包含人参皂苷Rg1的皮肤外用剂组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种包含人参皂苷Rg1的皮肤外用剂组合物，且上述人参皂苷Rg1能够抑制牛皮癣素。本发明的皮肤外用剂组合物能够用于预防及减轻皮肤疾病或皮肤保湿目的。其中，上述皮肤疾病包括特异性皮炎或牛皮癣。本发明的皮肤外用剂组合物，能够阻止牛皮癣素所诱发的皮肤角质形成异常现象，预防及减轻皮肤疾病，提升皮肤的水分含量。
【专利说明】
包含人参皂苷Rg1的皮肤外用剂组合物
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种包含人参皂苷Rgl的皮肤外用剂组合物。
【背景技术】
[0002] 每个人都希望拥有婴儿般晶莹靓丽的皮肤，但皮肤在暴露于各种各样的外部环境 以及年龄增长的过程中，会逐渐失去弹性并受损。皮肤是人体中直接与外部环境接触的第 一道屏障，需要始终直接承受外部环境所带来的刺激，因此非常微小的刺激也有可能会导 致皮肤的敏感反应和变化。这种皮肤的变化会导致与平时不同的物质生成，且当阶段性及 持续性地暴露在刺激环境中时，甚至有可能导致不可逆的损伤。
[0003] 近来，人们正在积极开展很多关于皮肤内的一种抗菌肽物质即牛皮癣素的研究。 尤其是在人们发现牛皮癣素除了目前已知的抗菌作用之外，还有可能诱发皮肤角质细胞分 化异常并由此导致皮肤屏障受损的作用之后，牛皮癣素(psoriasin)被认为是与皮肤疾病 直接相关的重要物质。根据实际的一项研究结果（Regine Glaser，The Journal of investigative dermatology(2009)，ν· 129no · 3，p· 641~649)可以得知，在代表性的皮肤 疾病即特异性皮炎或牛皮癣患者的表皮中，能够检测出极高浓度的牛皮癣素。这种牛皮癣 素浓度过高的皮肤，会呈现出结构不致密、稀疏受损的形态，同时还会出现表皮厚度异常增 厚的现象。
[0004] 此外，本发明人通过有关牛皮癣素的持续性研究发现，在施加如紫外线、葡萄球 菌、视黄酸等外部刺激时，也会导致牛皮癣素浓度的提升。此外还可以确认牛皮癣素会表达 到表皮细胞外，从而对正常表皮结构蛋白质中的角蛋白1或角蛋白10的表达造成抑制作用， 同时对引起非正常表皮分化及增殖的蛋白质即角蛋白6或角蛋白16的生成造成促进作用。 因此通过有效抑制牛皮癣素，可以得到改善皮肤特性的效果。
[0005] 现有技术文献
[0006] 专利文献
[0007] (专利文献1)包含人参皂苷Rg3的皮肤外用剂组合物(大韩民国公开专利10-2014-0126892)
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于提供一种包含人参皂苷Rgl的皮肤外用剂组合物，从而对存在 于皮肤内的牛皮癣素作用进行抑制。
[0009] 本发明的另一目的在于，通过上述牛皮癣作用的抑制效果，预防并减轻特异性皮 炎或牛皮癣等皮肤疾病，并提升皮肤的保湿力和恢复力。
[0010] 为了实现上述目的，本发明提供一种皮肤外用剂组合物，其有效成分中包含人参 皂苷Rgl，且上述人参皂苷Rgl能够抑制牛皮癣素。
[0011] 根据本发明实施例，上述人参皂苷Rgl的结构如下述化学式1所示：
[0012] 〈化学式1>
[0013]
[0014] 根据本发明实施例，上述人参皂苷Rgl的含量为组合物整体重量的0.001~5重 量％。
[0015] 根据本发明实施例，上述组合物包含皮肤科用组合物、清洗剂组合物以及化妆品 组合物中的一种以上。
[0016] 本发明的组合物能够用于预防及减轻皮肤疾病或皮肤保湿目的。此时，上述皮肤 疾病包括特异性皮炎或牛皮癣。
[0017] 本发明的包含人参皂苷Rgl的皮肤外用剂组合物，能够对存在于皮肤内的牛皮癣 素作用进行抑制。
[0018] 因此，本发明的皮肤外用剂组合物能够抑制因为牛皮癣素而诱发的皮肤角质细胞 异常现象，恢复已受损的皮肤屏障，预防并减轻皮肤疾病，同时提升皮肤的保湿力和恢复 力。
【附图说明】
[0019] 图1是显示在紫外线B、葡萄球菌、视黄酸等外部刺激下牛皮癣素的mRNA表达量的 图表。
[0020] 图2a是显示在紫外线A及紫外线B外部刺激下角蛋白1以及角蛋白10的mRNA表达量 的图表。
