专利名称：柚皮挥发油的提取方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种提取柚皮挥发油的提取方法及其用途，其用于制备治疗哮喘及急、慢性支气管炎的药物。
背景技术：
柚皮我国很早就已入药，临床一般整体入药，有芳香健胃、驱风下气、祛痰等作用，并具有一定的抗氧化活性，对自由基也有一定的清除作用，其挥发油目前一般用于沐浴产品；支气管哮喘是世界范围内严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病，它涉及到各个年龄段，全世界约有1亿6千万患者；急、慢性支气管炎是由于感染或非感染因素引起的气管、支气管粘膜及周围组织的急、慢性非特异性炎症。目前，柑橘属植物用于治疗支气管炎，多整体入药，也有单用提取物如橘红、柚皮苷等成分的研究，但尚未见单用柚皮挥发油治疗支气管哮喘及急、慢性支气管炎的研究报道。柚皮挥发油的提取方法多以干柚子皮进行水蒸气蒸馏提取为主，具有提取时间长，活性成分破坏较多，收油率低等缺点。
本发明目的是以新鲜柚皮为原料，提取工艺简单、稳定，能得到高收率的柚皮挥发油的提取方法，并确定柚皮药用有效部位及其新的用途。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取柚皮挥发油成分较多的提取方法，并提供柚皮挥发油用于制备治疗哮喘及急、慢性支气管炎的药物的应用。
本发明的目的是这样来实现的柚皮挥发油的提取方法是将新鲜柚子皮切成2～5mm3的小块，投入提取釜中。当提取釜温度达到40℃，分离I的温度达到50℃，分离II的温度为35℃时，打开二氧化碳气瓶，当提取釜压力达20MPa，分离I压力为10MPa，分离II压力为6MPa时，开始循环提取，二氧化碳流量为3L·h-1·kg-1左右，提取2h后接取挥发油，收率为1.8％左右，较常规提取方法提高5-7倍(扣除水份与干柚皮折算)。
对所提取挥发油的化学成分进行研究，分离出了56种物质。其主要成分为d-柠檬烯等22个萜及烃类化合物，占71.57％，芳樟醇等8个醇占5.24％，紫苏醛等2个醛占0.22％，奴卡酮等7个酮类化合物占6.66％，乙酸香叶酯等6个酯类化合物占2.62％，大茴香脑等醚及其环氧化合物6个，占11.51％，其余为1个氢化萘和1个长链脂肪酸，在环氧化合物中含量最多的是大茴香脑，其次是奴卡酮和B-芳樟醇和一些脂和醚，前3种约占66％。较常规提取方法成分多出近10种。
本发明的柚皮挥发油新用途，还包括现有制药工业已知方法，如冷轧法、水蒸气蒸馏法、微波提取法等提取的柚皮挥发油，其也包括沙田柚、葡萄柚、胡柚、文旦柚、坪山柚、蜜柚等柚皮原料所提取的挥发油。
柚皮挥发油治疗哮喘及急、慢性支气管炎的作用1实验材料1.1实验动物SD大鼠，喂食全价饲料。
1.2药物与试剂①柚皮挥发油，每1ml提取物相当于新鲜柚皮60g，临用时用水稀释；②氨茶碱片，100mg/片，临用时用水配成0.8mg/ml的混悬液；③咳必清片，25mg/片，临用时用水配成0.2mg/ml的混悬液；④必漱平片，8mg/片，临用时用水配成0.2mg/ml的混悬液。
1.3实验仪器Mettler AE-163电子天平(瑞士产)，SARY-100型紫外分光光度计(美国瓦里安公司和平)，Medlab生物信号采集处理系统，WM-Z型无油气体压缩机(天津医疗器械二厂生产)。
2方法与结果2.1分组及给药 本试验均将动物分为5组，即空白对照组、柚皮挥发油低、中、高剂量组及阳性对照组，口服灌胃给药。柚皮挥发油给药按低、中、高剂量分别为0.05、0.1、0.2ml/kg(均相当5ml/kg)；氨茶碱给药为4mg/kg(相当5ml/kg)；咳必清给药为1mg/kg(相当5ml/kg)；必漱平给药为1mg/kg(相当5ml/kg)；空白对照组口服灌胃5ml/kg的蒸馏水。2.2柚皮挥发油对组胺诱发SD大鼠哮喘发作的影响取健康无伤的SD大鼠，体重350～375g，雄性，于试验前2天，用0.4％组胺溶液引喘，以SD大鼠抽搐跌倒作为引喘成功。剔除引喘潜伏期大于123秒的SD大鼠。
