专利名称：可水解的聚合fmoc-连接体的制作方法
技术领域：
本发明涉及可水解连接体的制备，该连接体与至少一个半合成聚合物结合。这些可水解 的连接体适用于延长蛋白质和多肽药物的体内循环。
背景技术：
大多数蛋白质或多肽药物在体内是短寿命的并且通常具有较短的循环半衰期。考虑到蛋 白质或多肽药物不能口服吸收，故治疗性活性药物在循环中的长期保持是具有明显临床意义 的优选特征。
用于提高蛋白质或多肽药物的临床性能的有吸引力的策略是用聚合物比如聚亚烷基氧化 物(Roberts等，Advan Drug Rev. 54， 459-476 (2002))或多糖比如聚唾液酸(Fernandes等， BiochimBiophys Acta 1341， 26-34 (1997))、葡聚糖或羟烷基淀粉修饰药物。(将说明书 中引用的所有文献引入本文以作参考)。
目前已知的有用聚(乙二醇)(PEG)修饰。然而，用PEG修饰蛋白质通常导致蛋白质 活性的降低。
聚唾液酸(PSA)，又称多聚乙酸神经氨酸(colominicacid， CA)，是天然存在的多糖。 其是N-乙酰神经氨酸与a (2—8)酮苷键的均聚物并且在其非还原端处包含邻二醇基。PSA 带负电荷，并且是人体的天然组成物。由细菌可容易地大量制备具有预定物理特性的PSA(US 5,846,951)。由于与人体中的聚唾液酸具有化学上以及免疫学上的一致性，故即使与蛋白质 偶联时，细菌的聚唾液酸也是非免疫原性的。与其他聚合物(比如PEG)不同，聚唾液酸是 可生物降解的。
8然而，迄今为止，还没有可商业使用的包含结合了酸性单糖例如PSA的多肽的治疗性化 合物。
仅具有l-4个唾液酸单元的较短PSA聚合链也已被合成(Kang等，ChemCommun， 227-228 (2000) ; Ress等，Current Organic Synthesis 1， 31-46 (2004))。 几种包含PEG部分的可水解的或可生物降解的连接体也已被建议。 US 6,515, IOQ描述了具有较弱的、水解不稳定的键的PEG以及相关的聚合物衍生物。 US 7，122，189描述了基于二-N-2-羟乙基甘氨酸基(N-二 (羟乙基)甘氨酸)的可释放 的PEG连接体。
WO 04/089280和WQ 06/138572描述了可水解芴基PEG结构。
在将这些连接体与蛋白质药物结合之后，可将蛋白质-聚合物结合物作为前体药物，并且 蛋白质的活性可经由可控的释放机制由结合物中释放出来。使用该原理，可获得药物动力学 性能得到改善的药物(赵等，Bioconjugate Chem. 17， 341-351 (2006))。
发明内容
本发明提供了一种可水解的连接体，该连接体与至少一个半合成生物聚合物结合， 其中该可水解的连接体被结合到蛋白质或多肽药物上以提高其体内性能比如体内循环。
本发明提供了一种通式1的化合物
(通式1)
其中Z为离去基团，并且位置l、 2、 3、 4、 5、 6、 7或8中的至少一个与自由基Y结合。 Y是包含半合成生物聚合物的自由基，其与N-琥珀酰亚胺部分结合。
9除了与自由基Y结合之外，通式l的化合物在可用位置l、 2、 3、 4、 5、 6、 7或8中的 至少一个处可选地与自由基X结合。 X为-S。3-R3。
R3选自于由氢、(CVCs)-烷基和(d-C8)-垸基-R4构成的组。 R"为聚合物。
图1所示为FVIIa-PSA结合物在pH 8.3处的体外水解。FVIIa活性的释放用Staclot分析 (Diagnostica Stago公司，Asni6res,法国)领!l定。
图2所示为FVIIa-三聚物PSA结合物在pH 8.3处的体外水解。FVIIa活性的释放用Staclot 分析(DiagnosticaStago公司，Asni^res,法国)测定。
