专利名称：副痘病毒与传统细胞毒性化疗剂联合作为治疗癌症的生化治疗的制作方法
副痘病毒与传统细胞毒性化疗剂联合 作为治疗癌症的生化治疗
在可以与已有治疗一起使用的新型癌症治疗方法的研究中，基 于病毒的疗法的使用具有一定的前景(l)。病毒生来是感染细胞的， 并且常常通过不同的机制破坏这些细胞。尽管迄今为止在临床上已 经使用了大量的病毒，但是这种方法存在毒性、无关组织的感染、
免疫副作用等问题，因此被放弃(2)。然而，重组DNA技术提供了 在治疗方法中使用病毒的新的可能性。当前的尝试是使用复制选择 型病毒(在1中综述)。这些病毒应当在分裂的细胞中选择性复制 ,(3)。然而，尽管这些病毒可以在细胞培养单层中快速扩散，但是在 实体肿瘤内的扩散仍然是一个没有解决的问题(l)。
以前曾经提出将灭活的绵羊副痘病毒(oWs )用于 癌症治疗(4)。
干护C素-cc (IFN-a)以前已经与传统化疗药如顺铂、长春新石咸 (vinclesine )和达卡巴# ( dacarbacine ) —起进行了研究。生物制
剂和细胞毒性化疗药的联用被称为生物化学治疗。在生物化学治疗
后，响应率可达66%,因此优于细胞毒性化学治疗(5)。
在癌症治疗中使用灭活病毒进行生物化学治疗尚没有报道。 从上述现有技术显然可知，迄今为止还没有公开使用灭活病毒
作为免疫调节剂与传统细胞毒性化疗剂作为癌症生物化学治疗的治
疗方法。
本发明因此基于提供一种治疗方法的技术问题，该治疗方法不 仅比细胞毒性化学疗法更有效地减轻患者的肿瘤负荷，而且提供一 种在细胞毒性化学治疗后重建免疫系统的治疗方法。该治疗方法应 当不仅没有或者仅具有较少的不希望的副作用，而且应当优于现有 的疗法。本发明涉及
1.绵羊副痘病毒与至少一种另外的抗癌剂联用在制备治疗癌症 的药物中的用途。本发明还涉及绵羊副痘病毒在制备与至少一种另 外的抗癌剂联合治疗癌症的药物中的用途。本发明的另外一方面涉 及绵羊副痘病毒在治疗患有癌症的患者中的用途，其中给予所述患 者至少一种另外的抗癌剂以治疗癌症。此外，本发明还涉及癌症的 治疗方法，其中绵羊副痘病毒与其他的抗癌剂联合给药。
根据本发明，绵羊副痘病毒被认为是绵羊副痘病毒D1701、 NZ-2、 NZ-7、 NZ-10或orf-ll林。
本发明还涉及通过使用合适的细胞系统进行传代或适应化 (adaption)而获得的上述绵羊副痘病毒的衍生物与在抗癌症治疗中 有效的物质联合用于生产针对人类和动物癌症的药物的用途，所述 细胞系统例如是人细胞如WI-38、 MRC-5，猴细胞如Vero细胞，牛 细胞例如BL-K13A47/Reg或MDBK，以及绵羊细胞如MDOK。
另外，本发明涉及上述绵羊副痘病毒的部分或片段和它们的传 代和适应化变体与在抗癌症治疗中有效的物质的联合应用。根据本 发明，病毒的部分或片段被认为是利用适当载体如痘苗病毒在适当 系统如成纤维细胞培养物中表达的、整个病毒或其基因组核酸的基 因组片段或亚基因组片段，或者病毒的其它成分。在一个优选变化 方案中，本发明的绵羊副痘病毒的部分或片段利用常规方法纯化， 例如利用过滤或层析法纯化。在另一个优选变化方案中，本发明的 绵羊副痘病毒的部分或片段利用技术人员公知的方法重组产生。根 据本发明，癌症是与增生的或静止的肺瘤相关的所有人类和动物疾 病。
在本发明的一个优选变化方案中，所述抗癌剂是细胞毒性剂。
2. 本发明还涉及根据第1项的用途，其中所述癌症是黑素瘤、 乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠直肠癌、肝癌或一种或多种原发性 癌症的转移性疾病。
