对干眼综合征的治疗和预防有效的组合物的制作方法

专利名称：对干眼综合征的治疗和预防有效的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于预防和/或治疗干眼综合征的组合物。更具体地， 本发明涉及包括作为活性成分的至少一种选自尿嘧啶核苷及其衍生物 的材料的用于预防和治疗干眼综合征的组合物。
背景技术：
干眼综合征是用来描述由泪液缺乏或泪液组分变化引起的泪液膜 病症的总称，其伴有各种眼部不适症状。根据"国立眼科研究所/行业
研究机构关于干眼症临床试验的报告(1994) (Report of the National Eye Institute/Industry Workshop on Clinical Trials in Dry Eyes (1994))"， 干眼综合征可以定义为由泪液缺乏或过量泪液蒸发引起的眼表疾病， 所述泪液缺乏或过量泪液蒸发导致了对睑间眼表的损伤，并与眼部不 适和眼部剌激的症状有关。此外，近来因为伴有神经源性成份的新型 干眼综合征(诸如LASIK术后发生的干眼症)，由泪液膜组分变化引 起的眼表疾病等的出现，干眼综合征的定义已扩展至包括任何症状性 夕卜目艮病症(American Journal of Ophthalmology, 140. 507， 2005)。
据报道，超过50。/。的眼科门诊的病人患有干眼综合征。尤其是上 了年纪的70-80%的绝经后妇女患有由干眼综合征引起的眼部不适。过 去，认为干眼综合征的病理学原因是由泪腺产生的泪液减少而导致的 水层缺乏。然而，近来的研究揭示了干眼综合征的主要原因是响应外 部环境刺激的炎症反应或内源性炎症反应，从而提出与因角膜上皮细 胞的病症和角膜上皮细胞与角膜角膜细胞间的相互作用减少引起的慢 性眼表损伤相关的问题。
干眼综合征可以由各种病因，如老化，激素缺乏或改变，环境因素(风，热，灰尘，吸烟，电吹风等)，慢性低眨眼率(VDT综合征)， 配戴隐形眼镜(contact lens wear) ， LASIK视力校正手术，药物和自 身免疫性疾病(狼疮，类风湿性关节炎和斯耶格伦氏综合征)发展而 来(American Journal of Ophthalmology, 137， 337-342， 2004) <>
为了治疗这种综合征，通常用人工泪液或软膏来改善眼部的润滑 作用，并为眼表提供水分。然而，人工泪液等不显示直接的抗炎作用， 因此还伴有抗炎剂的联合治疗。作为抗炎剂的例子可以提到的有i)作 为滴眼剂的泪液补充剂，如人工泪液，ii)滴眼剂，诸如利用胞质蛋白 亲环蛋白-环孢素相互作用对T细胞活化的抑制作用的RESTASISTM(环 孢素眼用乳剂)，iii)眼用溶液，如刺激眼表的泪液和粘蛋白的分泌， 从而治疗干眼症的P2Y2受体激动剂Diquafosol， iv)通过改善泪液稳 定性治疗严重干眼综合征的自体血清滴眼剂和v)甾族化合物。
然而，这些治疗剂大多数是用于缓解症状的治疗，而不是根本性 的治疗，因此其不能对由角膜上皮细胞与角膜角膜细胞间的相互作用 减少引起的慢性眼表损伤和与涉及病因包括复杂和不同的机制及环境 因素的干眼综合征的治疗提供根本性的解决方法。结果，目前这种不 利情况加剧了患者的痛苦。另外，滴眼剂的长期滥用牵涉医疗费用的 增加。此外，甾族药物使眼内压升高，其在慢性疾病和病症中的长期 使用可能不合需要地导致白内障和青光眼并发症。
