水溶解后上聚酰胺树脂柱，用蒸馏水洗脱至有盐酸-镁粉反应时开始接收，并同时改用稀乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，至盐酸-镁粉反应阴性，回收乙醇至干，即得本发明的山楂叶总黄酮。
本发明中总黄酮含量的测定方法1、对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的牡荆素鼠李糖甙对照品200mg，置100ml量瓶中，加甲醇70ml，至水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含牡荆素鼠李糖甙0.2mg)。
2、标准曲线的制备精密量取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法在280nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3、测定法山楂叶总黄酮粉末约1g，于60℃干燥6小时，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚120ml，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移置100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中牡荆素鼠李糖甙的重量(μg)，计算，即得。
实施例1制备山楂叶总黄酮水针剂和输液剂。
将用本发明的制备方法制得的山楂叶总黄酮2kg，溶于100L注射用水中，配成20mg/ml，调节PH至7.0。经微孔滤膜超滤后，补充注射用水至规定量，灌装于安瓿瓶中或输液瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得。
按说明书中提供的方法测定，结果得针剂每安瓿中山楂叶总黄酮的浓度为9.7-10.2mg/ml；规格为2ml、5ml。输液剂中山楂叶总黄酮的浓度为1.0-1.2mg/ml，规格为50ml、100ml、150ml和200ml。
实施例2制备山楂叶总黄酮粉针剂。
将用本发明的制备方法制得的山楂叶总黄酮2kg溶于适量100L注射用水中，加入计量的药用辅料，调节PH为7.0，经微孔滤膜超滤后，真空或喷雾干燥得山楂叶总黄酮无菌粉，无菌分装于西林瓶中，制成每瓶含山楂叶总黄酮无菌粉50mg、100mg两个规格，轧盖，经检验合格后，包装即得。
实施例3制备山楂叶总黄酮冻干粉针剂。
将用本发明的制备方法制得的山楂叶总黄酮2kg，溶于100L注射用水中，配成20mg/ml的溶液，调节PH至7.0。经微孔滤膜超滤后，分装于5ml、10ml安瓿中，经冷冻干燥后熔封，检验合格后，包装即得。分别得每安瓿含山楂叶总黄酮50mg、100mg。
实施例4本发明的山楂叶总黄酮的制备方法如下取山楂叶1kg，加40％稀乙醇50℃温浸提取三次，每次3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，浓缩至无醇味，加水至2kg，冷藏48小时，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并，用水饱和的正丁醇等倍量萃取三次，合并回收正丁醇至干，用2000ml水溶解后上聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱，至有盐酸-镁粉反应时开始接收，并同时改用40％稀乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，至盐酸-镁粉反应阴性，回收乙醇至干，即得本发明的提取物210g，检测结果表明山楂叶总黄酮含量为85％，总黄酮中的主要成分牡荆素鼠李糖甙的含量为25％，牡荆素葡萄糖甙的含量为10％。
本发明山楂叶总黄酮针剂的有关药效学实验由于本发明中所述的针剂都是由同种质量标准的山楂叶总黄酮制成，因此可以用山楂叶总黄酮原料进行药效实验。
实验一、山楂叶总黄酮对犬冠脉血流量的影响实验材料1.实验动物健康成年犬36只，雌雄兼用，体重17.50±1.77kg。
2.实验药物山楂叶总黄酮50mg/支，0.9％氯化钠注射液。
