专利名称：从东紫苏中提取木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物提取药物的方法，尤其涉及一种从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法。
背景技术：
东紫苏(Elsholtzia bodinieri Vaniot.)为唇形科(Labiatae)香薷属(Elsholtzia)植物。其全草均可入药，用于治疗感冒风寒、头痛身痛、虚火牙痛、泻肚、急性结膜炎、肝炎、咽喉痛、消化不良、闭尿等症；嫩叶可做茶饮用，有清热解毒之功效。在对东紫苏进行系统的化学成分分离研究中发现，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucoside)在东紫苏中含量较高，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷具有止咳、祛痰、消炎作用，而且有降低兔实验性动脉粥样硬化和胆固醇的作用，大鼠皮下注射，有增强毛细血管通透性作用，但目前没有从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法。
本发明采用以下技术方案来实现上述目的从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，首先对东紫苏利用溶剂提取，提取溶剂为乙醇、甲醇、丙酮和水以不同配比所组成的溶剂，东紫苏与提取溶剂的重量比为1∶8-20，提取液浓缩后得浓缩液或浸膏，将浓缩液或浸膏溶于水，用弱极性或中等极性的有机萃取剂萃取脱脂，脱脂后的水相再用与水不互溶的低碳醇类萃取剂萃取，醇类萃取相浓缩干燥，重结晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
弱极性或中等极性的萃取剂为石油醚、环己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯，与水不互溶的低碳醇类萃取剂为C4～C10的醇类。
与水不互溶的低碳醇类萃取剂为正丁醇、1-戊醇、环戊醇、环己醇或异辛醇。
另一种从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，首先对东紫苏利用溶剂提取，提取溶剂为乙醇、甲醇、丙酮和水以不同配比所组成的溶剂，东紫苏与提取溶剂的重量比为1∶8-20，提取液浓缩后得浓缩液或浸膏，浓缩液或浸膏溶解于水，用弱极性或中等极性的有机溶剂萃取脱脂，脱脂后的水相过大孔吸附树脂，先用水洗去水溶性杂质后，再用洗脱剂洗脱，洗脱液浓缩干燥，重结晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
弱极性或中等极性的萃取剂为石油醚、环己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯。
大孔吸附树脂为弱极性、非极性或中等极性的大孔吸附树脂，洗脱剂为醇-水体系洗脱剂。
选用弱极性、水份含量为60-70％、比表面积为480-520m2/g、平均孔径为130-140的大孔吸附树脂。
本发明的方法可从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷纯品，提取工艺简单，制备方便，能耗小，主要以醇-水体系为溶剂，无环境污染，溶剂可循环使用，提取率高，粗品提取可得到含量在60-80％的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，纯化后得到含量在95-99％的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷可用于研发治疗心脑血管疾病、支气管炎、哮喘、肺癌等疾病的药物。
图1是对照品的高效液相色谱图；图2是本发明样品的高效液相色谱图。
具体实施例方式
实施例1，东紫苏采自云南省红河州，将东紫苏全草500g粉碎，用4000ml的乙醇-水作提取剂，回流提取，其中乙醇的体积百分比为70％，提取液减压浓缩至无乙醇后，得东紫苏提取物浓缩液，用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯萃取后的水相减压浓缩除去残留的乙酸乙酯后，冷冻干燥得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷粗产品，HPLC、UV测定含量为80％，对粗品进行结晶和重结晶，则得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷纯品，HPLC、UV测定含量为96％。
实施例2，将东紫苏全草500g粉碎，用7000ml的乙醇-水作提取剂，回流提取，其中乙醇的体积百分比为90％，提取液减压浓缩至无乙醇后，得东紫苏浓缩浸膏，将东紫苏浸膏制成水悬浮液，用与悬浮液等体积氯仿萃取三次，氯仿萃取后的水相再用1-戊醇萃取，1-戊醇萃取相减压浓缩后，真空干燥，则得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷粗品，HPLC、UV测定含量约为61％，对粗品进行结晶和重结晶，则得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷纯品，HPLC、UV测定含量为98％。
