专利名称：：用于改善APOE4阴性病人认知功能的PPAR-γ激动剂的制作方法用于改善APOE4阴性病人认知功能的PPAR-Y激动剂本发明涉及轻度认知损伤和阿尔茨海默氏病和其它痴呆的治疗或预防，其中特别是改善认知功能。阿尔茨海默氏病(AD)在1907年首次由巴伐利亚精神病医师AloisAlzheimer描迷。阿尔茨海默氏病是进行性的、衰竭性疾病，并且为引起痴呆的最常见原因。一般症状包括记忆损伤、认知功能紊乱、行为改变(包括偏执、妄想、抑制丧失)和语言功能下降。病理学上，传统上AD的特征在于两种不同类型的脑损伤的出现-神经炎性斑块(有时称老年斑)和神经纤维缠结。神经炎性斑块为细胞外的淀粉样(3-蛋白(A卩)沉积物，通常为丝状形式，横截面约10至150jim，并与轴突和树突损伤相关。Ap由淀粉样前体蛋白(APP)经一系列分泌酶裂解形成。Ap40,40个残基的肽，是细胞正常产生的最大量的A(3形式，然而，在神经炎性斑块中发现大量包含42个氨基酸的A卩(Ap42)。虽然AP4o也位于斑块中，但A&2与A(34o相比疏水性明显更大，因此更易于聚集。认为神经炎性斑块是经一段时间(几个月至几年)发展形成的。虽然淀粉样沉积的程度和认知损伤之间的关系仍有争论，但已知斑块形式的淀粉样沉积发生在临床症状出现之前。神经纤维缠结通常见于AD患者神经元的核周胞浆中。缠结由成对的纤维形成，所述纤维受损伤形成单环。这些高度不溶的纤维由异常高度磷酸化的微管相关蛋白tau组成。有证据表明缠结的形成是神经元对AP逐步聚集的反应。临床上，通常AD可以常染色体显性的方式遗传，然而，认为大多数病例(约90%)为散发的。这种疾病的两种类型为表型上高度相似的，与散发型AD比较，较罕见的家族型AD通常出现早的多(这样，通常认为散发型AD为迟发AD或LOAD)。一般表型的相似性说明表现常染色体显性型机理特征的信息(例如APP突变和早老素1和2基因)与迟发散发型AD相关。通常，家族型AD与A卩产生的增加有关，然而散发型AD可能是常规A卩产生的清除缺陷的结果。已经确定大量的散发型AD促进因素，包括年龄、低胆固醇浓度、高收缩压、高糖浓度、高胰岛素浓度、异常糖耐受和载脂蛋白E的e4等位基因的存在(KuusistoJ等人BMJ1997315:1045-1049)。关于AD的更多信息大体上见SelkoeDPhysiol.Rev.200181(2):741-766;WatsonG等人CNSDrugs200317(1):27-45。轻度认知损伤指患者有轻微的认知功能损伤的情况，所述损伤可从患者发病前基线检测，但严重度不足以达到AD诊断标准。这样，可认为MCI为正常衰老受试者的正常认知功能和痴呆中的异常认知功能之间的过渡状态。MCI可根据检测的认知缺陷的类型再分类。仅有记忆的缺陷代表遗忘型MCI;然而其它类型的MCI包括多种认知区域(包括记忆)的缺陷，或单独的、非记忆区域的缺陷。在群体研究中测量从遗忘型MCI至AD的进行率在每年10-20o/。的范围内(更多信息见Petersen等人ArchNeurol200158:1985-1992)。相似的引起认知缺陷的其它痴呆包括血管性痴呆、Lewy小体痴呆、额颞叶痴呆和帕金森氏病相关痴呆。载脂蛋白是糖蛋白，其与大脑发育、突触发生和对神经损伤的反应相关。载脂蛋白E(ApoE)是血浆脂蛋白的一个蛋白组分。ApoE的主要同工型有三种(即，ApoE2、ApoE3和ApoE4)，为在单基因座上三个等位基因的产物。因此，个体可为纯合子(APOE2/2、APOE3/3或APOE4/4)或杂合子(APOE2/3、APOE2/4或APOE3/4)。最常见的等位基因为APOE3,它在白种人(Caucasianpopulation)中的等位基因频率约O.78(BalesKR等人Mol.Interventions20022:363-375)，并且最常见的基因型为APOE3/3。三种同工型的氨基S吏序列仅表现出轻微变化，总结见下表1。表1-载脂蛋白同工型中的氨基酸序列变化<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>APOE4等位基因的携带与发展成AD的风险的相关性已经知道一段时间，并记录在文献中(StrittmatterWJ等人PNAS1993卯1977-1981;RosesADAnnRevMed199647:387-400)。然而，由于e4等位基因的存在为易患病因素且并不引发疾病，所以仅APOE的基因型不足以"^断^企测AD(MayeuxR等人7Vew五"g/./1998338:506-511)。在有两个APOE4等位基因的个体中，年龄导致(age-adjusted)的AD的风险是仅有一个APOE4等位基因个体的三倍以上，仅有一个APOE4等位基因的个体中年龄导致的AD的风险是没有APOE4等位基因个体的几乎三倍(Corder等人Science1993261(5123):921-3;K腦istoJ等人BMJ1994309:636-638)。相对于其它AD患者，APOE4纯合子的患者表现出较早的发病年龄、淀粉样蛋白负担增加和乙酰胆碱水平下降。APOE4等位基因频率在种族群体中变化，已发现在白种人中约0.15,但在AD患者中高达0.4(Saunders等人Neurology199343(8):1467-72)。APOE2，是三种常见等位基因中最罕见的，发现其具有相对于最常见的APOE3等位基因的保护作用，有APOE2等位基因的个体与没有APOE2等位基因的个体相比通常表现为疾病发作较晚(Corder等人NatureGenetics19947(2):180-4;BalesKR等人MolInterventions20022:363-375)。已发现在白种群体中APOE2等位基因频率为约0.07。最近的数据表明一旦可能的AD症状出现，APOE4状态与疾病进行速度无关。糖代谢在中枢神经系统的细胞功能中十分重要。已经证明在AD患者中区域特异的大脑糖代谢降低(ReimanEM等人NewEngJMed1996334:752-758;Alexander,GE等人AmJPsychiatry2002159:738-745),在LOAD和家族型AD中(SmallGW等人，PNAS200097:6037-6042)。因为在携带一个或两个APOE4等位基因的个体中，在临床症状发生的预测年龄之前许多年，就可检测到区域特异模式的大脑糖代谢的降低，因此有AD风险的患者的大脑糖代谢的降低与APOE状况相关(ReimanEM等人NewEngJMed1996334:752-758;RossorM等人，AnnalsNYAcadSci1996772:49-56;SmallGW等人，PNAS200097:6037-6042)。胰岛素在外周和中枢能量代谢中也十分重要。胰岛(3细胞分泌的血浆胰岛素在进食和禁食期间，调节血液中的葡萄糖水平，胰岛素敏感的葡萄糖转运体控制胰岛素敏感组织中的葡萄糖摄取率。血葡萄糖的增加导致胰岛素的释放，同时血葡萄糖的下降导致增加肝输出葡萄糖的反馈调节激素的释放。胰岛素能力降低，以刺激糖摄取并使得抑制肝糖输出(又称胰岛素抵抗)，和为补偿胰岛素抵抗的不足的胰岛素分泌反应，导致II型糖尿病。胰岛素经胰岛素受体介导的转运过程转运通过血/脑屏障。胰岛素的外周水平与中枢神经系统(CNS)中的水平相关，即，外周胰岛素的增加导致CSF胰岛素的增加。有证据表明，胰岛素与正常记忆功能相关，并且外周胰岛素代谢疾病，例如胰岛素抵抗和高胰岛素血症，可对记忆产生负面影响。胰岛素促进的葡萄糖利用的增加可导致乙酰辅酶A糖酵解产物，乙酰辅酶A为神经递质乙酰胆碱合成中的重要物质。乙酰胆碱水平的下降是AD的重要特征。过氧化物酶体增殖物活化受体y(PPAR-y)是配体激活转录因子的类固醇/曱状腺/维曱酸受体超家族的孤立成员。PPAR-y是独立基因编码的紧密相关的PPARs亚家族成员之一(DreyerC等人Cell199268:879-887;SchmidtA等人Mol.Endocrinol.19926:1634-1641;Zhu等人J.Biol.Chem.1993268:26817-26820;KliewerSA等人Proc.Nat.Acad.Sci.USA199491:7355-7359)。已分离三种哺乳动物的PPARs，称为PPAR-a、PPAR-y、PPAR-S(也称NUC-1)。三种PPARs通过结合DNA序列元件(称为PPAR反应元件(PPRE)),调节目的基因的表达。