专利名称：水加分离剂提取甜荞麦花叶总黄酮的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及中草药有效成分总黄酮提取技术领域，特别是一种水加分离剂提取甜荞麦花叶总黄酮的工艺。
背景技术：
荞麦(俗称甜荞F.esculentum Moench)为蓼科植物，全富含黄酮类化合物，特别是花、叶中含量更高。以往对荞麦种子研究较多，而对荞麦花叶研究鲜有报道。文献报道荞麦花叶黄酮类的提取方法有水提取法、水提醇沉法和醇提取法，其各自工艺步骤如下(1)水提取工艺a、一定量荞麦花叶粉碎；b、加一定量去离子水煮沸三次，每次0.5-1hc；c、合并三次滤液，浓缩干燥得样品。
(2)水提取乙醇沉淀工艺将上述水提取法所得样品，用乙醇溶解；过滤；回收乙醇；蒸发干燥，得黄色样品。
(3)乙醇提取工艺a、荞麦花叶粉碎；b、60-90％乙醇回流提取三次，每次0.5-1h；c、合并滤液；d、回收乙醇；e、加石油醚祛除叶绿素；f、滤液蒸干得样品。
上述水提取法简单，但黄酮类成分纯度和含量很低，常常含有蛋白质、淀粉和糖等杂质，其总簧酮含量和纯度分别是3-4％和50-60％；醇提取法纯度和含量较高，其总簧酮含量和纯度分别是6-7％和89-96％，但醇提取法须用石油醚祛除叶绿素，工艺繁琐，费时，成本高，且不安全；水提醇沉法类似醇提法。
发明内容
本发明的目的旨在以黄酮类化合物的常规提取方法中水、醇提取法为基础，并在此基础上加以改进，优选荞麦花叶总黄酮提取溶媒、提取时间、提取次数等工艺条件，而提出一种工艺流程简单、省时、成本低、提取率和纯度高、适合工业化生产、易推广应用的水加分离剂提取甜荞麦花叶总黄酮的工艺。
实现上述发明目的的技术方案所涉及的工艺步骤是a、荞麦花叶粉碎；b、加8倍量去离子水，加热回流提取30min；c、过滤，滤渣再加6倍量去离子水，加热回流提取二次，每次20min；e、合并三次滤液，浓缩至原液量的1/4-1/5，趁热加分离剂，调PH5-6；f、过滤除去杂质和非特异性沉淀，滤液静置36-48h；g、离心得黄色沉淀物样品，70℃烤干，即为荞麦花叶总黄酮粗提物。
本工艺方法与传统工艺方法比较有如下优点①省时提取三次总时间为70min，而传统的提取方法总时间为90-180min。
②简单与水提取法相近，不需回收乙醇，不需石油醚除叶绿素。
③成本低提取溶媒只有水，不用乙醇、石油醚等有机溶剂，而且所用溶媒量小，是原料的8倍、6倍、6倍，传统的提取方法溶媒用量是原料的10-14倍。同时因提取时间短，节省了能量、人力和物力，此方法成本约为醇提取法成本的1/10。
④安全不用乙醇、石油醚等有机溶剂，而只用水，不易燃，对人体无害，因此是最安全的。
⑤提取率和纯度高本工艺方法总黄酮提取率为6.3％，纯度为93％，乙醇提取法总黄酮提取率和纯度是6-7％和89-96％，二者相近。
本发明所述水加分离剂提取甜荞麦花叶总黄酮的工艺，其技术依据说明如下(1)提取工艺条件的优选选择溶媒、提取时间、提取次数为关键因素，采用正交实验进行优选，其因素水平选择见表1。结果水加分离剂提取与70％乙醇提取率相近，见表2和表3。综合试验过程和经济考虑，认为水加分离剂的提取接近醇提取率，而且成本低，提取工艺简单、安全，不需要特殊仪器和设备，总黄酮提取率和纯度高。
表1 荞麦花叶总黄酮提取方法的因素水平
表2 正交试验设计及结果
表3 不同溶剂提取率
(2)质量控制标准采用紫外分光光度法，用标准品芦丁为对照，以黄酮含量作为测定指标，测定荞麦花叶不同提取方法总黄酮含量，建立质量分析标准.