图3所示为用凝血分析(Staclot， Diagnostica Stago公司，Asnidres,法国)测定的血浆中 的FVIIa活性(图中SD为标准偏差)。至于FVIIa凝血活性，调整剂量的曲线下面积(AUC)， 对于未修饰的rFVIIa为0.014，对于rFVIIa-结合物则增加到0.015 (0为无穷大)。最终半衰 期从2.3小时增加到4.4小时，并且平均滞留时间(MRT)从1.4小时增加到2.4小时。
图4所示为通过ELISA用多克隆的抗人FVII抗体测定FVIIa抗原。对于抗原，调整剂 量的AUC，从0.010 (未修饰的rFVIIa)增加到0.014 (rFVIIa-结合物)(0为无穷大)，最 终半衰期从1.4小时增加到2.3小时，并且MRT从1.5小时增加到2.2小时。
图5所示为用凝血分析(Staclot， DiagnosticaStago公司，Asnidres,法国)测定的血浆中 的FVIIa活性。与天然rFVIIa (_△-)相比，rFVIIa-三聚物-PSA结合物(-O-)的药物动力 学性能得到提高。
具体实施例方式
本发明提供了一种可水解的连接体，该连接体与至少一个半合成生物聚合物结合， 其中该可水解的连接体能够被进一步结合到蛋白质或多肽药物上，以提高它们的体内性 能比如体内循环。蛋白质或多肽药物的活性可经由受控的释放机制而由结合物中释放出来。
下述段落对构成根据本发明的化合物的各种化学部分进行了一般的定义，并且除非以其 他方式明确进行的定义提供了更宽的定义，否则在整个说明书和权利要求书中均一致地使用"(d-C8)-垸基"是指具有l-8个碳原子的一价垸基。其例子包括比如甲基、乙基、丙基、 丁基、己基等基团。直链烷基和支链烷基被包括。
"离去基团"是指能与形成结合物的蛋白质或多肽药物上的亲核基团反应的基团。其例 子包括比如N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基苯并三唑、卤化物、N-羟基苯邻二甲酰亚胺、对硝基
苯氧基、咪唑基、噻唑烷基硫酮、o-酰基脲的基团或者本领域技术人员所熟知的其他合适的
离去基团。于是，为了本发明的目的，蛋白质或多肽药物包含一个以上用于置换的基团，比 如胺。蛋白质或多肽药物是血浆蛋白质或凝血因子比如FVin、 VWF、 FVIIa以及FIX。
"半合成生物聚合物"是指基于天然存在的聚合物而制造的有机聚合物。半合成生物聚 合物也可通过反应基团被功能化，以使这些功能化的半合成生物聚合物结合到其他化合物上。 "半合成生物聚合物"的例子包括直链聚合物或支链聚合物比如碳水化合物，特别地比如是 多糖。多糖的例子为PSA (聚唾液酸)和HAS (羟垸基淀粉)。
"可水解的"连接体是指其中蛋白质以天然形式被释放的连接体系。蛋白质被释放并且 连接体完全分离。用于可水解的同义词为"可降解的"或"可释放的"连接体。 本发明提供了一种根据通式1的化合物
通式1)
其中Z为离去基团，并且位置l、 2、 3、 4、 5、 6、 7或8中的至少一个与自由基Y结合。 Y是包含半合成生物聚合物的自由基，其与N-琥珀酰亚胺部分结合。 除了与自由基Y结合之外，通式l的化合物在可用位置l、 2、 3、 4、 5、 6、 7或8中的 至少一个处可选地与自由基X结合。 X为-S03-R3。
11基和(d-C8)-烷基-R4构成的组。 R"为聚合物。其例子为亲水性聚合物比如聚(乙二醇)(PEG)。
在一个实施方式中，本发明涉及一种根据通式1的化合物，其中Z为N-琥珀酰亚胺酯，
并且位置l、 2、 3、 4、 5、 6、 7或8中的至少一个与自由基Y结合，其中Y为
其中POLYMER为半合成生物聚合物，优选具有1,000 Da至300,000 Da的分子量。 在一个实施方式中，分子量为5,000-25,000，优选为5,000-10，000。
在另一实施方式中，所述半合成生物聚合物为碳水化合物，优选为多糖，该多糖优选包 括至少3个单元的单糖。
在一个实施方式中，所述多糖包括2-200个单元、优选10-100个单元的单糖。 在一个实施方式中，半合成生物聚合物为PSA衍生物。
在另一实施方式中，半合成生物聚合物经由硫醚键被结合到琥珀酰亚胺部分上。 R1在每次出现时独立地为(CVQ)-烷基。