至今，已确认PPREs为许多调节脂代谢的基因编码蛋白的增强子，表明PPARs在脂肪形成信号级联和脂稳态中发挥重要作用(KellerH等人TrendsEndocrin.Met19934:291-296)。欧洲专利306228描述噻唑烷二酮衍生物类的PPAR-y激动剂，其作为胰岛素敏化剂用于治疗II型糖尿病。这些化合物有抗高血糖活性。其中描述的一种优选的化合物化学名为5-[4-[2-(N-曱基-N-(2-吡啶基)氨基)乙氧基]千基]瘗唑烷-2,4-二酮，并且通用名为罗格列酮。此化合物的盐，包括马来酸盐，在WO94/05659中描述。欧洲专利申请，公开号0008203，0139421,0032128,0428312,0489663,0155845,0257781,0208420,0177353,0319189,0332331,0332332,0528734,0508740;国际专利申请，公开号92/18501，93/02079,93/22445和美国专利号5104888和5478852，也公开了一些噢唑烷二酮PPAR-y激动剂。提及的具体化合物包括5-[4-[2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基]苄基]噻唑烷_2,4_二酮(也称吡格列酮)、5-[4_[(1-曱基环己基)曱氧基]苄基]噻唑烷-2,4-二酮(也称环格列酮)、5-[[4-[(3，4-二氢-6-羟基-2,5，7，8-四曱基-2&1-苯并吡喃-2-基)曱氧基]苯基]曱基]-2，4-噻唑烷二酮(也称曲格列酮)和5_[(2_千基_2,3_二氬苯并吡喃)_5_基曱基)噻唑烷_2，4_二酮(也称恩格列酮)。美国专利6,294,580(此专利的公开内容在此引用作为参考)描述了一9系列非噻唑烷二酮类的PPARy激动剂化合物，而是O-和N-取代的酪氨酸衍生物，仍然作为胰岛素敏化剂在II型糖尿病的治疗中有效。其中一种这样的化合物的化学名是N-(2-苯曱酰基苯基)-0-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)乙基]-L-酪氨酸(也称2(S)-(2-苯曱酰基-苯基氨基)-3-(4-[2-5-曱基-2-苯基-噁唑-4-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸或通用名法格立他扎)。大量临床证据表明大脑糖代谢的损伤AD期间出现，和在AD临床症状发生之前APOE4-携带者中出现(ReimanEM等人NewEngJMed1996334:752-758;RossorM等人，AnnalsNYAcadSci1996772:49-56;SmallGW等人，PNAS200097:6037-6042)。合并临床和流行病学证据，还表明胰岛素抵抗可影响发展为AD的危险。然而，胰岛素抵抗和AD之间确切的本质关系是复杂的，并且现在仍不完全清楚。已表明高胰岛素血症是AD的危险因素。在一项研究中，作者的结论为AD不依赖于APOE基因型(KuusistoJ等人BMJ1997315:1045-1049),在此项研究中在高胰岛素血症受试者中，没有APOE4等位基因(APOE4-)的高胰岛素血症老年受试者的AD患病率为7.5%,与之相比在正常血胰岛素受试者中AD患病率为1.4%;同时在高胰岛素血症受试者中，有APOE4等位基因的高胰岛素血症老年受试者(APOE4+)的AD患病率为7.0。/。，与之相比在正常血胰岛素受试者中AD患病率为7.1%。其它研究表明在APOE基因型和胰岛素抵抗之间存在联系(WatsonG等人CNSDrugs200317(1):27陽45)。例如，非APOE4等位基因纯合子的患者胰岛素代谢异常(特别是血浆胰岛素水平增加)，说明这些患者中发展为AD的可能因素，而APOE4等位基因纯合子的患者表现出正常的胰岛素外周水平。两组与非AD受试者相比都表现出脑脊液胰岛素水平的减少(CraftS等人Neurology199850:164-168)。此外，没有APOE4等位基因的患者相对于APOE4+患者胰岛素介导的葡萄糖清除率下降(CraftS等人Neuroendocrinology199970:146-152)。公认正常的胆碱能信号传导是精神过程例如记忆的正常功能所必须的。大量证据表明AD患者胆碱能信号传导异常，异常程度与认知损伤水平相关。AD的多方面研究对疾病进行和观察到的胆碱能功能障碍之间的关系仍不完全清楚。尽管大量的胆碱酯酶抑制剂表现出用于治疗AD的有效性，并伴随可接受程度的不良反应，这些抑制剂包括他克林(CognexTM)、加兰他敏(Reminyl/Radazyne)、利凡斯的明(Exelon)和多奈咪齐(Aricept),但至今未证明毒蕈碱或烟碱乙酰胆碱受体激动剂的使用有临床价值。更多信息见，例如，TerryAV等人J.Pharmacol.Exp.Ther.2003306(3):821-827。在一项最近发表的研究中，研究了多奈哌齐在轻度认知损伤(在正常衰老和早期AD之间的过渡状态)的个体中的用途，多奈哌齐在给药后的前12个月期间表现出患者发展为AD的比例减少，虽然3年时两组没有区别。此外，在前12个月的有益作用后，在随后的24个月出现疾病的更快速恶化。虽然在3年后，治疗群体与安慰剂组相比无显著性差异，但携带一个或两个拷贝APOE4等位基因的患者与安慰剂组相比发展成AD的危险下降(PetersenR等人NewEngl.J.Med.2005352:2379-2387)。认为谷氨酸导致的N-曱基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的过度激活有助于AD发病。因此，NMDA受体拮抗剂也是在AD临床治疗中使用的一类化合物美金刚(AxuraTM、NamendaTM)是首个FDA批准的NMDA受体拮抗剂。基于金刚烷母核，美金刚表现出显著的延緩中度至重度AD患者恶化速度的作用，同时不良反应发生率低(ResibergB等人NewEngl.J.Med.2003348:1333-1341)。最近的数据的表明美金刚的作用机理不是单独的NMDA阻断，还可能包括对a7烟碱乙酰胆碱受体的作用(Aracava等人JPharmacolExperTherapeutics,2005312(3):1195-1205)。在细胞和分子水平，在AD患者大脑中观察到许多炎症过程，并且认为这些炎症过程在疾病的发展和进行中是重要的。有证据表明非甾体抗炎药(NSAIDs)可降低AD的发病风险，减緩疾病的进行并降低认知症状的严重程度(int，VeldBA等人Epidemol.Rev.200224(2):248-268;EtminanM等人BMJ2003327:128-132)。然而，由于在受试者中意外出现心血管作用，临床实验未成功完成。完成了一个使用罗非昔布的针对AD和MCI的临床试验(Reines等人Neurology200462:66-71)但没有表现出任何有效性。以前提出胰岛素敏化剂在治疗AD中的用途。国际专利申请W098/39967公开了治疗或预防AD的方法，所述方法通过给予降j氐血清胰岛素水平的药物，例如噻唑烷二酮。国际专利申请W099/25346公开了治疗或预防细胞凋亡介导的疾病的方法，所述疾病例如神经退行性疾病，包括AD和帕金森氏病，所述方法通过给予细胞凋亡抑制剂，例如胰岛素敏化剂，如罗格列酮。国际专利申请WO00/32190公开了治疗或预防AD的方法，所述方法通过给予PPAR-y激动剂，例如噻唑烷二酮类吡格列酮和罗格列酮。国际专利申请WO00/35437公开了改善精神行为下降的患者精神行为的方法，所述方法通过给予胰岛素敏化剂，例如噻唑烷二酮类吡格列酮和罗格列酮。在帕金森氏病模型中，有证据表明噻唑烷二酮类(包括罗格列酮和吡格列酮)可保护多巴胺能细胞防止多种毒性损伤，包括乙醛(Jun等人(2006)BiochemBiophysResComm340,221-227)、MPTP(Dehmer等人(2004)JNeurochem88,494-501)和8-OHDA(Chen等人(2004)FASEB18,1162-1164)。在此专利申请最早优先权之前，没有明确的证据表明使用PPAR-y激动剂以改善患有或易患MCI、AD或其它痴呆的受试者认知功能，仅对非APOE4等位基因纯合子的受试者有益，并且对APOE4等位基因非携带者的益处最大。图1表示治疗实施例2的群体中，模型校正(modeladjusted)的ADAS-cog从基线的改变。