专利名称：一种蜘蛛毒注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医用制剂，特别是一种蜘蛛毒注射液及其制备方法。
背景技术：
长期以来，人们认为疼痛只是疾病的症状，只要疾病治好，疼痛就会消失，所以很多患者经常忍受疼痛的折磨。但是实际上，疼痛不仅会对人的中枢、循环、呼吸、内分泌、消化和自主神经系统等多方面，造成不良影响，疼痛本身就是一种疾病。
在我国有1亿多疼痛患者，每3位门诊病人中就有2位伴有各种疼痛症状。由于疼痛的普遍性和重要性，它已成为继呼吸、脉搏、体温和血压之后人类第五大生命指征。疼痛分为急性和慢性两种。急性痛的意义在于其“警示”作用，因此可称为是“好痛”，这种疼痛容易被人重视，治疗起来也相对容易。有些疼痛会持续3个月以上，很难得到治疗，并长期影响身心健康和生活质量，这种疼痛被称为慢性疼痛，也被认定为“坏痛”，是医学界努力攻克的难题。慢性疼痛包括颈肩腰腿痛；各种慢性顽固性神经痛，如三叉神经痛、坐骨神经痛；癌痛，70％的癌症患者在中晚期时会出现疼痛；另外像糖尿病、肩周炎等也都会引起慢性疼痛，手术后出现的急性疼痛，如控制不当也会转成顽固性慢性疼痛。据统计，有30％至35％的人长期被慢性疼痛困扰，全世界每天有550万人忍受慢性癌痛折磨。
蜘蛛早在《本草纲目》中就有入药的记载，在《尔雅》中叫次 《方言》中称 蝓，又叫蝃 气味微寒，有小毒。主要用于“主口蜗，脱肛，疮肿，狐臭，蠹齿。”《名医别录》记载能治疗大人、小儿潰疝，以及小儿大腹丁奚，三年不能行走。《新修本草》谓“主蛇毒温疟，霍乱，止呕逆。”《千金方》中有用火取蜘蛛摩擦侧颊，用于治疗中风口蜗斜。现代医学研究证明，临床应用方面有治疗鹅口疮、小儿口疮、鼻息肉、毒蛇咬伤等。
蜘蛛毒液可以抑制钙离子通道，是一种神经毒素。其主要成分是多肽和蛋白质，包括多肽神经毒素、细胞毒素、酶、激肽类似物、凝集活性肽和抗菌肽等，此外还含有多胺类及ATP、核苷酸、氨基酸、单胺类低分子量物质和无机盐等。蜘蛛毒素是一种神经毒素，对心脏、血管及骨骼肌均有明显的兴奋作用。少量蜘蛛毒素不但对人体无害，而且呈现出一种良性调节作用，可使局部组织器官功能由亢进或减弱状态恢复到正常状态。蜘蛛毒素还具有良好的消炎、止痛、消肿、解痉、祛风等作用，对人体免疫功能具有双向调节作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种对风湿、类风湿和神经性疼痛具有镇痛作用的蜘蛛毒注射液。
本发明的另一个目的在于提供一种上述蜘蛛毒注射液的制备方法。
本发明的蜘蛛毒注射液中含有活性蜘蛛毒素和注射用溶液，其中活性蜘蛛毒素的含量为0.5mg～5mg/100ml。
本发明所用的活性蜘蛛毒素为活性虎纹捕鸟蛛毒素或活性敬钊缨毛蛛毒素，还可为活性智利蜘蛛毒素、活性黑寡妇蜘蛛毒素、活性美国漏斗网蛛毒素、活性漏斗网蛛毒素、活性黑腹栉足蛛毒素或活性狼蛛毒素。
本发明所用注射用溶液可为蒸馏水、生理盐水或注射用葡萄糖溶液。
本发明的蜘蛛毒注射液的制备方法包括以下步骤1)活蜘蛛体内诱导取毒方法提取活性蜘蛛毒液，具体步骤为a)将成年蜘蛛从饲养筒内用较长的镊子、夹子或筷子取出置于普通塑料水桶或普通塑料洗衣盆内；b)用上述镊子、夹子或筷子为挑逗物在蜘蛛头部前方对其进行挑逗，蜘蛛会抬起前身并会张开毒螯，对挑逗物进行攻击，此时，避免蜘蛛直接咬住挑逗物可能直接释放毒液；c)待可观察到蜘蛛明显的3-5次攻击动作后，可用挑逗物轻压其身体，用带软质皮手套的手直接从蜘蛛身体中部将其提起；d)将蜘蛛毒螯对准磨口瓶或硬质胶口瓶瓶口，蜘蛛咬住瓶口后即刻会放出毒液，可观察到毒液为透明液体；e)另一人用微型注射器在瓶口及时吸取毒液，并将毒液注入试管或细胞管，细胞管或试管及时放入装有冰块的保温杯，防止提取过程时间较长使毒液温度升高。
