专利名称：一种制备鱼腥草金银花注射液的方法及其所获得的产品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种制备鱼腥草金银花提取液，尤其是鱼腥草金银花注射剂的方法，以及使用该方法所制备的鱼腥草金银花注射液。
背景技术：
鱼金制剂(由金银花和鱼腥草制成)在临床上用于急性呼吸道感染、急性支气管炎有很好的疗效，是临床和家庭用于治疗以上病症的常用药物制剂。研究表明，鱼金制剂中的挥发油主要由鱼腥草素、环六烷-2-烯-1-醇、甲基正壬酮、3-甲基环己醇、9，12-十八烷二烯酸、环己酮、3-环己烯-1-醇、癸酸等多种成分，挥发油是其抗炎杀菌的主要有效成分，因此，如何在制备过程中保持挥发油的转移率是保证鱼金制剂质量及治疗效果的关键。
鱼金注射液的传统制备方法是以鱼腥草和金银花的干燥饮片为原料，通过重蒸馏提取含挥发油的芳香水制成。由于产地、烘晒干燥及保存条件不同等原因，使得药材中挥发油含量及挥发油中的有效成分含量发生变化，致使各地生产厂家的鱼金制剂各批次产品质量不稳定从而导致疗效也产生差异。金银花刚采摘下来时，香气浓郁，而经过烘、晒、熏干等处理后，则变得气微，表明大部分芳香成分已丢失。据文献介绍，有人曾使用15批鱼腥草提取挥发油，其中只有1批药材的提取液含有主要有效成分之一的鱼腥草素，而其余14批的提取液均不含有该成分。此外，使用已有方法制备的鱼腥草和金银花注射液中挥发油的转移率以及挥发油中的主要有效成分如鱼腥草素、甲基正壬酮等含量较低，例如使用中国专利申请“一种鱼腥草注射液的制备方法及质量控制方法”(申请号200410037630.2)公开的方法制备的注射液中，每1ml注射液仅含主要有效成分甲基正壬酮1～20μg，且未对总挥发油进行定量。总体来看，使用已有方法生产的鱼腥草金银花注射液质量差，疗效不稳定。
迫切需要一种制备鱼腥草金银花注射液的方法，使得用该方法制备的鱼腥草金银花注射液具有良好的质量和稳定的疗效。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备鱼腥草金银花注射液的方法。
本发明的第二个目的是提供一种质量稳定、疗效好的鱼腥草金银花注射液。
本发明的第三个目的是提供一种能控制鱼腥草金银花注射液质量的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种制备鱼腥草金银花注射液的方法，该方法包括制备鱼腥草提取液采集鱼腥草鲜草，洗净后晾干表面水分，将全草或切碎后的草用水蒸馏提取，得到馏出液，优选将馏出液再进行重蒸馏得到重蒸馏馏出液，所得馏出液或重蒸馏馏出液即为鱼腥草提取液，称为原液I；其中，优选将鱼腥草鲜草洗净后晾干表面水分，全草或切碎后称量，加药材重量4～12倍(W/V)的水蒸馏，当馏出液体积达药材投料重量的0.5～2倍(V/W)时，停止蒸馏，将此蒸馏液再进行重蒸馏，当重蒸馏液体积达到药材投料重量的5～20％(V/W)时，停止蒸馏，将此重蒸馏液直接使用或密封于0-4℃冷藏室中保存，即为原液I；制备金银花提取液采摘新鲜金银花，用水蒸馏提取得到馏出液，优选将馏出液再进行重蒸馏得到重蒸馏馏出液，所得馏出液或重蒸馏馏出液即为金银花提取液，称为原液II；其中优选将新鲜金银花加4～12倍量(W/V)水蒸馏，当馏出液体积达药材投料量0.5～2倍(V/W)时，停止蒸馏，收集蒸馏液进行重蒸馏，当重蒸馏液体积达药材投料量10～40％(V/W)时，停止蒸馏，将此重蒸馏液直接使用或者密封于0-4℃冷藏室中保存备用，即为原液II；制备鱼腥草金银花注射液使用常规方法将鱼腥草提取液和金银花提取液制成注射液，例如将原液I与原液II按一定比例混合后，加入适量注射用水及其他药用辅料，灭菌罐装而成，例如取原液I 50～100体积份，原液II 1～2体积份，加注射用水至180体积份量，分次加入0.5～2体积份吐温-80，混匀，依次加入焦亚硫酸钠0.3质量份、氯化钠1.7质量份和枸橼酸钠溶液适量调节PH＝5.9-6.5，搅匀，补足注射用水至200体积份，滤过，再用0.45μm微孔滤膜精滤3次，取滤液灌装(每支10ml)，流通蒸汽，灭菌30m，即得，更具体如取250ml-500ml原液I和5-10ml原液II，加注射用水至约900ml，分次加入吐温-804g，混匀，依次加入焦亚硫酸钠1.5g、氯化钠8.5g和枸橼酸钠溶液适量调节PH＝5.9-6.5，搅匀，补足注射用水至1000ml，过滤，再用0.45μm微孔滤膜精滤3次，取滤液灌装(每支10ml)，流通蒸汽，灭菌30m，即得。
