专利名称：：一种稳定的乌司他丁水针剂药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种水针剂药物组合物，具体涉及含有有效剂量的乌司他丁和一定比例的辅料组成。
背景技术：
：乌司他丁(Ulinastatin，尿胰蛋白酶抑制剂UrlinaryTrypsinInhibitor,UTI)是从健康成年男性尿液中提取的一种糖蛋白，由143个氨基酸组成，N端为丙氨酸，C端为亮氨酸，在第10位丝氨酸和45位天冬氨酸有糖链。丝氨酸上的O-糖苷链包含多个硫酸软骨素单元。乌司他丁的分子量经HPLC法测定为60-70KD，经SDS-PAGE测定为40-50KD，等电点为2.6，是一种对热稳定的酸性蛋白。乌司他丁对胰蛋白酶、透明质酸酶、纤溶酶等多种酶具有抑制作用，对细胞膜、溶酶体膜有明显的稳定作用，临床上常用于治疗急性胰腺炎、急性器官功能衰竭等。目前临床使用的乌司他丁大多是冻干粉针剂，配置过慢容易导致生物活性的降低、且有微生物污染的可能性，严重影响病人的治疗效果。特别是，乌司他丁用于急性器官功能衰竭的治疗时，用药时间是至关重要的，等到将冻干粉针溶解配制好，可能已经延误了病人的最佳治疗时间。
发明内容本发明的目的是提供一种稳定、使用方便的乌司他丁水针剂药物组合物，以解决上述乌司他丁粉针剂在临床使用中存在的问题。为达到上述目的，本发明人采用的技术方案是，选取能够对乌司他丁活性起保护作用，且不与乌司他丁药理作用产生拮抗、可以用于静脉注射的辅料，与乌司他丁按照一定比例制备成一定pH值范围的注射液，在临床使用时可直接用于静脉输注。辅料可选自甘露醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸中的一种或几种，pH值范围选自4.2-6.0。本发明所述的含有乌司他丁的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为IO万单位0.02-0.2g，pH为4.2-6.0;优选的配比为10万单位0.05-0.15g，pH为4.8-5.8;比较优选的配比为IO万单位O.lg，pH为5.0-5.5。本发明优选的含有乌司他丁的药物组合物的组成及配比乌司他丁和甘露醇，优选的配比为10万单位0.05-0.15g，pH4.8-5.8，比较优选的配比为10万单位O.lg,pH5.0-5.5;或者为乌司他丁、甘露醇和氯化钠，优选的配比为10万单位0.05-0.15g:0細3-0.02g，pH4.8誦5.8，比较优选的配比为10万单位O.lg:0.015-0.016g，pH5.0-5.5;或者为乌司他丁、甘露醇、氯化钠、醋酸钠和醋酸，优选的配比为10万单位0.05-0.15g:0.0003-0.02g:0.0005-0.01g:0.0001-0.001g，pH4.2-5.8，比较优选的配比为10万单位O.lg:0.015-0.016g:0.0035-0.004g:0.00065-0.0007g、pH4.8-5.8。在本文中，乌司他丁单位被定义为2ixg胰蛋白酶活性50n/。被抑制时乌司他丁的量为1个单位。如上所述的任一药物组合物，可以注射剂形式存在，尤其可以水针剂形式存在。本发明药物组合物的配制方法(1)称取所需乌司他丁，加入配液桶内，加入少量约95%的注射用水溶解；(2)将配制所需的辅料加入到配液桶内，混匀；(3)用lmol/L的氢氧化钠或lmol/L的盐酸溶液调节pH值至4.2-6.0;(4)加入剩余的注射用水，混匀；(5)过滤除菌，灌封，包装。按照上述组成、配比及制备方法配制的乌司他丁注射剂，在临床应用时，可直接作静脉直接输入。根据患者的病情，治疗剂量为30万-300万单位，给药次数每天1-4次。发明人应用本发明的配方制备的乌司他丁注射液进行了稳定性研究，结果表明25'C放置两年，乌司他丁的效价仍保持在97%以上。特别是，按照优选配方，如乌司他丁5000万单位、甘露醇50g制备的乌司他丁注射液，25'C放置两年，乌司他丁的效价保持在99.9%以上，且在放置过程中，药液仍保持无色澄明。而未使用辅料的乌司他丁注射液，经过两年，效价降至81%以下，失去药用价值。采用本方法制备所得的含有乌司他丁注射剂，进行了药效学试验，结果表明本发明所述的注射剂具有较好的治疗急性胰腺炎、急性器官功能衰竭等功效。具体实施例方式发明人通过以下的实施例来进一步详细阐述本发明，但并不限于此实施范围。实施例l乌司他丁注射液的制备本发明的所述的乌司他丁可按照专利"纯化的乌司他丁及其制备方法和含有该乌司他丁的药物组合物"(ZL200610000200.2)中公开的制备方法制备而得。