专利名称：一种盘果菊苷a的提取纯化方法
技术领域：
本发明属于制药领域，具体涉及一种盘果菊苷A的提取纯化方法。
背景技术：
盘果菊苷A (Prenantheside A)为倍半職类化合物,分子式为C21H3tlO9,分子量为426.46。呈无定形粉末状,来源于菊科植物槭叶盘果菊acerifolia Benth.全植物，槭叶盘果菊在我国河北、辽宁等省区有广泛分布。现代药理研究表明，盘果菊苷A具有一定的细胞毒活性，对L-5178Y细胞株的ID5tl为4. O μ g/mL。经检索，尚无盘果菊苷A的工业生产方法的专利文献报道
发明内容
本发明的目的是提供一种盘果菊苷A的提取纯化方法。本发明的盘果菊苷A的提取方法的技术方案包括以下步骤
A.取槭叶盘果菊药材粉碎，用有机溶剂加热提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用水饱和正丁醇萃取4-5次，萃取液减压回收正丁醇至尽，得正丁醇萃取物；
B.将正丁醇萃取物湿法装柱，葡聚糖凝胶LH-20为吸附剂，用量为被分离样品量的20-30倍，以甲醇或乙醇水溶液洗脱，减压回收试剂并浓缩，得浓缩液；
C.将浓缩液进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含盘果菊苷A的流分，浓缩、干燥即得。步骤A中所述提取用有机溶剂可选80-95%的乙醇、甲醇、丙酮溶液，提取方法可选回流、微波或超声提取。步骤B中所述甲醇或乙醇的体积百分比浓度为50%_70%。步骤C中所述高压硅胶柱的柱压为2. 1-3. 4MPa，柱内径为150_200mm，层析柱径高比为1:12-15，硅胶目数为100-300目。本发明的优点在于本发明通过提取、萃取、连续柱层析分离纯化以及结晶等步骤制备得到盘果菊苷A，耗时短、得率高、操作简单、易于工业化；且本发明所提供的盘果菊苷A的提取纯化方法所得产品含量高，为进一步开发利用提供了药理原料、理论及实践支持。
具体实施例方式 实施例I:
取槭叶盘果菊粗粉10kg，按质量比1:4加入85%的乙醇，65°C条件下加热回流提取I. 5小时，提取2次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水混悬，用水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，减压回收正丁醇至尽，装入S^hadex LH-20凝胶柱(用量为流浸膏的20倍)上，以60%乙醇洗脱，根据TLC合并洗脱液，减压回收试剂并浓缩，得到盘果菊苷A浓缩液，将浓缩液用甲醇溶解湿法上样至填料200-300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 8MPa，柱内径为200mm，层析柱径高比为1:15，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:1、100:2、100:5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含盘果菊苷A流分合并，减压回收溶剤，自然干燥得到盘果菊苷A54mg，含量为98. 26%。实施例2:
取槭叶盘果菊粗粉IOkg,按质量比1:5加入80%的甲醇,60°C条件下加热回流提取2. O小时，提取3次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水混悬，用水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇层，减压回收正丁醇至尽，装入S印hadex LH-20凝胶柱(用量为流浸膏的20倍)上，以55%こ醇洗脱，根据TLC合并洗脱液，减压回收试剂并浓缩，得到盘果菊苷A浓缩液，将浓缩液用甲醇溶解湿法上样至填料100-200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为3. 2MPa，柱内径为150mm，层析柱径高比为1:12，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:1、100:2、100:5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含盘果菊苷A流分合井，减压回收溶剤，自然干燥得到盘果菊苷A48mg，含量为96. 42%。实施例3:
取槭叶盘果菊粗粉IOkg,按质量比1:6加入95%的甲醇,70°C条件下微波提取20min, 提取4次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水混悬，用水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，减压回收正丁醇至尽，装入S印hadex LH-20凝胶柱(用量为流浸膏的30倍)上，以65%甲醇洗脱，根据TLC合并洗脱液，减压回收试剂并浓缩，得到盘果菊苷A浓缩液，将浓缩液用甲醇溶解湿法上样至填料150-250目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 5MPa，柱内径为180mm，层析柱径高比为1:13，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100: I、100: 2、100: 5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含盘果菊苷A流分合并，减压回收溶齐U，自然干燥得到盘果菊苷A56mg，含量为97. 31%。实施例4:
取槭叶盘果菊粗粉10kg，按质量比1:5加入80%的丙酮，65°C条件下超声提取I. O小时，提取2次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水混悬，用水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，减压回收正丁醇至尽，装入S印hadex LH-20凝胶柱(用量为流浸膏的28倍)上，以70%こ醇洗脱，根据TLC合并洗脱液，减压回收试剂并浓缩，得到盘果菊苷A浓缩液，将浓缩液用甲醇溶解湿法上样至填料100-200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. IMPa，柱内径为150mm，层析柱径高比为1:14，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:1、100:2、100:5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含盘果菊苷A流分合井，减压回收溶剤，自然干燥得到盘果菊苷A64mg，含量为96. 59%。实施例5
取槭叶盘果菊粗粉10kg，按质量比1:10加入90%的こ醇，65 °C条件下微波提取O. 5小时，提取3次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水混悬，用水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇层，减压回收正丁醇至尽，装入S印hadex LH-20凝胶柱(用量为流浸膏的25倍)上，以60%甲醇洗脱，根据TLC合并洗脱液，减压回收试剂并浓缩，得到盘果菊苷A浓缩液，将浓缩液用甲醇溶解湿法上样至填料200-300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为3. 4MPa，柱内径为160mm，层析柱径高比为1:15，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100: I、100: 2、100: 5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含盘果菊苷A流分合并，减压回收溶剤，自然干燥得到盘果菊苷A53mg，含量为98. 44%。
权利要求
1.ー种盘果菊苷A的提取纯化方法，其特征在于包括以下步骤 A.取槭叶盘果菊药材粉碎，用有机溶剂加热提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用水饱和正丁醇萃取4-5次，萃取液减压回收正丁醇至尽，得正丁醇萃取物； B.将正丁醇萃取物湿法装柱，葡聚糖凝胶LH-20为吸附剂，用量为被分离样品量的·20-30倍，以甲醇或こ醇水溶液洗脱，减压回收试剂并浓缩，得浓缩液； C.将浓缩液进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含盘果菊苷A的流分，浓缩、干燥即得。
2.根据权利要求I所述的提取方法，其特征在于步骤A中所述提取用有机溶剂可选80-95%的こ醇、甲醇、丙酮溶液，提取方法可选回流、微波或超声提取。
3.根据权利要求I所述的提取方法，其特征在于步骤B中所述甲醇或こ醇的体积百分比浓度为50%-70%。
4.根据权利要求I所述的提取方法，其特征在于步骤C中所述高压硅胶柱的柱压为·2. 1-3. 4MPa，柱内径为150-200mm，层析柱径高比为1:12-15，硅胶目数为100-300目。
全文摘要
本发明涉及一种盘果菊苷A的提取纯化方法，其步骤如下取药材粉碎，用有机溶剂提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用正丁醇萃取，减压回收正丁醇，加入葡聚糖凝胶柱层析分离，减压回收试剂并浓缩，取浓缩液进行高压硅胶柱层析，石油醚-丙酮梯度洗脱，收集盘果菊苷A流分，浓缩、干燥即得。本发明方法操作简单、设备投入小、产品纯度好，适合工业化生产。
文档编号C07H1/08GK102863490SQ201210356698
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月24日 优先权日2012年9月24日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司