在一个实施方式中，R!在每次出现时独立地选自于由甲基、乙基、丙基、丁基和己基构 成的组。
R2独立地选自于由-C(O)NR-、 -C(0)NR-(C广C8)-烷基-NR-、 -NRC(O)-和-NRC(O)-(C,-Q)-垸基-NR构成的组，其中R独立地为氢或(Q-C8)-烷基。 在一个实施方式中，R2为-C(0)NH-。 在另一实施方式中，R2为-NHC(0)-。
在一个实施方式中，通式l的化合物在位置l、 2、 3或4中的至少一个处与自由基Y结合。
在另一实施方式中，通式l的化合物在位置l、 2、 3或4中的至少一个处与自由基Y结 合，并在位置5、 6、 7或8中的至少一个处进一步与自由基X结合。
在另一实施方式中，通式1的化合物在位置2或3中的至少一个处与至少一个自由基Y 结合，并在位置7或8中的至少一个处进一步与自由基X结合。在另一实施方式中，通式l的化合物在位置2和7处与自由基Y结合。 在另一实施方式中，通式1的化合物在位置2和7处分别与自由基Y和自由基X结合。 在另一实施方式中，通式1的化合物为
13<formula>formula see original document page 14</formula><formula>formula see original document page 15</formula>在另一实施方式中，本发明涉及根据通式1的化合物的制备。
Tsubery等(J Biol Chem.279， 38118-38124 (2004))描述了基于Fmoc (9-芴基-甲氧基羰基)部分的用于蛋白质衍生物的可水解PEG连接体的合成。MAL-FMS-OSU (9-羟甲基-2-(氨基-3-马来酰亚胺-丙酸酯)-7-硫代芴-N-羟基琥珀酰亚胺碳酸酯)的合成被描述。如下的合成方案作为例子说明了由MAL-FMS-OSU衍生物开始制备根据通式1的化合物的合成步骤。
(通式2)
其中POLYMER为半合成生物聚合物；R！在每次出现时独立地为(C,-Cs)-垸基；
R2独立地选自于由-C(O)NR-、 -C(0)NR-(C广C8)-烷基-NR-、 -NRC(0)-和-NRC(0)-(d-C8)-烷基-NR构成的组，其中R独立地为氢或(d-C8)-垸基。
R独立地为氢或(C,-C8)-烷基；
16X为-S。3-R3;
R3独立地选自于由氢、(C!-Q)-烷基和(d-C8)-烷基-R4构成的组;R"为聚合物；
n为选自于O、 1、 2、 3或4的整数；以及
m为选自于l、 2、 3或4的整数。
HS-POLYMER为硫醇衍生的半合成生物聚合物，比如
或者
PSA—SH 。
通式2的化合物可容易地与包含一个以上用于置换的基团比如胺的蛋白质或多肽药物反应。优选蛋白质或多肽药物为凝血因子比如FVIII、 VWF、 FVIIa、 FIX。
根据上述方案修饰的蛋白质和多肽药物具有明显提高的体内循环。连接体的可水解性允许通过释放天然形式的蛋白质而使活性在水解后被恢复。其例子如图1和2所示。蛋白质结合物的生物活性的恢复如图3和4所示。
本发明通过如下实施例被说明，但本发明并不限于此。实施例1
包含末端SH基团的PSA的制备。
聚唾液酸(Sigma)用Nal04氧化(Fernandes等，Biochim BiophysActa 1341,26-34(1997))，并且末端醛基被形成。然后如WO 05/016973所述，用NH4C1进行还原性胺化步骤，并且用NaCNBH3还原希夫碱，以形成包含末端氨基的PSA-NH2。随后，根据制造商的指导手册进行与2-亚氨基硫羟垸(2-iminothi。lane) (Pierce 26101)的反应，以制备包含末端SH基团的改性PSA。使用Ellmans试剂确定产生的SH基团的摩尔含量。此外，使用同样的步骤在N-乙酰基神经氨酸三聚物(由TimTec (LLC公司，内瓦克，美国)获得)中引入SH基团。实施例2:
使用MAL-FMS-OSU连接体的rFVIIa与PSA的结合