实施例3，将东紫苏全草500g粉碎，用10000ml的丙酮-水作提取剂，回流提取，其中丙酮的体积百分比为60％，提取液减压浓缩至无丙酮后，得东紫苏提取物浓缩液，用与浓缩液等体积石油醚萃取两次脱脂，水相过大孔吸附树脂，用水洗至流出液无色，以95％乙醇为洗脱剂洗脱，洗脱液减压浓缩后，再冷冻干燥，得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷精品，HPLC、UV测定含量约为90％；对粗品和精品进行结晶和重结晶，则得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷纯品，HPLC、UV测定含量为99％。其中，大孔吸附树脂选用弱极性，粒度mm(0.3-1.25)≥90％，水份含量70％，平均比表面积为520m2/g，平均孔径140的大孔吸附树脂。
实施例4，将东紫苏全草500g粉碎，用5000ml的丙酮-水作提取剂，回流提取，其中丙酮的体积百分比为60％，提取液减压浓缩至无丙酮后，得东紫苏提取物浓缩液，用等体积的环己烷萃取三次后，水相过大孔吸附树脂，用水洗至流出液无色，以95％乙醇为洗脱剂洗脱，洗脱液减压浓缩后，再喷雾干燥，得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷精品，HPLC、UV测定含量约为90％；对精品进行结晶和重结晶，则得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷纯品，HPLC、UV测定含量为99％。其中，大孔吸附树脂选用非极性，粒度mm(O.3-1.25)≥90％，水份含量60％，平均比表面积为480m2/g，平均孔径130的大孔吸附树脂。
木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷产物鉴定一、性状含量为99％，浅黄色粉末，mp 251-253℃；HCl-Zn反应阳性，TLC遇硫酸乙醇溶液加热显黄色，薄层水解检出葡萄糖和木犀草素。
二、光谱图EI-MS m/z(％)448 (26)，286(苷元)(100)，270(5)，258(16)，257(5)，212(38)，162(3)，示为黄酮类化合物，推得分子式为C21H20O11，与质谱分子离子峰一致；化合物的13C-NMR、DEPT谱中，在δC 60.6-105范围内，出现典型的葡萄糖特征碳吸收信号，示为黄酮苷。在1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ中，12.98(1H，s)、10.00(1H，s)和9.41(1H，s)的三个峰分别归属为5、4′和3′位的羟基信号，7.43(1H，dd，J＝2.0，8.4Hz)是6′位的质子信号，7.41(1H，d，J＝2.0Hz)和6.89(1H，d，J＝8.0Hz)则为2′和5′位的峰，6.78(1H，d，J＝2.0Hz)和6.43(1H，d，J＝2.0Hz)分别是8位和6位质子信号，6.75(1H，s)则为3位质子信号，5.08(1H，d，J＝6.8Hz)是糖端基质子信号，为β-型。综合所有光谱数据，经与文献对照，确定该化合物为5，3′，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，即木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
三、含量测定选用安捷伦高效液相色谱仪，日本岛津公司UV-250分光光度仪；色谱柱Agilent ODS(5μm，21mm×150mm)，流动相甲醇-1.5％冰醋酸水溶液(60∶40v/v)；流速0.3mL·min-1；检测波长360nm；柱温30℃；进样量5μL，选用甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品自制，结构通过UV，IR，NMR等谱学方法鉴定，纯度经HPLC面积归一化法测定大于99％，可作定量之用，对照品的高效液相色谱图如图1所示。
(一)、标准曲线的考察1、高效液相标准曲线的考察取对照品储备液2.5mL，用甲醇稀释10倍，准确吸取标液3.0，4.0，5.0，6.0，7.0μL进样，按上述色谱条件测定，以进样量(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标，得标准曲线为Y＝305.7167+7864.7871Xr＝0.9994线性范围为0.3～0.7μg。
2、分光光度法标准曲线的考察分别用吸量管依次吸取对照品储备液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5mL于比色管中，用甲醇稀释至25mL，混匀，在360nm波长处测定吸光度，以溶液浓度(X)为横坐标，以吸光度(Y)为纵坐标，得标准曲线为Y＝-0.00155+44.5428X r＝0.9999线性范围为0.004～0.014g·L-1。
