专利名称：韭菜籽总皂苷的提取方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种韭菜籽总皂苷的提取方法及其应用。
背景技术：
目前市场上作为治疗心血管疾病的药物多为西药，都存在一定的不足，如容易产生耐药性，作为治疗心律失常的药物本身又导致心律失常的产生，甚至有的药物具有较强的毒副作用。现有资料记载，韭菜籽又称韭籽。韭籽甘辛，能温暖肝肾，补阳痿减遗精，止带下减尿频。它归肝、肾经。它的功能是补肝肾、暖腰膝、壮阳固精、缩尿止带。主治肝肾虚损、阳气不足之阳痿、腰膝冷痛、肾气不固、遗精、尿频、带下，但没有治疗心血管疾病的用途；韭菜籽中的主要有效成分为韭菜籽总皂苷，而现有的韭菜籽总皂苷的提取方法存在工艺复杂的缺点。
发明内容
本发明在于提供一种韭菜籽总皂苷作为治疗心血管疾病药物的新应用以及解决现有的韭菜籽总皂苷的提取方法存在工艺复杂的问题。韭菜籽总皂苷的提取方法通过以下步骤实现(一)将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为30～99％的乙醇溶液中浸泡1～24小时；(二)对浸泡液进行过滤，然后将滤液浓缩为滤液原体积的10～80％；(三)将浓缩后的滤液流经大孔吸附树脂柱色谱进行吸附1～3小时，用水对已经吸附滤液的大孔吸附树脂柱色谱进行水洗5～15分钟，然后用质量浓度为30～95％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗20～80分钟；(四)然后将醇洗的洗脱液放入真空度为1～10Pa的真空室内进行干燥，干燥后得到韭菜籽总皂苷。韭菜籽总皂苷作为药物应用于心血管疾病的治疗。本发明工艺简单，成本低；本发明中的韭菜籽总皂苷经大量试验证实，韭菜籽总皂苷对冠心病、心律失常、室颤、心肌缺血等心血管疾病具有显著的治疗效果，利于推广应用；本发明中的韭菜籽总皂苷可以加葡萄糖作为注射液，可以做成胶囊和片剂。
具体实施例方式
具体实施例方式
一本实施方式中韭菜籽总皂苷的提取方法通过以下步骤实现(一)将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为30～99％的乙醇溶液中浸泡1～24小时；(二)对浸泡液进行过滤，然后将滤液浓缩为滤液原体积的10～80％；(三)将浓缩后的滤液流经大孔吸附树脂柱色谱进行吸附1～3小时，用水对已经吸附滤液的大孔吸附树脂柱色谱进行水洗5～15分钟，然后用质量浓度为30～95％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗20～80分钟；(四)然后将醇洗的洗脱液放入真空度为1～10Pa的真空室内进行干燥，干燥后得到韭菜籽总皂苷。
具体实施例方式
二本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为60～80％的乙醇溶液中。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
三本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为70％的乙醇溶液中。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
四本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为50％的乙醇溶液中。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
五本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为30％的乙醇溶液中。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
六本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(二)中将滤液浓缩为滤液原体积的30～60％。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
七本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(三)中用质量浓度为45～80％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
八本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(三)中用质量浓度为50％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
