专利名称：：阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液的制作方法阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液本发明涉及一种霉酚酸酯滴眼液，特别涉及到一种阳离:？1柳趣霉酚酸酯纳米滴眼液。背景駄在我国的致盲眼病中，角鹏仅次于白内障居第二位。目前，角膜移l翻诉反应成为导致移植娜的首要原因。在》管的1誠，排斥反应的发生率为510%，而在高危角膜移植，排斥反应的发生率可高达65%以上。如f贿效防治穿透性角膜移植术后的免疫排斥皿、提高lt^的成活率已成为眼科学者研究的焦点之一。霉酚酸酯(MMF)是一种有效的抗免疫排斥药物，但目前只有口月蹄蜊。口服全身给药后不良反,重，文献t隨接受霉酚酸酯的患者中有18Q/^因药物毒副作用而被迫中断用药；iJ^卜，^L-目,P韓影响，药物口服后!歐MA眼部组织而超陏效药物浓度，这些均限制了已有霉酚酸酯在眼科中的进一步的应用。
发明内容本发明的目的是^^一种阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液，以增强药物粒子角膜滞留性，延长药物作用时间、提高角m药物的吸收、>给药次数、提高患者的j鹏人性，弥补现有技术的不足。本发明的技术构思将霉酚酸酉識J备成眼局部给药新齐鹏如滴眼液，贝何以避免现有的霉酚酸酯口服制剂^Z用中存在的严重不良反应。但普通滴眼液因为受角膜吸收障碍的限制，生物利用激艮低。霉酚酸酯愚隹溶性药物，适合开发滴眼用温悬剂。对于在泪液中难溶的药物，如果斷氐混悬剂中药物粒子的粒径，由普通温悬剂(粒径在1-10，)制备成纳米温悬剂(粒径在10-1000nm)，可增^X隹溶性药物的溶解度，改变药物的角膜吸收特征，提高安全性和有效性。另外，考虑到樹可一种聚合物溶液或温悬液滴入眼部，首先与角膜和结膜表面的粘蛋白结合，粘蛋白主要为酸性糖蛋白，侦鸦il^^是硫酸或唾液酸基团，呈负电荷性。普通的温悬剂和纳米温悬剂呈负电荷(约-30-50mV)，和角膜上的正电荷存在电荷相斥，妨碍药物吸收，因此，如果将普通的纳米混悬剂的药物粒子进行^t布使其带正电荷，就有利于正负电荷相吸，有助于提高角ilM药物的吸收，并延长药物作用时间，而达至伏，强药效。本发明魏已有普通霉酚酸酯的齐趣进行创新，即将药物纳米技祸畔立子傲嫩术相结合，具体说是将霉酚酸酉識1」备皿有黏附作用、带正电荷的纳米级药物粒子的滴眼液，^f吏霉酚酸酯的粒径在100-700nm的纳米级范围内。本发明的技术方案包括质量百分比浓度1%的霉酚酸酯，适量的渗舰调节剂和PH调节剂，其特征^aS包括壳聚糖、普朗尼克F-68、磷脂，其中磷脂在滴眼液中的质量百分比浓度0.2%-2%、普朗尼克F"68在滴眼液中的质量百分比浓度0.5X-4Q/^、壳聚糖在滴眼液中的质量百分比浓度0.5-4%，且壳聚糖W量为5000300000，脱乙>85%，其中霉酚酸酯的粒径在100-700nm范围内。本发明中的磷脂是药用辅禾職别的旭卵磷脂或蛋黄卵磷脂。本发明中的霉酚酸酯的粒径和审U备过程中的匀质机的压强和循环7，有关，压强增大，粒径减小，循环7M^加，粒径也减小，但题强增加到一定禾雖如1500bar、循环次f[ii加到一定禾號如15次后，压^^循环7M[再增加，粒径没有明显的减小，而是趋于稳定，因此，本发明中iiffi匀质l几压强1500bar循环157皿一步细化粉碎的固定工艺。霉酚酸酯的粒^3S与普朗尼克F-68、磷脂和壳聚糖浓度有关。普朗尼克F"68、卿旨和壳聚糖三者的浓度共同作用影响着霉酚酸酯的粒径。本发明中的霉酚酸酯的正电荷的电荷大小与壳聚糖在滴眼液中的质量百分比浓度有关，壳聚糖浓^^大，霉酚酸酯的正电荷的电^^大。本发明制备的方法如下首先，将霉酚酸酯和磷賸溶解与乙醚中，旋转蒸发充分去除乙醚，得到药物和磷脂的均匀分散薄膜，然后加入壳聚糖溶液和普朗尼效-68溶液，充分(壳聚糖和磷脂包裹的粒子结合使得其粒，面带上+20^-+50mV电位的正电荷，同时具有壳聚糖的黏附性)，、M结束后，将鹏声分麟匀后得至IJ乳液，将乳舰高压匀舰，細压强500bar循环5^a行初次粉碎，再用压强1500bar循环15^S—步细化粉碎，粒径在100-700nm，然后将匀质的学L液调节渗ffi至等渗，调节pW旌5.5-8.O即得。