3. 本发明还涉及根据第1项或第2项的用途，其中所述绵羊副痘病毒是绵羊副痘病毒D1701、 NZ-2、 NZ-7、 NZ-10或orf-l 1抹。
在本发明的一个进一步的变化方案中，绵羊副痘病毒是通过将这些 抹传代获得的副痘病毒。
4. 本发明还涉及根据第1 - 3项中任一项的用途，其中所述绵羊 副痘病毒以灭活的形式存在。副痘病毒的灭活通过纟支术人员所知的 病毒灭活方法进行。在一个优选变化方案中，利用欧洲专利EP-B1-0312839所述的方法将绵羊副痘病毒灭活。
5. 本发明还涉及根据第1-4项中任一项的用途，其中癌症的治 疗导致患者的肿瘤大小缩小，即，所述药物分别导致肿瘤大小缩小 或质量减轻。
6. 本发明还涉及根据第l-5项中任一项的用途，其中通过本领 域技术人员已知的方法测量，对癌症的治疗降低了原发性肿瘤转移 的数目和大小。
7. 本发明还涉及根据上述第l-6项中任一项的用途，其中所述 抗癌剂选自天冬酰胺酶、博来霉素、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮 芥、顺賴、左旋天冬酰胺酶(colaspase)、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡 巴嗪、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、依托 泊苷、5-氟尿嘧啶、六甲蜜胺、羟基脲、异环磷酰胺、伊立替康、 曱酰四氢叶酸、洛莫司汀、氮芥、6-巯基。票呤、美司钠、氨曱蝶 呤、丝裂霉素C、米托蒽醌、泼尼松龙、泼尼松、曱基千肼—、雷洛 昔芬、链佐星、他莫昔芬、硫鸟噪呤、托泊替康、长春碱、长春新 碱、长春地辛、氨鲁米特(amnogluthethimide)、 L-天冬酰胺酶、硫唑 嘌呤、5-氮杂胞苷、克拉屈滨、白消安、己烯雌酚、2'，2'-二氟-脱氧胞 苷、多西他赛、红羟基壬基腺嘌呤、乙炔雌二醇、5-氟脱氧尿苷、5-氟脱氧尿苷一磷酸盐、磷酸氟达拉滨、氟曱睾酮、氟他胺、己酸羟 孕酮、伊达比星、干扰素、醋酸曱羟孕酮、醋酸曱地孕酮、美法 仑、米托坦、紫杉醇、喷司他丁、 PALA、普卡霉素、司莫司汀、替 尼泊普、丙酸睾酮、塞替派、三甲基蜜胺、尿苷、长春瑞滨、奥沙 利铂、吉西他滨、卡培他滨、埃博霉素(epothilone)及其天然或合成衍生物、托西莫单抗、tmbedectin 、替莫唑胺、曲妥珠单抗 (trastuzumab)、 西妥昔单^元(cetuximab)、 贝"f戈单^L(bevacizumab)、巾白 妥珠单抗(pertuzumab)、 ZD-1839 (Iressa)、 OSI-774 (Tarceva)、 CI-1033 、 GW-2016 、 CP-724/714 、 HKI-272 、 EKB-569 、 STI-571 (Gleevec)、 PTK画787、 SU誦11248、 ZD-6474、 AG國13736、 KRN画951、 CP-547、 632、 CP-673，451和索拉非尼(somfenib )。
本发明的药物组合物可以通过口服形式给药，例如但不限于 正常和肠溶衣片、力交嚢、丸剂、4分末、颗粒、酏剂、酊剂、溶液、 悬浮剂、糖浆、固体和液体气雾剂和乳剂。它们也可以通过非肠胃 形式给药，例如但不限于静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、肺瘤 内等制药领域普通技术人员公知的形式。本发明的药物组合物可以 通过局部应用合适的鼻内载体以鼻内形式给药，或者使用本领域普 通技术人员公知的经皮逸送系统通过经皮途径给药。
