专利名称：从柚中提取柚皮苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种从柚Citus grandis(L)Osbeck(如沙田柚等)中提取柚皮苷单体的方法。
背景技术：
柚皮苷是一种黄酮类化合物，广泛存在于各种中药材中，例如枳壳，枳实，柑橘，柠檬，葡萄柚，橘红，橙等。在柚Citus grandis(L)Osbeck中也含有柚皮苷，且含量较高。柚Citus grandis(L)Osbeck有多个变种，其中包括文旦柚Citus grandis(L)Osbeck var.wentanyu Hort.、沙田柚Citus grandis(L)Osbeckv var.shatianyu Hort.、坪山柚Citus grandis(L)Osbeck var.Hort.、四季抛Citus grandis(L)Osbeckvar.szechipow Hort.、大红抛Citus grandis(L)Osbeck var.tahungpow.。柚皮苷是多种药材的主要有效成份之一。已经有研究证明，柚皮苷具有抗菌消炎，止咳化痰，降低血浆胆固醇浓度，改善血管循环等作用。已被用于作苦味剂、发汗剂、还有降胆固醇等方面。
柚皮苷的获得途径，除了Rosenmund(Rosenmund，Ber.，61，2608(1958))和Zemlen，Bognar(Ber.，75，648(1942))描述的方法以及其它化学方法进行合成得到外，还可通过从药材中提取获得。很多药材例如柚，枳实等，其药材中柚皮苷含量均很高。梅州沙田柚鲜果中的柚皮苷含量就有2％左右。但由于药材中含有各种黄酮类，多糖类，鞣质，生物碱类，蒽醌类等物质，而且黄酮类物质中也含有多种结构相近的物质。要得到柚皮苷单体，需要把柚皮苷与其它各种物质分离开来。以往的研究，未能提供一种获得柚皮苷单体的可行的提取方法。从药材(特别是柚)中提取柚皮苷单体的方法，尚没有报道。
柚皮苷的结构式
发明内容
本发明的目的是提供一种从柚Citus grandis(L)Osbeck中提取柚皮苷单体的方法。
本发明的柚皮苷提取方法的步骤包括①将柚切片或粉碎，经过水提取，滤过，合并滤液；②滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；③洗脱液挥干溶剂，得柚皮苷粗品再经多次重结晶，得柚皮苷单体(纯品)。
上述本发明方法所说的柚可以是沙田柚或其同科属种水果的幼果或成熟果实的果皮或全果；可以是新鲜的或者是干的药材；例如沙田柚Citus grandis(L)Osbeckvvar.shatianyu Hort.、文旦柚Citus grandis(L)Osbeck var.wentanyu Hort.、坪山柚Citus grandis(L)Osbeck var.Hort.、四季抛Citus grandis(L)Osbeckvar.szechipow Hort.或大红抛Citus grandis(L)Osbeck var.tahungpow.等各种柚的各个变种。
本发明方法中的水提取可以采用在室温～100℃条件下或/和超声波条件下进行；提取次数一般为一至三次，次数增加不限。水的用量为水至少能没过药材，水用量过多不限。提取时间一般为0.1-24小时，时间延长不限。加温或/和超声波条件下提取可缩短提取时间。
本发明方法中的浸膏醇沉所用的乙醇可以是无水乙醇或者各种浓度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液体的乙醇最终浓度可以是5％至959％的各种浓度。
本发明方法中的柱分离，采用的柱填料可以为硅胶，聚酰胺，大孔树脂，葡聚糖凝胶等各种填料。
本发明方法中的有机溶剂洗脱，有机溶剂可以采用乙醇，甲醇，乙酸乙酯等各种常用有机溶剂。有机溶剂的浓度可以采用各种浓度，包括浓度为100％的有机溶剂。
本发明方法中的重结晶，溶剂可以采用水或者有机溶剂，有机溶剂可以采用乙醇，甲醇，乙酸乙酯等各种常用有机溶剂。重结晶的次数可以为一次至十次，次数增加不限。
采用本发明的方法，从柚Citus grandis(L)Osbeck及其变种沙田柚等中提取柚皮苷(纯品)，提取得率均在85％以上，提取得率高。
采用本发明方法所得到的柚皮苷单体(纯品)，经过《中华人们共和国药典》2000版一部高效液相色谱法测定，以中国药品生物制品检定所提供的柚皮苷对照品进行外标法定量，得提取所得柚皮苷样品中柚皮苷单体的含量。结果表明，样品中柚皮苷单体的含量高于95％。表明本发明工艺可行。
本发明的柚皮苷提取方法，具有提取工艺简单，提取率高，提取得到的柚皮苷单体纯度高等特点。
具体实施发式下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
各实施例所涉及到的固体混合物中之固体，液体中之液体，以及液体中之固体的百分比分别是以wt/wt，vol/vol，wt/vol计算，除非另有说明。
实施例1沙田柚的幼果切成饮片，加100℃水没过药材，水提取三次，每次一小时，滤过；滤液浓缩成浸膏，过大孔树脂柱，用水洗脱后，再用70％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，沉淀用水重结晶三次，喷雾干燥，得柚皮苷单体。得率为88.6％。
