延龄草提取物及其中皂苷类化合物的制备方法及其在制备抗缺血性心脏病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及延龄草提取物及其中皂苷类化合物的制备方法及其在制备抗缺血性 心脏病药物中的应用，属于中医药制备技术领域。
【背景技术】
[0002] 延龄草为百合科延龄草属植物延龄草Trillium tschonoskii Maxim.，俗名头顶 一颗珠、芋儿七、狮儿七等，是传统的名贵中药，有延年益寿的功效。主治头晕目眩、失眠、跌 打损伤、外伤出血、神经衰弱、高血压病、脑震荡后遗症等疾病，是恩施土家族著名民间药之 一。目前国内外对延龄草属植物的药理活性研究表明延龄草有较强的抗炎、免疫调节、改善 大鼠学习记忆功能和抗衰老等作用。发明人采用冠脉结扎致大鼠心肌缺血实验模型，从心 电图、心肌梗死范围、血清肌酸激酶（CK)及血清乳酸脱氢酶（LDH)的活力等方面研究证实 延龄草85%乙醇洗脱物对心肌缺血具有显著的防治作用。
[0003] 化学研究表明，有效部位85%乙醇洗脱部位以留体皂苷类成分为主，留体皂苷 总含量大于90%，其中主要为偏诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-i3_D-葡 萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0-a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)_[ a -L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2)]-i3_D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-a-L_吡 喃鼠李糖基（1 - 4) _[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]_ β-D-葡萄糖苷，上述三种皂苷 既是延龄草药材的指标性和特征性成分，又是有效部位85 %乙醇洗脱部位的指标性和 特征性成分。进一步药理研究证实有效部位中偏诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - β -D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [ a -L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - a -L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4) - [ a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷为延龄草抗缺血性心 脏病药物的有效成分。上述研究还没有报道，我们通过系统的体内外实验研究，首先发现其 对抗缺血性心脏病具有良好的治疗作用。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种延龄草提取物及其中皂苷类化合物的制备方法及其在制 备抗缺血性心脏病药物中的应用。
[0005] 本发明采用了下述技术方案。
[0006] 延龄草提取物的制备方法：将延龄草药材粉碎成粗粉，用0-100%乙醇浸泡 0. 5-2小时，4-12倍量溶剂加热回流提取2-4次，每次1-3小时，过滤，合并滤液。上述滤 液与45-80°C减压浓缩至0. 5-1. 5g生药材/ml，〇-4°C冷藏过夜，析胶，过滤，滤液再用正 丁醇萃取回收得浸膏稀释上大孔吸附树脂或滤液直接上大孔吸附树脂AB-8型或D-101 型或HPD-400或各种型号大孔吸附树脂富集，依次用乙醇水由0-50 %洗脱，再用乙醇水 由50-95 %洗脱得到各洗脱部位，主要收集乙醇水60-85%的洗脱部位，各洗脱部位在 45-80°C减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或 喷雾干燥粉，即得。
[0007] 延龄草皂苷类化合物中偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) - β -D-葡 萄糖苷（pennogenin-3-〇-a -L-rhamnopyranosyl-(1 一 2) - β -D-glucopyranoside)、偏 诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-i3_D-葡 萄糖苷（pennogenin-3-〇-a -L_rhamnopyranosyl-(l 一 4)_[ a -L_rhamnopyranosyl-(l 一 2)]_β -D-glucopyranoside)和偏诺阜苷元-3-〇-α -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-α -L- P比 喃鼠李糖基（1 - 4)-[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-i3-D-葡萄糖苷（pennogenin-3-O -a -L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) - a -L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) - [ a -L-rhamnopyranosyl -(1 - 2)]-β -D-glucopyranoside)的制备方法：将权利要求6所得延龄草提取物上硅胶 柱，上样后依次用三氯甲烷：甲醇或二氯甲烷：甲醇或三氯甲烷：甲醇：水或二氯甲烷： 甲醇：水梯度洗脱，以上述延龄草皂苷类化合物中偏诺皂苷元-3-〇-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - β -D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [ a -L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - a -L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4) -[ a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷的3种皂苷作为对照 品TLC或HPLC检测，合并相应流份。上述流份于45-80 °C减压浓缩蒸干，用适量蒸馏水混悬 或溶解，上反相硅胶0D5-C18柱色谱或S印hadexLH-20柱色谱或制备高效液相色谱技术分 离纯化，依次用乙醇水由0-50%洗脱，再用乙醇水50-95%洗脱，洗脱液用冷冻干燥法或喷 雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，用10-95%乙醇结晶并重结晶，即得。