[0021 ]图2b是显示在葡萄球菌外部刺激下角蛋白1以及角蛋白10的mRNA表达量的图表。 [0022]图2c是显示在视黄酸外部刺激下角蛋白1以及角蛋白10的mRNA表达量的图表。 [0023]图3a是显不在牛皮癖素作用下角蛋白1的mRNA表达量的图表以及显不蛋白质表达 量的蛋白质印迹结果。
[0024]图3b是显不在牛皮癖素作用下角蛋白10的mRNA表达量的图表以及显不蛋白质表 达量的蛋白质印迹结果。
[0025]图4是显示在白细胞介素-6(IL-6)、人参皂苷Rgl、IL-6+人参皂苷Rgl作用下分别 表达出的牛皮癣素的mRNA量的图表。
[0026]图5a是显示在牛皮癣素、牛皮癣素+人参皂苷Rgl作用下分别表达出的角蛋白1的 mRNA量的图表。
[0027]图5b是显示在牛皮癣素、牛皮癣素+人参皂苷Rgl作用下分别表达出的角蛋白10的 mRNA量的图表。
[0028] 图6是人造皮肤在牛皮癣素、牛皮癣素+人参皂苷Rgl作用下分别表达出的角蛋白1 的观察照片。
[0029] 图7是在使用包含或未包含人参皂苷Rgl的皮肤外用剂和使用一般皮肤外用剂的 情况下，皮肤水分含量的对比图表。
【具体实施方式】
[0030] 本发明人考虑到当使用能够抑制牛皮癣素作用的物质制造皮肤外用剂组合物时， 将不仅能够预防并减轻各种皮肤疾病，还能够进一步提升皮肤自身的恢复力和保湿力，从 而保持更加靓丽的皮肤。因此，通过对各种候选物质进行筛选并经过了多次的失败和不懈 的努力之后，终于发现了人参皂苷Rgl能够对牛皮癣素作用起到非常良好的抑制效果。
[0031] 上述人参皂苷Rgl是下述化学式1所示结构的人参萃取物中所包含的皂苷成分中 的一种：
[0032]〈化学式1>
[0033]
[0034]人参皂苷不仅与750多种其他植物中所包含的皂苷的化学结构及药理效能不同， 其药性也非常温和且过量使用时也不会有任何毒性，而且几乎不会导致任何溶血作用的发 生，因此本发明的包含人参皂苷Rgl的皮肤外用剂组合物有望能够被非常安全且有效地使 用。
[0035]上述人参皂苷Rgl能够从植物中萃取，也可以利用相应行业公知的方法进行合成 使用，也可以购买商业市售产品使用。通常能够从人参进行萃取和采集，此时所使用的人参 种类并无特殊限制，使用鲜人参、红参、白参、太极参、尾参等为宜。此外，在上述萃取过程 中，能够使用人参的茎、根、叶、花、果实等人参的所有部分，并不限定于某个特定部分的萃 取物。
[0036]本发明中人参皂苷Rgl的含量比例为，皮肤外用剂组合物整体重量的0.001~5重 量％。
[0037]如上所述的包含人参皂苷Rgl的皮肤外用剂组合物通过对存在于皮肤内的抗菌肽 中的一种即牛皮癣素进行抑制，有效防止因为上述牛皮癣素而引发的皮肤角质细胞形成异 常现象，并借此预防或缓解皮肤疾病，提升皮肤中的水分含量。
[0038]此时，上述皮肤外用剂组合物还可以包含类黄酮物质(flavonoid)。
[0039] 本发明的组合物，可为皮肤科用组合物、清洗剂组合物以及化妆品组合物中的一 种以上为宜。此外，本发明的组合物可包含人参皂苷Rgl或包含人参皂苷Rgl的萃取物以及 其他添加剂等，还包含允许在皮肤科和/或化妆品中使用的载体为宜。
[0040] 在适用本发明的另一实施例中，人参皂苷Rgl或包含人参皂苷Rgl的萃取物，还可 以转换为食品补充剂组合物等制剂。
[0041] 对于适用本发明的组合物的剂型并无特别限制，可以适用包含化妆品学或皮肤科 学所允许使用的媒介或基材的剂型。这包含适合于局部使用的所有剂型，例如溶液、凝胶、 固体、糊状无水生成物、将油状物分散到水状物中所得到的乳剂、悬浮液、微型乳剂、微型胶 囊、微型颗粒或离子型（脂质体）以及非离子型小囊分散剂形态、或面霜、润肤露、乳液、粉、 软膏、喷剂或遮瑕棒等形态。而且，还可以采取泡沫(foam)形态或包含压缩促进剂的气雾剂 (aerosol)组合物形态。
[0042] 这些组合物可按照对应领域的常规方法进行制造。更详细地说，可以采取软膏、面 霜、凝胶、药膏(sal ves )、精华液(serums )、乳剂、水溶液、粉末、棒状等形态。