(二)、精密度和重现性1、高效液相法的精密度和重现性取同一样品溶液连续进样5次，峰面积RSD＝0.045％。准确称取同一样品5份，用上述方法配制样品溶液，测定得如图2所示的样品高效液相色谱图，其峰面积的RSD＝2.1％。
2、分光光度法的精密度和重现性取同一样品溶液连续测定5次，得吸光度的RSD＝0.045％。准确称取同一样品5份，用上述方法配制样品溶液，依法测定，得吸光度的RSD＝2.1％。
(三)、稳定性和回收率1、高效液相法的稳定性和回收率取同一样品溶液，室温放置0，2，4，6，8h分别进样，测得峰面积平均值为3.936×103，RSD＝2.2％。取对照品储备液与样品溶液各5mL混匀，共五份，测定回收率见表1。
2、分光光度法稳定性与回收率取对照品储备液与样品溶液各5mL混匀，共五份，测定回收率见表1。
(四)、含量结果1、高效液相色谱法测定分别取样品储备液2.5mL三份，用甲醇稀释10倍，在选定的色谱条件下，进样5μL，测得样品含量见表1。
2、紫外分光光度法测定分别吸取样品储备液2.5mL三份，用甲醇稀释至25mL，测得含量见表1。
表1HPLC和UV法测定结果比较
*P＞0.01，两种方法测定的结果无显著性差异。
权利要求
1.从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，对东紫苏利用溶剂提取，其特征在于，将提取后的浓缩液或浸膏溶于水，用弱极性或中等极性的有机萃取剂萃取脱脂，脱脂后的水相再用与水不互溶的低碳醇类萃取剂萃取，萃取相浓缩干燥，重结晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
2.如权利要求1所述的从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，弱极性或中等极性的萃取剂为石油醚、环己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯，与水不互溶的低碳醇类萃取剂为C4～C10的醇类。
3.如权利要求1或2所述的从东紫苏中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，与水不互溶的低碳醇类萃取剂为正丁醇、1-戊醇、环戊醇、环己醇或异辛醇。
4.如权利要求3所述的从东紫苏中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，提取溶剂为乙醇、甲醇或丙酮和水以不同配比所组成的溶剂，东紫苏与提取溶剂的重量比为1∶8-20。
5.从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，对东紫苏利用溶剂提取，其特征在于，将提取后的浓缩液或浸膏溶解于水，用弱极性或中等极性的有机萃取剂萃取脱脂，脱脂后的水相过大孔吸附树脂，洗脱剂洗脱，洗脱液浓缩干燥，重结晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
6.如权利要求5所述的从东紫苏中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，弱极性或中等极性的萃取剂为石油醚、环己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯。
7.如权利要求5或6所述的从东紫苏中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，大孔吸附树脂为弱极性、非极性或中等极性的大孔吸附树脂，洗脱剂为醇-水体系洗脱剂。
8.如权利要求7所述的从东紫苏中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，选用弱极性、水份含量为60-70％、比表面积为480-520m2/g、平均孔径为130-140的大孔吸附树脂。
9.如权利要求8所述的从东紫苏中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，提取溶剂为乙醇、甲醇或丙酮和水以不同配比所组成的溶剂，东紫苏与提取溶剂的重量比为1∶8-20。
全文摘要
本发明涉及一种从植物提取药物的方法，尤其涉及一种从东紫苏中提取木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷的方法，对东紫苏利用溶剂提取，将提取后的浓缩液或浸膏溶于水，用弱极性或中等极性的有机萃取剂萃取脱脂，脱脂后的水相再用与水不互溶的低碳醇类萃取剂萃取，萃取相浓缩干燥，重结晶后得木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷；或者脱脂后的水相过大孔吸附树脂，洗脱剂洗脱，洗脱液浓缩干燥，重结晶后得木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷；本发明提取工艺简单，制备方便，能耗小，无环境污染，溶剂可循环使用，提取率高，可用于研发治疗心脑血管疾病、支气管炎、哮喘、肺癌等疾病的药物。
文档编号A61K127/00GK1974590SQ20061012829
公开日2007年6月6日 申请日期2006年11月29日 优先权日2006年11月29日
发明者赵东保, 刘绣华, 李明静, 张卫, 邵鹏 申请人:河南大学