图2表示不同治疗方案和APOE等位基因状态的实施例2的基因型群体中，模型校正的ADAS-cog从基线的改变。图3表示在实施例2的APOE4杂合子("Het")和APOE4纯合子("Homo")群体中，才莫型校正的ADAS-cog从基线的改变。本发明提供了改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的方法，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子，所述方法包括下列步骤(i)筛查受试者，确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子；之后(ii)向所述受试者给药安全并且有效量的PPAR-y激动剂。在本发明的一个实施方案中，筛查步骤(i)包括确定受试者携带单拷贝的APOE4等位基因。例如可确定受试者为APOE3/APOE4。在本发明的更优选的实施方案中，筛查步骤(i)包括确定受试者为APOE4-(即，不携带APOE4等位基因)。筛查步骤(i)可包括，例如确定受试者是否有APOE2或APOE3等位基因。例如可确定受试者为APOE3/APOE3或APOE2/APOE3。例如受试者可患有或易患(例如患有)MCI或AD。在本发明的一个实施方案中，受试者患有MCI(特别是健忘型MCI)。在本发明的另一个实施方案中，受试者患有阿尔茨海默氏病。在本发明的另一个实施方案中，受试者易患MCI(特别是健忘型MCI)。在本发明的另一个实施方案中，受试者易患阿尔茨海默氏病。在另一个实施方案中，受试者患有或易患其它痴呆，例如血管性痴呆、Lewy小体痴呆、额颞叶痴呆和帕金森氏病相关痴呆。本发明还提供了筛查患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆患者的方法，所述方法帮助预测受试者对给予PPAR-y激动剂的反应，包括筛查以确定是否受试者携带0个或1个拷贝的APOE4等位基因。特别的，所述方法可包括筛查以确定受试者是否为APOE4-。筛查方法可包括，例如确定受试者是否有APOE2或APOE3等位基因。另一方面本发明提供了PPAR-y激动剂，其用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能，预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。受试者可，例如，预先确定为APOE4-。另一方面本发明还提供了PPAR-y激动剂在改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能中的用途，预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。受试者可，例如，预先确定为APOE4-。另一方面本发明提供了PPAR-y激动剂在制备用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的药物中的用途，预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。受试者可，例如，预先确定为APOE4-。本发明还提供了改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的方法，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子，所述方法包括向所述受试者给药安全并且有效量的PPAR-y激动剂；和用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的PPAR-y激动剂，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子；和PPAR-y激动剂在改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能中的用途，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子；和PPAR-y激动剂在制备用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的药物中的用途，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。根据本发明的具体方面，在所述方法、PPAR-Y激动剂或用途中，所述受试者为APOE4-。本发明还提供了改善受试者认知功能的方法，包括向所需受试者给药治疗有效量的PPAR-Y激动剂，其中所述受试者不是APOE4等位基因纯合子(例如受试者为APOE4-)。本发明还提供了确定患有或可能发展为影响认知行为的疾病的受试者是否能够使用PPAR-Y激动剂治疗的方法，包括确定所需受试者是否有两个APOE4等位基因，其中如果受试者没有两个APOE4等位基因(即，受试者有零个或一个APOE4等位基因),那么受试者可以使用PPAR-Y激动剂治疗。具体的此方法包括确定所需受试者是否有0个APOE4等位基因，其中如果受试者有0个APOE4等位基因，那么受试者可以使用PPAR-Y激动剂治疗。本发明还提供了试剂盒，其包括(i)PPAR-y激动剂和(ii)指导向非APOE4等位基因纯合子的受试者(例如预先确定受试者不是APOE4等位基因纯合子)给药PPAR-Y激动剂(一般为药学组合物形式)的说明书。例如所述说明书指导向患有或易患MCI或阿尔茨海默氏病或其它痴呆的非APOE4等位基因纯合子的受试者给药PPAR-Y激动剂。根据本发明的具体方面，受试者是APOE4-(例如预先确定受试者没有任何拷贝的APOE4等位基因)。本发明还提供了试剂盒，其包括PPAR-y激动剂和一种或多种用于确定受试者有一个还是两个(例如两个)APOE4等位基因的试剂。在这种试剂盒中，一种或多种试剂可选自探针、引物、抗体或其组合。或者本发明的上述方面中，受试者可携带、或可确定为或预先确定为携带单拷贝的APOE4等位基因。例如受试者可为或可确定为或预先确定为APOE3/APOE4。如下列实施例所示，发明者意外发现PPAR-y激动剂罗格列酮与安慰剂组相比，在不携带APOE4等位基因患有轻度至中度AD的患者中产生临床相关的认知功能改善。结果说明携带一个拷贝的APOE4等位基因的患者在罗格列酮治疗中经历了认知功能的稳定(即，既无显著改善也无显著下降)。结果说明APOE4等位基因纯合子的患者在罗格列酮治疗中可经历临床下发明者试图用理论说明此发明，并非限制。根据一种理论，同工型之间的氨基酸序列差别导致蛋白折叠的不同。特别是ApoE2和ApoE3的特征在于在112位为Cys且在61位为Arg。ApoE4的特征在于在112位为Arg且在61位为Arg。在折叠蛋白中61和112位残基相互作用并且因为Arg带正电且Cys带负电，ApoE2和ApoE3在此区域的蛋白折叠比ApoE4的蛋白折叠更紧密。尽管所有的ApoE同工型经历了细胞内降解，认为由于同工型之间的构像区别导致ApoE4经历了更快速的降解。在降解中产生的片段具有脂质和受体结合位点，它们一起导致线粒体毒性。ApoE4片段的脂质结合位点是比ApoE2或ApoE3片段更活跃的脂质结合物。因此，ApoE4片段结合并且破坏线粒体的程度较ApoE2和ApoE3片段更大；这种破坏也影响了线粒体从胞体转运至突触。这种破坏也可致使线粒体对PPAR-y激动剂治疗所导致的葡萄糖或乳糖底物增加的反应减少。预期在2个拷贝的APOE4等位基因受试者中比在1个拷贝等位基因受试者中这种作用更大，并且在有1个APOE4等位基因受试者中比在无拷贝携带的受试者中这种作用更大。受试者携带0个、1个还是2个拷贝的APOE4等位基因的预先确定可，例如，通过本文描述的APOE4筛查方法进行。在本发明的一个实施方案中，受试者患有II型糖尿病。在本发明的另一个实施方案中，受试者未患有II型糖尿病。以确定APOE4等位基因存在或缺失(或APOE2或APOE3等位基因存在或缺失)的对受试者的诊断筛查方法在文献中有详细记录，并在本领域技术人员能力之内。APOE4等位基因的缺失可通过表明等位基因存在的测试的阴性结果直接确定，或间接确定，例如通过表明APOE2和APOE3等位基因存在的测试的阳性结果(从而排除APOE4等位基因存在的可能性)。筛查方法学可基于许多方法例如(ApoE蛋白本身或其编码核酸的)等电聚焦方法、免疫学方法、免疫化学方法或测序方法。