本发明药物组合物的剂量方案由本领域普通技术人员根据多种 因素来选择，这些因素包括但不限于接受者的年龄、体重、性别 和医疗状况、所治疗的疾病的严重程度、给药途径、接受者的代谢 水平和排泄功能、使用的剂型。
本发明的药物组合物优选地在给药前配制，并且包含一种或多 种药物可接受的赋形剂。赋形剂是隋性物质，例如但不限于载体、 稀释剂、调味剂、甜味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、粘合剂、药
片崩解剂和包封材料。
制剂可以是适合在人类或其它哺乳动物中给药的单位剂量形 式，单位剂量形式是包含单位剂量的物理上分散的单位。单位剂量 形式可以是一个胶嚢或片剂，或者是多个胶嚢或者片剂。"单位剂 量"是与 一 种或多种赋形剂结合的预定量的本发明的活性药物组合 物，其量计算为产生所需的治疗效果。剂量从每次用药大约103到大 约1012物理量的病毒颗粒不等，或者基于颗粒/千克/天的物理量。
本发明的药物组合物可以以单一每日剂量给药，或者总的每日 剂量可以以分开的剂量每天2次、3次或更多次给药。在以经皮形式递送时，当然，优选连续给药。
图1的说明
在棵鼠MDAMB 231乳腺癌模型中，绵羊副痘病毒(PPVO)和紫 杉醇(Taxol)联合的抗肺瘤活性优于使用紫杉醇或PPVO的单一治 疗。从第10天开始连接三天，以7.5mg/kg/天经静脉内给予紫杉醇 (泰素⑧(Taxol ) , Bristol Myers Squibb)。在移植后第13天经腹膜 内给予单一剂量的ppvo (lx106 TCIDso)或相应的安慰剂(n = 10只小 鼠/组)。
实施例
MDA-MB-231人乳腺癌细胞(ATCC # HTB26)在标准通用生长培 养基(UM: DMEM， 10% FBS， 10 mM HEPES， 2 mM L-谷氨酰胺，100 U/ml青霉素，100 |dg/ml链霉素)中在潮湿培养箱中在37° C和5% C02条件下培养。通过胰蛋白酶消化收获细胞，洗涤，计数，用冰 冷的磷酸盐緩冲液(PBS)调节为2.5xl0"田胞/ml，然后贮存在水上 直到移植时。在胁腹区皮下(s.c.)注射在0.2 ml总体积的PBS中的大 约5 x 106个细胞。实-险^吏用平均体重大约为20-25 g的8-10周龄的 雌性NCr棵鼠(Taconic, Germantown, NY)。肿瘤测量在移植后进行 10天。用公式(a x b x b)/2计算胂瘤大小。之后将小鼠随机化，分到 几个反映不同治疗的组中(11= 10只小鼠/组)。在第一组中，小鼠只接 受PBS作为对照组。在第二组中，从第10天开始连续3天以 7.5mg/kg/天静脉内给予紫杉醇(泰素⑧，Bristol Myers Squibb)。在第三 组中，在移植后第13天腹膜内给予单一剂量的PPVO (lx106 TCID5Q)。在第四组中，按照应用于第二组和第三组的剂量方案，联 合紫杉醇和PPVO给药。出于动物伦理的原因，当肿瘤达到小鼠体 重的大约10-15%时，或者当肿瘤结痂(scab)或溃烂时，处死动 物。
如图1所示，与第2组(D或第3组(4r)相比，第4组 d)的平均肿瘤大小明显缩小。因此，本发明第一次清楚地证明了绵羊副痘病毒(PPVO)和传统 抗癌剂的联合给药优于单独使用抗癌剂或PPVO的单一疗法。
参考文献
1. D. Kirn, RJ. Martuza, J. Zwiebel,舰她d 7, 781 (2001)
2. CM. Southam, TVT Jc^/. Sci. 22， 656 (1960)
3. R.L. Martuza， A. Malick， J,M. Markert, K丄.Ruffner, D.M. Coen， 252， 856(1991)
4. O. Weber等人.WO 02/04002