用激j^立度电位分析测定仪测得纳米温悬剂的粒径在100-700nm。因此，本发明基本上是一个薄膜分散—高压匀质方法。本发明的特点是将霉酚酸酉識j备成纳米瓶悬剂(粒径在100-700nm)，增大药物的溶解度，改变药物的角膜吸收特征，提高^性和有效性。此外，将温悬剂的霉酚酸酯药物粒子M31磷脂和壳聚lia行斷布，使其带正电荷，有利于正负电荷相吸，有助于提高药物的角膜吸收，并延长药物作用时间而大，强药效，其中的壳聚糖具有生物黏附作用，使霉酚酸酯药物粒子角膜黏附性增强，延长药物作用的时间。相比于霉酚酸酯口服制剂，本发明具有眼部药物生物利用度高，不存在不良反应，特别魏免了全身用药的不良反应，为霉酚酸酯在眼科的广Si^用掛共了保证。这种新剂型會的多增强药物粒子角膜滞留性，延长药物作用时间、提高角)3M药物的吸收、淘沙给药次数、提高患者的顺从性，本发明包括霉酚酸酯，适量的渗透压调节剂和ph调节剂，^if征在于还包括壳聚糖、普朗尼克F-68、磷脂，其中磷脂在滴眼液中的质量百分比浓度O.2%-2%、普朗尼克^68在滴眼液中的质量百分比浓度0.5%-4%、壳聚糖在滴眼液中的质量百分比浓度0.5-4%，且壳聚糖好量为5000300000，脱乙驗〉8讽，其中霉酚酸酯的粒径在100-700nm范围内。本发明中的磷脂为药用辅料级另啲旭卵磷脂或蛋黄卵磷脂，主要起纳米混悬剂的助悬剂和电荷傲布剂的作用，还可超楼似脂质体的作用，增加霉酚酸酯的溶解度。本发明中的浓度O.5%-4%普朗尼弥~68是作为助悬剂和稳定剂，延长滴眼航角膜的滞留时间。浓度低刊.5%，贝U审恪的滴眼液不稳定，容易絮凝，浓度高于4%，贝跑J备的滴眼舰于茅战周，機胡视力。本发明的渗透压调节剂为已有的WH、右旋蹄、山梨醇、甘露醇及氯化钠中的—种构成，调节至激本发明的pH调节剂为已有的盐酸、丰繊酸、,化钠、,化钾、碳M钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠中的一种，调节pH至5.5—8.0。鄉例l将O.3g霉酚酸酯和60mg磷腊溶解于50ml乙醚中，旋转蒸发充分去除乙醚，得到药物和磷脂的均匀分散薄膜，然后加入2%壳聚糖(^量5000、脱乙酰度85%)溶液7.5ml和2X的F-68溶液7.5ml，充分淵莫，超声分,匀后得到乳液，将乳舰高压匀Mt几，先用压强500bar循环5次进行初次粉碎，然后用压强1500bar循环15次謝TS—步细化粉碎，然后将匀质的乳OT、Mt用7jC定容至30ml，用氯化钠调节^tHM驗，稀盐酸pH值至6.5，得阳离子黏附型霉酚酸酉謝米温悬剂滴眼液。激光粒度电位分析测定仪测得纳米混悬剂的粒径范围为腦700nm，平均粒径为480nm，霉酚酸酯纳^*立子表面电位为+37.5mV。将得到的纳米温悬剂在4。C闭光保存6个月，粒径电位没有实质性变化。鄉例2将0.3g霉酚酸酯和0.6g磷腊溶解于50ml乙醚中，旋转蒸发充分去除乙醚，得到药物和磷脂的均匀分散薄膜，然后加^量130000、脱乙,91%的壳聚糖1.2g和F~681.2g溶解于25ml注射用水中充分溶解，用壳聚糖和F~68的溶角^5分洗膜，超声分散均匀后得到乳液，将乳M高压匀^m，先用500bar压强循环5:fcit行初次粉碎，然后用1500bar压强循环157^Sfi^—步细化粉碎，然后将匀质的乳OT继寸用水定容至30ml，用氯化钠调节渗透iS等渗，稀盐酸pH值至6.5，得阳离子黏附型霉酚酸酯纳米温悬剂滴眼液。激光茅镀电位分析测定仪测得纳米温悬剂的粒径范围为100700nm，平均粒径为410nm，粒子表面电位为+43mV。))射寻到的纳米温悬剂在4°C闭光保存6个月，粒径电位没有实质性变化。鄉例3将实施例1中的壳聚糖换用M量为300000、脱乙酰度为85%的壳聚糖，也可得到本发明。光粒度电位分析测定仪测得纳米温悬剂的粒径范围为100700nm，平均粒径为427nm，粒賴面电位为+49mV。将得到的纳米龍悬剂在4r闭光保存6个月，粒径电位没有实质性变化。