“痛泻要方”中药提取物的制备方法和用途的制作方法

专利名称：：“痛泻要方”中药提取物的制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药提取物的制备方法，具体地说涉及用于治疗肠道肠易激综合症的中药提取物的制备方法。本发明还涉及按照上述制备方法制备的中药提取物以及其在制备治疗肠道肠易激综合症药物中的应用。
背景技术：
：肠道肠易激综合症(Irritablebowelsyndrome，IBS)是临床上最常见的一种肠道功能紊乱性疾病，主要表现为腹痛、腹胀、便秘、腹泻或便秘与腹泻交替，是最常见的消化系统疾病之一。我国社区人群中IBS患病率约为5.7%，西方国家IBS人群患病率在10%以上，全球发病率很高各地发病率在10%15。％之间，主要原因有精神因素、感染因素、肠道菌群失调、遗传因素等。目前，IBS具体分型有痉挛性结肠型(以下腹尤其是左下腹痛和便秘为主)、无痛性腹泻型(以腹泻为主伴有粘液)、混合型三种，因此该适应症的治疗药具有重要的价值。目前，在西药上治疗方法，主要有采用止泻剂如洛哌丁胺、地芬诺酯，解痉药如阿托品、普鲁本辛、罂粟碱、曲美布汀，促动力药如西沙必利、5-HT等，但这些药都有较多的副作用及不良反应，如西沙必利最常见的不良反应是便秘和急性缺血性结肠炎，对心血管系统的严重副作用，阿托品不良反应较多，如心动过速、视物模糊、烦躁、幻觉、口干等，在老年人表现尤为明显，临床使用应慎重。而中医药对该疾病的整体治疗具有优势，仍是最重要的治疗方法。中医经典传统方剂痛泻要方为治疗该类疾病的代表。肠易激综合症在祖国医学无此病名，本病属于《中医病证治法术语》中"肠郁"范畴，散见于中医学"腹痛"、"腹泻"、"便秘"等门类的文献中。《中医临床诊疗术语*疾病部分》规定肠郁是"因情志不舒，气机阻滞，使肠道运化失常，以腹痛、腹泻或便秘为常见表现的郁病类疾病"。痛泻之证由土虚木4乘，肝脾不和，牌运失常所致。《医方考》说"泻责之脾，痛责之肝；肝责之实，脾责之虚，脾虚肝实，故令痛泻。"其特点是泻必腹痛。治宜补脾抑肝，祛湿止泻。"痛泻要方"史载于《景岳全书》，方中主要组成为白术、白芍、陈皮、防风等四味中药，方中白术苦甘而温，补脾燥湿以治土虚，为君药。白芍酸寒，柔肝缓急止痛，与白术相配，于土中泻木，为臣药。陈皮辛苦而温，理气燥湿，醒牌和胃，为佐药。配伍少量防风，具升散之性，与术、芍相伍，辛能散肝郁，香能舒脾气，且有燥湿以助止泻之功，又为牌经引经之药，故兼具佐使之用。四药相合，可以补脾胜湿而止泻，柔肝理气而止痛，使脾健肝柔，痛泻自止。"痛泻要方"作为一个很好的治疗肠易激综合症的方剂，但其应用与开发却没有市场成品推广，目前仅仅限制于临床医生对方剂的汤剂使用，原因是其提取物制备只是汤剂，对其进一步的应用上受到限制。"痛泻要方"提取物的制备工艺，按历代方剂所记载，均是"白术炒二两[6g]白芍药炒二两[6g]，陈皮炒一两五钱[4.5g]，防风一两[3g]，上细切，分作八服，水煎或丸服"，传统方剂为水煎物为提取物，该提取物因为是水煎液，不容易保管，易变质，流动性大，粘性强，如果进一步加工成相关制剂，产品的吸潮性很强，容易生霉，其所含主要活性成分并不高，体积大，加工制备新的剂型十分困难。因此，对该方剂的提取物的制备工艺有必要进行深入研究，使其提取物仍能达到甚至超过原水提物的疗效，且工艺简单，可行，适合工业化生产，便于进一步开发各种制剂，便于市场广泛推广。
