含1,2,3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺类化合物的制作方法

专利名称：：含1,2,3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺类化合物的制作方法含1,2,3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺类化合物
技术领域：
：本发明属于医药
技术领域：
，特别涉及一种具有抗乙肝病毒活性的含1,2，3-噻二唑环的丙烯酰胺化合物。
背景技术：
：乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus;HBV)是一个相当大的公众健康问题，因为此病毒有引起急性和慢性感染的能力。慢性HBV感染可导致肝硬化和原发性肝细胞癌。尽管乙肝病毒疫苗已经问世多年，然而目前还没有能成功的控制慢性HBV感染的有效治疗手段。全世界仍有3亿人口感染HBV，中国现作为世界第一的乙肝大国约有1.2亿人携带乙肝病毒，其中慢性乙肝病人3000万，他们无法从现有的商品疫苗中受益。现有的HBV治疗手段功效还不够，或者是有严重的毒副作用，如公认有明确疗效的干扰素仅有25%至40%的有效率，同时还有10%至40%的病人产生严重的副作用。核苷类似物如拉米夫定等，必须有相当长的疗程，又易发生特定的耐药病毒变异，而且存在治疗费用高昂的缺点。文献中报道几类具有强的抗培养液中的乙肝病毒的活性的非核苷类的丙烯酰胺类似物。特别是N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇(梁光义等，CN02160309.X)和2-苯甲酰胺基-3-氯-3-苯基-丙烯酰胺(Perni,etal.，Bioorg.&Med.Chem.Lett"10,2687,2000)，它们具有类似的骨架结构，对乙肝病毒具有强烈的抑制作用。本发明人曾报道了一系列(x-取代-I，2，3-噻二唑乙酰胺类化合物具有抗烟草花叶病毒活性(李正名等，CN01136684.2)和一定的抗乙肝病毒活性(Zhao,etal.,Bioorg.&Med.Chem.Lett.，16，6107，2006)。
发明内容本发明的目的在于提供一种含l，2，3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物。该类化合物是非核苷类化合物，具有制备简单，成本低廉，抑制乙型肝炎病毒进行DNA复制效果明显等特点，制备药物前景广阔。本发明提供的含1,2,3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物是具有如下通式(I)的化合物其中，X是氢或卤素；Ri是氨基、l-6碳烷胺基、芳胺基、吗啉基或哌啶基；R3是4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-基时，R2是苯基、取代苯基；R2是4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-基时，R3是苯基、取代苯基；苯环上的取代基为l-6碳烷基、l-6碳院氧基、l-6碳烷胺基、l-6碳垸硫基、卤素、羟基、氰基、硝基、酯基、羧基，取代基数量为1~5。本发明化合物对乙型肝炎病毒进行DNA复制和HBsAg、HbeAg有较好的抑制作用。本发明进一步优选X优选卤素；Ri优选吗啉基、哌啶基；R3是4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-基时，R2优选苯基、氯苯基、溴苯基；R2是4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-基时，R3优选苯基、氯苯基、溴苯基。。本发明化合物(I)制备路线如下(1)R3是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基取代时:。。？&飞/"r2"Vb，&q'本发明化合物(I)具体制备方法经以下步骤完成1)将N-(4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-甲酰基)甘氨酸、NaAc、苯甲醛和乙酸酐，摩尔比为1:1~2:1~2:1~5，在50-150°C的超声波中反应1~10小时，加入乙醇，滤出固体，所得固体重结晶，得到4-取代苯甲叉-2-(4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-基)-5(4印-噁唑酮。2)上步得到的4-取代苯甲叉-2-(4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-基)-5(4H)-噁唑酮和哌啶，摩尔比为1:12;在CHCl3中搅拌过夜，脱去溶剂后减压柱层析，得产品N-(l-取代胺基甲酰基-2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰胺。3)上步得到的N-(l-取代胺基甲酰基-2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲酰胺，在CHCl3中，-15-0匸下，加入等摩尔的液溴，搅拌1~10小时，加入CaC03搅拌过夜，减压柱层析得目标化合物(I)。(2)R2是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基取代时:本发明化合物(I)的具体制备方法经以下步骤完成.-1)马尿酸、4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲醛、无水NaAc和醋酸酐，摩尔比为1:12:12:卜5，在95-100。C保持卜10h，降温到80。