[0043] 此外，本发明的组合物可以包括脂肪物质、有机溶媒、溶解剂、浓缩剂、胶凝剂、软 化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent )、芳香剂、表面活性剂、水、离子型 或非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封锁剂(metal ion blocking agent)例如乙二胺四 乙酸（EDTA;ethylenediaminetetraacetic acid)、螯合剂（chelating agent)、保存剂、维 生素、阻滞剂(blocker)、湿润剂、所需油分、染料、颜料、亲水性或亲油性活性剂、脂质小囊 或化妆品中经常使用的任意其他成分等在化妆品学或皮肤科学领域常规使用的辅助剂。上 述辅助剂的添加量为化妆品学或皮肤科学领域常规使用的量。
[0044] 此外，本发明的组合物为了提升其皮肤改善效果，还可以包含皮肤吸收促进物质。
[0045] 下面为了帮助对本发明的理解，将对最具代表性的实施例等进行说明。本发明的 权利范围并不限定于此，包含所有等同范围。
[0046] 在本说明书中所使用的所有附图中，人参皂苷RGl(Ginsenoside Rgl)表示为G_ Rgl、牛皮癣素(psoriasin，S100A7)表示为S100A7、角蛋白l(keratin 1)表示为KRT 1、角蛋 白10(keratin 10)表不为KRT 10、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)表不为 S.aureus、视黄酸(retinoic acid)表示为RA、紫外线A表示为UVA、紫外线B显示为UVB、逆转 录聚合酶链反应（RT-PCR)的补正基准mRNA(control)或蛋白质印迹的补正基准蛋白质 (control)表不为con。
[0047] 确认牛皮癣素是否会诱发皮肤角质形成异常
[0048] 因为考虑到在特异性皮炎及牛皮癣等皮肤疾病中皮肤内的牛皮癣素保持较高浓 度的现象，在实验例1至3中确认了外部刺激是否会同样导致一般皮肤内牛皮癣浓度的增 加，并观察了在形成上述牛皮癣素时所出现的与皮肤角质的形成相关的各种变化。
[0049] 上述外部刺激的类型为，紫外线A或B、葡萄球菌以及视黄酸。
[0050] [实验例1]在外部刺激下的牛皮癣素表达量变化确认
[0051] 为了对在外部刺激下的牛皮癣素表达量的变化进行确认，首先对皮肤角质细胞进 行培养。作为第一步骤，将从新生儿的表皮中分离出的角质形成细胞以1.25 X 106个细胞/ 培养皿的密度接种到直径为60mm的细胞培养皿(cell culture dish)的KGM培养基中。接下 来利用C02培养箱将上述细胞培养皿在37°C、5%C02条件下进行保管，将角质形成细胞培养 至80%左右的覆盖密度（confluency)。
[0052]接下来，将所培养出的上述角质形成细胞分成三个实验组，然后作为外部刺激手 段分别利用紫外线B 25mJ/cm2、葡萄球菌6μg/ml、视黄酸ΙμΜ进行处理之后，再进行2天的培 养。接下来，分离出没有细胞的培养液，然后利用酶联免疫吸附法(ELISA assay)对牛皮癣 素的mRNA表达量进行测定及定量化。作为补正基准mRNA，使用持家基因 （housekeeping gene)RPL13A。
[0053]上述测定结果如图1所示。在上述经过外部刺激处理的所有实验组中，其牛皮癣素 的mRNA表达量均有所增加。
[0054][实验例2]确认外部刺激是否会诱发皮肤角质形成异常
[0055] 为了确认外部刺激是否会诱发皮肤角质形成异常，对表皮分化蛋白质中代表性的 角蛋白1和角蛋白10的mRNA以及蛋白质表达量变化进行了分析。上述角蛋白1以及角蛋白10 用作角质形成的指标。
[0056] 对皮肤角质细胞进行培养的阶段与上述实施例1相同。接下来，将所培养出的上述 角质形成细胞分成若干个实验组，然后作为外部刺激手段分别利用紫外线、葡萄球菌、视黄 酸对其进行处理。具体来讲，在利用紫外线A 10mJ/cm2、紫外线B 20mJ/cm2、葡萄球菌3yg/ ml、葡萄球菌6μg/ml、视黄酸ΙμΜ进行处理之后，再进行2天的培养。
[0057] 接下来，进行mRNA分析或蛋白质分析。详细说明如下。
[0058] l)mRNA 分析