具体方法包括使用限制性片段酶或TaqMan引物的基于PCR的方法。免疫学方法包括使用同工型特异性抗体的ApoE同工型^f企测。然而，免疫学检测方法可受抗体交叉反应性的干扰，影响结果的可靠性。免疫化学方法包括国际专利申请WO94/09155中描述的方法(与授权专利EP0625212、JP03265577和US5508167相关),所述国际专利申请公开了检测ApoE4存在或缺失的方法，从而诊断AD。WO94/09155中公开的检测ApoE4存在或缺失的方法也在本发明中使用。简言之，来自受试者的样品(例如，血液样品)与固体载体接触，设计所述固体载体特异地与巯基反应。之后液体样品从固体载体上分离，并使用合适的抗体检测ApoE的存在。在分离的样品中ApoE4的存在说明受试者是APOE4等位基因的携带者。不同于ApoE2和ApoE3，ApoE4蛋白不包含半胱氨酸残基，因此不与固体载体反应且并不固定在固体载体上。在液体样品流过固体载体后，液体样品中未结合的ApoE的存在说明个体为ApoE4+;在液体样品流过固体载体后，液体样中ApoE免疫活性的缺失说明个体为ApoE-。由于这种方法不要求ApoE同工型的免疫学分化，因此通过此方法很大程度的避免了抗体特异性的问题。测序方法包括受试者ApoE蛋白或编码ApoE的DNA的分离和纯化，使用常规方法测定氨基酸或DNA序列，和结果与不同等位基因的已知氨基酸或DNA序列的比较。优选的确定APOE基因型的方法包括使用基于PCR的方法-主要进行部分APOE基因的PCR,随后用识别DNA碱基(区分等位基因)的限制性内切酶消化，并经凝胶电泳或最近使用的TaqMan实时定量PCR。特别的，APOE基因型可使用已建立的Taqman方法，Taqman方法为使用等位基因特异性的荧光探针，依赖5，-核酸酶的荧光检测系统。这些探针只有在与模板结合时才发荧光。这种方法在Macleod等人EurJClinicalInvestigation200131(7):570-3中有描述。用于确定APOE基因型的市售产品在LabCorp和AthenaDiagnostics公司有售。患者认知功能的改善可由一种或多种已建立的方法确定，例如ADAS-cog和/或CIBIC+和/或DAD方法(每种方法细节在本文其它地方描述，并且相关文献在此引用作为参考)。优选的方法是ADAS-cog。经24周治疗期，合适的ADAS-cog改善为至少l分，尤其是至少2分。另一种可能的方法是Buschke选择提醒测试(BuschkeSelectiveRemindingTest)(GroberE等人Neurology198838:900-903)。"认知功能的改善"指经过一段时间的药物治疗的认知治疗中相对于未治疗组个体的改善。由于痴呆(例如AD)患者通常随时间认知功能下降，"认知功能的改善"包括下降緩慢或停止，也包括绝对改善。如实施例2中所示，认知功能的绝对改善是执行本发明的优选方法所导致的。本文使用的术语PPAR-y激动剂指包括作为PPAR-y受体激动剂或部分激动剂的化合物或组合物。本发明中使用的合适的PPAR-y激动剂包括二十二碳六烯酸、前列腺素J2、前列腺素J2类似物(例如厶12-前列腺素和15-去氧-厶12'14-前列腺素J2)、法格立他扎(GI262570)、噁唑烷二酮类和瘗唑烷二酮类。示例性的噻唑烷二酮类包括曲格列酮、环格列酮、吡格列酮、罗格列酮(BRL49653)、达格列酮和恩格列酮。优选的，PPAR-y激动剂为p塞唑烷二酮。更优选的，所述蓬唑烷二酮为罗格列酮或吡格列酮，特别优选的为罗格列酮。对法格立他扎也特别感兴趣。本发明包括对其它PPAR受体(例如PPAR-a和PPAR-S)有选择性的PPAR-y激动剂("选择性"理解为激动剂活性对PPAR-y是对PPAR-a或PPAR-S的例如至少IO倍，例如至少50倍)。用于评价相对激动剂活性的合适方法为在下述转染实验中得到的ec50值。例如选择性PPAR-y激动剂在PPAR-y实验中的ec50值是PPAR-a或PPAR-s实验中得到的ec50值至多1/10。本发明还包括对一种或多种其它的PPAR受体，例如PPAR-a和/或PPAR-S也有显著激动活性的PPAR-y激动剂。PPAR受体激动剂活性可通过常规筛查方法测定。合适的筛查例如下述方法结合测定使用亲近闪烁分析(SPA)(ScintillationProximityAssay)检测化合物结合于hPPARy、hPPARa或hPPARS的能力。PPAR配体结合域(LBD)可表达在大肠杆菌中作为多聚组氨酸标记的融合蛋白，并纯化。之后LBD用生物素标记，并固定在链霉亲合素包被的亲合闪烁珠上。然后该珠使用恒量合适的放射性配体孵育(对PPARy使用5-{4-[2-(甲基-吡啶-2-基-氨基)-乙氧基]-节基卜p塞唑烷-2,4-二酮(J.Med.Chem1994，37(23)，3977),并且对PPARa和PPARS使用被标记的GW2433(配体结构和合成见Brown,P.J等人Chem.Biol.19974:909-918),并將育不同浓度的4全测化合物，在平4軒后结合于亲合闪烁珠的放射活性，可通过闪烁计数仪测量。通过含有50liM的对应未标记配体的对照孔测定非特异性结合的量，从每个数据点中减去非特异性结合的量。对于每种被检测的化合物，将配体浓度对放射性配体结合的CPM进行拟合，并通过假设为单一竟争性结合的数据的非线性最小二乘法拟合评估近似的Ki值。此实验的细节在他处有报道(见Blanchard,S.G.等人Anal.Biochem.1998257:112-119)。转染测定17化合物可在CV-1细胞的瞬时转染实验中检测激活PPAR同工型的能力筛查化合物功能效力(反式激活实验)。可使用之前建立的嵌合受体系统，比较不同受体亚型在相同目的基因上的相对转录活性，并防止对内源性受体激活的结果的解释复杂化。见，例如，Lehmann,J.M等人J.Biol.Chem.,1995270:12953-6。鼠和人的PPARa、PPARy和PPARS的每种配体结合域融合于酵母转录因子GAL4的DNA结合域。用表达各种PPAR嵌合体的载体和报告基因一起瞬时转染CV-1细胞，报告基因结构包含5个拷贝的使分泌性胎盘碱性磷酸酶(SPAP)和P-半乳糖香酶表达的GaL4的DNA结合位点。在16小时后，培养基更换为补充10%去脂胎牛血清的DME培养基和合适浓度的检测化合物。在24小时后，制备细胞提取物并测定碱性磷酸酶和(3-半乳糖苷酶活性。使用(3-半乳糖苷酶活性作为内标校正碱性磷酸酶活性(见，例如Kliewer,S.A.，等人Cell199583:813-819)。在hPPARy测定中罗格列酮(BRL49653)可作为阳性对照。在hPPARa测定中阳性对照可为2-4-[2-(3-[4-氟苯基]-l-庚基脲基)乙基]-苯氧基-(2-曱基丙酸(WO97/36579)。在PPARS测定中阳性对照可为2-{2-曱基-4-[({4-曱基-2-{三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-5-基}甲基)硫基]苯氧基}乙酸(WO01/00603)。测定化合物达到相对于合适的阳性对照50%活性时的浓度为EC50。在上述结合实验中"激动剂"通常对相关PPAR的pKi至少为6.0,优选至少为7.0，并在上述转染实验中在l(T5M或更少浓度下对于适当阳性对照达到相关PPAR的至少50%激活。任选，在本发明中使用多于一种的PPAR-y激动剂(例如，两种PPAR-y激动剂组合)。在本发明的优选实施方案中使用单一的PPAR-y激动剂。根据本发明PPAR-y激动剂依据标准药物生产，常规配制为药物组合物。对于本领域的技术人员是明确的，药物可以药学可接受盐或溶剂化物形式存在。合适的溶剂化物包括水合物。合适的盐包括与有机和无机酸或碱形成的盐。药学可接受的酸加成盐包括与下述酸形成的盐氢氯酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、三氟乙酸、三苯基乙酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、琥珀酸、草酸、反丁烯二酸、马来酸、苹果酸、谷氨酸、天门冬氨酸、草酰乙酸、曱磺酸、乙磺酸、芳磺酸(例如对曱苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸或萘二磺酸)、水杨酸、戊二酸、葡萄糖酸、丙三羧酸、肉桂酸、被取代的肉桂酸(例如，苯基、曱基、曱氧基或囟素取代的肉桂酸，包括4-曱基和4-甲氧基肉桂酸)、抗坏血酸、油酸、萘曱酸、羟基萘曱酸(例如1-或3-羟基-2-萘曱酸)、萘丙烯酸(例如萘-2-丙烯酸)、苯曱酸、4-曱氧基苯曱酸、2-或4-羟基苯甲酸、4-氯苯曱酸、4-苯基苯曱酸、苯丙烯酸(例如1,4-苯二丙烯酸)和羟乙基磺酸。