实验共分4组(1)空白对照组，生理盐水1ml/kg；(2)山楂叶总黄酮5mg/kg剂量组；(3)山楂叶总黄酮10mg/kg剂量组；(4)山楂叶总黄酮20mg/kg剂量组。各给药组60min前n＝12，90min后n＝6。
实验药物用生理盐水配制成同体积(50ml)，电脑微量注射泵以5ml/min的速度经股静脉给入试药。
实验方法实验动物用戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉，气管插管，连接电动人工呼吸机。施左侧第四肋间开胸术，暴露心脏，剪开心包，做心包床，分离冠状动脉左旋支及主动脉根部，放置电磁流量计探头，测量冠脉血流量。手术完毕，待所观察指标稳定后，记录药前值，给入所试药物。并于药后即刻、药后10、30、60、90min进行记录并测定各给药组对犬冠脉血流量(ml/100g·min-1)的影响。将各项观测指标及推导参数进行统计学处理，以不同观察时间的实测值进行给药前后自身比较，其变化百分率进行组间比较，以t检验判断其显著性。
表1各给药组对犬冠脉血流量(ml/100g·min-1)的影响(X±SD)
实验结果显示，山楂叶总黄酮可明显增加冠脉流量，扩张冠脉血管，降低冠脉阻力，改善心肌的供血供氧，并能降低总外周阻力，对心血管系统起到调整和改善作用。
实验二、山楂叶总黄酮对缺血再灌注所致心肌梗塞的影响实验材料1.实验动物Wistar种大鼠32只，雄性，体重250～270g。
2.实验药物山楂叶总黄酮50mg/支，0.9％氯化钠注射液。
实验方法动物随机分为4组模型组(生理盐水)，山楂叶总黄酮20、10、5mg/kg组。药物以生理盐水稀释至所需浓度，给药体积均为3ml/kg，给药途径为静脉。
动物以戊巴比妥钠腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，心电图机以标准II导联监测动物心电图；切开气管，插入气管插管，接呼吸机进行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1∶3)；开胸，断3-5肋，打开心包膜，暴露心脏，于冠状动脉左前降支根部穿线(0号缝合线)，备结扎用；分离左股静脉，备给药用；穿线后稳定10min，将一塑料凹管与血管并列，结扎(无ST段及T波改变者淘汰)，给入受试药物；40min后，沿凹槽剪断结扎线，使前降肢实现再灌注；缝合胸壁，恢复自主呼吸。
再灌注损伤2小时后，腹主动脉取血，心脏结扎线以下横切5片，N-BT染色，采板和不锈钢丝筛网固定，即得(如图)。
挡板 为一平整光滑的透明塑料块，相对密度1.18～1.20，直径20.7±0.15mm，厚9.5±0.15mm；挡板共有5个孔，孔径2mm，中央1个孔，其余4个孔距中心6mm，各孔间距相等；挡板侧边有4个等距离的V形槽，V形槽上端宽9.5mm，深2.55mm，底部开口处的宽与深度均为1.6mm。
检查法 将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架上，浸入1000ml烧杯中，并调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25mm，烧杯内盛有温度为37±1℃的水，调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下25mm处。取供试品6粒，按上述方法检查，应在30分钟内全部崩解，包衣滴丸应在1小时内全部崩解。
三.崩解时限实验数据用上述方法制备的三种丸剂，按上述方法进行崩解时限的实验结果如下
实验表明，用相同的提取药材中有效成分的方法将六味药材中的挥发油、脂溶性成分及水溶性成分全部提出，按上述的方法制成滴心丸、滴丸以及浓缩丸，按《中华人民共和国药典》规定的方法及上述描述的方法，分别进行崩解时限的检测，滴心丸在20分钟即可全部崩解，而滴丸在60分钟内即可崩解，而浓缩丸要在120分钟才可崩解。说明滴心丸崩解快，易吸收，起效快，作用强。
附图1是本发明滴心丸的横截面示意图。其中1-药核、2-包裹层、3-包衣层。
具体实施例本发明的实施例1制备复合维生素滴心丸统计学处理方法 全部实验数据的统计学处理均采用t检验法进行显著性检验，结果以均数减标准差(x±S)表示。
实验结果山楂叶总黄酮对全脑缺血小鼠的生存时间明显延长、SOD升高、MDA含量明显降低，证明用本发明工艺制备的山楂叶总黄酮具有延长脑中风患者的生存时间并具有保护脑组织的作用。