发明内容对"痛泻要方"中药提取物的工艺研究尝试用各种方法，如溶剂法，酸碱方法，大孔树脂方法进行了深入研究，最后确定了一种新型的大孔树脂方法的制备工艺，实施了制备方法，较好地完成了其工业化的制备工艺。因此，本发明的一个目的在于提供一种中药提取物的制备方法(以下也称痛泻要方中药提取物，或痛泻要方提取物)，其以中国传统中药方剂"痛泻要方"为依据，提供了该方剂中药物的新的制备方法。本发明的另一个目的在于提供一种用本发明方法制备的中药提取物。本发明的再一个目的在于提供本发明的中药提取物在制备治疗肠道肠易激综合症药物中的应用。根据本发明的一方面，本发明的中药提取物以中药药材白术、白芍、陈皮和防风为原料制备。其中白术为菊科植物白术(Arac^y/otfesmacrac印/za/a《ozVfe)的根茎、白芍为毛茛科植物芍药(尸Mom'a/flc":/7orai^/.)的干燥根、陈皮为芸香科植物橘(Cz>mr幼'cw/"to祝朋co)及其栽培变种的干燥成熟果皮，防风为伞形科植物防风"apo^2"汰oWflAwm'cato(Twrcz.」&;^cM.)的干燥根。在制备时根据需要可采用对原药材再炮制的药材，例如炒白术、炒白芍、炒陈皮等。获得的中药提取物为所含各种药材活性成分协同起效的混合物，它不同于活性单体，它的药效也不同于各种药材活性成分药效的简单加和。根据本发明的一方面，提供一种痛泻要方中药提取物的制备方法，包括下述步骤1)以炒白术、炒白芍、炒陈皮和防风为原料，以乙醇溶液或水为溶剂提取所述原料，获得提取液；各原料重量比为炒白术炒白芍炒陈皮防风=1:1:0.75:0.5;2)浓縮获得的提取液至所述提取液的体积为所述原料重量的69倍，相当于1Kg原料对应6~9L提取液；3)以35倍体积水稀释步骤2)获得的浓縮液，取上清液；4)将所述上清液以大孔树脂柱吸附，收集乙醇洗脱部分，获得乙醇洗脱液；5)浓縮并干燥获得的乙醇洗脱液，得到所述中药提取物。其中，步骤l)中，所述乙醇溶液或水溶液提取是指以含水乙醇或水作溶剂，采用本领域内已知的常规技术例如，热回流法、渗漉法、连续逆流法等提取，所用溶剂体积为药材重量的大约10倍，即1Kg药材对应10L溶剂。举例来说，可以采用体积用量为药材重量8~10倍的60~75%的乙醇水溶液进行热回流提取；提取次数为23次；加热温度可以为7085。C。步骤2)中，提取液浓縮后，其体积优选为原药材重量的69倍。步骤3)中，浓縮液优选以加35倍体积的水稀释。步骤4)中，吸附柱吸附提取液后，优选用"5BV(柱床体积)的水洗涤，洗脱液流速优选为0.5~2.5BV/hr;洗脱乙醇优选采用5070%乙醇水溶液，洗脱液流速优选为0.5~2.5BV/hr。其中BV(BedVokim)为树脂柱装载的树脂后的柱床体积。树脂柱的处理能力与它的树脂装载量成正比。洗脱液的流量和速率以BV或BV/hr为计算单位。所述大孔树脂通常为苯乙烯型共聚体的含有酯基或氰基的中等极性吸附树脂，其结构为大孔网状结构，例如D-101大孔树脂、SIPI-40大孔树脂、SIPI-21大孔树脂或SIPI-8大孔树脂等。在上样前，先对大孔树脂进行前处理，以防止有效成分从废液中流失。在树脂前处理时，先用5。/。HC1洗脱，后用纯化水洗至中性，再用2。/。NaOH洗脱，后用纯化水洗至中性，连续生产时，用95%乙醇洗柱，后用纯化水洗至不含乙醇，即可再次使用。步骤5)中，得到的提取物进行干燥处理，得到干燥形式的提取物，所用的干燥方法包括真空干燥、喷雾干燥和冷冻干燥等。因此，进一步的，本发明所述的中药提取物的制备方法包括以下步骤a).以炒白术、炒白芍、炒陈皮和防风为原料，用60~75%的乙醇溶液热回流提取23次，合并提取液；b).提取液减压浓缩至体积为原材料重量的69倍；c).以3~5倍体积的水稀释浓縮液，并澄清，取上清液；d).将所述上清液以大孔树脂柱吸附，弃流出液；用1~5BV的水，以0.52.5BV/小时的流速洗涤所述吸附柱，弃水洗液；之后，采用50~70%的乙醇，以0.52.5BV/小时的流速洗脱吸附柱，收集该乙醇洗脱液；e).