药学可接受碱盐包括铵盐、碱金属盐例如钠盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐，和与有机碱例如二环己胺和N-曱基-D-葡萄糖胺形成的盐。当PPAR-y激动剂是罗格列酮，优选罗格列酮为马来酸罗格列酮形式。当PPAR-y激动剂是吡格列酮，优选吡格列酮是盐酸吡格列酮形式。当PPAR-y激动剂是法格立他扎，示例性的盐形式是钠盐。合适的制剂包括口服、非胃肠道(包括皮下、皮内、肌内、静脉和关节内)、吸入(包括细微粒粉剂或雾剂，可通过各种类型的定剂量施压的气雾剂、喷雾剂或吸入器产生)、直肠和局部(包括皮肤、含服、舌下和眼内)给药的制剂，尽管最合适的给药途径依赖于例如接受者的情况和相关药物。制剂可方便的以单位剂型存在，并可通过药学领域众所周知的方法制备。所有方法包括将活性成分加入与含有一种或多种副成分的载体结合。一般制剂通过均匀地和紧密地加入活性成分，使活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者结合而制备，之后如果需要，将产物制成所需的制剂。在本发明中适合于口服给药使用的制剂可以分散单位存在，例如胶嚢、扁胶嚢或片剂，每种包含预先确定量的活性成分；例如粉剂或颗粒剂；例如水或非水液体的溶液或悬浮液；或例如水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。活性成分也可以药丸、药糖剂或糊剂存在。可通过压制或模印制造片剂，任选地，使用一种或多种副成分。压制的片剂可通过在合适的机器上压制自由流动形式，例如粉末或颗粒形式的活性成分，任选地，与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性或分散剂混合。模印片可通过在合适的机器上模印经惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物制造。任选地，片剂可包衣或刻痕，并可配制成提供緩慢释放或控释片剂中活性化合物的形式。非胃肠道给药的制剂包括水和非水的灭菌注射液，注射液可包含抗氧化剂、緩冲液、抑菌剂和使制剂与接受者血液等渗的溶质；和水和非水的灭菌注射混悬液，可包括助悬剂和增稠剂。制剂可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安剖瓶和药瓶，并在冷冻干燥(冻干)条件下储存，只需在使用前加入灭菌的液体载体，例如盐水或注射用水。临时注射溶液和混悬液可由灭菌粉剂、颗粒剂和之前描述的片剂制备。通过吸入局部运输至肺的干燥粉末组合物可存在于，例如吸入器或吹入器中使用的胶嚢和例如明胶的药包(cartridge),或例如薄铝箔罩。粉末混合制剂通常包含用于吸入的本发明化合物的粉末混合物和合适的粉末基质(载体/稀释/赋形物)例如单糖、二糖或多糖(例如乳糖或淀粉)。优选使用乳糖。用于通过吸入局部运输至肺的喷雾组合物可配制为例如使用合适的液化推进剂从施压包装输出的水溶液或混悬液或气雾剂，所述施压包装例如定剂量的吸入器。适于吸入的气雾组合物可为混悬液，也可为溶液，并且通常包含式(I)化合物，任选地与其它治疗活性成分和合适的推进剂例如碳氟化合物或含氢的氯氟烃或其混合物组合，特别是氢氟代烷，例如二氯二氟曱烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷，特別是1，1,1,2-四氟乙烷、1，1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷或其混合物。二氧化碳或其它合适的气体也可作为推进剂使用。气雾组合物可没有赋形剂或任选地包含本领域众所周知的其它制剂赋形剂，如表面活性剂，例如油酸或卵磷脂和共溶剂例如乙醇。施压制剂通常保存在阀门(例如定量阀门)封闭的罐中(例如铝罐)，并装入有接口的执行装置。理想的通过吸入给药的药物具有可控的粒径。用于吸入支气管系统的合适的粒径通常为l-10)im,优选2-5pm。具有粒径超过20pm的颗粒通常太大，不能吸入到达小气道。为了实现这种粒径，生产的活性成分的颗粒可通过常规方法例如微粉化减小大小。所需部分通过空气分类(airclassification)和过筛分离出来。优选地，颗粒为晶态。当使用赋形剂例如乳糖时，通常赋形剂的粒径比本发明的吸入药物大很多。当赋形剂为乳糖时，通常以磨成粉的乳糖存在，其中不超过85%的乳糖颗粒的MMD为60-90pm并且不少于15%的颗粒MMD低于15pm。鼻内喷雾制剂可使用水或非水载体，加入例如增稠剂、緩冲盐或酸或碱调节pH、等渗性调节试剂或抗氧化剂配制。通过雾化吸入的溶液可使用水性载体，加入例如酸或碱、緩冲盐、等渗性调节试剂或抗菌剂配制。可通过过滤或在高压灭菌器中加热灭菌，或为无菌产品。用于直肠给药的制剂可以与常见载体，例如可可油或聚乙二醇作为栓剂存在。用于口腔内局部给药例如含服或舌下给药的制剂，包括在调t朱基质例如蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶中含有活性成分的锭剂，和在基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中含有活性成分的软锭剂(pastilles)。应理解除了上文特别描述的成分，本发明的制剂可包括对于所需制剂类型相关的其它本领域中的常规试剂，例如适合于口服给药的试剂可包括调味剂。当PPAR-y激动剂为罗格列酮或吡格列酮时，化合物优选配制为口服给药制剂，特别是片剂。才艮据伴随MCI、AD或其它痴呆的认知问题，理想的是将PPAR-y激动剂配制为持续释放剂型，从而减少所需的给药频率(例如每日单计量给药)。当PPAR-y激动剂为罗格列酮时，特別适合緩释制剂例如WO05/013935中公开的类型(尽管这些制剂也可应用于其它PPAR-y激动剂)。此处描述的片剂包括含有两种不同的活性组合物的片芯，速释制剂和緩和释放制剂。此外，片剂用羟丙基曱基纤维素(HPMC)包衣包裹，有两个孔穿透通过包衣，一个渗入速释的储库，一个渗入緩和释放的储库。这种设置保证罗格列酮的高度可控溶解。2mg、4mg或8mg(例如8mg)的单一片剂可例如每天给药一次。因此，本发明一方面提供了如上所述的方法、PPAR-y激动剂、用途或试剂盒，其中PPAR-y激动剂以緩释片剂形式存在，片剂包括含有速释剂型的储库和緩和释放剂型的储库的片芯。特别提供了方法、PPAR-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述片剂由例如HPMC包衣包裹，有两个孔穿透通过包衣；至少一个(例如一个)渗入速释的储库，并且至少一个(例如一个)渗入緩和释放的储库。这种8mg罗格列酮緩释片剂通常可包含速释的储库中3mg的罗格列酮和緩和释放的储库中的5mg罗格列酮。这种4mg罗格列酮緩释片剂可通常包含速释的储库中的1.5mg的罗格列酮和緩和释放的储库中2.5mg的罗格列酮。这种2mg罗格列酮的緩释片剂可通常包含速释的储库中0.75mg的罗格列酮和緩和释放的储库中1.25mg的罗格列酮。PPAR-y激动剂的合适的每日剂量对本领域技术人员是明确的，并且依赖于所选择的具体PPAR-y激动剂。例如，在使用罗格列酮时，每日剂量通常在O.Olmg至12mg范围内(例如2mg、4mg或8mg每日)。8mg或更多，例如8mg的每日剂量是特别合适的。当本发明用于APOE4杂合子时，给予较高剂量(如，4mg或更多，例如4mg或8mg)的罗格列酮似乎是有利的。在本发明中PPAR-y激动剂的使用可联合一种或多种用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的其它药物。用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的其它药物包括胆碱酯酶抑制剂(例如他克林、加兰他敏、利凡斯的明或多奈派齐)和NMDA抑制剂(例如美金刚)。本发明中PPAR-y激动剂的使用可与一种或多种用于治疗或预防其它痴呆的其它药物联合给药。