为此，本领域迫切需要开发通过减轻炎症的同时帮助受损细胞修 复而不导致不良副作用，能从根本上治疗和/或预防千眼综合征的其它 药物。
在这一点上，本申请的发明者发现，尿嘧啶核苷及其衍生物对人 无害，并促进透明质酸(HA)的合成，从而能从根本上治疗和/或预防 千眼综合征。根据这些发现，我们想到了包括作为活性成分的尿嘧啶 核苷或其衍生物的用于治疗和/或预防干眼综合征的组合物。透明质酸(HA)为天然存在的生物聚合物，是高粘度、分子量为
50,000-13,000,000道尔顿并含有交替的N-乙酰基-D-葡糖胺和D-葡糖 醛酸单糖作为重复单元的无色透明直链多糖。
透明质酸的物理性质之一粘弹性已知通过向眼睛和关节提供缓冲 作用达到润滑作用，从而显示出细胞保护功能，并被发现参与创伤愈 合反应。因此，在炎症反应早期，透明质酸增加细胞浸润和细胞因子 分泌，因而促进创伤愈合反应，减少自由基，从而参与抗氧化作用， 因此起到炎症反应介质的作用。
因此，透明质酸促进血管发生和细胞增殖，从而帮助组织再生， 减少不必要的胶原沉积，从而参与创伤重塑，同时留下的瘢痕较小， 还对角膜上皮细胞再生和表皮再生显示作用。因此，近来有大量研究 集中于用透明质酸作为多种治疗剂。例如，透明质酸可用于各种应用， 如关节炎药物，干眼症药物，用于减少皱纹的化妆品补充剂，外科手 术后使用的抗粘连剂，化妆品润湿剂，人工皮肤，创伤愈合剂，去瘢 痕剂，白内障手术助剂等。
另外，作为含有透明质酸的常规滴眼液，有通过减少泪液蒸发和 润滑作用及细胞再生作用发挥疗效的制剂。然而，在人类皮肤的表皮 和真皮层中观察到的透明质酸具有非常短的约1天的半衰期，其活性 被认为取决于分子量的不同而显示出高变异性。因此，仅通过注射外 源性透明质酸难以满足机体所需的透明质酸的量，同时也对其作用持 怀疑态度。
发明概述
因此进行了本发明以解决上述问题和其它仍未解决的技术问题。 结果，经过许多基于上述事实的广泛而深入的研究和实验，本发
6明的发明者证实了包括作为活性成分的至少一种选自尿嘧啶核苷及其 衍生物的材料的组合物和药物制剂的使用令人惊讶地促进了透明质酸
(HA)的合成，HA对人体无害，并具有多种药理作用，因而可以提
供对干眼综合征的根本性的治疗和/或预防。基于这些发现完成了本发 明。
优选实施方案详述
根据本发明的方面，上述目的和其它目的可以通过提供用于治疗 和/或预防干眼综合征的、包括作为活性成分的至少一种选自尿嘧啶核 苷及其衍生物的材料的组合物来实现。
如上文所述，本发明的组合物含有尿嘧啶核苷或其衍生物，这样， 尿嘧啶核苷或其衍生物诱导人体细胞或组织产生透明质酸，从而不断 地促进内源性透明质酸的合成，导致向连续供应作为强保湿成分的透 明质酸。此外，尿嘧啶核苷或其衍生物除了促进透明质酸的合成外，
还促进多种葡糖胺聚糖(GAGs)的合成，并抑制一氧化氮(NO)的产 生。
本文所用术语"葡糖胺聚糖"通常指能提供润滑作用，创伤愈合 作用和保湿作用，从而可以有效地用于治疗各种由粘多糖缺乏引起的 疾病，包括干眼综合征的粘多糖，诸如透明质酸，硫酸软骨素，肝素， 角蛋白等。因此，根据本发明的含有尿嘧啶核苷及其衍生物的组合物 可以对干眼综合征的治疗或预防发挥良好的疗效。
一氧化氮(NO)是细胞和组织中的炎症相关因子。参与炎症的发 展的蛋白诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达在炎症病灶中增加， 因此导致一氧化氮的产生增加，从而加重炎症。因此，减少一氧化氮 的产生被认为是炎症的有效治疗方法。同时，干眼综合征还伴有创伤 诱导的炎症。因此，根据本发明的尿嘧啶核苷及其衍生物可以减少一 氧化氮的产生，或者有效地清除一氧化氮，从而可以对干眼综合征的炎症的治疗发挥良好作用。