向15 ml的50mM磷酸缓冲液、pH 7.2中rFVIIa (0.7 mg/ml)的溶液中添加双功能连接体MAL-FMS-OSU (按照Tsubery等(J Biol Chem.279， 38118-38124 (2004))所述的方法制备)(浓度0.5mg/mg蛋白质)，并在室温下保温30分钟。然后根据实施例1，制备包含末端SH基团的衍生的PSA。将PSA衍生物添加到混合物中(浓度10 mg PSA-SH/mg蛋白质)，并另外保温2小时。然后，通过添加0.1M甘氨酸(最终浓度IO mM)和5 mM半胱氨酸(最终浓度O. 5mM)的水溶液来停止反应。使用QHyperD F 5(Him树脂(BioS印ra)和PharmaciaXK-10柱(Pharmacia XK 10;高度h=10 cm)，通过离子交换色谱法从rFVIIa-PSA结合物中分离出游离试剂。将包含PSA-rFVIIa的溶液加载到柱子上，随后用10 CV平衡缓冲液(20 mM柠檬酸钠，20mMNaCl， pH6.5)洗涤柱子。然后用洗脱缓冲液(20 mM柠檬酸钠，500mMNaCl，pH 6.1)洗脱聚唾液酸化的rFVIIa。洗脱液包含0. 06 mg/ml蛋白质，通过间苯二酚测定(Sve騰rholm; Biochim Biophys Acta 24: 604-11 (1957))证实结合物中结合了 PSA。为了释放结合物中的rFVIIa的活性，将450 |il洗脱液添加到50 ^ 1MTRIS缓冲液(pH 8.3)中，并测定FVIIa活性的释放(Staclot， Diagnostics Stago公司，Asn化res,法国)。结果如图2所示。实施例3:
使用MAL-FMS-OSU连接体的rFVIIa与三聚物PSA的结合
向15 ml的50mM磷酸缓冲液、pH 7.2中rFVIIa (0.7 mg/ml)的溶液中添加双功能连接体MAL-FMS-OSU (按照Tsubery等(J Biol Chem.279， 38118-38124 (2004))所述的方法制备)(浓度0.07mg/mg蛋白质)，并在室温下保温30分钟。然后按照实施例1所述的方法衍生得到三聚物PSA (TimTec, I丄C公司，内瓦克，美国)，以引入游离的SH基团。将三聚物PSA-SH衍生物添加到混合物中(浓度0.43 mg三聚物PSA-SH/mg蛋白质)并另外保温2小时。然后通过添加0.1 M甘氨酸(最终浓度10 mM)和5 mM半胱氨酸(最终浓度0. 5 mM)的水溶液来停止反应。使用QHyperD F 50|nm树脂(BioS印ra)和Pharmacia XK-10柱(PharmaciaXK 10;高度h40 cm),通过离子交换色谱法从rFVIIa-PSA结合物中分离出游离试剂。将包含PSA-rFVIIa的溶液加载到柱子上，随后用10 CV平衡缓冲液(20 mM柠檬酸钠，20 mM NaCl ，pH 6.5)洗涤柱子。然后用洗脱缓冲液(20 mM柠檬酸钠，500 mM NaCl， pH 6. 1)洗脱聚唾液酸化的rFVIIa。洗脱液包含0.06 mg/ml蛋白质，通过间苯二酚测定(Svennerholm等；Biochim Biophys Acta 24: 604-11 (1957))证实结合物中结合了 PSA。为了释放结合物中的rFVIIa的活性，将450 (il洗脱液添加到50 ^ 1M TRIS缓冲液(pH 8.3)中并测定FVIIa活性的释放(Staclot， Diagnostics Stago公司，Asni6res,法国)。结果如图1所示。实施例4:
使用MAL-FMS-OSU连接体的人血清白蛋白与PSA的结合在25mM醋酸钠缓冲液、pH6.2中，将人血清白蛋白(HSA)与双功能连接体MAL-FMS-OSU (按照Tsubery等(J Biol Chem.279， 38118-38124 (2004))所述的方法制备)一起保温l小时。然后使用Sephadex Cj-25 (GE-Healthcare公司)，用相同的缓冲体系通过凝胶过滤分离过量的连接体。包含蛋白质的部分被收集，并且添加PSA-SH (根据实施例l制备)。混合物在室温下保温2小时。然后使用DEAE-Sepharose FF (GE Healthcare公司)，通过离子交换色谱法提纯结合物。用25mM醋酸钠缓冲液(pH4.5)洗脱蛋白质-PSA结合物。使用IOK滤膜，通过超滤法汇集并浓縮包含结合物的部分。然后，溶液在25mM醋酸钠缓冲液(pH6.2)中进行渗滤。实施例5:
普通大鼠中的rFVIIa-PSA结合物的药物动力学
使用蛋白质浓度为0.05 mg/mg的MAL-FMS-OSU，根据实施例2制备rFVIIa-PSA结合物。对8个普通大鼠(4个公的，4个母的)进行麻醉，并通过静脉注射将缓冲液(1.3 g/L双甘氨酸，3g/L氯化钠，30g/L甘露醇，1.5g/LCaCl2X2H20， 0. 1 g/L Tween 80， pH5.5)中的rFVIIa-PSA-结合物以10ml/kg的体积剂量(1200吗蛋白质/kg)注入尾部静脉中。剂量为1200 ng蛋白质/kg的未修饰rFVIIa用作8个普通大鼠(4个公的，4个母的)中的对照物。在注入上述物质后5分钟、l小时、2、 4、 7、 10和24小时，从尾部动脉中抽取血样，并且制备和冰冻含枸橼酸盐的血浆用于进一步的分析。
血浆中的FVIIa活性用凝血分析(Staclot， Diagnostics Stago公司，Asni6res,法国)测定，FVII抗原用ELISA (多克隆的抗人FVII抗体)确定。对结果进行统计学的评估。至于FVIIa凝血活性，调整剂量的曲线下面积(AUC)对未修饰的rFVIIa为0.014，对rFVIIa-结合物则增加到0.015(0为无穷大)。最终半衰期从2.3小时增加到4.4小时，并且平均滞留时间(MRT)从1.4小时增加到2.4小时。对于抗原，调整剂量的AUC从0.010 (未修饰的rFVIIa)增加到0.014 (rFVIIa-结合物)(0为无穷大)，最终半衰期从1.4小时增加到2.3小时，并且MRT从1.5小时增加到2.2小时。所用的计算利用统计学程序(程序R:用于统计计算的语言和环境，Foundation for Statistical Computing,维也纳，奥地利，ISBN 3-900051-07-0， URLhttp:〃www.R-OToiect.org)进行。药物动力学结果如图3和4所示。
实施例6:
普通大鼠中的rFVIIa-三聚物-PSA-结合物的药物动力学
使用蛋白质浓度为0.05 mg/mg的MAL-FMS-OSU，根据实施例3制备rFVIIa-三聚物-PSA
结合物。对6个普通大鼠(3个公的，3个母的)进行麻醉，并通过静脉注射将缓冲液(1.3 g/L双甘氨酸，3g/L氯化钠，30g/L甘露醇，1.5g/LCaCl2X2H20， 0.1 g/L Tween 80， pH 5.5)中的rFVIIa-三聚物-PSA结合物以10 ml/kg的体积剂量(1200吗蛋白质/kg)注入尾部静脉中。剂量为1200ng蛋白质/kg的未修饰rFVIIa用作6个普通大鼠(3个公的，3个母的)中的对照物。在注入上述物质后5分钟、l小时、2、 4、 7、 10和24小时，从尾部动脉中抽取血样，并且制备和冰冻含枸橼酸盐的血浆用于进一步的分析。
血浆中的FVIIa活性用凝血分析(Staclot， Diagnostics Stago公司，Asnidres,法国)测定，并且绘制消除曲线。rFVIIa-三聚物-PSA结合物的改善的药物动力学结果如图5所示。实施例7:
使用MAL-FMS-OSU连接体的rFIX与PSA的结合
向0.6 ml的20 mM Hepes缓冲液、pH 7.4中重组体FIX (8 mg/ml)溶液中添加双功能连
接体MAL-FMS-OSU (按照Tsubery等(J Biol Chem.279， 38118-38124 (2004))所述的方法