以新鲜人尿为原料，通过以下工艺步骤制备a.将尿泵入搅拌池中，调节pH至4.5-6，加入甲壳素吸附，用硫酸铵溶液洗脱，洗脱液进行抽滤，抽干产品为乌司他丁粗制品；b.取乌司他丁粗制品加2-3倍水溶解后，过滤，取上清液，调节pH为6-7.5后用乙醇沉淀，将沉淀用水溶解过滤，所得滤液上阴离子交换柱，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液洗脱，收集洗脱液；c.调节该洗脱液pH至7.0-9.0，然后上金属螯合柱，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液洗脱，收集洗脱液；d.调节洗脱液pH至4.0-6.0，上疏水柱吸附，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液进行梯度洗脱，收集洗脱液；e.调整洗脱液pH至5.0-6.0,上阴离子交换柱，用含有0.1-2mol/LNaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐缓冲液洗脱，洗脱液用超滤膜超滤；f.将超滤液pH调至6.0-8.0，上凝胶柱，用含有0.5%-5%NaCl及0.1-0.5mol/L磷酸盐的缓冲液洗脱，收集洗脱液；g.洗脱液用超滤膜超滤，即得纯化的乌司他丁，浓度为5万单位/ml的溶液，纯度>99.9%;以上述方法制备的乌司他丁(溶液或者冻干后的粉末)为原料，按照以下方法制备乌司他丁注射液处方h乌司他丁10000万单位，甘露醇100g，pH5.0-5.5二者配比为10万单位O.lg，pH为5.0-5.5制备方法(1)称取所需原料，加入配液桶内，加入约95%(l卯0ml)的注射用水溶解；(2)将配制所需的甘露醇注射液(或甘露醇)加入到配液桶内，混匀；(3)用lmol/L的氢氧化钠或lmol/L的盐酸溶液调节pH值至5.0-5.5;(4)加入注射用水至2000ml，混匀；(5)过滤除菌，分装成1000支(每支10万单位/2ml)，灌封，包装。实施例2:乌司他丁注射液的制备处方2-10配比如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>处方2-10乌司他丁注射液制备方法按照实施例1所述的方法制备。实施例3稳定性试验取按照处方1-10法制备的IO万单位乌司他丁注射液剂各一支，另取按照实施例1制备方法制备而得的不含有辅料的10万单位乌司他丁注射液1支；25°C放置2年后，采用以下方法测定乌司他丁的活性，按照下式计算乌司他丁的活性残留率活性残留率-放置后活性/放置前活性X100%乌司他丁活性测定方法标准品溶液的制备精密称取乌司他丁标准品适量，加0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(取三乙醇胺29.8g，加水900ml溶解，用4mol/L盐酸溶液调pH至7.8，加水至1000ml，摇匀，即得。)制成每lml中含50单位的溶液。供试品溶液的配制精密称取本品适量，加0.2mol/L三乙醇胺缓冲液制成.每lml中约含50乌司他丁单位的溶液。结晶胰蛋白酶溶液精密称取结晶胰蛋白酶(每lmg含750010000BAEE单位)适量，加冷的氯化钙盐酸溶液(取氯化钙2.94g加0.001mol/L盐酸溶液1000ml溶解即得)制成每lml含0.lmg的溶液，临用配制，并置4'C保存。苯甲酰一L一精氨酸一P—对硝基苯胺盐酸溶液取苯甲酰一L一精氨酸—P一对硝基苯胺盐酸盐适量，加水制成每lml中含lmg的溶液，临用时配制并置暗处保存。测定法取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(预热至25±0.1°C)1.6ml，至比色池中，加标准品溶液0.2ml，加结晶胰蛋白酶溶液0.2ml，混匀，保温5分钟，使比色池内温度保持在25±0.rc,加苯甲酰一L一精氨酸一p—对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0ml(预热至25土0.rC)立即计时并摇匀，以水为空白，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处，每隔1分钟测定吸收度，共5分钟，吸收度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸收度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸收度变化率(AAs)。