因此，本发明的组合物提供了干眼综合征的治疗和/或预防，炎症 的调节和受损角膜上皮细胞及角膜角膜细胞的修复，从而能治疗上皮 细胞病症，并因此还可以帮助治疗由次要因素导致的角膜上皮细胞病 症。
此外，传统的直接注射外源性透明质酸仅能获得局部效果，因此 仅提供有限的疗效。根据本发明的含有尿嘧啶核苷及其衍生物的组合 物可以解决传统技术所遭遇的这些问题，并且其能通过多种途径给药， 包括口服给药，从而实现快速的疗效和安全的治疗。
尿嘧啶核苷是构成RNA所需的四种核苷之一，其广泛分布于自然 界，分子量约244.20，分子式为C9H12N206。迄今已知的尿嘧啶核苷的 药理活性如下。例如，已知尿嘧啶核苷体内给药后，尿嘧啶核苷通过 尿嘧啶核苷激酶的催化转化为尿嘧啶核苷-5'-磷酸，从而可用于酶缺乏 或嘧啶核苷酸缺乏和核酸合成不足，因此可用作缓解乳清酸尿症的药 物(MARTINDALE, 1989， 1627)。另外，还已知尿嘧啶核苷可以用作 胶原性关节炎的治疗剂(转让给韩国Green Cross Holdings公司的韩国 专利公开No. 1994-0008033 Bl)，或者，与其它药理活性物质的混合 制剂形式的尿嘧啶核苷也可以用于治疗脑血管病，肝病，周围神经病 和组织缺氧。然而，上述公开或专利均未公开或暗示本发明所证明的 通过促进透明质酸的合成预防和治疗干眼综合征。
本发明的发明者新近发现尿嘧啶核苷或其衍生物促进透明质酸的 合成和葡糖胺聚糖的合成，并抑制一氧化氮(NO)的产生，因此能显 著治疗干眼综合征。这些发现和事实可以通过以下实施例来证明。
具体地，本发明的发明者测定了尿嘧啶核苷及其衍生物促进角膜
角膜细胞和上皮细胞中透明质酸及葡糖胺聚糖的产生，以及抑制一氧 化氮(NO)产生的活性，结果证明尿嘧啶核苷及其衍生物对干眼综合征的治疗显示了良好的作用，上皮细胞得到了修复。另一方面，证实 了尿嘧啶核苷或其衍生物作为滴眼剂和口服制剂均表现出良好的治疗 活性，对透明质酸和葡糖胺聚糖的产生的促进度和对一氧化氮(NO) 的产生的抑制度与尿嘧啶核苷或其衍生物的浓度相关。
结果，用于预防和治疗干眼综合征的含有作为活性成分的尿嘧啶 核苷和/或其衍生物的组合物可以通过修复上皮细胞预防和治疗干眼综 合征，因此认为可以将其开发为多种与干眼综合征相关的多种疾病的 治疗剂。根据本发明的用于预防和治疗干眼综合征的组合物包括作为 活性成分的上述尿嘧啶核苷和/或其衍生物，并且连同必要时加入药学 上可接受的载体可以制成干眼综合征的预防和治疗剂。
可用于本发明的组合物中的尿嘧啶核苷衍生物的例子包括但不限 于，优选一种或多种选自尿嘧啶，尿嘧啶核苷单磷酸，尿嘧啶核苷二 磷酸，三乙酰基尿嘧啶核苷，三苯甲酰基尿嘧啶核苷，5-乙基尿嘧啶核 苷，2-脱氧尿嘧啶核苷，异亚丙基尿嘧啶核苷及其任一组合的材料。
对活性成分，即，尿嘧啶核苷或其衍生物的含量无特殊限制，只 要其在能诱导透明质酸合成的范围内即可。活性成分的含量优选按重
量计在组合物总重量的0.1-20°/。，更优选按重量计1-10%的范围内。
优选组合物是含有药学上可接受的载体或介质的药物组合物。
本发明的药物组合物的适宜剂量可以根据多种因素，诸如配制方 法，给药模式，患者的年龄，体重和性别，病理状况，饮食，给药时 间，给药途径，排泄率和反应敏感性的改变而改变。