本发明方法中，采用两种原料的新鲜药材投料分别进行蒸馏。经研究发现鱼腥草初蒸馏液收集至馏出液量达到鲜药量1倍(V/W)时，显示甲基正壬酮已提取完全，停止蒸馏，将收集到的初蒸馏液进行重蒸馏，收集重蒸馏液，当重蒸馏液量为鲜药量的10％(V/W)时，显示甲基正壬酮已提取完全；金银花鲜花初蒸馏液量达到鲜花量1倍(V/W)时，显示挥发油收集完全，停止蒸馏，将初蒸馏液进行重蒸馏，收集重蒸馏液达鲜花量15-20％(V/W)时，显示挥发油收集完全。
在低温下保存鱼腥草和金银花的重蒸馏液，生产注射液之前，可以先对两种蒸馏液进行含量检测，然后按适当比例配制。两种原料提取液的配伍比例的确定是根据不同产地多次试验结果综合确定的。因为不同产地的药材所含有效成分差异较大，且鲜药材的含水量也各不相同，因此会造成蒸馏提取物的转移率有较大差别。通过对原液进行含量测定，然后根据具体的情况进行配制，从而保证了注射液的质量稳定。金银花在提取挥发油后，药渣可以继续用以提取氯原酸等亲水性有效成分药用原料，因此发明还可以节约药材原料。
以下描述本发明制备鱼腥草金银花注射液所用的鱼腥草提取液和金银花提取液以及所得鱼腥草金银花注射液最好能满足的具体指标，如果能够满足这些条件，可以保证所得产品能达到本发明描述的质量。
提取物的限度指标以甲基正壬酮为对照品，配成1mg/ml(乙酸乙酯中)对照品溶液，照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定原液I中鱼腥草含量，原液I每1ml含鱼腥草以甲基正壬酮计，不得少于96.0μg。照挥发油测定法(中国药典2005年版一部附录XD)，取原液II适量检测，原液II中挥发油的含量(ml/100ml)应不低于3％。
注射液的限度指标原液I和原液II按照一定比例配制后加用各种辅料制成注射剂。鱼腥草金银花注射液中挥发油含量不低于0.10‰，鱼腥草素含量以甲基正壬酮计每毫升不少于24.0μg，其它未定量成分符合本发明人制定的相应的指纹图谱限量规定。
本发明注射液的质量控制方法如下挥发油的含量测定照挥发油测定法(中国药典2005年版一部附录XD)建立了本方法。
精密量取鱼腥草金银花注射液(以下简称注射液)1000ml，置容积为3000ml的硬质圆底烧瓶中，加玻璃珠数粒，连接挥发油测定器和回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。将圆底烧瓶置于电热套中缓慢加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中的油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为至，放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算本品中挥发油的含量(ml/1000ml)。
注射液中挥发油含量应不低于0.10‰。
甲基正壬酮的含量测定照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定。
色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇-20M(PEG-20M)为固定液，涂布浓度为10％；柱温120±5℃，理论板数按甲基正壬酮峰计算，应不低于1000。
取甲基正壬酮对照品适量作为内标，精密称定，加醋酸乙酯制成1mg/ml的溶液。
供试品溶液的制备与测定精密量取注射液25ml，置于圆底烧瓶中，加水25ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，再加醋酸乙酯约3ml，连接回流冷凝管，加热回流2小时，停止加热，放置片刻，分取醋酸乙酯层，测定器用醋酸乙酯洗涤3次(每次2ml)，合并洗涤液，置蒸发皿于60℃水浴中，通入氮气蒸至近干，定量转移至2ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各4μl，注入气相色谱仪，计算，即得。
注射液中，每1ml含鱼腥草素以甲基正壬酮(C11H22O)计，不得少于24.0μg。
本发明注射液指纹图普的绘制照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定。
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)PEG--20M、氢火焰离子化检测器。进样口和检测器温度220℃，分流比10∶1；程序升温初始100℃，保持15分钟，以每分钟5℃升至170℃，保持41分钟。理论板数按甲基正壬酮峰计算不低于1.5×104。