2)活性蜘蛛毒素制备，真空度为0.1个标准大气压条件下，采用常规冻干手段，冻干温度-45℃，将活性蜘蛛毒液制成白色活性蜘蛛毒素晶体；3)注射液制备，在温度为1～6℃的无菌室中，取活性蜘蛛冻干粉加入适量注射用溶液，轻轻振摇溶解，然后加入注射用溶液稀释至0.5mg～5mg/100ml；4)将制备好的注射液分装于灭菌过的容器中，在1～6℃的低温环境中保存备用。
本发明蜘蛛毒注射液主要用于治疗各种原因引起的集体免疫机能减退及多种癌症，还可用于治疗风湿、类风湿性关节炎及三叉神经痛、坐骨神经痛等神经疼痛。经对中枢神经和外周神经的抑制试验证明，对于神经性疼痛具有很好的镇痛作用。
本发明蜘蛛毒注射液保留了蜘蛛毒的活性，为临床治疗各种疾病开创了一条新途径。
具体实施例方式
下面结合具体实施例进一步描述本发明。
实施例1从活捕鸟蛛科虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia Huwena)体内用诱导取毒法提取活性虎纹捕鸟蛛毒液，具体步骤为1)将成年虎纹捕鸟蛛从饲养筒内用较长的镊子取出置于普通塑料水桶或普通塑料洗衣盆内；2)用上述镊子为挑逗物在蜘蛛头部前方对其进行挑逗，蜘蛛会抬起前身并会张开毒螯，对挑逗物进行攻击，此时，避免蜘蛛直接咬住挑逗物可能直接释放毒液；3)待可观察到蜘蛛明显的3-5次攻击动作后，可用挑逗物轻压其身体，用带软质皮手套的手直接从蜘蛛身体中部将其捉起；4)将蜘蛛毒螯对准磨口瓶，蜘蛛咬住瓶口后即刻会放出毒液，可观察到毒液为透明液体；5)另一人用微型注射器在瓶口及时吸取毒液，将毒液注入试管管，试管及时放入装有冰块的保温杯，防止提取过程时间较长使毒液温度升高。
活性虎纹捕鸟蛛毒液在真空条件下，0.1个大气压，采用常规冻干手段制成白色活性虎纹捕鸟蛛毒素晶体，冻干温度-45℃。
在室温为1～6℃的无菌室中，将5mg活性虎纹捕鸟蛛毒素晶体加入适量蒸馏水中溶解，再加入蒸馏水稀释到500ml，然后分装到经灭菌处理的安瓿管中，封口。每支装量为1ml，含10ug活性虎纹捕鸟蛛毒素。制成成品应在1～6℃的低温环境中保存。
实施例2从活狒蛛科棒刺蛛亚科敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)体内诱导取毒，具体操作方法同实施例1，但选用的是狒蛛科棒刺蛛亚科敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)。活性敬钊缨毛蛛毒液在真空条件下，0.1个大气压，采用常规冻干手段制成白色活性敬钊缨毛蛛毒素晶体，冻干温度-45℃。
在室温为1～6℃的无菌室中，将2.5mg活性敬钊缨毛蛛毒素晶体加入适量蒸馏水中溶解，再加入蒸馏水稀释到500ml，然后分装到经灭菌处理的安瓿管中，封口。每支装量为1ml，含5ug活性敬钊缨毛蛛毒素。制成成品应在1～6℃的低温环境中保存。
利用上述方法还可制备活性智利蜘蛛毒素、活性黑寡妇蜘蛛毒素、活性美国漏斗网蛛毒素、活性漏斗网蛛毒素、活性黑腹栉足蛛毒素或活性狼蛛毒素注射液，所用注射用溶液为蒸馏水、生理盐水或葡萄糖溶液。