其它的药物包括非甾体抗炎药(NSAIDs),例如萘普生、布洛芬、双氯芬酸、巧l哚美辛、萘丁美酮、吡罗昔康、塞来昔布和阿司匹林。其它可与本发明中PPAR-y激动剂联合的药物包括HMG-CoA还原酶抑制剂，例如他汀类药物(例如辛伐他汀(舒降之)、阿托伐他汀(立普妥)、瑞舒伐他汀(可定)、氟伐他汀(来适可))。对本发明中PPAR-y激动剂(特别是罗格列酮，例如马来酸罗格列酮)与多奈派齐(例如盐酸多奈派齐)的联合特别感兴趣。根据用于同时给药的联合治疗中使用的各个药物，可合并配制成制剂(可制备稳定制剂并且理想的剂量给药方案是相容的)或者药物可分别配制成制剂(对共同给药或分别给药通过相同或不同途径)。应理解本发明的方法和用途可用于预防，也可(更适合)用于治疗患有轻度认知损伤、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者。本文所用给药相关术语同时给药指在相同时间的给药，使得各个药物同时存在于受试者体内。除了药物的共同给药(通过相同或不同途径)外，同时给药可包括在不同时间的给药(通过相同或不同途径)。实施例实施例1-马来酸罗格列酮緩释(extendedrelease)片剂的制备包含2mg、4mg或8mg的PPAR-y激动剂罗格列酮(马来酸盐形式)的緩释片剂根据WO05/013935中描述的方法制备(对应于实施例3)。(a)2mg罗格列酮緩释片剂下列组合物形成片芯表2-2mg罗格列酮片剂第一组合物(速释层)。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表3-2mg罗格列酮片剂的第二组合物(緩和释放(modifiedrelease)层)。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>通过压制形成7mm常规凹面双层200mg片剂(50mg的速释层和150mg的緩和释放层)。片芯用HPMC基的底衣和在pH5.5可溶的聚曱基丙烯酸酯树脂包衣至总重量217.3mg。在包衣片芯的两个主要表面每面上钻直径3.0mm的开口穿透包衣，以暴露片芯表面。最终片剂包含2mg罗格列酮-速释层中0.75mg的罗格列酮和緩和释放层中L25mg的罗格列酮。(b)4mg罗格列酮緩释片剂下列组合物形成片芯表4-4mg罗格列酮片剂第一组合物(速释层)。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表5_4mg罗格列酮片剂第二种组合物(援和释放层)。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>通过压制形成7mm常规凹面双层200mg片剂(50mg的速释层和150mg的緩和释放层)。片芯用HPMC基的底衣和在pH5.5可溶的聚曱基丙烯酸酯树脂包衣至总重量217.3mg。在包衣片芯的两个主要表面每面上钻直径3.0mm的开口穿透包衣，以暴露片芯表面。最终片剂包含4mg罗格列酮-速释层中1.5mg的罗格列酮和緩和释放层中2.5mg的罗格列酮。(a)8mg的马来酸罗格列酮緩释片剂下列组合物形成片芯表6-8mg罗格列酮片剂第一组合物(速释层)。_<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表7-8mg罗格列酮片剂第二组合物(緩和释放层)。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>通过压制形成7mm常规凹面双层200mg片剂(50mg的速释层和150mg的緩和释放层)。片芯用HPMC基的底衣和在pH5.5可溶的聚曱基丙烯酸酯树脂包衣至总重量217.3mg。在包衣片芯的两个主要表面每面上钻直径3.0mm的开口穿透包衣，以暴露片芯表面。最终片剂包含8mg罗格列酮-速释层中3mg的罗格列酮和緩和释放层中5mg的罗格列酮。实施例2-PPAR-y激动剂(马来酸罗格列酮)在治疗阿尔茨海默氏病患者中对ADAS-cog和CIBIC+的作用。方法对511名受试者进行完全以治疗为目的(ITT)群体的分析，受试者随机分配至四种特定治疗给药方案中的一种。对63%(323/511)的ITT群体进行基因型分析。患者群体包括白人男性和女性，年龄在50-85岁之间，被诊断患有轻度至中度AD，患者群体没有接受任何可能对研究造成不良影响的药物(例如PPAR-y激动剂和常规AD药物)且没有患有其它可能的不利疾病(例如糖尿病或主要的精神疾病)。患者每日一次接受安慰剂或三种剂量水平(如实施例1中所述2mg、4mg和8mg片剂)的緩释罗格列酮。使用阿尔茨海默氏病评估认知量表(ADAS-cog;更多信息见RosenWG等人Am.J.Psychiatry.1984141:1356-1364)和伴随看护者信息的医师面谈印象改变(CIBIC+;更多信息见KnopmanDS等人Neurology199444:2315-2321)检测患者；并且使用痴呆残疾评估(DAD,更多信息见GelinasL等人AmJOccupTher199953:471-81)和神经精神调查表(NPI,更多信息见Cummings等人(1994)Neurology44,2308-2314)在研究开始(基线)和研究过程中(治疗8周、16周和24周后)进行二次评定。下文APOE基因型使用McLeod等人2001中的基于TaqManPCR的方法测定。戶斤有纟克i十凄tl居反映末)欠M/顶'H直结4争(lastobservedassessmentcarriedforward)(LOCF)测定。表8和9按治疗方案总结了基因型和完全ITT群体的年龄和性别。表8-基因型群体总结<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表9-完全治疗目的群体总结<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>结果值得注意的是较高的ADAS-cog评分表明认知功能的下降。因此研究过程中从基线的负改变表明改善，并且从基线的正改变表明下降。简言之，负的治疗差表示该治疗与安慰剂组相比导致改善，并且正的治疗差表示该治疗与安慰剂组相比导致下降。较高的CIBIC+评分表明较大水平的降低，评分低于4表示临床改善并且评分高于4表示临床下降。因此负的CIBIC+治疗差表示该治疗与安慰剂组相比导致改善，并且正的治疗差表明该治疗与安慰剂组相比导致下降。(i)ITT群体表10总结了在ITT群体中对4种治疗方案中每种模型校正的ADAS-cog从基线的改变和在24周实验后的CIBIC+结果。图1表示研究期间在ITT群体中模型校正的ADAS-cog从基线的改变(分析包括对基线评分的效果调节、计数(country)、小型精神状况检测筛查和基线人体质量指数)。使用PPAR-Y激动剂罗格列酮治疗，在表10和图1中的ADAS-cog数据支持临床改善趋势(即，从基线的负改变)。在所有时间点，就整体而言被分析的群体中有净改善。然而，对罗格列酮治疗AD患者的作用的统计分析表明这种趋势没有统计学意义。在24周的CIBIC+结果在治疗组和安慰剂组之间没有显著性差异。表10_治疗组24周后模型校正ADAS-cog从基线的改变总结(LOCF隱ITT群体)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>(ii)基因型群体表ll和表lla(反映了另外2名受试者的加入)表明在基因型群体中APOE4等位基因测定的结果。在APOE4等位基因测定前分配治疗方案，尽管如此，由于统计平均，在各组之间通常基因型分布较好，虽然一些较不普遍的基因型表现出聚集(例如8mg罗格列酮治疗组中有大比例的APOE4纯合子)。表11-治疗组的APOE等位基因状况总结<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>下表12表示了APOE等位基因状况和治疗方案研究进行24周后，ADAS-cog改变的统计。预先确定的对APOE携带状况和从基线至24周的ADAS-cog总评分改变之间相互关系的检测是有显著性的(P=0.0194)。随后的探索检测揭示APOE4-(没有APOE4等位基因)的患者，在24周后，表现出PPAR^激动剂罗格列酮治疗导致认知功能的总体改善趋势，有证据表明最高的8mg的罗格列酮剂量治疗组与安慰剂相比可以导致功能改善(P=0.027)。APOE4杂合子(有单APOE4等位基因)没有表现出任何可识别的趋势。