尿嘧啶核苷或其衍生物可以根据临床给药方法通过口服或肠胃外 途径给药，并可用于各种形式的一般药物制剂。即，本发明的组合物 可以根据实用临床给药方法以多种口服和肠胃外制剂的形式给药。当将组合物配制成预期剂型时，用常规填充剂，膨胀剂，粘合剂，润湿 剂，崩解剂和稀释剂或介质，诸如表面活性剂制备制剂。口服给药用 固体制剂包括，例如，片剂，丸剂，粉剂，颗粒剂和胶囊剂，通过将 尿嘧啶核苷或其衍生物与一种或多种介质，如淀粉，碳酸钙，蔗糖， 乳糖和明胶混合来制备。除了普通介质外，润滑剂，诸如硬脂酸镁和 滑石粉也可以使用。作为口服给药用液体制剂可以提到的有悬剂，内 用溶液剂，乳剂和糖浆剂。除了常用的普通稀释剂，诸如水和液体石 蜡外，上述制剂还可以含有多种介质，例如润湿剂，甜味剂，芳香剂 和防腐剂。肠胃外给药用制剂包括无菌水溶液剂，非水溶剂，悬剂， 乳剂，冻干制剂和栓剂。可以用丙二醇，聚乙二醇，植物油，诸如橄
榄油，可注射酯，如油酸乙酯(ethylolate)等作为非水溶剂和悬剂。 可以用Witepsol，聚乙二醇(macrogol)，吐温61，可可脂(cacao butter), 三月桂酸甘油酯(Iaurin butter)，甘油和明胶作为栓剂的基质材料。
剂量单位可以含有单个剂量的1， 2， 3或4倍量，或单个剂量的 1/2, 1/3或1/4倍量。优选单个剂量含有一次给药量的活性药物，其通 常相当于一天给药的总量，或其1/2， 1/3或1/4倍量。尽管尿嘧啶核苷 或其衍生物的有效剂量是浓度依赖性的，但其优选在0.1-l，000 mg/kg， 更优选0.4-200 mg/kg的范围内，并且可以一天l-6次给药。
优选，将组合物配制成含有一种或多种化妆品或营养上可接受的 载体或介质的组合物。即，组合物可以制成化妆品或化妆品添加剂， 饮料或饮料添加剂或食品或食品添加剂形式的用于预防和治疗干眼综 合征的组合物。
根据本发明的另一方面，提供了含有作为活性成分的尿嘧啶核苷 或其衍生物的用于预防和/或治疗干眼综合征的功能性健康食品。本发 明的说明书中所用术语"功能性健康食品"指的是其中尿嘧啶核苷或 其衍生物被添加到普通食品中以改善其功能的食品。尿嘧啶核苷或其 衍生物可以添加到普通食品中，或者制成胶囊剂，粉剂，悬剂等的形式。这种含有尿嘧啶核苷或其衍生物的功能性健康食品的摄入为健康 提供有益作用，并且由于使用了食品材料作为原材料，不同于常规药 物，因此显示出无长期用药后可能发生的不良副作用的优势。
如果期望用本发明的尿嘧啶核苷或其衍生物作为食品添加剂时， 尿嘧啶核苷或其衍生物可以单独加入，或者可以与其它食品或食品成 分结合使用，或者根据其它常规方法适当使用。活性成分的混合量根 据使用目的(预防性，健康或治疗性治疗)适当地确定。通常，生产 混合有尿嘧啶核苷或其衍生物的食品或饮料时，这些材料优选以按重 量计占原材料总重量的0.1-20%的量加入。然而，当为了健康和卫生的 目的，或为了健康控制的目的希望长期摄入时，上述尿嘧啶核苷或其 衍生物的量可以调整至上述特定范围以下。另外，本发明的健康食品 当用作上述药物组合物时，优选含有落入所定毒性范围内的量的尿嘧 啶核苷或其衍生物。
对上述食品的种类无特殊限制。作为可添加尿嘧啶核苷或其衍生