[0059] 在去除所培养出的上述细胞的培养基之后，通过添加 lml的Trizol试剂(Trizol， invitrogen)对胶质细胞的mRNA进行分离，然后利用紫外线检测仪(HEWLLETT PACKARD)在 260nm条件下对上述胶质细胞的mRNA进行定量。接下来，通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR; reverse transcription-polymerase chain reaction)对胶质细胞的mRNA中的角蛋白 1 以 及角蛋白1 〇的mRNA表达量进行了确认。此时作为补正基准mRNA，使用持家基因 RPL13A。
[0060] 实验结果如图2a、图2b以及图2c所示。在经过外部刺激处理后的实验组中，角蛋白 1以及角蛋白10的基因表达有所减少。
[0061] 2)蛋白质分析
[0062] 通过向所培养出的上述细胞添加 RIPA缓冲液（Radio-immunoprecipitation assay buffer)，使蛋白质溶出。接下来，利用SDS-PAGE对上述蛋白质进行分离，然后通过蛋 白质印迹(Western blot)对角蛋白1以及角蛋白10进行确认及定量化。此时作为补正基准 蛋白质，使用从持家基因表达出的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH;Gly Ceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)。
[0063] 实验结果显示，在经过外部刺激处理之后，角蛋白1以及角蛋白10的蛋白质表达量 呈现出与mRNA表达量相同的减少现象。
[0064][实验例3]确认牛皮癣素是否会诱发皮肤角质形成异常
[0065] 综合上述实施例1和实施例2的结果，为了检讨牛皮癣素是否会诱发皮肤角质形成 异常，实施了实验例3。
[0066] 本实施例3的实施过程与上述实施例2相同，只是将上述实施例2中对所培养的角 质形成细胞进行处理的外部刺激，替换成添加〇. 25μg/ml、lμg/ml的牛皮癣素之后再进行4 天的培养。
[0067]实验结果如图3a以及图3b所示。在牛皮癣素处理实验组中，角蛋白1以及角蛋白10 的mRNA以及蛋白质表达量有所减少。
[0068] 人参皂苷Rgl的牛皮癣素抑制效果确认
[0069]通过上述实施例1至3,已确认牛皮癣素是皮肤角质形成异常的诱发物质之一。下 面，对用于确认人参皂苷Rgl的牛皮癣素抑制作用的实施例进行说明。
[0070] [实施例1]人参皂苷Rgl的牛皮癣素抑制效果-1
[0071] 对皮肤角质细胞进行培养的阶段与上述实施例1相同。接下来，将所培养出的上述 细胞分成两个实验组，然后利用lμg/ml的已知的牛皮癣素表达诱导物质即白细胞介素（IL-6; Interlukine-6)对其中的一个实验组进行处理，再同时利用lyg的IL-6以及lOppm的人参 皂苷Rgl对另一个实验组进行处理，然后再进行2天的培养。其中，上述人参皂苷Rgl是IL-6 所诱发的牛皮癣素表达抑制的候选物质。
[0072] 在2天之后去除培养基，然后利用与上述实施例2中的mRNA分析相同的方法对其进 行mRNA分析，然后对上述两个实验组中的牛皮癣素的mRNA表达量差异进行了确认。
[0073] 实验结果如图4所示。相对于仅添加 IL-6的实验组，在同时利用IL-6以及人参皂苷 Rgl进行处理的实验组中，牛皮癣素的mRNA表达量有所减少。
[0074][实施例2]人参皂苷Rgl的牛皮癣素抑制效果_2(体外）
[0075]对皮肤角质细胞进行培养的阶段与上述实施例1相同。接下来，将所培养出的上述 细胞分成两个实验组，然后利用lμg/ml的牛皮癣素对其中的一个实验组进行处理，再同时 利用lμg/ml的牛皮癣素和lOppm的人参皂苷Rgl对另一个实验组进行处理，然后再进行4天 的培养。在培养后按照上述实施例2中的mRNA分析以及蛋白质分析方法，对角蛋白1以及角 蛋白10的mRNA以及蛋白质表达量进彳丁确认。