尽管在接受2mg罗格列酮组有些下降，但是4mg和8mg剂量组均几乎未表现出改变，并且在治疗24周后没有一个点有明显显著性。APOE4纯合子(有2个APOE4等位基因)表现出罗格列酮治疗所导致的ADAS-cog评分的相对较大的正改变。尽管样品数较小，但有证据表明在治疗24周后的这种下降是由于所有3个剂量水平的治疗(未校正PO.05)。然而，治疗所导致的临床下降的程度随剂量水平的增加而下降。尚不清楚治疗组中的临床下降是罗格列酮导致的，还是阿尔茨海默氏病的自然进程所导致的。表12-APOE4等位基因状况和治疗组(PGxITT群体)24周后模型校正ADAS画cog从基线的改变总结_<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>图2表示分析群体按治疗方案和APOE等位基因状况(1和2个APOE4等位基因携带者在一起显示)拟合模型校正的ADAS-cog从基线的改变。图3表示一种拟合，其中APOE4纯合子(表示为'HomoE4+，)数据与APOE4杂合子(表示为'HetE4+，)数据不同。罗格列酮治疗导致的认知改善的明显趋势在APOE4-个体中特别明显。在所有时间点(8、16和24周)安慰剂组表现出认知功能的持续下降，然而使用2mg、4mg或8mg的PPAR-y激动剂的治疗组表现出显著的改善。对于APOE4+个体的情况不十分清楚。在治疗8周后，接受安慰剂组表现出认知功能的轻微下降，然而所有接受罗格列酮组(2mg、4mg或8mg)有轻微的改善。在治疗16周后，接受安慰剂组表现出认知功能的持续下降，尽管使用4mg和8mg的治疗组表现出相同或较好的临床状况。使用2mg罗格列酮治疗组表现出比安慰剂组更大程度的下降。最终，在治疗24周后，在接受安慰剂的APOE4携带者中观察到大的并且令人吃惊的改善。明显的改善可能是受少数具有意外的且大的ADAS-cog评分改善的受试者影响。所有三个罗格列酮治疗组以临床下降结束，并且由于在此时间点安慰剂组罕见的改善，罗格列酮治疗与安慰剂组相比似乎表现出临床下降。在一些APOE4+组中观察到的临床下降可能由于正常的AD临床过程。图3表示APOE4纯合子结果与APOE4杂合子结果不同。尽管APOE4纯合子数量小，但可以看到所有用罗格列酮治疗的APOE4纯合子经历了临床下降，然而接受较高剂量的罗格列酮(4、8mg)的APOE4杂合子在研究过程中保持接近基线。使用痴呆残疾评估(DAD)检测(GelinasL等人爿mJ(9ccw;77zw199953:471-81)得到相似的结果。预先确定的对在24周的APOE4携带者状况和DAD评分之间相互关系的检测是有显著性的(P=0.006)。随后的检测表明结果与ADAS-cog结果定性相似即，对DAD,APOE4-受试者表现出改善，然而APOE4+受试者无改善。使用神经精神调查表(NPI)检测(Cummings等人(1994)Neurology44,2308-2314)得到相似的结果。预先确定的对在24周的APOE4携带者状况和NPI评分之间相互关系的检测是有显著性的(P=0.086)。随后的检测表明结果与ADAS-cog结果定性相似即，对NPI,APOE4-受试者表现出改善，然而APOE4+受试者无改善。表13和表13a(为考虑到外加受试者的更新分析)表明在24周后的CIBIC+结果，按APOE4等位基因状况和治疗给药方案分类。没有证据表明在治疗和APOE4拷贝之间的相互关系，所以下述在亚组之间的差异很可能是由于随机误差，而不是差异性作用。APOE4-(没有APOE等位基因的)患者在24周内均表现出轻微的改善，在2mg的罗格列酮治疗组观察到最大的改善(未校正P=0.052)。使用2mg的罗格列酮治疗的APOE4杂合子(有单个APOE4等位基因的患者)表现下降(P=0.056)。在接受4mg的罗格列酮组表现出较少的下降，并且在接受8mg的罗格列酮组表现出轻微改善(尽管在探索性分析中没有接近有显著性的比较)。APOE4纯合子(有2个APOE4等位基因的患者)在治疗24周后与安慰剂组相比在CIBIC+中均表现出的轻微改善，尽管改善程度随治疗剂量下降。表13-在24周后APOE4等位基因状况和治疗组(PGxITT)的模型校正CIBIC+总结。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表13a-在24周后APOE4等位基因状况和治疗组(PGxITT群体)的模型校正CIBIC+总结。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>APOE拷贝*治疗相互关系P-值=0.21讨论实施例2的结果表明使用PPAR-y激动剂罗格列酮治疗AD患者就整体而言在ITT群体中导致无统计学意义的整体改善趋势。在检测的群体中，有证据表明没有APOE4等位基因患者的8mg罗格列酮组的认知改善(如ADAS-cog中测量)。在没有APOE4等位基因患者的8mg罗格列酮组中，经24周对安慰剂组的平均改变为-2.86，P=0.027。在检测群体中，没有证据表明携带APOE4等位基因的患者中有认知改善(如ADAS-cog中测量)。然而携带一个拷贝的患者与携带两个拷贝的APOE4等位基因的患者不同，表明在携带2个拷贝的APOE4等位基因患者中有最大的认知下降(如ADAS-cog中测量)(然而这可能由于疾病的自然进程，而不是由于罗格列酮)，并且在携带1个拷贝的APOE4等位基因的患者中没有显著趋势(例如，认知功能的可能的稳定)。在此申请中所有的参考文献，包括专利和专利申请，在此全部引用作为参考使公开完全。在整个说明书和下述权利要求中，除非文中要求，否则"包含(comprise)"一词，和变异词例如"包含(comprises)"和"包含(comprising)"将被理解为表示包含所述整体、步骤、整体的组或步骤的组，而不排除其它任何整体、步骤、整体的组或步骤的组。权利要求1.改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的方法，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子，所述方法包含下列步骤(i)筛查受试者，以确定受试者不是APOE4等位基因纯合子；然后(ii)向所述受试者给药安全并且有效量的PPAR-y激动剂。2.根据权利要求1的方法，其中筛查步骤(i)包括确定受试者为APOE4-。3.根据权利要求1的方法，其中筛查步骤(i)包括确定受试者携带单拷贝的APOE4等位基因。4.筛查患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者的方法，该方法有助于预测受试者对给药PPAR-y激动剂的应答，所述方法包含筛查以确定受试者是否携带0或1个拷贝的APOE4等位基因。5.根据权利要求4的方法，其中所述筛查包括确定受试者是否为APOE4-的筛查。6.根据权利要求4的方法，其中所述筛查包括确定受试者是否携带单拷贝的APOE4等位基因的筛查。7.改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的方法，预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子，所述方法包括向所述受试者给药安全并且有效量的PPAR-y激动剂。8.PPAR-y激动剂，其用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能，预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。9.PPAR-y激动剂在改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能中的用途，预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。10.PPAR-y激动剂在制备用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的药物中的用途，预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。11.根据权利要求7至10中任一项的方法、PPAR-y激动剂或用途，其中预先确定所述受试者为APOE4-。12.