制备)(浓度0.07mg/mg蛋白质)，并在室温下保温30分钟。然后根据实施例1制备包含
末端SH基团的衍生的PSA。将PSA衍生物添加到混合物中(浓度32 mg PSA-SH/mg蛋白
质一过量100倍摩尔)，并在室温下另外保温2小时。然后通过添加0.1M甘氨酸(最终浓度
10 mM)和5 niM半胱氨酸(最终浓度0.5 mM)的水溶液来停止反应。使用预先装有丁基琼脂
糖的柱子(HiTrap Butyl FF 5 ml， GE Healthcare公司)，通过疏水作用色谱法从rFIX-PSA
结合物中分离出游离试剂。将包含5M NaCl的缓冲液(50 mM H印es缓冲液，5M NaCl， 0.01
% Tween 80， 6.7 mM CaCl2， pH 6.9)添加到包含PSA-rFIX的溶液中，以获得3M NaCl的最
终浓度。将混合物加载到柱子上，随后用IOCV平衡缓冲液(50mMH印es缓冲液，3MNaCl，
0. 01%Tween80， 6. 7 mM CaCl2, pH 6. 9)洗涤柱子，并用50mM的包含6. 7 mM CaCl2的Hepes
缓冲液(pH 7.4)进行rFIX-PSA结合物的洗脱。在洗脱结合物后，将pH调整到pH 6.9。通
过BCA分析测定洗脱液包含0.24 mg/ml蛋白质，通过间苯二酚测定(Sv匿rholni; Biochim
Bi叩hys Acta 24: 604-611 (1957))证实结合物中结合了 PSA。在最后的步骤中，在20 mM
H印es、 50mMNaCl、 lmMCaCl2、 pH6. 9中，使用30 kD滤膜(再生纤维素/Milliporc公司)，
通过超滤法/渗滤法(UF/DF)，将洗脱液浓縮10倍。
实施例8:
使用MAL-FMS-OSU连接体的rFVIII与PSA的结合
为了制备rFVIII-PSA结合物，向6 ml的20 mM Hepes缓冲液、pH 7.4中重组体FVIIK4.5
mg/ml)(来自Advate制造工艺)溶液中添加双功能连接体MAL-FMS-OSU (按照Tsubery等
(JBiolChem.279， 38118-38124 (2004))所述的方法制备)(浓度:0.315 mg/mg蛋白质)，
20并在室温下保温30分钟。然后根据实施例1制备包含末端SH基团的衍生的PSA。将PSA 衍生物添加到混合物中(浓度27.8 mg PSA-SH/mg蛋白质一过量450倍摩尔)，并在室温下 另外保温2小时。然后通过添加Q.1M甘氨酸(最终浓度IO mM)和5 mM半胱氨酸(最终浓 度0.5 mM)的水溶液来停止反应。使用预先装有丁基琼脂糖的柱子(HiTrap Butyl FF 5 ml， GE Healthcare公司)，通过疏水作用色谱法从rFVIII-PSA结合物中分离出游离试剂。将包 含5MNaCl的缓冲液(50mMH印es缓冲液，5MNaCl， 0.01% Tween80， 6. 7 mM CaCl2, pH 6. 9 ) 添加到包含PSA-rFVIII的溶液中以获得3MNaCl的最终浓度。将该混合物加载到柱子上，随 后用IOCV平衡缓冲液(50mMH印es缓冲液，3MNaCl， 0. l%Tween80， 5 mM CaCl2， pH 6. 9) 洗涤柱子，并用柠檬酸缓冲液(pH 7.4， 13.6 mM柠檬酸钠，20 mM CaCl2， 20mM组氨酸， 0.01% Tween 80)进行rFVIII-PSA结合物的洗脱。在洗脱结合物后，将pH调整到pH 6.9。 洗脱液包含2. 5 mg/ml蛋白质(BCA测定)。
权利要求