以甲基正壬酮作为内标，取适量，精密称定，加正己烷制成每1ml含1.5mg的溶液，作为参照物溶液。
供试品溶液的制备预测定量取供试品150ml，置于烧瓶中，加水800ml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，再加正己烷2ml，连接回流冷凝管，加热回流4小时，停止加热，放置片刻，分取正己烷层，定容至2ml作为供试品溶液。精密量取参照物溶液2μl，注入气相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的50％，再量取供试品溶液2μl±0.5μl注入气相色谱仪，用进样量调节最大色谱峰(除溶剂峰)的峰高，约为记录仪满量程的50％，记录色谱图至70分钟，计算相对保留时间和峰面积比值，与标准指纹图谱(见附图1)对照。
指纹图谱共有峰峰面积和应大于总峰面积的95％，各共有峰面积比值和相对保留时间与标准指纹图谱相关值比较，应符合规定。
指纹图谱及各项技术参数。共有峰号(相对保留时间漂移范围±15％)1(0.36)、2(0.47)、3(0.53)、4(0.67)、5(0.70)、6(0.79)、7(0.89)、S(1.00)、9(1.12)、10(1.25)、11(1.35)、12(1.41)、13(1.49)、14(1.51)、15(1.56)、16(1.59)、17(1.65)、18(1.68)、19(1.71)、20(1.78)、21(1.88)、22(1.95)、23(2.01)、24(2.16)、25(2.32)、26(2.69)、27(2.83)、28(2.91)、29(3.02)、30(3.20)、31(3.96)共有峰含量限度为11∶S＝(0.31-0.57)∶1，26∶S＝(1.85-2.77)∶1本发明的制备方法和质量控制方法使得本发明的注射液的质量稳定可靠。本发明规定指标性成分甲基正壬酮的含量每毫升不低于24.0μg，挥发油含量不低于0.10‰，且采用指纹图谱对挥发油众多成分进行了限度规定。该方法规定的质量标准远远高于以往的注射剂，更能保证质量的稳定，疗效的可靠。
图1为本发明人提出的鱼腥草金银花注射液的标准指纹图谱。
图2为实施例3的鱼腥草金银花注射液指纹图谱。
具体实施例方式
下面结合实施例来进一步描述本发明。
实施例1鱼腥草金银花注射液的制备取新采收的鱼腥草全草，洗净晾干表面水分、切碎、称16kg，加128kg水进行蒸馏，至蒸馏液达16L时，停止蒸馏，对蒸馏液进行重蒸馏，当重蒸馏液达1.6L时，停止蒸馏，密封，于0-4℃冷藏室保存，为原液I。
取新采摘的金银花8kg，加64kg水进行蒸馏，至蒸馏液达8L时，停止蒸馏，收集蒸馏液进行重蒸馏，当重蒸馏液达1.6L时，停止蒸馏，于0-4℃冷藏室中保存，为原液II。
①以甲基正壬酮对照品，配成1mg/ml(乙酸乙酯中)对照品溶液照气相色谱法测定原液I中鱼腥草含量，原液I每1ml含鱼腥草以甲基正壬酮计＝102.0mg。
②照挥发油检测法测定原液II，挥发油含量＝3.1％(ml/100ml)。
③取原液I 250ml，原液II 5ml，加注射用水近900ml，分次加入吐温-80 4g，混匀，依次加入焦亚硫酸钠1.5g、氯化钠8.5g，用枸橼酸钠调PH＝6.0，搅匀，补足注射用水至1000ml，过滤，滤液再用0.45μm的微孔滤膜精滤3次，取滤液灌装，每支10ml，流通蒸汽、灭菌30m，得成品100支。
实施例2鱼腥草金银花注射液的制备取新采收的鱼腥草全草，洗净，晾干表面水分，全草称10kg，加80kg水进行蒸馏，至蒸馏液达10L时，停止蒸馏，对此蒸馏液进行重蒸馏，当重蒸馏液达1L时，停止蒸馏，密封于0-4℃冷藏室中保存，为原液I。
取新摘的金银花5kg，加50kg水进行蒸馏，至蒸馏液达5L时，停止蒸馏，对此蒸馏液进行重蒸馏，当重蒸馏液达1L时，停止蒸馏，密封于0-4℃冷藏室中保存，为原液II。
①以甲基正壬酮对照品，配成1mg/ml(乙酸乙酯中)对照品溶液，照气相色谱法测定原液I中鱼腥草含量，原液I每1ml含鱼腥草以甲基正壬酮计＝110.0μg。
②照挥发油测定法测定原液II，挥发油含量＝3.2％(ml/100ml)③取原液I 250ml，原液II 5ml，加注射用水近900ml，分次加入吐温-80 4g，混匀，依次加入焦亚硫酸钠1.5g、氯化钠8.5g、枸橼酸钠调PH＝6.1，搅匀，补足注射用水至1000ml，过滤，滤液再用0.45μm的微孔滤膜精滤3次，取滤液灌装，每支10ml，流通蒸汽，灭菌30m，得成品100支。