取符合标准的SD大鼠50只，随机分成5组，10只/组，设立空白对照组，三个剂量的柚皮挥发油组(0.05、0.1、0.2ml/kg)和氨茶碱阳性对照组(4mg/kg)。按等体积不同浓度给药，空白对照组口服灌胃5ml/kg的蒸馏水。连续口服灌胃3天(1次/天)，末次给药1小时后进行引喘试验。将SD大鼠放入玻璃钟罩内，待其安静后，启动空气压缩泵，以400mmHg的恒压喷入0.4％组胺溶液，每次喷雾15秒后，停止喷雾。以雾化开始至动物出现抽搐跌倒的时间为6min，大于6min者，作为引喘不成功。计算引喘潜伏期以及发生抽搐的动物数。
结果表明，柚皮挥发油0.05、0.1、0.2ml/kg组均能明显延长因组胺雾化吸入所致的SD大鼠哮喘发作的潜伏时间，与空白对照组比较P＜0.05～0.01。结果见表1
表1柚皮挥发油对组胺诱发SD大鼠哮喘发作的影响(
秒)
与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
2.3柚皮挥发油对氨水刺激致SD大鼠咳嗽的影响取健康无伤的SD大鼠50只，体重350～375g，按体重、性别随机分成5组，10只/组，雌雄各半，设立空白对照组，三个剂量的柚皮挥发油组(0.05、0.1、0.2ml/kg)和咳必清对照组(1mg/kg)。按等体积不同浓度给药，空白对照组口服灌胃5ml/kg的蒸馏水。连续口服灌胃3天(1次/天)，末次给药1小时后进行镇咳试验。结果见表2表2柚皮挥发油对氨水刺激致小鼠咳嗽的影响
与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
2.4柚皮挥发油SD大鼠酚红祛痰试验取健康无伤的SD大鼠50只，体重350～375g，按体重、性别随机分成5组，10只/组，雌雄各半，设立空白对照组，三个剂量的柚皮挥发油组(0.05、0.1、0.2ml/kg)和必漱平对照组(1mg/kg)。按等体积不同浓度给药，空白对照组口服灌胃5ml/kg的蒸馏水。连续口服灌胃3天(1次/天)，于试验前24h禁食不禁水。末次给药1h后腹腔注射0.5％酚红生理盐水0.1ml/10g体重，30min后处死小鼠，切开颈部皮肤，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分叉处的一段气管，放入盛有2.0ml生理盐水的试管中，浸洗30min，加入0.1mol/L的氢氧化钠的溶液0.1ml，3000rpm离心15min，取上清液于546nm处测吸收度，进行统计学检验。
结果表明，柚皮挥发油有明显增加小鼠气道酚红分泌量的倾向。结果见表3。
表3柚皮挥发油对小鼠酚红祛痰试验结果
与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
实验结果显示，柚皮挥发油具有明显的平喘、镇咳、祛痰作用，能明显延长哮喘发作的潜伏期，拮抗哮喘发作，并能明显减少咳嗽次数，减少呼吸道分泌物。
权利要求
1.柚皮挥发油的提取方法，其特征在于是直接用新鲜柚皮，采用二氧化碳超临界萃取，将新鲜柚子皮切成2～5mm3的小块，投入提取釜中。当提取釜温度达到40℃，分离I的温度达到50℃，分离II的温度为35℃时，打开二氧化碳气瓶，当提取釜压力达20MPa，分离I压力为10MPa，分离II压力为6MPa时，开始循环提取，二氧化碳流量为3L·h-1·kg-1左右，提取2h后接取挥发油。
2.根据权利要求1所述的柚皮挥发油，其特征在于富含56种以上成分，其中的一种或数种显效，能明显延长哮喘发作的潜伏期，拮抗哮喘发作，并能明显减少咳嗽次数，减少呼吸道分泌物，具有平喘、镇咳、抗炎的作用。
3.根据权利要求2所述的柚皮挥发油的特征，还包括现有制药工业已知方法提取的柚皮挥发油，其包括沙田柚、葡萄柚、胡柚、文旦柚、坪山柚、蜜柚等柚皮原料所提取的挥发油，用于制备成治疗哮喘及急、慢性支气管炎的各种剂型药物。
全文摘要
本发明涉及柚皮挥发油的提取方法及其用途，其特征在于提取方法是用新鲜柚皮进行超临界二氧化碳流体萃取，萃取条件萃取压力为30MPa，萃取温度为35℃，二氧化碳流量为3L·h
文档编号A61P11/06GK101085083SQ20071003510
公开日2007年12月12日 申请日期2007年6月12日 优先权日2007年6月12日
发明者方平飞, 彭六保, 李焕德, 赵绪元, 刘艺平 申请人:中南大学湘雅二医院