表3山楂叶总黄酮对全脑缺血小鼠的生存时间、SOD、MDA含量的影响(x±S，n＝10)组别 生存时间 SOD MDA空白组 335.46±61.6395.96±32.50假手术组 338.21±25.0287.02±19.06模型组112.30±32.74235.89 111.39△114.56±37.72△银杏叶组 120.21±42.30△315.57±52.8993.68±25.92大剂量组 150.65±38.37△356.95±93.06△61.21 ±22.62△中剂量组 130.65±30.97△337.06±57.23△70.91±16.30△小剂量组 119.21±25.80296.39±110.28 96.32±40.35与空白组比较△P＜0.05本发明针剂的最佳PH值范围筛选实验结果用加速稳定性实验方法考察比较两者的稳定性，条件温度40℃，相对湿度75％，时间三个月，每隔一个月抽样检测一次，最佳PH值范围为6.0-7.5，注射液颜色太深，不利于橙明度的检查。结果见下表
备注本发明中牡荆素鼠李糖甙与牡荆素葡萄糖甙的化学名称牡荆素鼠李糖甙为5，7，4`-三羟基黄酮-8-C-β-D-葡萄糖基(1→2)-β-D-鼠李糖甙牡荆素葡萄糖甙为5，7，4`-三羟基黄酮-8-C-β-D-葡萄糖基(1→4)-β-D-葡萄糖甙
权利要求
1.一种对冠心病、心绞痛具有显著疗效的山楂叶总黄酮针剂及其制备方法，其特征在于用于制备针剂的山楂叶总黄酮含量为80-99.9％，总黄酮中的主要成分牡荆素鼠李糖甙的含量为10-50％，牡荆素葡萄糖甙的含量为3-30％。
2.根据权利要求1所述的针剂，包括水针剂、粉针剂、输液剂。
3.根据权利要求1所述的针剂，是由山楂叶总黄酮作为活性成分和药用辅料组成。
4.根据权利要求2所述的水针剂，是由山楂叶总黄酮和注射用水及药用辅料组成，其特征在于将山楂叶总黄酮，溶于适量注射用水中，加入计量的注射用水溶性辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热原，调节PH至6.0-7.5，经微孔滤膜超滤后，补充注射用水至规定量，灌装于安瓿瓶中或输液瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得；针剂中山楂叶总黄酮的含量为3.0-50.0mg/ml；规格为2ml、5ml；输液剂含山楂叶总黄酮0.5-10.0mg/ml，规格为50ml、100ml、150ml和200ml。
5.根据权利要求2所述的粉针剂，是由山楂叶总黄酮与注射用水溶性药用辅料组成，其特征在于将山楂叶总黄酮溶于适量注射用水中，加入计量的药用辅料，加0.1-0.5％的活性炭除去热原，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜超滤后，真空或喷雾干燥，无菌分装于西林瓶中，每瓶含山楂叶总黄酮10-200mg，轧盖，经检验合格后，包装即得。
6.根据权利要求2所述的粉针剂，是由山楂叶总黄酮和注射用水溶性药用辅料组成，其特征在于将山楂叶总黄酮溶于适量注射用水中，加入计量的药用辅料，调节PH为6.0-7.5，经微孔滤膜超滤后，分装于安瓿中，每安瓿中山楂叶总黄酮含量为10-200mg，经冷冻干燥后熔封，检验合格后，包装即得。
7.据权利要求4或5所述的山楂叶总黄酮针剂，其中的药用辅料是指抗氧化剂，包括亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、维生素C中的一种或两种。
8.根据权利要求6所述的山楂叶总黄酮针剂，其中的药用辅料是指冻干粉支持剂，包括以下辅料中的一种或两种乳糖、甘露醇、肌醇、葡聚糖、甘氨酸。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种以山楂叶总黄酮为主要成分，对冠心病、心绞痛以及脑中风有显著疗效的针剂及其制备方法。用本发明的提取方法制备的山楂叶总黄酮含量为80－99.9％，其中牡荆素鼠李糖甙的含量为10－50％，牡荆素葡萄糖甙的含量为3－30％。
文档编号A61K9/14GK1634110SQ20041008671
公开日2005年7月6日 申请日期2004年10月29日 优先权日2004年4月1日
发明者梁玉英 申请人:梁玉英