(3)提取时间与提取率的关系实验时选择第1次提取时间为50min，40min，30min，20min，而第2次和第3次均采用20min。根据原料总黄酮含量及每次提取液中总黄酮含量，算出提取率。测得第1次提取液中其总黄酮含量分别是46.13％、45.95％、45.96％和34.37％。综合考虑，蛋白质、糖类、叶绿素等物质溶出要少及节省时间，且黄酮类含量相对较高，故选择第1次提取时间为30min，第2次和第3次提取时间均为20min。
(4)提取次数与提取率的关系每次用10倍原料的水提取，提取液过滤后测总黄酮含量。根据原料总黄酮含量及每次提取液中总黄酮含量，算出提取率。见表4，由表达方4可见，当提取次数达到三次时，提取率可达88.55％，再增加次数，提取率增加不大，故提取次数以3次为佳。
表4 提取次数与总黄酮提取率的关系
(5)料液比与提取率的关系一般来说，液固比越大，总黄酮提取率越高，但所得提取液中的总黄酮浓度小，增加蒸发的负荷和成本消耗。为达到最佳提取效果，对不妥的液料比进行筛选。在相同的提取条件下，重复提取3次，合并提取液，测定提取液中总黄酮的含量，计算出各自的提取率，结果见表5。当提取液用量达8倍时，提取率达86％，再增加提取液用量，提取率增加不大，所以提取液用量是8倍原料为佳，如再增加提取液用量，提取率增加不大，且增加了工作量和成本。
表5 提取液用量与提取率的关系(％)
根据实验结果，综合其他因素，提取液用量选择第1次提取的液固比为8∶1，第2次为6∶1，第3次为6∶1，提取效果较好。
(6)总黄酮的含量、提纯和鉴定上述经水加分离剂提取的总黄酮粗提物提取率占原料的6.3％，经测得总黄酮含量达93％(纯度)。
具体实施例方式取粉碎的荞麦花叶原料5kg，加入40升去离子水，于不锈钢锅中煮沸30min，过滤，滤渣用6倍量去离子水再提取2次，每次20min。合并滤液，浓缩至原液量的1/4-1/5，加分离剂，调PH5-6，过滤，滤液静置40h。离心得黄色沉淀物，70℃烤干即为荞麦花叶总黄酮粗提物，三次提取量分别为314.6g、322.9g和318.3g，平均为318.6g，提取率为6.37％，纯度为92.5％。
依照本发明工艺方法所提取的甜荞麦花叶总黄酮，经多种疾病动物模型的药理研究，证实其具有降血糖、调血脂、抗氧化、改善血黏度及抗心肌肥厚的作用，与对照组比较P＜0.01。
权利要求
1.一种水加分离剂提取甜荞麦花叶总黄酮的工艺，该工艺步骤是a、荞麦花叶粉碎；b、加8倍量去离子水，加热回流提取30min；c、过滤，滤渣再加6倍量去离子水，加热回流提取二次，每次20min；e、合并三次滤液，浓缩至原液量的1/4-1/5，趁热加分离剂，调PH5-6；f、过滤除去杂质和非特异性沉淀，滤液静置36-48h；g、离心得黄色沉淀物样品，70℃烤干，即为荞麦花叶总黄酮粗提物。
全文摘要
本发明涉及中草药有效成分总黄酮提取技术，特别是一种水加分离剂提取甜荞麦花叶总黄酮的工艺。该工艺步骤是荞麦花叶粉碎；加8倍量去离子水，加热回流提取30min；过滤，滤渣再加6倍量去离子水，加热回流提取二次，每次20min；合并三次滤液，浓缩至原液量的1/4－1/5，趁热加分离剂，调pH5－6；过滤除去杂质和非特异性沉淀，滤液静置36－48h；离心得黄色沉淀物样品，70℃烤干，即为荞麦花叶总黄酮粗提物。该工艺流程简单，省时，成本低，提取率和纯度高，适合工业化生产。
文档编号C07D311/00GK1690055SQ200410019078
公开日2005年11月2日 申请日期2004年4月22日 优先权日2004年4月22日
发明者韩淑英 申请人:韩淑英