分别取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液和供试品溶液0.2ml，代替标准品溶液同法操作，分别求出吸收度变化率AA。和AAt。按下式计算每lmg供试品中乌司他丁的单位数。△A0—AAtBu/mg=X△A0—厶AsW式中AA。为三乙醇胺缓冲液对照管吸收度的变化率。AAt为供试品溶液吸收度的变化率。△As为标准品溶液吸收度的变化率。B:每lml标准品溶液中含乌司他丁单位数。W:每lml供试品溶液中含供试品的mg数。结果如表l:表l乌司他丁25'C放置2年的稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本实验结果说明，乌司他丁注射液中含有上述处方i一io中的辅料，可以有效保持乌司他丁的活性，优选处方l中辅料和pH的最佳组合使得其中乌司他丁的活性残留率大于99.9%，且能够保持无色澄明，pH值基本不变，仍维持在5.0一5.5之间；而没有添加辅料的乌司他丁注射液中，乌司他丁易发生降解，常温放置2年后其活性残留率降至80%左右，不宜应用于临床。权利要求1、一种含有乌司他丁的药物组合物，其特征在于是由有效剂量的乌司他丁和选自甘露醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸中的一种或几种辅料组成，pH值范围选自4.2-6.0。2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为10万单位0.02-0.2g，pH为4.2-6.0。3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为10万单位0.05-0.15g，pH为4.8-5.8。4、根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于乌司他丁和辅料的配比为10万单位0.lg，pH为5.0-5.5。5、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于组合物中组成及配比为乌司他丁和甘露醇，配比为10万单位0.05-0.15g,pH4.8-5.8;或者，乌司他丁、甘露醇和氯化钠，配比为10万单位0.05-0.15g:0.0003-0.02g，pH4.8-5.8;或者，乌司他丁、甘露醇、氯化钠、醋酸钠和醋酸，配比为10万单位0.05-0.15g-0.0003-0.02g:0.0005-0.01g:0.0001-O.OOlg，pH4.2-5.8。6、根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于组合物中组成及配比为-乌司他丁和甘露醇，配比为10万单位O.lg，pH5.0-5.5;或者，乌司他丁、甘露醇和氯化钠，配比为10万单位O.lg:0.015-0.016g，pH5.0-5.5;或者，乌司他丁、甘露醇、氯化钠、醋酸钠和醋酸，配比为10万单位O.lg:0.015-0.016g:0.0035-0.004g:0.00065-0.0007g、pH4.8-5.8。7、根据权利要求l一6所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物以注射剂形式存在。8、根据权利要求7所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物以水针剂形式存在。9、一种含有乌司他丁的药物组合物的配制方法，其特征在于，(1)称取所需乌司他丁，加入配液桶内，加入少量注射用水溶解；(2)将配制所需的辅料加入到配液桶内，混勾；(3)用lmol/L的氢氧化钠或lmol/L的盐酸溶液调节pH值至4.2-6.0;(4)加入剩余的注射用水，混匀；(5)过滤除菌，灌封，包装。全文摘要本发明公开了一种稳定的乌司他丁药物组合物，它包含有效剂量的乌司他丁以及一定比例的药用辅料。其中辅料可为可选自甘露醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸中的一种或几种，pH值范围选自4.2-6.0。该组合物通常以注射剂的形式使用，临床应用时可直接作静脉输入，能明显改善乌司他丁冻干粉针制剂在配制时活性易降低的问题。文档编号A61K47/02GK101439181SQ20081018770公开日2009年5月27日申请日期2008年12月31日优先权日2008年12月31日发明者侯永敏,许文勤,瑶雷申请人:广东天普生化医药股份有限公司