[0076]实验结果如图5a以及图5b所示。如上述图5a以及图5b所示，在仅利用牛皮癣素进 行处理的实验组中，角蛋白1(KRT 1)以及角蛋白10(KRT 10)的表达量有所减少，但在同时 利用人参皂苷Rgl和牛皮癣素进行处理的实验组中，呈现出较高的KRT 1以及KRT 10的mRNA 表达量。此外，在同时利用人参皂苷Rgl和牛皮癣素进行处理的实验组中，其KRT 1的mRNA表 达量水平与未经处理的实验组类似，但KRT 10的mRNA表达量反而高于未经处理的实验组。 [0077][实施例3]人参皂苷Rgl的牛皮癣素抑制效果_3(人造皮肤）
[0078]为了对与体内实验类似环境下的效果进行确认，利用人造皮肤(MaTack公司)进行 了实验。
[0079]利用2μg/ml的牛皮癣素对其中一个实验组的表皮上层部进行处理，并利用2μg/ml 的牛皮癣素和lOppm的人参皂苷Rgl对另一个实验组进行处理，在1个星期之内每隔2天进行 了共计3次处理。接下来，利用甲醛溶液对两个实验组进行固定，并对角蛋白1进行了免疫染 色处理。
[0080] 经染色处理之后的角蛋白1呈现为红色，其观察结果如图6所示。相对于未经处理 的实验组，在仅利用牛皮癣素进行处理的实验组中，角蛋白1的表达量有所减少，且皮肤屏 障崩溃导致组织结构松散。但是在同时利用牛皮癣素和人参皂苷Rgl进行处理的实验组中， 角蛋白1的表达量以及皮肤屏障的结构恢复正常。
[0081] [实施例4]
[0082] 下面，以上述人参皂苷Rgl的牛皮癣素抑制效果为基础，制备了如表1所示的本发 明的组合物。
[0083] 表 1
[0084]
[0085] *比较剂型例及实施剂型例的数值表示其含量，单位为重量％。
[0086]制造不包含人参皂苷Rgl的比较剂型例1和以0.1重量％包含人参皂苷Rgl的实施 剂型例1的皮肤外用剂，以30~49岁的40位女性(4个实验组，每组10人)为对象，使其在8个 星期内的每天早晨和晚上将上述皮肤外用剂涂抹在脸部。在实验前(〇周）、4周后、8周后，分 三次测定各个实验组的皮肤水分含量，上述测定的平均值对比结果如图7所示。
[0087]在测定皮肤中的水分含量时，使用能够对伴随皮肤角质层水分(hydrat ion)的介 电常数(dielectric constant)变化值进行测定的皮肤水分测试仪(Corneometer)。
[0088]测定结果显示，使用包含人参皂苷Rgl的皮肤外用剂时的皮肤保湿效果明显高于 使用未包含人参皂苷Rg 1的皮肤外用剂的情况。
[0089]以上述实施例为基础，可以确认本发明的皮肤外用剂组合物有望能够对特异性皮 炎或牛皮癣等皮肤疾病提供皮肤保护以及恢复效果。
【主权项】
1. 一种皮肤外用剂组合物，其特征在于:有效成分中包含人参皂苷Rgl。2. 根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于： 所述人参皂苷Rgl的结构如下述化学式1所示： 〈化学式1>3. 根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于： 所述人参皂苷Rgl的含量为所述皮肤外用剂组合物整体重量的0.001~5重量％。4. 根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于： 所述人参皂苷Rgl能够抑制牛皮癣素的表达。5. 根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于： 所述皮肤外用剂组合物用于预防或减轻皮肤疾病。6. 根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于： 所述皮肤外用剂组合物用于皮肤保湿。7. 根据权利要求5所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于： 所述皮肤疾病包含特异性皮炎或牛皮癣。8. 根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于： 所述皮肤外用剂组合物包含皮肤科用组合物、清洗剂组合物以及化妆品组合物中的一 种以上。
【文档编号】A61K31/704GK105997842SQ201610195635
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年3月31日
【发明人】孙义东, 洪勇德, 李成训, 裵日弘, 曺恩敬, 朴泌俊
【申请人】爱茉莉太平洋股份有限公司