通过下面的试验说明本蜘蛛毒注射液的活性。
试验例1虎纹捕鸟蛛毒注射液对于关节炎的效果试验方法先采用甲醛致炎法，用2％的甲醛0.1ml，注射到大鼠右后腿的第三第四关节之间，导致关节炎产生，24小时后，关节肿胀达到最大值。然后分空白组和给药组进行对比，分别记录关节的周长和关节炎消失的时间，并计算关节周长的平均值。给药组的给药方式为皮下注射，给药量为每天一次，每次1ml虎纹捕鸟蛛毒注射液，该注射液的浓度为0.01mg/ml，注射用溶液为无菌蒸馏水。空白组皮下注射无菌蒸馏水，每天一次，每次1ml。本实验采用三周龄大鼠，体重在180～220g，每组8只。
试验结果如表1所示。
表1
结论从试验结果看出，给药组效果非常明显，大约3到4天基本好转，而对照组在10天才出现好转。所以，该虎纹捕鸟蛛毒注射液用于关节炎效果明显。
试验例2虎纹捕鸟蛛毒注射液的镇痛效果试验方法采用小鼠扭体试验0.6％的醋酸0.2ml用直接灌胃方法让小鼠致痛，致痛5分钟后给药。空白组皮下注射蒸馏水，每天一次，每次注射1ml；给药组皮下注射虎纹捕鸟蛛毒注射液，该注射液浓度为0.01mg/ml，注射用溶液为无菌蒸馏水，每天一次，每次注射1ml。然后观察60分钟内的扭体次数，并计算平均数。本试验采用成年雄性小鼠，体重在18～22g，每组8只。
试验结果见表2。
表2
结论通过试验结果发现，空白组3分钟后发生扭体现象而给药组15分钟后才有扭体现象发生，并且空白组60分钟内的扭体平均数为36次而给药组60分钟内的扭体平均数为8次，说明虎纹捕鸟蛛毒注射液有较好的镇痛效果。
权利要求
1.一种蜘蛛毒注射液，其特征在于包括活性蜘蛛毒素和注射用溶液，所述活性蜘蛛毒素的含量为0.5mg～5mg/100ml。
2.根据权利要求1所述的蜘蛛毒注射液，其特征在于所述活性蜘蛛毒素为活性虎纹捕鸟蛛毒素、活性海南捕鸟蛛毒素、活性敬钊缨毛蛛毒素、活性智利蜘蛛毒素、活性黑寡妇蜘蛛毒素、活性美国漏斗网蛛毒素、活性漏斗网蛛毒素、活性黑腹栉足蛛毒素或活性狼蛛毒素。
3.根据权利要求1所述的蜘蛛毒注射液，其特征在于所述活性蜘蛛毒素为活性虎纹捕鸟蛛毒素或活性敬钊缨毛蛛毒素。
4.根据权利要求1或2或3所述的蜘蛛毒注射液，其特征在于所述活性蜘蛛毒素的含量为1mg/100ml。
5.根据权利要求1所述的蜘蛛毒注射液，其特征在于所述注射用溶液为蒸馏水、生理盐水或注射用葡萄糖溶液。
6.一种蜘蛛毒注射液的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)在1～6℃的无菌室中，取活性蜘蛛毒素加入适量注射用溶液，轻轻振摇溶解，然后加入注射用溶液稀释至0.5mg～5mg/100ml；2)分装于灭菌过的容器中。
全文摘要
本发明提供了一种蜘蛛毒注射液，它含有活性蜘蛛毒素和注射用溶液。制备时包括以下步骤1)取活性蜘蛛冻干粉加入适量注射用溶液，轻轻振摇溶解，然后加入注射用溶液稀释至0.5mg～5mg/100ml；2)分装于灭菌过的容器中，1～6℃的低温保存备用。本发明蜘蛛毒注射液主要用于治疗风湿和类风湿、三叉神经痛和坐骨神经痛等神经疼痛，还可用于各种原因引起的机体免疫机能减退及多种癌症。
文档编号A61P35/00GK1839888SQ200510120779
公开日2006年10月4日 申请日期2005年12月22日 优先权日2005年12月22日
发明者张旭旭 申请人:清华大学深圳研究生院, 佳宝科技有限公司