C后，加入3ml乙醇，冷却，过滤，用乙醇和水洗涤，得砖红色固体，4-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(411)-噁唑酮。2)上步得到的4-(4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(4H)-噁唑酮，在CHCl3中，-5-10'(:下，缓慢滴加取代胺的CHCl3溶液，摩尔比为1:12，搅拌反应卜10h，减压蒸除溶剂，干燥得产品N-(l-取代胺基甲酰基-2-(4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)-苯甲酰胺。3)1.9611111101上步得到的]^(1-取代胺基甲酰基-2-(4-甲基-1，2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)苯甲酰胺，在CHCl3中，-15-0卩下，加入等摩尔的液溴，搅拌1~10小时，加入CaC03搅拌过夜，减压柱层析得目标化合物(I)。本发明提供的结构式(I)化合物是具有抗乙肝病毒活性的化合物，在抗乙型肝炎病毒复制的检验中显示出相当高的活性。本发明化合物进一步可用于制造治疗或预防HBV的药物。具体实施方式实施例1N-(l-取代胺基甲酰基-2-氯(溴)-2-取代苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰胺(1)4-苯甲叉-2-(4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-基)-5(4H)-噁唑酮的合成将8.00gC0.038mo1)的N-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰基)甘氨酸、3.28g(0.040mol)的NaAc研细加入100ml锥形瓶中，一次性加入0.040mol的苯甲醛和12.72gC0.120mo1)的乙酸酐，在70°C的超声波中反应2小时，加入16ml乙醇摇晃均匀冷冻过夜。次日滤出固体，用300ml氯仿溶解，用20mlX5的蒸馏水洗涤，将有机层低压蒸除溶剂，所得固体重结晶得产品5.794g，产率53.7%，熔点167國169。C，iHNMR(S):3.169(s,3H,4-methyl國thiadiazole),7.416(s，1H,-CH=)，7.515-8.170(m,5H,Ph)(2)N-(l-取代胺基甲酰基-2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-甲酰胺的合成在25ml的锥形瓶中依次加入2.2mmol4-取代苯甲叉-2-(4-甲基-l，2，3-噻二唑-5陽基)-5(411)-噁唑酮，10mlCHCl3和0.196g(2.3mmo1)哌啶，搅拌过夜。次日脱去溶剂后用石油醚乙酸乙酯(5:1)减压柱层析，得产品。同样方法可以合成本发明其它中间体。其物化数据和核磁数据见表1和表2。表l:中间体的物化数据<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2:中间体的核磁数据<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>(3)N-(l-取代胺基甲酰基-2-卤代-2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰胺的合成在25ml锥形瓶中加入溶于15mlCHC13的1.4mmol^(1-取代胺基甲酰基-2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲酰胺，在冰盐浴下搅拌，然后加入液溴0.225g(1.4mmol、0.072ml)，室温搅拌3小时，加入0.07g(0.7mmol)CaC03室温搅拌过夜，减压柱层析得产品。同样方法，可以合成本发明的其它化合物。其物化数据和核磁数据见表3和表4。表3式I化合物的物化数据(R3是4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-基时)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实施例2:N-(l-取代胺基甲酰基-2-氯(溴or氢)-2-(5-取代-4-甲基-l,2，3-噻二唑)-乙烯基)-苯甲酰胺的合成(1)4-(4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(4H)-噁唑酮的合成在50ml圆底烧瓶安装上回流冷凝管、干燥管，一次性加入3.358g(0.01787mol)马尿酸、2.323g(0.01787mol)4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-甲醛、1.538g(0.01787mol)无水NaAc和5.474g(0.05361mol)醋酸酐。加热到95-100。C保持2h。然后降温到80。C后，一次性加入3ml乙醇，冷却，过滤出沉淀，用10ml冰乙醇洗涤2次，5ml热水洗涤3次，得砖红色固体，干燥称重得2.812g，产率57%，熔点233-235。C，'HNMR(S):2.903(s，3H，4-methyl-thiadiazole)，7.399(s,1H，隱CH-),7.567-8.299(m,5H，Ph)。(2)N-(l-取代胺基甲酰基-2-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)-苯甲酰胺的合成在50ml的锥形瓶中加入1.4gC0.00512mo1)4-(4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(4H)-噁唑酮和20mlCHCl3，在冰浴冷却下，缓慢滴加10mlCHCl3和0.00563mol取代胺的混合物，加完后室温，搅拌反应1.5h，静置过夜。