物的食品的例子可以提到的有肉，香肠，面包，巧克力，糖果(candies)， 点心，糖食(confectionary)，比萨，Ramen，其它面条(other noodles), 口香糖，脱脂乳，千燥食品，生食，乳制品，包括乳酸菌发酵乳和冰 淇淋，各种汤，饮料(beverage)，茶，饮料(drinks),酒精饮料和 多种维生素制剂。具体地，作为含有尿嘧啶核苷或其衍生物的健康食 品的例子可以提到的有例如，由尿嘧啶核苷或其衍生物作为主要成分 制成的压榨液体，茶，胶冻(jelly)和汁(juice)的健康食品和特殊中 意的产品(special favorite products)。另外，可以提到将水肿，肾炎和尿 道炎作为要治疗的目标疾病或病症的民间药物。
期望用本发明的尿嘧啶核苷或其衍生物作为化妆品原材料时，其 可以本身加入，或者可以与其它化妆品成分结合使用，或者根据其它 常规方法适当使用。活性成分的混合量可以根据其使用目的适当地确 定。通常，使用尿嘧啶核苷或其衍生物生产化妆品时，这些原料优选以按重量计占原材料总重量的0.1-20%的量加入。化妆品包括但不限于
须后水，洗剂，乳膏，面膜(packs)和彩妆品。
根据本发明的另一方面，提供了包括作为活性成分的上述组合物 和一种或多种药学上可接受的载体或介质的用于预防和/或治疗干眼综 合征的制剂。
因此，上述制剂必要时可以含有药学上可接受的载体，稀释剂， 介质或其任何组合物。这些组分促进活性成分向有机体施用。
载体的定义是促进化合物或感兴趣的物质进入靶细胞或组织的化 合物。尽管对载体的种类无特殊限制，但优选载体为根据预期制剂本 领域的常用载体，例如，至少一种选自固体载体，诸如淀粉，乳糖， 甘露醇，羧甲基纤维素，玉米淀粉和无机盐；液体载体，诸如蒸馏水， 生理盐水，葡萄糖水溶液，醇，诸如乙醇，丙二醇和聚乙二醇；以及 油性载体，诸如各种动物和植物油，白凡士林，石蜡和蜡的载体。
介质的例子包括填充剂，诸如乳糖，蔗糖，甘露醇和山梨醇，玉 米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，土豆淀粉，明胶，黄蓍胶，甲基纤维 素，羟丙甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和/或纤维素物质，如聚乙烯吡 咯垸酮(PVP)。
将组合物制成药物制剂的过程可以通过本领域已知的常规方法来 完成。优选药物制剂是药学上可接受的口服，外用，透皮或透粘膜制 剂。例如，药物制剂可以是粉状药物，颗粒剂，溶液剂，丸剂，锭剂， 悬剂，乳剂，糖浆剂，片剂，粉剂，软或硬胶囊剂，悬剂，注射剂或 乳化液，或肠胃外给药用单或多剂量制剂。更优选药物制剂是口服制 剂或滴眼剂。尤其是，根据本发明的口服制剂可以发挥几乎比得上使 用滴眼剂的良好作用。这样的事实还可以通过以下实施例来证实。


通过以下详细描述，并结合附图，将更清楚地理解本发明的上述 及其它目的，特征和其它优点，其中
图1图示了不同浓度尿嘧啶核苷下，角膜角膜细胞中透明质酸合 成的程度；
图2图示了不同浓度尿嘧啶核苷下，角膜角膜细胞中葡糖胺聚糖 合成的程度；
图3图示了不同浓度尿嘧啶核苷下，尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞
中一氧化氮(NO)的产生的影响；
图4图示了尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞增殖的影响；
图5图示了不同浓度尿嘧啶核苷下，眼上皮细胞中葡糖胺聚糖合
成的程度。