九本实施方式与具体实施方式
一的不同点在于步骤(三)中用质量浓度为70％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗。其它步骤与具体实施方式
一相同。
具体实施例方式
十本实施方式中韭菜籽总皂苷的应用在于韭菜籽总皂苷作为治疗心血管疾病的药物的应用。
具体实施例方式
十一本实施方式中韭菜籽总皂苷的提取方法通过以下步骤实现(一)将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度70％的乙醇溶液中浸泡12小时；(二)对浸泡液进行过滤，然后将滤液浓缩为滤液原体积的50％；(三)将浓缩后的滤液流经大孔吸附树脂柱色谱进行吸附2小时，用水对已经吸附滤液的大孔吸附树脂柱色谱进行水洗10分钟，然后用质量浓度为50％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗60分钟；(四)然后将醇洗的洗脱液放入真空度为1～10Pa的真空室内进行干燥，干燥后得到韭菜籽总皂苷。
具体实施例方式
十二本实施方式中取韭菜籽总皂苷1.0kg、药用淀粉0.5kg、糊精1kg和质量浓度为50％的乙醇溶液0.1～10kg制粒，整粒，干燥压片，每片0.3g。
具体实施例方式
十三本实施方式中取韭菜籽总皂苷1.0kg，用质量浓度为80％的乙醇溶液湿发制粒，整粒，装1号胶囊，每粒0.2g。
韭菜籽总皂苷治疗心血管疾病的药理试验实验材料动物昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半；wistar大鼠，体重200～230，雌雄各半。均购自哈尔滨医科大学动物中心，合格证编号分别为040518试剂垂体后叶素上海第一生化药业有限公司 批号030401乌头碱DELTA天然有机化合物信息中心批号040507MDA试剂盒 南京建成生物研究所 批号20040517HDL试剂盒 南京建成生物研究所 批号20040517SOD试剂盒 南京建成生物研究所 批号20040517乌拉坦上海曹扬中学第二化工厂 批号9710201、对正常小鼠缺氧存活时间的影响取小鼠30只，随机分为3组，(1)对照组iv 10ml/kg生理盐水；(2)韭菜籽总皂苷低剂量组组iv 15mg/kg；(3)韭菜籽总皂苷高剂量组iv75mg/kg；注射30分钟后将小鼠放入500ml磨口瓶中(含3g钠石灰)，涂凡士林后，盖干。观察小鼠死亡时间。结果见表1。
表1.小鼠缺氧存活时间对比试验
a表示与对照组相比P＜0.05。
试验结果表明注射韭菜籽总皂苷的小鼠在缺氧条件下存活时间明显长于未注射的小鼠，说明韭菜籽总皂苷能显著提高心脏供氧能力。
2、对乌头碱诱发的大鼠心律失常的影响健康雌性Wistar大鼠30只，随机分为3组(1)模型组iv给予等容积生理盐水、(2)韭菜籽总皂苷低剂量组iv 15mg/kg、(3)韭菜籽总皂苷高剂量组iv 75mg/kg。30分钟后用20％乌拉坦(5mg/kg)进行腹腔注射麻醉，将动物仰位固定在鼠台上，并与BL-420生物机能实验系统相连，描记心电图。大鼠心电图稳定后，正常对照组舌下静脉注射生理盐水，其余两组舌下静脉注射0.04％乌头碱1ml/kg(40μg/kg)，5s内注完，观测室性早搏(VP)的发生时间，并统计室性心动过速(VT)、室颤(VF)的发生率和窦性节律恢复率。结果见表2。
表2.乌头碱诱发的大鼠心律失常的对比试验表
a表示与模型组相比P＜0.05。
试验结果表明注射韭菜籽总皂苷的大鼠在乌头碱诱发的心律失常的条件下发生时间明显晚于未注射的大鼠，说明韭菜籽总皂苷对心律失常有明显治疗作用。
3、对氯仿诱发小鼠室颤的影响取小鼠30只，随机分为3组，(1)模型组iv给予等容积生理盐水、(2)韭菜籽总皂苷低剂量组iv 15mg/kg、(3)韭菜籽总皂苷高剂量组iv 75mg/kg。给药后2～3分钟内，将小鼠逐个放入含有5ml氯仿棉球的导致500ml烧杯内，每换一只小鼠需加入0.5ml氯仿，让小鼠吸入氯仿直至停止呼吸。立即取出并与BL-420生物机能实验系统相连，描记心电图。计算室颤发生率，结果见表3。
表3.氯仿诱发小鼠室颤的对比试验
a表示与模型组相比P＜0.05。
试验结果表明注射韭菜籽总皂苷的小鼠室颤率明显降低，说明韭菜籽总皂苷对室颤有明显的抑制作用。