1.一种通式1的化合物(通式1)其中Z为离去基团，位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个与自由基Y结合；Y是包含半合成生物聚合物的自由基，其与N-琥珀酰亚胺部分结合；可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个可选地与自由基X结合；X为-SO3-R3；R3独立地选自于由氢、(C1-C8)-烷基和(C1-C8)-烷基-R4构成的组；以及R4为聚合物。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z为N-琥珀酰亚胺酯；Y为<formula>formula see original document page 2</formula>其中POLYMER为半合成生物聚合物；R,在每次出现时独立地为(d-C8)-烷基；以及R2独立地选自于由-C(O)NR-、 -C(0)NR-(C广C8)-烷基-NR-、 -NRC(O)-和-NRC(O)-(C广Q)-烷基-NR构成的组；其中R独立地为氢或(CVC8)-垸基。
3. 如权利要求2所述的化合物，其特征在于，R2为-C(0)NR-或-NRC(0)-，其中R独立地为氢或(d-C8)-垸基。
4. 如权利要求3所述的化合物，其特征在于，所述POLYMER经由硫醚键被结合。
5. 如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其特征在于，所述半合成生物聚合物为碳氢 化合物。
6. 如权利要求5所述的化合物，其特征在于，所述半合成生物聚合物为多糖。
7. 如权利要求6所述的化合物，其特征在于，所述多糖为聚唾液酸(PSA)。
8. 如权利要求6所述的化合物，其特征在于，所述多糖包括至少3个单元的单糖。
9. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自于由I、 II、 III、 IV、 V、 VI、 VII、 VIII、 IX、 X和XI构成的组 <formula>formula see original document page 3</formula><formula>formula see original document page 4</formula><formula>formula see original document page 5</formula><formula>formula see original document page 6</formula>
10. —种用于制备如权利要求1所述的化合物的工艺，所述工艺包括使中间化合物发生 偶联反应的步骤其中POLYMER为半合成生物聚合物； R,在每次出现时独立地为(C!-C8)-烷基；R2独立地选自于由-C(O)NR-、 -C(0)NR-(C1-C8)-烷基-NR-、 -NRC(0)-和-NRC(OHC广C8)-烷基-NR构成的组，其中R独立地为氢或(CVC8)-垸基； X为-SOrR3;R3独立地选自于由氢、(C,-C8)-烷基和(d-C8)-垸基-R4构成的组； 114为聚合物；n为选自于0、 1、 2、 3或4的整数；以及 m为选自于1、 2、 3或4的整数。
11. 如权利要求8所述的工艺，其特征在于，HS-POLYMER为；<formula>formula see original document page 6</formula>
12. 如权利要求9所述的工艺，其特征在于，R2为-C(0)NR-或-NRC(0)-，其中R独立地 为氢或(d-Q)-垸基。
13. 如权利要求10所述的工艺，其特征在于，所述化合物被结合到包含一个以上用于置 换的基团的蛋白质或多肽药物上。
14. 一种结合物，包括如权利要求l-7中任一项所述的化合物和蛋白质或多肽药物。
全文摘要
本发明涉及基于Fmoc(9-芴基-甲氧羰基)的聚合结合物。这些结合物适用于延长蛋白质和多肽药物的体内循环。
文档编号A61K47/48GK101687048SQ200880021877
公开日2010年3月31日 申请日期2008年6月25日 优先权日2007年6月26日
发明者于尔根·西克曼, 皮特·图雷切克 申请人:巴克斯特国际公司;巴克斯特保健股份有限公司