实施例2沙田柚的柚皮粉碎，不过筛，加100℃水没过样品，提取三次，每次1小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩，加入无水乙醇至乙醇浓度为50％，放置过夜，滤过，上清液回收乙醇。浸膏过聚酰胺柱，先用水洗脱，再用30％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，沉淀干燥，用无水乙醇重结晶五次后，得柚皮苷单体。得率为86.3％。
实施例3沙田柚的幼果切成饮片，经70℃水浸提两次，每次3小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏加入95％乙醇至乙醇浓度为60％，静置过夜，产生沉淀，滤过，去沉淀，滤液回收乙醇，所得液体过氧化铝柱，先用水洗脱，再用95％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，回收浓缩，得沉淀，沉淀用甲醇重结晶四次，得柚皮苷单体。得率为85.8％。
实施例4经炮制后的沙田柚切成饮片，加100℃水没过药材，提取二次，每次2小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩，得浸膏，浸膏过聚酰胺柱，先用水洗脱，再用60％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，所得液体放置过夜，滤过，得沉淀，沉淀用水重结晶四次，得柚皮苷单体。得率为89.4％。
实施例5柚皮苷单体纯度测定实验取上述提取方法制备得到的柚皮苷单体适量，甲醇溶解定容于容量瓶中，再用微孔滤膜(0.45um)过滤后，注入高效液相色谱仪中，以中国药品生物制品检定所提供的柚皮苷对照品进行外标法定量，得提取所得柚皮苷样品中柚皮苷单体的含量。结果见表1。
色谱条件Agilentl100高效液相色谱仪(自动进样器，真空脱气机，四元泵，柱温箱，二极管阵列检测器)；色谱柱MARKER ODS柱(5um，4.0×250mm)；流动相甲醇-水-冰乙酸(35∶61∶4)；检测波长283nm；柱温30℃；流速1ml/min；进样量5μl。
表1样品含量测定试验结果样品浓度 进样量测得柚皮苷 柚皮苷含量样品号峰面积(mg/ml)(μl)浓度(mg/ml) (％)柚皮苷0.1004 5815.75 0.1004 100对照品样品1 0.1004 5798.85 0.0983 98.0样品2 0.1192 5963.64 0.1186 99.5从表1结果看出，提取所得样品中柚皮苷单体的含量均高于98％。说明本发明的提取方法所得到的柚皮苷样品纯度高。
综上所述，说明本发明的柚皮苷提取方法，能有效地从柚中提取得到柚皮苷单体，所得柚皮苷样品纯度高，含量均高于95％以上。工艺简单可行。
权利要求
1.一种从柚中提取柚皮苷的方法，依次包括以下步骤①将柚切片或粉碎，经过水提取，滤过，合并滤液；②滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；③洗脱液挥干溶剂，得柚皮苷粗品；再经多次重结晶，得柚皮苷单体。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的水提取是在室温至100℃条件下或/和超声波条件下进行；提取次数为一至三次。
3.按照权利要求2所述的方法，其特征是所说水提取的提取时间为0.1-24小时。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的浸膏醇沉所用的乙醇是无水乙醇或者各种浓度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液体的乙醇最终浓度为5％至95％。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的柱分离采用的柱填料为硅胶，聚酰胺，大孔树脂或葡聚糖凝胶填料。
6.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的有机溶剂洗脱所用的有机溶剂为包括浓度为100％6的各种浓度的乙醇或甲醇，乙酸乙酯。
7.按照权利要求1所述的方法，其特征是所说的重结晶所用的溶剂为水或常用有机溶剂，常用有机溶剂为乙醇，甲醇，乙酸乙酯；重结晶的次数为一次至十次。
8.按照权利要求1至7之一所述的方法，其特征是所述的柚为沙田柚或其同科属种水果的幼果或成熟果实的果皮或全果。
全文摘要
本发明涉及一种从柚(如沙田柚等)中提取柚皮苷单体的方法。该方法是将柚切片或粉碎，经过一至多次水提取，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；洗脱液挥干溶剂，得粗品；再经多次重结晶，得柚皮苷晶体。采用本发明方法，从沙田柚中提取柚皮苷，提取得率均在85％以上，所得柚皮苷样品中柚皮苷单体的含量达到98％以上。因此，本发明方法具有提取工艺简单，提取率高，提取得到的柚皮苷单体纯度高等特点。
文档编号C07H17/00GK1528773SQ0314699
公开日2004年9月15日 申请日期2003年9月29日 优先权日2003年9月29日
发明者苏薇薇, 方铁铮, 吴忠, 宋晓虹, 王永刚, 彭维, 古淑仪 申请人:中山大学