实施例3鱼腥草注射液的质量控制方法取实施例1所得的鱼腥草注射液进行挥发油的含量测定。
挥发油的含量测定方法挥发油测定法(中国药典2005年版一部附录XD)精密量取注射液1000ml，置3000ml硬质圆底烧瓶中，加玻璃珠数粒，连接挥发油测定器和回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓慢加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中的油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为至，放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算本品中挥发油的含量(ml/1000ml)。
本品挥发油含量0.37‰。
甲基正壬酮的含量测定方法气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)；色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇-20M(PEG-20M)为固定液，涂布浓度为10％；柱温120±5℃，理论板数按甲基正壬酮峰计算为1570。
取甲基正壬酮对照品作为内标，精密称定，加醋酸乙酯制成1mg/ml的溶液。
供试品溶液的制备与测定精密量取注射液25ml，置于圆底烧瓶中，加水25ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，再加醋酸乙酯约3ml，连接回流冷凝管，加热回流2小时，停止加热，放置片刻，取上层醋酸乙酯溶液部分，测定器用醋酸乙酯洗涤3次(每次2ml)，合并洗涤液，置蒸发皿于60℃水浴中，通入氮气蒸至近干，定量转移至2ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。
测定法 分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各4μl，注入气相色谱仪，计算，即得。
本品每1ml含鱼腥草素以甲基正壬酮(C11H22O)计32.3μg。
注射液指纹图普的绘制照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定。
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)PEG--20M、氢火焰离子化检测器。进样口和检测器温度220℃，分流比10∶1。程序升温初始100℃，保持15分钟，以每分钟5℃升至170℃，保持41分钟。理论板数按甲基正壬酮峰计算不低于1.5×104。
以甲基正壬酮作为内标，取适量，精密称定，加正己烷制成每1ml含1.5mg的溶液，作为参照物溶液。
供试品溶液的制备预测定量取供试品150ml，置于烧瓶中，加水800ml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，再加正己烷2ml，连接回流冷凝管，加热回流4小时，停止加热，放置片刻，分取正己烷层，定容至2ml作为供试品溶液。精密量取参照物溶液2μl，注入气相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的50％，再量取供试品溶液2μl±0.5μl注入气相色谱仪，用进样量调节最大色谱峰(除溶剂峰)的峰高，约为记录仪满量程的50％，记录色谱图至70分钟，计算相对保留时间和峰面积比值，与标准指纹图谱对照。
指纹图谱共有峰峰面积和为总峰面积的97.6％，各共有峰面积比值和相对保留时间与标准指纹图谱相关值比较，符合规定共有峰号(相对保留时间)1(0.34)、2(0.45)、3(0.52)、4(0.67)、5(0.72)、6(0.77)、7(0.90)、S(1.00)、9(1.10)、10(1.27)、11(1.34)、12(1.41)、13(1.46)、14(1.54)、15(1.58)、16(1.62)、17(1.67)、18(1.72)、19(1.74)、20(1.83)、21(1.94)、22(1.99)、23(2.05)、24(2.21)、25(2.38)、26(2.72)、27(2.88)、28(2.97)、29(3.10)、30(3.29)、31(4.18)。
共有峰含量限度为11∶S＝(0.49)∶1，26∶S＝(2.39)∶1实施例4本发明注射液抑菌作用研究实验药物本发明鱼腥草金银花注射液；市售鱼金注射液。
