专利名称：一种从橘红中提取柚皮苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种从化橘红中提取柚皮苷的方法，尤其是提取高纯度柚皮苷的方法。发明所称的高纯度柚皮苷是指纯度在98%以上的柚皮苷。
背景技术：
柚皮苷是一种天然产物，广泛存在于芸香科植物中，尤以未成熟的果皮含量最高。它具有止咳、化痰、抗炎、抗肿瘤、抗衰老、降胆固醇、改善血管循环等生物活性。
获得柚皮苷的方法分为两种一种是化学合成法，但此种方法合成路线复杂，成本高；第二种方法，也是用得最广泛的方法，即从芸香科植物中提取。目前已报道的有，将含有柚皮苷的药材经水提、通过大孔树脂、浓缩并收集沉淀后用水或乙醇重结晶后得到(苏薇薇等，CN03113604. 4和CN03146997. 3);将化橘红粗粉经水提、调节pH、通过大孔树脂、浓缩并收集沉淀后用无水乙醇重结晶后得到(王琳等，CN200910232802. 4);将枳壳生药用60%乙醇提取后，通过大孔树脂，最后用高速逆流色谱纯化后得到(范国荣等，CN200410053284. 7)；将粉碎好的柚子粉经高压萃取釜萃取，萃取液浓缩后除去不溶物，调节PH后析晶，再用无水乙醇重结晶后得到(许晨等，CN200910229939. 4);贾冬英等报道了使用70%乙醇在60°C下提取后，用蒸馏水重结晶可得到纯度在90%的柚皮苷(贾冬英，姚开，谭敏，张铭让.柚皮中柚皮苷的乙醇提取工艺研究[J].中草药，2002,33 (9) :801);韦敏等报道了用95%乙醇的提取化橘红，提取液经大孔树脂纯化后冷冻干燥，可得纯度达85%的柚皮苷(韦敏，杨中林，吴建民.大孔吸附树脂法分离纯化化橘红中柚皮苷的研究[J].中成药，2007，29 (3)352)。尽管方法众多，但这些方法都不尽完善。在从药材中提取出粗品的柚皮苷时，许多方法都有加入CaCl2或调节pH，而且几乎都使用了大孔树脂来进行初步纯化，这些操作复杂，在洗脱时会用到一些有毒溶剂，污染环境，且加入的物质若不去除干净，可能会伤害人体，不利于工业化大生产。且所得的柚皮苷纯度不够理想，入药使用时容易产生毒副作用。虽然过高速逆流色谱和高压萃取釜能够获得纯度较高的柚皮苷，但对设备的要求较高，成本相对也较高，不利于工业化生产。
发明内容
为了克服以上问题，寻求一种简单易行的柚皮苷的提取纯化方法，发明人对柚皮苷的提取纯化工艺进行了深入的研究，得到了操作简单、产量高的柚皮苷提取纯化工艺。本发明的目的在于提供一种从化橘红中提取纯化柚皮苷的方法。该方法包括以下步骤(I)水提将化橘红用水加热提取I 4次，每次用水的体积为化橘红质量的8 16倍，时间为O. 5 4小时；过滤，合并水提滤液；(2)醇沉将上述水提滤液浓缩至其密度为I. 10 I. 30克/毫升；加乙醇，至醇浓度为40% 80% ;放置6 48小时，过滤，收集醇沉滤液；
(3)回收乙醇将醇沉滤液回收乙醇至无醇味，放置4 15天，过滤，干燥得柚皮昔粗品；(4)重结晶将柚皮苷粗品用20% 50%的乙醇水溶液进行两次重结晶干燥后得柚皮苷纯品；每次重结晶的乙醇水溶液的体积均为固体质量的4 10倍，析晶温度为5 25°C;其中，第一次重结晶析晶时间为24 36小时，得第一次重结晶粗产品；第二次重结晶采用两步析晶法，第一步析晶时间为6 8小时，第二步析晶时间为24 36小时。第(4)步骤中第二次重结晶采用两步析晶法的目的是先滤除杂质野漆树苷，再将母液析晶析出柚皮苷，从而保证得到高纯度的柚皮苷。所述步骤(4)中，第二次重结晶采用的两步析晶法具体为取第一次重结晶粗产品加入所述乙醇水溶液,加热搅拌至全溶,趁热过滤,收集滤液,滤液冷却至15 25°C，放置6 8小时，抽滤，弃去滤渣，所得滤液继续放置24 36小时，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的I 4倍，抽干，收集固体并干燥后得柚皮苷纯品。 上述工艺过程中所涉及的工艺参数范围，均为采用正交设计或均匀设计进行实验研究后所确定。在上述工艺所指定工艺参数范围进行提取分离，均可以得到纯度在98.0%以上的柚皮苷，上述工艺参数在所述范围内的改变仅对柚皮苷的得率有影响。在中试规模的多次实验中，采用本发明所述的提取纯化方法得到的柚皮苷纯品，经外标法测定产品纯度均在98. 0%以上，为高纯度柚皮苷。实验表明本工艺切实可行，有操作简单、溶剂低毒、对环境无污染、产品纯度高、重现性好等特点。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明做进一步说明，但不以任何方式限制本发明。下述实施例中乙醇水溶液的浓度是指乙醇与水按体积比的百分比浓度。实施例I取化橘红500公斤，加入其质量10倍量体积的水提取I小时，滤过，滤渣再提取2次，每次加其质量12倍量体积的水,每次提取I小时,滤过,合并滤液并于70°C浓缩至相对密度为I. 