图6图示了尿嘧啶核苷对眼上皮细胞中一氧化氮(NO)的产生的
影响；
图7比较了诱发干眼症的兔用尿嘧啶核苷滴眼剂治疗后，治疗组 与对照组间干眼综合征的缓解情况。
图8显示了向干眼症患者口服给予尿嘧啶核苷后泪液分泌试验 (Schirmer试验)的结果；以及
图9显示了向干眼症患者口服给予尿嘧啶核苷后角膜染色的结果。
实施例
现在将参考以下实施例更详细地对本发明进行描述。这些实施例 的提供只是为了说明本发明，而不应该被理解为是对本发明的范围和 精神的限制。
实施例l:角膜角膜细胞和角膜上皮细胞的分离 从经清洁的角膜组织除去眼血管。然后将该经清洁后的组织用5% 抗生素-PBS洗涤，置于3mLlX胰蛋白酶(0.05%) /EDTA (0.01%) 中，然后在37。C振荡孵育80min。所得悬浮液集中，用SHEM培养基 (10% FBS的DMEM/F12(1:1)溶液十0.5% PS + 4 mM L-谷氨酰胺十10ng/mL EGF + 5 jitg/mL胰岛素+ 30 ng/mL霍乱毒素+ 0.18 mM腺嘌呤+ 2 nM3,3',5-三碘代-L-甲腺原氨酸钠盐+0.4/ig/mL氢化可的松)洗涤，在 1，200 rpm离心5 min。这时，向用其作为上皮细胞后的剩余组织中加入 1.2 U/mL分散酶II，并将分离的细胞在3/C孵育2 h。接着除去1.2 U/mL 的分散酶II，用200 U/mL的I型胶原酶(5 mL)处理细胞，然后在37°C 振荡孵育。集中细胞悬浮液，用培养基(10% FBS的DMEM/F12(1:1) 溶液+1%PS)洗涤，在1,200 rpm离心5 min，并接种于平皿中。
实施例2:尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞中透明质酸的产生的影响 通过用尿嘧啶核苷(OmM-10mM)处理细胞来刺激角膜角膜细胞
48 h。收集100 pl的细胞培养物，在室温下与100pl的生物素化透明
质酸结合蛋白(b-HABP， 50ng/mL)反应1 h。
实验前一天，向96孔板中加入20/ig/mLHA和20 mM Na2C03溶 液，然后在冰箱中储存24h，用标准分析缓冲液(SAB)洗涤3次。向 96孔板中加入1%BSA，然后在室温下反应90min，用SAB洗涤3次， 由此制备HA涂层板。
将以上制备的细胞培养物加入到HA涂层板中，在室温下搅拌反 应1 h。之后，将这样反应的细胞培养物用SAB洗涤3次，然后加入 Extra-亲和素碱性磷酸酶(1:80000)，室温反应30 min，用SAB洗涤 3次。向细胞培养物中加入1 mg/mL对硝基苯二钠的100 mM NaCl和5 mMMgCl的溶液，然后反应20-60 min。此后，加入3NNaOH终止反 应，在405 nm处测定透明质酸的量。这样获得的结果见图l。
如图l所示，证明了在尿嘧啶核苷的浓度一直高至5/zM时，尿嘧 啶核苷对角膜角膜细胞的处理以浓度依赖性的方式促进了透明质酸的 产生。
实施例3:尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞中葡糖胺聚糖的产生的影响通过用尿嘧啶核苷(OmM-50mM)处理细胞来刺激角膜角膜细胞 48 h。收集细胞培养物，用Biocolor分析试剂盒在550 nm处测定葡糖 胺聚糖的量。这样获得的结果见图2。如图2所示，证明了从尿嘧啶核 苷的浓度为lMM开始，尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞的处理以浓度依赖 性的方式促进了葡糖胺聚糖的产生。
