一种从荞麦叶提取荞麦叶精华的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从荞麦叶中提取荞麦叶精华的方法。该方法是用65-85%的食用乙醇作溶剂、微波萃取2分钟（条件控制在微波功率250W-300W，料液比为1:40-60），趁热抽滤得到滤液，经旋转蒸发仪浓缩到原滤液体积的1/4，冷却，离心或过滤，固体经干燥，粉碎，即获得荞麦叶精华。此产品主要黄酮成份为芦丁，含量≥72%，并且具有良好的抗氧化性。本发明具有多种优点：所用溶剂安全无毒、价格低廉、可回收再利用、绿色环保无污染，原料成本低、变废为宝，工艺操作简单、提取效率高、提取时间极短、能耗低、适于工业化生产。
【专利说明】一种从荞麦叶提取荞麦叶精华的方法
【技术领域】[0001]本发明涉及从植物中提取黄酮的方法，具体涉及从荞麦叶中提取黄酮的方法。
【背景技术】
[0002]荞麦为寥科荞麦属、双子叶植物,荞麦籽粒、根、莖、叶及花含有丰富的黄酮类化合物，研究表明荞麦叶和花中的黄酮化合物含量高于荞麦的其它组织。荞麦叶中黄酮类物质的主要活性成分是芦丁和槲皮素，现代医学证明芦丁和槲皮素具有多方面的生理活性，可用于防治肝炎和关节炎、抗肿瘤、平喘、抗氧化活性以及降血脂和血糖(参见:Guardia et al.Ant1-1nflammatory properties of plant flavonoids.Effects of rutin，quercetin and hesperidin on adjuvant arthritis in rat[J].Farmac0.2001, 56(9):683-7;Lee CC et al.Rutin and quercetin,bioactive compounds from tartary buckwheat,prevent liver inflammatory injury[J].Food Funct.2013,4(5):794-802;Luo et al.1nhibition of Cell Growth and VEGF Expression in Ovarian Cancer Cells by Flavonoids[J].Nutrition and Cancer.2008，60(6):800-9;Chan Hun Jung et al.Ant1-asthmatic action of quercetin and rutin in conscious guinea-pigs challenged with aerosolized ovalbumin [J] ? Arch.Pharmacal Research.2007，30 (12): 1599-607.韩淑英，吕华，朱丽莎，等.荞麦种子总黄酮降血脂血糖及抗脂质过氧化作用的研究[J].中国药理通报，2001，17(6):694-696)o此外，槲皮素还具有防治动脉粥样硬化和降低胆固醇等生理功效(Juiwiak et al.Effect of quercetin on experimental hyperlipidemia and atherosclerosis in rabbits[J].Pharmacol Rep.2005, 57(5):604-9;Auger et al.Dietary wine phenolics catechin，quercetin, and resveratrol efficiently protect hypercholesterolemic hamsters against aortic fatty streak accumulation[J].J Agric Food Chem.2005，53(6):2015-21.)。
[0003]目前，国内外黄酮类保健产品及其医药产品主要是以银杏叶为原料提取出银杏叶精华，再通过深加工来制成的。在我国荞麦种植面积广泛，但对荞麦叶的开发利用却很少， 基本上被当作柴火烧掉了。所以，从荞麦叶中提取精华并加以开发、利用具有现实意义。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种成本低、绿色无污染、工艺简单、提取率高的从荞麦叶提取荞麦叶精华的方法。