4、对垂体后叶素诱发大鼠心肌缺血的保护作用健康Wistar大鼠70只，随机分为7组(1)模型组iv给予等容积生理盐水、(2)韭菜籽总皂苷低剂量组iv 15mg/kg、(3)韭菜籽总皂苷高剂量组iv 75mg/kg。实验前一日进行大鼠对垂体后叶素敏感性筛选实验。方法是大鼠舌下静脉注射垂体后叶素1U/kg，观察心电图变化情况，选取对垂体后叶素敏感大鼠用于实验(T波明显抬高，ST段抬高超过0.1mV)。将筛选获得的敏感大鼠用于模型组和总皂苷组，24h后开始实验。各组均以1ml/100g灌胃，1小时后用20％乌拉坦(5ml/kg)腹腔注射麻醉，将动物仰位固定在鼠台上，并与BL-420生物机能实验系统相连，描记心电图。正常对照组舌下静脉注射生理盐水，其余两组舌下静脉注射垂体后叶素1U/kg后，分别于即刻、1min后观察心电图变化。以T波和ST段改变为指标，判断心肌缺血程度和药物作用。60min，后腹主动脉取血，离心分离血清，测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果见表4。
表4.对心肌缺血大鼠LDH、MDA和SOD的影响的对比试验
a表示与对照组相比P＜0.05；b表示与模型组比有差别P＜0.05。
试验结果表明注射韭菜籽总皂苷的小鼠心肌缺血程度低，说明韭菜籽总皂苷对心肌缺血有显著的治疗效果。
权利要求
1.韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于韭菜籽总皂苷的提取方法通过以下步骤实现(一)将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为30～99％的乙醇溶液中浸泡1～24小时；(二)对浸泡液进行过滤，然后将滤液浓缩为滤液原体积的10～80％；(三)将浓缩后的滤液流经大孔吸附树脂柱色谱进行吸附1～3小时，用水对已经吸附滤液的大孔吸附树脂柱色谱进行水洗5～15分钟，然后用质量浓度为30～95％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗20～80分钟；(四)然后将醇洗的洗脱液放入真空度为1～10Pa的真空室内进行干燥，干燥后得到韭菜籽总皂苷。
2.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为60～80％的乙醇溶液中。
3.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为70％的乙醇溶液中。
4.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为50％的乙醇溶液中。
5.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(一)中将韭菜籽粉碎后，放入水中或者质量浓度为30％的乙醇溶液中。
6.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(二)中将滤液浓缩为滤液原体积的30～60％。
7.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(三)中用质量浓度为45～80％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗。
8.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(三)中用质量浓度为50％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗。
9.根据权利要求1所述的韭菜籽总皂苷的提取方法，其特征在于步骤(三)中用质量浓度为70％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱色谱进行醇洗。
10.韭菜籽总皂苷的应用，其特征在于韭菜籽总皂苷作为治疗心血管疾病的药物的应用。
全文摘要
韭菜籽总皂苷的提取方法及其应用，本发明涉及一种韭菜籽总皂苷的提取方法及其应用。韭菜籽总皂苷的提取方法通过以下步骤实现(一)萃取；(二)过滤并压缩滤液；(三)吸附并水洗，然后再醇洗；(四)减压干燥，得到韭菜籽总皂苷。韭菜籽总皂苷的应用在于韭菜籽总皂苷作为药物应用于心血管疾病的治疗。本发明中的韭菜籽总皂苷作为治疗心血管疾病的药物，经大量试验证实，对冠心病、心律失常、室颤、心肌缺血等心血管疾病具有显著的治疗效果，利于推广应用；本发明中的韭菜籽总皂苷可以加葡萄糖作为注射液，可以做成胶囊和片剂。
文档编号A61K131/00GK101040997SQ200710072060
公开日2007年9月26日 申请日期2007年4月19日 优先权日2007年4月19日
发明者杨宝峰, 吕延杰, 初文峰, 李国玉 申请人:哈尔滨医科大学