浓縮、干燥乙醇洗脱液，得到所述中药提取物。另外，在采用上述工艺制备提取物之前，可以先将该药材进行前处理，即将药材洗净，干燥，粉碎，过筛。本发明进一步采用高效液相色谱法对上述工艺制备的提取物进行含量控制，并建立了同一种色谱条件下的快速分析方法。根据本发明的另一方面，按照本发明方法制备的"痛泻要方"中药提取物，其含有以重量计4~7%的橙皮苷，2~4%的芍药苷，0.10.4%的升麻素苷和0.51.5%的白术内酯。上述成分的含量控制，采用高效液相色谱法(HPLC)测定由制备得到的中药提取物中橙皮苷、芍药苷、升麻素苷、白术内酯的含量，以橙皮苷、芍药苷、升麻素苷、白术内酯为对照品，测定得到。本发明提供的中药提取物可以治疗肠易激综合症、肝郁脾虚证、脾虛证、湿热蕴脾、急性肠炎、慢性结肠炎、神经性腹泻等。因此，本发明还涉及该中药提取物在制备治疗上述疾病药物中的应用，尤其涉及制备治疗肠易激综合症的药物中的应用。急性毒性试验结果表明，该中药提取物经灌胃给药途径，ICR小鼠的食量、体重未见异常，LD50〉10.0g/kg，表明毒性低，具有很好的用药安全性。本发明的中药提取物还可以进一步和药学上可接受的载体和/或赋形剂等组成药物组合物。例如，一种药物组合物可以是总黄酮提取物和药学上可接受的载体和/或赋形剂按照一定的配比混合而成；还可以是将总黄酮提取物、其它中药提取物和药学上可接受的载体和/或赋形剂按照一定的配比混合而成。上述药物组合物可进一步按照常规制剂方法配制成可供给药的形式，包括经口或胃肠外给药形式。在可供给药的形式中，应包含治疗有效量的提取物。所谓"治疗有效量"是指在该剂量下，本发明的提取物能够改善或减轻疾病症状，或能够抑制或阻断疾病的发展。可供给药的组合物可以为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂、贴剂、凝胶剂、粉剂或液体制剂(如口服或无菌胃肠外溶液或悬浮液)。这些可供给药的组合物还可以根据需要制备成缓控释制剂或靶向制剂。口服给药的形式可以为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂等，它们可以含有常规赋形剂如粘合剂像糖桨、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂如硬脂酸镁；崩解剂如淀粉、聚乙烯吡咯垸酮、交聚维酮、羟乙酸淀粉钠或微晶纤维素或药学上可接受的润湿剂如十二烷基硫酸钠。液体组合物(如口服液体组合物)可以制备为乳液、糖浆剂或酏剂形式，或者将它们制备为干燥产物形式，在使用前用水或其它适当的溶媒溶解。此类液体制剂可以含有常规的添加剂，如悬浮剂像山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶、氢化可食用脂肪；乳化剂如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水溶性溶媒(可以包括食用油)如杏仁油、分馏椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇的酯；防腐剂如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常规的矫味剂或着色剂。胃肠外组合物(如胃肠外给药组合物)可以含有所述活性化合物和无菌溶媒，根据使用的浓度，所述活性化合物可以悬浮于或溶解于该溶媒中。制备胃肠外给药的溶液时，可以将本发明的组合物溶于注射用水中，过滤除菌，然后灌装于适当的管制瓶或安瓿中并密封。