根据权利要求7至10中任一项的方法、PPAR-Y激动剂或用途，其中预先确定所述受试者携带单拷贝的APOE4等位基因。13.改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的方法，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子，所述方法包含向所述受试者给药安全并且有效量的PPAR-Y激动剂。14.PPAR-y激动剂，其用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。15.PPAR-Y激动剂在改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能中的用途，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。16.PPAR-y激动剂在制备用于改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的药物中的用途，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。17.根据权利要求13至16中任一项的方法、PPAR-y激动剂或用途，其中所述受试者为APOE4-。18.根据权利要求13至16中任一项的方法、PPAR-y激动剂或用途，其中所述受试者携带单拷贝的APOE4等位基因。19.试剂盒，其包含(i)PPAR-y激动剂和(ii)指导向受试者给药PPAR-y激动剂的说明书，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。20.根据权利要求19的试剂盒，其中所述说明书指导向受试者给药PPAR-Y激动剂，所述受试者患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。21.根据权利要求19或权利要求20的试剂盒，其中预先确定所述受试者不是APOE4等位基因纯合子。22.根据权利要求19或权利要求20的试剂盒，其中所述受试者为APOE4-。23.根据权利要求19或权利要求20的试剂盒，其中所述受试者携带单拷贝的APOE4等位基因。24.根据权利要求21的试剂盒，其中预先确定所述受试者为APOE4-。25.根据权利要求21的试剂盒，其中预先确定所述受试者携带单拷贝的APOE4等位基因。26.根据权利要求1至25中任一项的方法、PPAR-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述受试者患有mci。27.根据权利要求1至25中任一项的方法、ppar-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述受试者患有阿尔茨海默氏病。28.根据权利要求1至27中任一项的方法、ppar-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述受试者未患有ii型糖尿病。29.根据权利要求1至27中任一项的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述受试者未患有ii型糖尿病。30.4艮据权利要求1至29中任一项的方法、ppar-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述PPAR-Y激动剂为法格立他扎。31.才艮据权利要求1至29中任一项的方法、PPAR-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述PPAR-丫激动剂为p塞唑烷二酮。32.根据权利要求31的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述p塞唑烷二酮为吡格列酮。33.根据权利要求31的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述噻唑烷二酮为罗格列酮。34.根据权利要求33的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述罗格列酮为马来酸罗;f各列酮形式。35.根据权利要求33或34的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述罗格列酮以每日0.01mg至12mg的剂量水平提供。36.根据权利要求35的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述罗格列酮以每日2mg、4mg或8mg的剂量水平提供。37.根据权利要求35的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述罗格列酮以每日8mg或更多的剂量水平提供。38.根据权利要求1至37中任一项的方法、PPAR-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述PPAR-y激动剂作为缓释制剂存在。39.根据权利要求1至37中任一项的方法、ppar-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述PPAR-Y激动剂作为含有片芯的緩释片剂存在，所述片芯含有速释制剂的储库和緩和释放制剂的储库。40.根据权利要求39的方法、ppar-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述片剂包有包衣，有孔穿透所述包衣；至少一个孔穿透入速释的储库，并且至少一个孔穿透入緩和释放的储库。41.根据权利要求1至40中任一项的方法、PPAR-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述PPAR-y激动剂以适合于单次每日剂量给药的形式存在。42.根据权利要求1至41中任一项的方法、PPAR-y激动剂、用途或试剂盒，其中所述PPAR-y激动剂与其它用于治疗或预防阿尔茨海默氏病或其它痴呆的药物联合给药。43.根据权利要求42的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述其它药物为胆碱酯酶抑制剂。44.根据权利要求43的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述胆碱酯酶抑制剂为他克林、加兰他敏、利凡斯的明或多奈哌齐。45.根据权利要求42的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述其它药物为NMDA受体拮抗剂。46.根据权利要求45的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述NMDA受体拮抗剂为美金刚。47.根据权利要求42的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述其它药物为非甾体抗炎药。48.根据权利要求47的方法、PPAR-Y激动剂、用途或试剂盒，其中所述非甾体抗炎药为萘普生、布洛芬、双氯芬酸、吲咪美辛、萘丁美酮、吡罗昔康、塞来昔布或阿司匹林。49.根据权利要求1至6中任一项的方法、其中所述确定受试者不是APOE4等位基因纯合子的筛查包含使用基于PCR的方法。50.改善患有MCI或阿尔茨海默氏病的受试者认知功能的方法，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子，所述方法包含下列步骤(i)筛查受试者，以确定受试者不是APOE4纯合子；然后(ii)向所述受试者给药安全并且有效量的PPAR-Y激动剂。全文摘要改善患有或易患MCI、阿尔茨海默氏病或其它痴呆的受试者认知功能的方法，所述受试者不是APOE4等位基因纯合子，所述方法包含下列步骤(i)筛查受试者，以确定受试者不是APOE4等位基因纯合子；然后(ii)向所述受试者给药安全并且有效量的PPAR-γ激动剂。文档编号A61P25/00GK101312728SQ200680043754公开日2008年11月26日申请日期2006年9月20日优先权日2005年9月22日发明者安·M·桑德斯,艾伦·D·罗塞斯申请人:Sb药物波多黎各公司