[0005]本发明提供的一种从荞麦叶提取荞麦叶精华的方法，包括如下步骤:
[0006](I)将荞麦叶洗净烘干、磨碎、过60目筛，得到荞麦叶粉；
[0007](2)称取荞麦叶粉，加入料液比为1:40-60的65-85%食用乙醇，搅拌均匀，放入微波炉中，用250W-300W功率，微波加热l_3min，得混合提取液；
[0008](3)将混合提取液趁热抽滤得滤液，用2~3倍的65-85%食用乙醇清洗沉淀物继续抽滤得到滤液，合并滤液；[0009](4)浓缩滤液到原体积的1/4，大量沉淀析出，回收乙醇，可用于下次提取；
[0010](5)离心或过滤浓缩液，所得沉淀物在60□供干、粉碎，即制得荞麦叶精华，产品得率最高达12.9%，其总黄酮含量≥72%，其中含芦丁 94 38%、槲皮素1.88%和微量的其它类黄酮成分。
[0011]所述的食用乙醇浓度优选为65%，料液比优选为1:60 ;
[0012]所述的微波功率优选为280W，加热时间优选为2min。
[0013]与现有技术相比，本发明的优点和效果:
[0014]首先，本发明所用乙醇为食用乙醇且可回收再利用，安全性高、绿色无污染、成本低；本发明提取时间仅需2分钟，工艺简单、能耗低。目前常见的水浴浸提法则需要长达 3-5小时，超声波提取法需要60-80分钟，提取时间长；同时这两种技术整个过程均需高温 (55-85°C)水浴，耗能很大。而本发明使用的超声波提取技术，甚至无需特殊仪器，仅需一台微波炉即可实现。本发明产品得率最高达12.9%，黄酮纯度为72.18%，不仅提取率高，纯度也闻。
[0015]其次，与现有方法选用的荞麦组织(种子、籽壳等)不同，本发明选择荞麦中富含黄酮类化合物且被当作柴火的荞麦叶(甜荞叶黄酮含量是果实的30多倍，苦荞叶黄酮含量是果实的4倍左右)作为提取材料，不仅提高了荞麦的利用率，变废为宝；而且荞麦叶精华提取成本低、收率高。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1芦丁、异槲皮素和槲皮素的标品色谱图
[0017]图2本发明荞麦叶精华溶液色谱图
[0018]图3荞麦叶精华对DPPH自由基的清除能力
【具体实施方式】
[0019]实施例1
[0020]荞麦叶精华的制备:将田间收割的荞麦叶洗净烘干、磨碎、过60目筛，得到荞麦叶粉；称取荞麦叶粉20g，加入65%食用乙醇1200mL (1:60)，搅拌均匀，放入微波炉中，280W功率，微波2min ;取出后，趁热抽滤得滤液，用2~3倍的65%乙醇清洗沉淀一次并抽滤得到滤液，合并滤液；用旋转蒸发仪浓缩滤液到300mL，大量沉淀析出；离心浓缩液，沉淀物在600 烘干、粉碎，得到荞麦叶精华2.58g，产品得率12.9%。
[0021]荞麦叶精华总黄酮含量测定:以银杏叶片(国药准字Z20053913)为参照。
[0022]仪器:U_2010紫外差谱仪，pollyscience水浴锅。
[0023]标准曲线的制备:准确称取干燥恒重的芦丁标准品12.3mg，用70%乙醇溶解定容 lOOmL，摇匀得浓度为0.123mg/mL标准储备液，装入棕色瓶于冰箱内保存备用。准确吸取标准储备液0、0.5、1.0、1.5,2.0,2.5mL，分别置于IOmL比色管中，加入2mL0.lmol/L三氯化铝溶液，3mLlmol/L乙酸钾溶液，70%乙醇溶液定容至IOmL摇匀，室温下放置30min，以70%乙醇作为对照，在420nm处测其吸光值。绘制芦丁质量浓度x与吸光度y的标准曲线，计算并获回归方程 y=35.127x-0.0002 (R2=0.9998)。
[0024]测定:准确称取干燥恒重的荞麦叶精华粉末0.2g (精确至0.0OOlg),置于具塞三角瓶中加入70%乙醇溶液在700的水浴锅中提取4h，趁热抽滤，滤液置于25mL容量瓶中定容，再取ImL定容至50mL作为待测液。准确吸取1.0mL待测液，置于IOmL比色管中，按照做标准曲线的方法测其吸光值。代入回归方程计算，荞麦叶精华的总黄酮含量即产品纯度为72.18%。银杏叶片的总黄酮含量为9.85%，即每片(0.2g)药品含有19.7mg黄酮醇苷(银杏叶片包装盒注明:每片含总黄酮醇苷19.2mg)。
[0025]高效液相色谱测定荞麦叶精华中黄酮组份与含量:
[0026]仪器:美国Agilent公司1100系列高效液相色谱仪，包括在线真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，柱温箱，DAD 二极管阵列检测器和化学工作站。
[0027]色谱分析条件:Hypersil BDS C18色谱柱(4.6X 250mm, 5 ii m),柱温300，流动相 A (纯水)，C (乙腈)，D (2%的乙酸，v/v);检测中A和C的浓度变化为0~lmin, A:56%，C: 24% ；8 ~12min,A:20%,C:60% ；13 ~17min，C: 100%。流速 1.0mL/min，检测波长 360nm，参比波长450nm。
[0028]标品:芦丁:异槲皮素:槲皮素=0.1:0.05:0.1 (mg/mL),根据标品测定结果(见图
1)，芦丁、异槲皮素和槲皮素的出峰时间(保留时间)分别为3.404,4.120和10.741min。
[0029]ft取干燥恒重的荞麦叶精华粉末0.2g,精确至0.0OOlg,置于具塞三角瓶中加入 70%乙醇在70□水浴中提取4h，趁热抽滤，滤液置于25mL容量瓶中定容，再取ImL定容至 50mL作为待测液。准确吸取5 u L荞麦叶精华待测液，按照上述方法测定，获荞麦叶精华色谱图(见图2)，经计算得荞麦叶精华中含芦丁 54.38%、槲皮素1.88%和微量的其它类黄酮成分。
[0030]实施例2
[0031]荞麦叶精华的制备:将田间收割的荞麦叶洗净烘干、磨碎、过60目筛，得到荞麦叶粉；称取荞麦叶粉20g，加入75%食用乙醇800mL (1:40)，搅拌均匀，放入微波炉中，280W功率，微波3min ;取出后，趁热抽滤得滤液，用2~3倍的75%乙醇清洗沉淀一次并抽滤得到滤液，合并滤液；用旋转蒸发仪浓缩滤液到300mL，大量沉淀析出；离心浓缩液，沉淀物在60口烘干、粉碎，得到荞麦叶精华1.95g，产品得率9.75%。
[0032]荞麦叶精华总黄酮含量测定方法:同实施例1,荞麦叶精华的总黄酮含量为 72.94%o
[0033]实施例3
[0034]荞麦叶精华的制备:将田间收割的荞麦叶洗净烘干、磨碎、过60目筛，得到荞麦叶粉；称取荞麦叶粉20g，加入85%食用乙醇1200mL (1:60)，搅拌均匀，放入微波炉中，280W功率，微波Imin ;取出后，趁热抽滤得滤液，用2~3倍的85%乙醇清洗沉淀一次并抽滤得到滤液，合并滤液；用旋转蒸发仪浓缩滤液到300mL，大量沉淀析出；离心浓缩液，沉淀物在60U 烘干、粉碎，得到荞麦叶精华2.06g，产品得率10.3%。
[0035]荞麦叶精华总黄酮含量测定方法:同实施例1，荞麦叶精华的总黄酮含量为 72.30%o
[0036]实施例4[0037]荞麦叶精华的抗氧化性测定:以荞麦叶精华清除DPPH自由基的活性代表其抗氧化性。用70%的乙醇配制DPPH溶液，浓度为4Xl(T2mg/mL。在预先加入2mL DPPH溶液的比色管中分别加入2mL浓度为4、6、8、12、16、20ii g/mL荞麦叶精华待测液(实施例1中配制)，摇匀、静置30min，在517nm处测定其吸光值。
[0038]
【权利要求】
1.一种从荞麦叶提取荞麦叶精华的方法，其特征在于，包括如下步骤:(1)将荞麦叶洗净烘干、磨碎、得荞麦叶粉；(2)称取荞麦叶粉，加入料液比为1:40-60的65-85%食用乙醇，搅拌均匀，放入微波炉中，用250W-300W功率，微波加热l_3min，得混合提取液；(3)将混合提取液趁热抽滤得滤液，用2-3倍的65-85%食用乙醇清洗沉淀物继续抽滤得到滤液，合并滤液；(4)浓缩滤液到原体积的1/4；(5)离心或过滤浓缩液，所得沉淀物在600烘干、粉碎，即制得荞麦叶精华。
2.如权利要求1所述的一种从荞麦叶提取荞麦叶精华的方法，其特征在于:所述的食用乙醇浓度为65%，料液比为1:60。
3.如权利要求1所述的一种从荞麦叶提取荞麦叶精华的方法，其特征在于，所述的微波功率为280W，加热时间为2min。
【文档编号】A61K36/70GK103494892SQ201310478274
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年10月14日 优先权日:2013年10月14日
【发明者】李艳琴, 史建强, 李彬春 申请人:山西大学