最好将辅助剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶解于所述溶媒中。为增加稳定性，可以将该组合物灌装于管制瓶中后冷冻并真空去除水分。以基本相同的方法可以制备胃肠外悬浮液，但是所述活性化合物是悬浮于溶媒中而不是溶解于溶媒中，并且除菌不能通过过滤进行。可以将所述化合物通过暴露于环氧乙烷中灭菌，然后将其悬浮于无菌溶媒中。最好该组合物中含有表面活性剂或润湿剂以有助于活性组分的均匀分布。本发明具备以下优点-1、本发明提供的提取物的制备工艺能有效地富集主要活性成分如橙皮苷、芍药苷、升麻素苷、白术内酯等，使其含量远高于直接水提液的方剂；质量控制采用高效液相分析方法进行含量测定，简单易控。2、本发明提供的提取物制备工艺中采用树脂纯化方法，该方法简便、快捷、重现性好；所选用的大孔吸附树脂吸附量大，解吸率大，可反复使用，降低工艺成本；所选用的溶剂乙醇，价廉、无毒。3、本发明所述制备工艺得到的提取物与原方剂的水煎物相比，体积小、中药内在质量高，产品吸潮性减少、稳定性增加，抗治肠道肠易激综合症作用更明显；且容易制成外观美观的各种剂型。4、急性毒性试验结果表明，总黄酮提取物的毒性低，具有很好的用药安全性，这充分提示了本工艺制备的提取物的临床用药的安全性。因此，本发明中所述的"痛泻要方"中药提取物适合工业化生产，具有很强的实用性。具体实施例方式通过下面的实施例可以更好地理解本发明的本质，但不以任何方式限制本发明。材料来源白术为菊科植物白术(v^rac(y/^fes附"crac^/w/a尺oz'fife)的根茎、白芍为毛茛科植物芍药(A^om'a/ac^7ora尸a〃.)的干燥根、陈皮为芸香科植物橘(a>MWb/ato祝a"②)及其栽培变种的干燥成熟果皮，防风为伞形科植物防风(Sa;os/m汰oWac/iVan'cato(TMrcz.JSc/n'scM.)的干燥根。炒白术、炒白芍和炒陈皮为在上述药材白术、白芍和陈皮的基础上再炮制的中药材，商业购买获得。其他材料均通过商业途径购买。实施例1大孔树脂方法一制备"痛泻要方提取物"取中药材炒白术50公斤、炒白芍50公斤，炒陈皮38公斤，防风25公斤，加入l吨的75%乙醇，加热回流提取2h，滤过，药渣继续加1吨75%乙醇回流提取2h，滤过，两次提取液合并。减压回收溶剂，温度8(TC，浓縮到原药材的9倍体积，将浓縮液加5倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于D101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用5BV水(用1%盐酸调节PH为56)洗涤所述吸附柱，弃水洗液；再用中性5BV水溶液洗脱，水溶液弃除，改用5BV的70。/。乙醇洗脱，洗脱液流速为2.5BV/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，喷雾干燥，即得。实施例2大孔树脂方法二制备"痛泻要方提取物"取中药材炒白术50公斤、炒白芍50公斤，炒陈皮38公斤，防风25公斤，加入1吨水，加热回流提取3h，滤过，药渣继续加1吨水回流提取2h，滤过，两次提取液合并。减压回收溶剂，温度80'C，浓縮到原药材的6倍体积，将浓縮液加3倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于D101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用2BV纯水冲洗，水溶液弃除，改用3BV的50。/。