实施例4:尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞中一氧化氮(NO)的产生 的影响
角膜角膜细胞用100/xMH202刺激，然后用尿嘧啶核苷(0/xM-100 /xM)刺激48h。向细胞悬浮液中加入100MlGriess试剂(4/ig/mL)， 所得混合物室温搅拌反应15 min。在540 nm测定一氧化氮(NO)的 量。这样获得的结果见图3。如图3所示，证明了在尿嘧啶核苷的浓度 一直高至50 /xM时，尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞的处理以浓度依赖性 的方式抑制了一氧化氮(NO)的产生。
实施例5:尿嘧啶核苷对角膜角膜细胞增殖的影响 角膜角膜细胞在96孔板中孵育，并用尿嘧啶核苷 刺激48h。用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)在450mn处进行细胞计数。 这样获得的结果见图4。如图4所示，揭示了从尿嘧啶核苷的浓度为 0.1 MM或更高开始，尿喷啶核苷对角膜角膜细胞的处理促进了细胞增 殖。
实施例6:尿喷啶核苷对角膜上皮细胞中葡糖胺聚糖的产生的影响 通过用尿嘧啶核苷(0mM-50/xM)处理来刺激眼上皮细胞48h。 收集细胞培养物，用Biocolor分析试剂盒在550 nm处测定葡糖胺聚糖 的量。这样获得的结果见图5。如图5所示，证明了尿嘧啶核苷对上皮 细胞的处理以浓度依赖性的方式促进了葡糖胺聚糖的产生。
实施例7:尿嘧啶核苷对角膜上皮细胞中一氧化氮(NO)的产生 的影响眼上皮细胞用100 pM &02刺激，然后用尿嘧啶核苷(0 AtM-100 pM)刺激48h。向细胞悬浮液中加入100plGriess试剂(4/ig/mL)， 所得混合物室温搅拌反应15 min。在540 nm测定一氧化氮(NO)的 量。这样获得的结果见图6。如图6所示，证明了尿嘧啶核苷对眼上皮 细胞的处理以浓度依赖性的方式抑制了一氧化氮(NO)的产生。
实施例8:体内动物试验
通过向兔泪腺注射伴刀豆球蛋白A导致眼部炎症，从而诱导干眼 综合征(Journal of Ocular Pharmacology &Therapeutics 21(2)， 139-148, 2005)。将尿嘧啶核苷分别用磷酸盐缓冲盐水溶液溶解成5%和10%的 浓度，所得溶液用作滴眼剂。用市场上可买到的0.1%透明质酸制剂作 为阳性对照组，用磷酸盐缓冲盐水溶液作为对照组。将1%和5%尿嘧 啶核苷制剂，透明质酸制剂和磷酸盐缓冲盐水溶液分别滴入诱发干眼 症的兔的眼中，对眼细胞进行印迹细胞学检查，以证明干眼综合征的 缓解。这样获得的结果见图7。
如图7所示，证明了在眼细胞的印迹细胞学检查中，使用尿嘧啶 核苷的滴眼剂与阳性对照组和对照组相比，显示出显著的上皮细胞修 复作用。
实施例9:临床试验
从除干眼症外无其它眼部疾病，甚至在给予至少两个月的常规药 物后病症仍无进一步缓解，泪液分泌试验(Schirmer试验)中分泌泪液 小于5mm，需要手术治疗，包括鼻泪管阻塞的干眼症患者获得试验受 试者的书面知情同意书后，通过双盲法向患者口服施予含有尿嘧啶核 苷的口服制剂(100mg/day)和不含尿嘧啶核苷的口服安慰剂制剂，每 天3次，持续3个月。在治疗初始点和治疗开始后两周， 一个月，两 个月和3个月，通过裂隙灯显微镜检查，测定眼内压，检眼镜检查， Schirmer试验，印迹细胞学检査和眼前节摄像分析对角膜症状和病症的 变化以及不良副作用的存在/缺乏进行客观评价。此外，准备个体患者的主观问巻，观察患者的主观症状的变化和不良副作用的存在/缺乏。