鄉例4将0.3g霉酚酸酯和0.3g磷腊溶解于50ml乙醚中，旋转蒸发充分去除乙醚，得到药物和磷脂的均匀分散薄膜，然后加M量175000、脱乙酰度95%的壳聚糖0.6g和F^680.6g溶解于25ml掛用水中充分溶解，用壳聚糖和F"68的溶M^5分鹏，超声分散均匀后得到乳液，将乳M:高压匀Ml，先用500bar压力循环5^t行初次粉碎，然后用1500bar压力循环157^^TiS—步细化粉碎，然后将匀质的乳^fflftl寸用水定容至30ml,用氯化钠调节渗mi!M雜，稀盐酸pH蛭6.5，得阳离子黏附型霉酚酸酯纳米温悬剂滴眼液。激^f镀电位分析测定仪测得纳米温悬剂的粒径范围为腦700nm，平均粒径为466nm，粒賴面电位为+45mV。4射寻歪啲纳米瓶悬剂在4t:闭光保存6个月，粒径电位没有实质性变化。^ffl本发明进行对照实验之1咖下取M^i西兰大白兔56只，随机分为2组，一组为1%霉酚酸酯温悬液，每只兔子50iilf商目艮，于5min、15min、30min、45min、lh、2h、4h、6h抽鹏水，HPLC分析药物浓度。另一组为1%阳离:？1占附型霉酚酸酯纳米滴眼液^^且。每只兔子50"5%阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液滴眼，于5min、15min、30min、45min、lh、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h抽，水，HPLC分析药物浓度。房水中药^T浓度见下表。药物浓麟水药物浓衝则定结果为1%阳离:？1柳趣霉酚酸酯纳米滴眼液会腺水药物浓腿著高于1%霉酚酸酯瓶悬液组，且作用时间显著延长。表1房水中霉酚酸酯浓度(n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>权利要求1、一种阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液，其包括质量百分比浓度1％的霉酚酸酯，适量的渗透压调节剂和pH调节剂，其特征在于该滴眼液还包括壳聚糖、普朗尼克F-68、磷脂，其中磷脂在滴眼液中的质量百分比浓度在0.2％-2％范围内、普朗尼克F-68在滴眼液中的质量百分比浓度在0.5％-4％范围内、壳聚糖在滴眼液中的质量百分比浓度在0.5-4％范围内，壳聚糖分子量为5000～300000，脱乙酰度＞85％，其中霉酚酸酯的粒径在100-700nm范围内，其粒子表面有+20mV-+50mV电位的正电荷。2、如权利要求1所述的阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液，其特征在于上述的磷脂为药用辅料级别的大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。3、制备阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液的方法如下首先，将霉酚酸酯和磷脂溶解于乙醚中，旋转蒸发充分去除乙醚，在容器内壁得到霉酚酸酯和磷脂的均匀分散的薄膜，然后加入壳聚糖溶液和普朗尼克F-68溶液，洗脱上述薄膜后，并将该薄膜超声粉碎后得到的混合液经由高压匀质机，先用压强500bar循环5次进一步粉碎，然后再用压强1500bar循环15次细化粉碎得到匀质的混合液，其中霉酚酸酯的粒径在100-700nm范围内，最后将匀质的混合液调节渗透压至等渗，又调节pH值至5.5-8.0即得。全文摘要本发明涉及一种阳离子黏附型霉酚酸酯纳米滴眼液。包括质量百分比浓度1％的霉酚酸酯，适量的渗透压调节剂和pH调节剂，其特征在于还包括壳聚糖、普朗尼克F-68、磷脂，其中磷脂在滴眼液中的质量百分比浓度0.2％-2％、普朗尼克F-68在滴眼液中的质量百分比浓度0.5％-4％、壳聚糖在滴眼液中的质量百分比浓度0.5-4％，壳聚糖分子量为5000～300000，脱乙酰度＞85％，且霉酚酸酯的粒径在10-700nm范围内。本发明的特点是纳米粒径的霉酚酸酯增大药物的溶解度，提高安全性和有效性。又使霉酚酸酯药粒子带正电荷，以助于提高药物的角膜吸收，增强药效并延长药物作用时间，大大增强角膜黏附性。文档编号A61P37/06GK101590015SQ20091001634公开日2009年12月2日申请日期2009年6月11日优先权日2009年6月11日发明者史伟云,吴祥根,萌辛申请人:山东省眼科研究所