乙醇洗脱，洗脱液流速为2.0BV/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，喷雾干燥，即得。实施例3痛泻要方提取物的活性成分测定1.色谱条件高效液相色谱仪HP1100系列(美国惠普公司)，用十八烷基硅垸健合硅胶为填充剂，C18色谱柱，规格为5um，4X250mm，柱温3(TC，水(A)和乙腈(B)为流动相，梯度洗脱，紫外检测器(UV)，检测波长230nm。2."痛泻药方"中药提取物样品的制备1)本发明提取物按本发明实施例1和2所述的方法分别制得上述中药提取物各3个批号。2)直接水提物(原方工艺方法)取中药材炒白术50公斤、炒白芍50公斤，炒陈皮38公斤，防风25公斤，加入1吨水，加热回流提取3h，滤过，药渣继续加1吨水回流提取2h，滤过，两次提取液合并。取1000ml合并的提取液，浓縮，干燥，得到"痛泻药方"中药水提物。按此方法，制得直接水提物3个批号。3)直接醇提物取中药材炒白术50公斤、炒白芍50公斤，炒陈皮38公斤，防风25公斤，加入l吨的75%乙醇，加热回流提取2h，滤过，药渣继续加1吨75%乙醇回流提取2h，滤过，两次提取液合并。取1000ml合并的提取液，浓縮，干燥，得到"痛泻药方"中药醇提物。按此方法，制得直接醇提物3个批号。3.标准品溶液的配制取对照品含橙皮苷hesperidin、芍药苷Paeoniflorin、升麻素苷eimicifiigoside、白术内酯atractylodeI分别为20.61mg、15.34mg、14.22mg、17.45mg用适量甲醇溶解，混合定容于100ml的容量瓶中，摇匀，作储备液。精密吸取适量储备液，用甲醇定容至50ml的容量瓶中。以对照品浓度(x)为横坐标，吸收度(y)为纵坐标进行回归计算，得各自标准品的回归曲线。4.测定方法分别取各批号的上述中药提取物样品适量，精密称定约25mg，转移至50ml容量瓶中，加甲醇40ml，常温下超声30min，取出冷却到室温，加甲醇至刻度，摇匀，吸取适量，定容至50ml，摇匀，即可测定。根据标准曲线即可计算各成分含量。结果见表l:表1.各组分含量测定结果橙皮苷(％)芍药苷(％)升麻素苷(％)白术内酯(％)实施例1，2共6个批号4~72~40.1~0.40.5~1.5直接水提物3个批号2~41~20.050.090.3~0.45直接醇提物3个批号3~51~20.07~0.090.3~0.4511从研究结果可知，按本发明方法制备的上述中药提取物中，含有橙皮苷hesperidin、芍药苷Paeoniflorin、升麻素苷eimicifUgoside、白术内酉旨atractylode1分别为4~7%，2~4%，0.10.4%、0.5~1.5%。各组分含量均高于直接水提物及醇提物。实施例4"痛泻要方"中药提取物对小鼠肠推进功能的作用取健康昆明种小白鼠140只，体重18225g，雌雄各半，随机分成7组，每组20只，即空白对照组，阳性对照组(次碳酸铋)，本发明实施例l制备的痛泻要方提取物低、中、高剂量组，痛泻要方直接水提物、痛泻要方直接醇提物共7组。按表2剂量对小鼠连续灌胃(ig)给药12d，于测定实验前禁食24h。用10%阿拉伯胶配制成8%炭末混悬液，末次给药后1h静脉注射炭末混悬液20ml'kg，之后20min处死动物，解剖，测量炭末头端在肠管内移动距离和小肠全长(自幽门至回盲部)，计算痛泻要方提取物各组对炭末推进百分率。实验结果表明，与空白对照组比较，痛泻要方提取物各组对炭末推进百分率均明显减少，表明它们均能减少肠内碳末推进长度，对在体小肠运动有明显的抑制作用。同时，按实施例l制备的样品即痛泻要方提取物高、中、低剂量的作用对肠运动抑制作用更强，说明比原方剂直接水提或醇提的产物的疗效更显著。