[0008] 前述方法制备的延龄草提取物及其中皂苷类化合物，其有效成分为偏诺皂苷 元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) - β D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖 基（1 - 4) - [ a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃 鼠李糖基（1 - 4)-α-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-[α-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-β-D-葡萄 糖苷中的一种或多种，或其该物质中的皂苷元的第21位和第27位的转化羟甲基的羟基或 17位羟基或所有糖基的醇羟基被乙酰基、脂肪链烷烃基、芳香族取代基、酰胺基中的任意一 种取代，或者是水解后会产生偏诺阜苷兀_3_〇-a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-β -D-葡萄糖 苷的物质，可用于制备抗缺血性心脏病药物，所述药物包括口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉 针剂、水针剂或注射剂或各种剂型制剂，所述药物还包括各种单方和复方制剂。
[0009] 所涉及的缺血性心脏病是由心肌缺血导致并发生的冠心病、心绞痛和心肌梗死等 缺血性心脏病的任意一种。
[0010] 本发明的优点是：提供了一种延龄草提取物及其中皂苷类化合物的提取与制备方 法，所得物质中有效成分主要为偏诺皂苷元-3-0-a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-β -D-葡 萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0-a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)_[ a -L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - a -L-吡喃鼠 李糖基（1 -4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 -2)]-i3_D-葡萄糖苷中的一种或多种，所得物 质可用于制备抗缺血性心脏病药物的口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉针剂、水针剂或注射剂 或各种剂型制剂的原料药。
[0011] 一种延龄草提取物及其中皂苷类化合物中偏诺皂苷元-3-0-a -L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - β -D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [ a -L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - a -L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4)_[ a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]_β -D-葡萄糖苷在体内外对由心肌缺 血导致并发生的冠心病、心绞痛和心肌梗死等缺血性心脏病具有良好的治疗作用和较强的 生物活性。
[0012] -种延龄草提取物及其中皂苷类化合物中偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - β -D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [ a -L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - a -L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4)-[α-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-β-D-葡萄糖苷的制备方法主要通过 从天然药物中提取，为纯天然组分与单体，具有良好的生物相容性。
【附图说明】
[0013] 图1为偏诺皂苷元-3-0-a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)_ β -D-葡萄糖苷的分子结 构式；
[0014] 图2为偏诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-[a-L_吡喃鼠李糖基 (1 - 2)]-β-D-葡萄糖苷的分子结构式；
[0015] 图3为偏诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-a-L_吡喃鼠李糖基 (1 - 4)_[ a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]_β -D-葡萄糖苷的分子结构式。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例对本发明作进一步描述：
[0017] 实施例1
[0018] -种延龄草提取物及其中偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - β -D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [ a -L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - β -D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-0- a -L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - a -L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-i3_D-葡萄糖苷的制备方法：将延 龄草药材粉碎成粗粉，用70%乙醇浸泡1小时，10倍量溶剂加热回流提取3次，每次2小 时，过滤，合并滤液。上述滤液与65°C减压浓缩至1. 0g生药材/ml，0-4°C冷藏过夜，析胶， 过滤，滤液再用正丁醇等有机溶剂萃取，回收有机溶剂，得浸膏加水混悬，上AB-8型号大孔 吸附树脂富集，依次用水、30 %乙醇、60%乙醇和85 %乙醇洗脱，得到各洗脱部位，用冷冻 干燥法进行干燥，收集冻干粉，即得。其中85%的洗脱部位以留体皂苷类成分为主，甾体 皂苷总含量大于95%，即得延龄草提取物。将上述延龄草提取物既85%乙醇的洗脱部位