12克/毫升，加乙醇使乙醇的体积比浓度达到70%，放置12小时，滤过，弃去滤渣，将滤液回收乙醇至无醇味，放置5天，析出固体，滤过，将固体干燥，即得柚皮苷粗品73. 3公斤。实施例2取实施例I的柚皮苷粗品5公斤，加入其质量6倍量体积的30%乙醇水溶液，加热搅拌至全溶,趁热过滤,收集滤液,滤液在25°C下放置24小时，析出固体，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的2倍，收集固体并干燥后得第一次重结晶粗产品。取第一次重结晶粗产品2. 7公斤，加入其质量10倍量体积的40%乙醇水溶液，加热搅拌至全溶，趁热过滤，收集滤液，滤液冷却至25°C时，继续放置8小时，抽滤，弃去滤渣，母液继续放置36小时，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的2倍，抽干，收集固体并干燥后得柚皮苷I. 7公斤，纯度为98. 82%。实施例3取实施例I的柚皮苷粗品13公斤，加入其质量6倍量体积的30%乙醇水溶液，加热搅拌至全溶，趁热过滤，收集滤液，滤液在20°C下放置30小时，析出固体，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的2倍，收集固体并干燥后得第一次重结晶粗产品。取第一次重结晶粗产品7. 5公斤，加入其质量10倍量体积的50%乙醇水溶液，加热搅拌至全溶，趁热过滤，收集滤液，滤液冷却至20°C时，继续放置7小时，抽滤，弃去滤渣，母液继续放置24小时，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的2倍，抽干，收集固体并干燥后得柚皮苷2. 9公斤，纯度为98. 81%。实施例4取实施例I的柚皮苷粗品15公斤，加入其质量6倍量体积的30%乙醇水溶液，加热搅拌至全溶，趁热过滤，收集滤液，滤液在15°C下放置36小时，析出固体，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的2倍，收集固体并干燥后得第一次重结晶粗产品。
取第一次重结晶粗产品9公斤，加入其质量10倍量体积的40%乙醇水溶液，加热搅拌至全溶，趁热过滤，收集滤液，滤液冷却至5°C时，继续放置7小时，抽滤，弃去滤渣，母液继续放置24小时，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的2倍，抽干，收集固体并干燥后得柚皮苷5. I公斤，纯度为98. 92%。
权利要求
1.一种从化橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)水提将化橘红用水加热提取I 4次，每次用水的体积为化橘红质量的8 16倍，时间为0. 5 4小时；过滤，合并水提滤液； (2)醇沉将上述水提滤液浓缩至其密度为I.10 I. 30克/毫升；加乙醇，至醇浓度为40% 80% ;放置6 48小时，过滤，收集醇沉滤液； (3)回收乙醇将醇沉滤液回收乙醇至无醇味，放置4 15天，过滤，干燥得柚皮苷粗品; (4)重结晶将柚皮苷粗品用20% 50%的乙醇水溶液进行两次重结晶干燥后得柚皮苷 纯品；每次重结晶的乙醇水溶液的体积均为柚皮苷粗品质量的4 10倍，析晶温度为5 25°C;其中，第一次重结晶析晶时间为24 36小时，得第一次重结晶粗产品；第二次重结晶采用两步析晶法，第一步析晶时间为6 8小时，第二步析晶时间为24 36小时。
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(4)，所述的第二次重结晶采用的两步析晶法具体为取第一次重结晶粗产品加入所述乙醇水溶液，加热搅拌至全溶，趁热过滤，收集滤液，滤液冷却至15 25°C，放置6 8小时，抽滤，弃去滤渣，所得滤液继续放置24 36小时，抽滤，固体用水洗涤二次，每次用水量为固体质量的I 4倍，抽干，收集固体并干燥后得柚皮苷纯品。
全文摘要
本发明公开了一种从化橘红中提取柚皮苷的方法，该方法包括水提、醇提回收和重结晶步骤。其中所述的重结晶进行两次，且第二次重结晶采用两步析晶法，第一步析晶时间为6～8小时，第二步析晶时间为24～36小时，析晶温度为5～25℃，溶剂为20%～50%的乙醇水溶液。相对于现有的同类提取技术本工艺具有切实可行，操作简单、溶剂低毒、对环境无污染、产品纯度高、重现性好等优点。
文档编号C07H1/08GK102964408SQ20121055521
公开日2013年3月13日 申请日期2012年12月19日 优先权日2012年12月19日
发明者王永刚, 苏薇薇, 吴忠, 刘孟华 申请人:广东中大天翼生物科技发展有限公司