实验菌种金黄葡萄球菌，大肠杆菌，枯草杆菌，青霉菌，黑曲霉，啤酒酵母菌。
实验方法滤纸片法测定抑菌作用直径6mm的圆形滤纸片，放入药物中浸泡16小时，120℃下湿热灭菌备用。上述供试菌液各取0.5ml与相应固体培养基，在超净工作台内制成含菌平板，取含浸出汁的滤纸片贴在上述平板上，每皿贴5片，平行操作4次。细菌置37℃、霉菌及酵母菌置27℃的生化培养箱内培养48h，测定24h、48h后滤纸片的抑菌圈大小，比较抑菌效果见表1。
最低抑菌浓度(Mic)测定配制上述军种分别所需的培养基，准确量取9ml分装试管，准确加入8％、4％、2％、1％、0.5％、0.25％药物系列浓度溶液1ml，配成系列培养基，120℃高压湿热灭菌，冷藏后每系列接种一个菌种，每系列做3次重复，细菌置37℃、霉菌及酵母菌置27℃的生化培养箱内培养48h，观察菌种生长情况，已完全没有菌生长的最低浓度为最低抑菌浓度，见表2。
表1 对供试菌种的抑制效果
表2 最低抑制浓度
上述药理实验结果表明本发明注射液比市售鱼金注射液有更强的抑菌活性。
权利要求
1.一种制备鱼腥草金银花注射液的方法，该方法包括制备鱼腥草提取液采集鱼腥草鲜草，洗净后晾干表面水分，全草或经切碎后称重，用水蒸馏提取得到馏出液，即为鱼腥草提取液，称为原液I；制备金银花提取液采摘新鲜金银花，用水蒸馏提取得到馏出液，即为金银花提取液，称为原液II；制备鱼腥草金银花提射液使用常规方法将原液I和原液II制成注射液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于制备鱼腥草提取液时，将馏出液进行重蒸馏，所得重蒸馏馏出液作为鱼腥草提取液；制备金银花提取液时，将馏出液进行重蒸馏，所得重蒸馏馏出液作为金银花提取液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于制备鱼腥草提取液时，将鱼腥草鲜草洗净后晾干表面水分，全草或经切碎后称量，加4～12倍量(W/V)的水蒸馏，当馏出液量达鲜药量0.5～2倍(V/W)时，停止蒸馏，将此蒸馏液再进行重蒸馏，当重蒸馏液量为鲜药量的5～20％(V/W)时，停止蒸馏，将此重蒸馏液直接使用或者密封于0-4℃冷藏室中保存，为原液I；制备金银花提取液时将新鲜金银花加4～12倍量(W/V)水蒸馏，当馏出液量达鲜花量0.5～2倍(V/W)时，停止蒸馏。收集蒸馏液进行重蒸馏，当重蒸馏液量达鲜花量10～40％(V/W)时，停止蒸馏，将此重蒸馏液直接使用或者密封于0-4℃冷藏室中保存备用，为原液II；制备鱼腥草金银花提射液时原液I与原液II按一定比例混合后，加入适量注射用水及其他药用辅料，灭菌罐装而成。
4.根据权利要求3的方法，其特征在于制备鱼腥草提取液时，将鱼腥草用8倍量(W/V)的水蒸馏；制备金银花提取液时将新鲜金银花用8倍量(W/V)的水蒸馏；制备鱼腥草金银花提射液时取原液I50～100体积份，原液II1～2体积份，加注射用水至180体积份量，分次加入吐温-80 0.5～2体积份，混匀，依次加入焦亚硫酸钠0.3质量份、氯化钠1.7质量份和枸橼酸钠溶液适量调节PH＝5.9-6.5，搅匀，补足注射用水至200体积份，滤过，再用0.45μm微孔滤膜精滤3次，取滤液灌装(每支10ml)，流通蒸汽，灭菌30m，即得。
5.根据权利要求1～4任意一项方法所得的鱼腥草金银花注射液。
6.根据权利要求5所述的鱼腥草金银花注射液，其特征在于，鱼腥草素含量以甲基正壬酮计每毫升不少于24.0μg，挥发油含量不低于0.10‰。
7.根据权利要求5所述的鱼腥草金银花注射液，其特征在于，所用原液I每1ml含鱼腥草素以甲基正壬酮(C11H22O)计不少于96.0μg。
8.根据权利要求5所述的鱼腥草金银花注射液，其特征在于，所用原液II中挥发油的含量(ml/100ml)不低于3.0％。
9.根据权利要求5所述的鱼腥草金银花注射液，其特征在于，该注射剂的气相色谱峰符合指纹图谱的共有峰限定。
全文摘要
本发明公开了一种制备鱼腥草金银花注射液的方法，该方法包括将鱼腥草鲜草洗净后晾干表面水分，全草或经切碎后称重，用水蒸馏提取，制得鱼腥草提取液；将新鲜金银花，用水蒸馏提取，制得金银花提取液；使用常规方法将原液I和原液II制成注射液提取物以及含有该提取物的注射剂。该方法获得的注射剂中，挥发油含量不低于0.10‰，鱼腥草素含量以甲基正壬酮(C
文档编号A61P11/00GK1876054SQ20061007813
公开日2006年12月13日 申请日期2006年4月26日 优先权日2006年4月26日
发明者郭东宇, 韩兆华, 袭开利 申请人:厦门国宇知识产权研究有限公司