结果见表2:表2.痛泻要方提取物对小鼠肠功能的影响组别动物数剂量(g/Kg)推进百分率(％)空白对照组20080.12±4.67痛泻要方提取物低剂量组20155.23±6.15*痛泻要方提取物中剂量组20250.34士6.11女痛泻要方提取物高剂量组20348.64土3.44女痛泻要方直接水提物20360.22±2.13*痛泻要方直接醇提物20361.37±6.68*次碳酸铋200.1463.12士5.23大与对照组比较，*P<0.01，女P〈0.005。1权利要求1.“痛泻要方”中药提取物的制备方法，包括以下步骤1)以炒白术、炒白芍、炒陈皮和防风为原料，以乙醇溶液或水为溶剂提取所述原料，获得提取液；各原料重量比为炒白术∶炒白芍∶炒陈皮∶防风＝1∶1∶0.75∶0.5；2)浓缩获得的提取液至所述提取液的体积为所述原料重量的6～9倍，相当于1Kg原料对应6～9L提取液；3)以3～5倍体积水稀释步骤2)获得的浓缩液，取上清液；4)将所述上清液以大孔树脂柱吸附，收集乙醇洗脱部分，获得乙醇洗脱液；5)浓缩并干燥获得的乙醇洗脱液，得到所述中药提取物。2、权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括下述步骤-a)所述原料用6075%的乙醇溶液加热回流提取23次，合并提取液；b)减压浓縮所得提取液至所述提取液的体积为原材料重量的6~9倍，获得浓縮液；c)以35倍体积的水稀释浓縮液，澄清，取上清液；d)将所述上清液过大孔树脂柱吸附，弃流出液；然后用15BV的水，以0.52.5BV/小时的流速洗涤所述吸附柱，弃水洗液；之后，采用50~70%的乙醇，洗脱体积3~5BV，以0.52.5BV/小时的流速洗脱吸附柱，收集乙醇洗脱液；e)浓縮、干燥所述乙醇洗脱液，获得"痛泻要方"中药提取物。3、权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述大孔树脂柱的吸附材料为D-101大孔树脂、DIPI-40大孔树脂、DIPI-21大孔树脂或SIPI-8大孔树脂。4、一种以权利要求l所述的制备方法制备的"痛泻要方"中药提取物。5、权利要求4所述的"痛泻要方"中药提取物，其特征在于所述提取物中含有以重量计橙皮苷4~7%、芍药苷24%、升麻素苷0.1~0.4%和白术内酯0.5~1.5%。6、一种药物组合物，其特征在于含有权利要求4所述的"痛泻要方"中药提取物，并进一步包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。7、权利要求4所述的"痛泻要方"中药提取物在制备治疗肠道肠易激综合症的应用。全文摘要本发明公开了“痛泻要方”中药提取物的制备方法，包括以下步骤1)以炒白术、炒白芍、炒陈皮和防风为原料，以乙醇溶液或水为溶剂提取所述原料，获得提取液；各原料重量比为炒白术∶炒白芍∶炒陈皮∶防风＝1∶1∶0.75∶0.5；2)浓缩获得的提取液至所述提取液的体积为所述原料重量的6～9倍，相当于1kg原料对应6～9L提取液；3)以3～5倍体积水稀释步骤2)获得的浓缩液，取上清液；4)将所述上清液以大孔树脂柱吸附，收集乙醇洗脱部分，获得乙醇洗脱液；5)浓缩并干燥获得的乙醇洗脱液，得到所述中药提取物。本发明还涉及按照上述方法制备的“痛泻要方”中药提取物在制备治疗肠道肠易激综合症药物中的应用。文档编号A61K36/752GK101474275SQ20081021730公开日2009年7月8日申请日期2008年11月11日优先权日2008年11月11日发明者严启新,勇李,姿李,焰薛,萍陈,媛高申请人:深圳海王药业有限公司