减压蒸除溶剂，干燥得产品。同样方法可以合成本发明其它中间体。其物化数据和核磁数据见表5和表6。表5:中间体的物化数据<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>酰胺的合成在25ml的锥形瓶中加入1.96mmolN-(l-取代胺基甲酰基-2-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)-苯甲酰胺和20mlCHC13，在冰盐浴搅拌下一次性加入0.32g(2mmol、0.1ml)Br2，搅拌0.5h，加入O.lg(lmmol)CaC03过夜搅拌，减压蒸除溶剂，减压柱层析，用甲醇重结晶得产品。同样方法，可以合成本发明的其它化合物。其物化数据和核磁数据见表7和表8。表7:式I化合物的物化数据(R2是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基，R3是苯环时)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例3抗乙肝病毒活性测试材料及方法1.细胞株2.2.15细胞(乙型肝炎病毒)。2.样品处理样品临用前溶于DMSO配成适当浓度，检测时用培养液作3倍稀释，共s个稀释度。3.阳性对照药拉米夫定(3TC)，由葛兰素威康公司生产。4.主要试剂乙肝病毒e抗原及s抗原放免检测试剂盒，北京北方生物技术研究所提供；a32PdCTP，中国福瑞生物工程有限公司提供；5.测试方法2.2.15细胞种96孔培养板，36小时后按以上稀释度分别加入样品及阳性对照药，同时设细胞对照孔，加药后96小时后分别更换含不同稀释浓度样品的培养液，于加药后第8天分别收集细胞上清及2.2.15细胞，采用RIA法检测细胞上清中HBsAg、HBeAg的分泌量，点杂交的方法检测细胞中HBVDNA复制程度，分别计算ICs。及SI。测试结果及结论见表9。表9抗乙型肝炎病毒测试结果样品编号TC50^g/ml)HBsAgHBeAgDNA复制ic50(pg/ml)SIic50(jig/ml)SIic50(|ig/ml)SI1-1111.11-一一---1-486.23-一--10.48.291-517.81--一-3.594.961-664.15--12.265.23--1-16231.12------1-11192.45----9.0021.381-12333.33----30.5110.921-1386.23-一----1-14577.35----3TC961.50----14.8064.97注(l)表中"-"表示样品在最大无毒剂量无抗病毒活性。(2)TC5():对细胞半数有毒浓度；IC5():对病毒半数抑制浓度；SI:选择指数，SI=TC5Q/IC50。10权利要求1、一种含1，2，3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物，其特征在于它是具有如下通式(I)的化合物id="icf0001"file="S2008100528125C00011.gif"wi="18"he="29"top="57"left="105"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，X是氢或卤素；R1是氨基、1-6碳烷胺基、芳胺基、吗啉基或哌啶基；R3是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基时，R2是苯基、取代苯基；R2是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基时，R3是苯基、取代苯基；苯环上的取代基为1-6碳烷基、1-6碳烷氧基、1-6碳烷胺基、1-6碳烷硫基、卤素、羟基、氰基、硝基、酯基、羧基，取代基数量为1～5。2、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述的通式(I)的化合物屮X优选卣素；Ri优选吗啉基、哌啶基；R3是4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-基时，R2优选苯基、氯苯基、溴苯基；R2是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基时，R3优选苯基、氯苯基、溴苯基。3、权利要求1所述的含1,2,3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物的应用，其特征在于对乙型肝炎病毒进行DNA复制和HBsAg、HBeAg的抑制作用，并将其用作制备乙肝病治疗的药物。全文摘要本发明涉及含1，2，3-噻二唑环并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物及其应用，它是如右结构式为(I)的化合物，其中X是氢或卤素；R₁是氨基、1-6碳烷基胺基、芳胺基、吗啉基或哌啶基；R₃是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基时，R₂是苯基、取代苯基；R₂是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基时，R₃是苯基、取代苯基。本发明提供的化合物是具有抗乙肝病毒活性的化合物，在抗乙型肝炎病毒复制的检验中显示出相当高的活性。本发明化合物进一步可用于制造治疗和/或预防乙型肝炎的药物。文档编号A61K31/4523GK101260091SQ20081005281公开日2008年9月10日申请日期2008年4月18日优先权日2008年4月18日发明者刘征骁,李正名,李玉新,赵卫光申请人:南开大学