5. S.S. Legha J. C7/". (9腳/. 14, 7 (1996)
权利要求
1. 绵羊副痘病毒与至少一种另外的抗癌剂联用在制备治疗癌症 的药物中的用途。
2. 绵羊副痘病毒在制备与至少 一种另外的抗癌剂联合治疗癌症的药物中的用途。
3. 根据权利要求1和2中任一项的用途，其中所述癌症是黑素 瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠直肠癌、肝癌、膀胱癌、内分 泌系统癌症、神经系统癌症、'淋巴瘤或相应原发性癌症的转移性疾病。
4. 根据权利要求1-3中任一项的用途，其中所述绵羊副痘病毒 是绵羊副痘病毒D1701、 NZ-2、 NZ-7、 NZ-10或orf-l 1抹，或通过 将这些抹任意传代获得的副痘病毒。
5. 根据权利要求1-4中任一项的用途，其中所述绵羊副痘病毒 以灭活的形式存在。
6. 根据权利要求1-5中任一项的用途，其中所述抗癌剂是细胞 毒性剂。
7. 根据权利要求1 -6中任一项的用途，其中所述药物导致肿瘤 大小缩小或胂瘤质量减轻。
8. 根据权利要求1 -7中任一项的用途，其中所述抗癌剂选自天 冬酰胺酶、博来霉素、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、左旋 天冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴。秦、放线菌素D、柔红 霉素、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、六甲 蜜胺、羟基脲、异环磷酰胺、伊立替康、甲酰四氢叶酸、洛莫司 汀、氮芥、6-巯基嘌呤、美司钠、氨曱蝶呤、丝裂霉素C、米托蒽 醌、泼尼松龙、泼尼松、甲基节肼、雷洛昔芬、链佐星、他莫昔 芬、硫鸟噤呤、托泊替康、长春碱、长春新碱、长春地辛、氨鲁米 特、L-天冬酰胺酶、硫唑。票呤、5-氮杂胞苷、克拉屈滨、白消安、己 烯雌酚、2',2'-二氟-脱氧胞苷、多西他赛、红羟基壬基腺嘌呤、乙炔雌二醇、5-氟脱氧尿苷、5-氟脱氧尿苷一磷酸盐、磷酸氟达拉滨、氟 甲睾酮、氟他胺、己酸羟孕酮、伊达比星、干扰素、醋酸曱羟孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑、米托坦、紫杉醇、喷司他丁、 PALA、 普卡霉素、司莫司汀、替尼泊苷、丙酸睾酮、塞替派、三曱基蜜 胺、尿苷、长春瑞滨、奥沙利铂、吉西他滨、卡培他滨、埃博霉素 及其天然或合成衍生物、托西莫单抗、trabedectin、替莫唑胺、曲妥 珠单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、帕妥珠单抗、ZD-1839 (Iressa)、 OSI-774 (Tarceva)、 CI-1033 、 GW-2016、 CP-724，714、 HKI-272 、 EKB-569、 STI-571 (Gleevec)、 PTK-787、 SU-11248、 ZD画6474、 AG-13736、 KRN-951、 CP画547、 632、 CP-673,451和索拉非尼。
全文摘要
本发明涉及绵羊副痘病毒与至少一种另外的抗癌剂联合用于制备治疗癌症的药物的用途。本发明还涉及绵羊副痘病毒用于生产与至少一种另外的抗癌剂联合治疗癌症的药物的用途。
文档编号A61K35/76GK101312737SQ200680043950
公开日2008年11月26日 申请日期2006年10月12日 优先权日2005年11月24日
发明者O·韦伯 申请人:爱库里斯股份有限两合公司