图8显示了泪液分泌试验(Schirmer试验)的结果，图9显示了 角膜染色的结果。参考图8和9，尿嘧啶核苷给药组在Schirmer试验和 角膜染色中显示出了显著差异，从而证明尿嘧啶核苷作为滴眼剂和口 服制剂的应用对干眼综合征的治疗在治疗上有效。
工业实用性
由前文显而易见的是，本发明的包括作为活性成分的至少一种选 自尿嘧啶核苷及其衍生物的材料的组合物和药物制剂的应用促进人类 细胞和机体中透明质酸的合成，因此可以预防和治疗干眼综合征。
尽管为说明性的目的公开了本发明的优选实施方案，但本领域技 术人员将了解，在不超出所附权利要求中所公开的本发明的范围和精 神的条件下可以进行多种修改，添加和取代。
权利要求
1.用于预防和/或治疗干眼综合征的组合物，包括作为活性成分的至少一种选自尿嘧啶核苷及其衍生物的材料。
2. 根据权利要求1的组合物，其中尿嘧啶核苷衍生物选自尿嘧啶，尿嘧啶核苷单磷酸，尿嘧啶核苷二磷酸，三乙酰基尿嘧啶核苷，三苯甲酰基尿嘧啶核苷，5-乙基尿嘧啶核苷，2-脱氧尿嘧啶核苷，异亚丙基 尿嘧啶核苷及其任一组合。
3. 根据权利要求l的组合物，其中活性成分的含量按重量计在组 合物总重量的0.1-20%的范围内。
4. 根据权利要求l-3任一项的组合物，其中组合物是含有化妆品 上可接受的载体或介质的化妆品组合物。
5. 根据权利要求1-3任一项的组合物，其中组合物是含有营养上 可接受的载体或介质的食品或饮料组合物。
6. 根据权利要求l-3任一项的组合物，其中组合物是含有药学上 可接受的载体或介质的药物组合物。
7. 用于预防和/或治疗干眼综合征的治疗性制剂，包括作为活性成 分的权利要求1的组合物和一种或多种药学上可接受的载体或介质。
8. 根据权利要求7的制剂，其中载体是至少一种选自固体载体， 诸如淀粉，乳糖，甘露醇，羧甲基纤维素，玉米淀粉和无机盐；液体 载体，诸如蒸馏水，生理盐水，葡萄糖水溶液，醇，诸如乙醇，丙二 醇和聚乙二醇；以及油性载体，诸如各种动物和植物油，白凡士林， 石蜡和蜡的载体。
9. 根据权利要求7的制剂，其中活性成分的含量按重量计在0.1-20%的范围内。
10. 根据权利要求7的制剂，其中制剂是粉状药物，颗粒剂，溶 液剂，丸剂，锭剂，悬剂，乳剂，糖浆剂，片剂，粉剂，软或硬胶囊， 悬剂，注射剂，乳化液，或肠胃外给药用单或多剂量制剂。
11. 根据权利要求7的制剂，其中制剂是口服制剂或滴眼剂。
12. 根据权利要求10的制剂，其中制剂含有药学上可接受的介质， 使其可以配制成可食用饮料，食品或化妆品的形式。
全文摘要
本申请提供了包括作为活性成分的至少一种选自尿嘧啶核苷及其衍生物的材料的组合物和包含该组合物的药物制剂，所述尿嘧啶核苷及其衍生物促进动物和人的细胞和机体中透明质酸的合成。本发明的组合物和药物制剂对干眼综合征的治疗和预防有效。
文档编号A61P27/04GK101316600SQ200680044338
公开日2008年12月3日 申请日期2006年11月18日 优先权日2005年11月28日
发明者朴明奎, 权民京 申请人:Md白奥阿尔法有限公司